舌癌及舌癌脑转移细胞的药物敏感性

为研究舌癌细胞系Ｔｃａ８１１３以及该细胞系在裸鼠体内脑转移细胞亚系（Ｔｂ）药物敏感性，采用四唑盐比色法（ＭＴＴ法）检测了１５种药物对Ｔｃａ８１１３和Ｔｂ的抑制作用。结果表明Ｔｂ对其中的１０种药物敏感性低于Ｔｃａ８１１３，提示：舌癌转移细胞可能有一定程度的耐药性。     

耐长春新碱人舌鳞癌细胞系Tca8113/V100的研究

目的建立耐长春新碱（Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ，ＶＣＲ）人舌鳞癌细胞系。方法采用间歇性加药，逐步提高培养基中ＶＣＲ的浓度，连续体外诱导，培养，建立了一株耐ＶＣＲ人舌鳞癌细胞系Ｔｃａ８１１３／Ｖ１００。对其药物敏感性、倍增时间、裸鼠成瘤性、超微结构及耐多药基因等生物学特性进行了研究。结果Ｔｃａ８１１３／Ｖ１００在含ＶＣＲ１００μｍｏｌ／Ｌ的培养基中稳定生长，其对ＶＣＲ的耐药性为Ｔｃａ８１１３细胞系的１９２倍，对其他几种抗癌药物也有程度不同的耐药性。Ｔｃａ８１１３／Ｖ１００倍增时间３７２小时，具有裸鼠成瘤性，病理诊断为鳞状细胞癌，超微结构观察其微绒毛短粗，ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达水平明显增高。结论Ｔｃａ８１１３／Ｖ１００细胞系已具备多药耐药性的特点，为口腔癌多药耐药性研究提供了细胞模型。     

耐长春新碱人舌癌细胞系Tca8113／V100的研究

目的 建立耐长春新碱人舌鳞癌细胞系。方法 采用间歇性加药,逐步提高培养基中ＶＣＲ的浓度,连续体外诱导,培养,建立了一株耐ＶＣＲ人舌鳞癌细胞系Ｔｃａ８１１３／Ｖ１００。对其药物敏感性、倍增时间、裸鼠成瘤性、超微结构及耐多药基因等生物学特性进行了研究。结果 Ｔｃａ８１１３／Ｖ１００在含ＶＣＲ１００μｍｏｌ／Ｌ的２基中稳定生长,其对ＶＣＲ的耐药性为Ｔｃａ８１１３细胞系的１９．２倍,对其他几各抗癌药物也有     

口腔颌面部肿瘤化疗方案药物敏感性试验

尊文以人舌鳞癌细胞系Ｔｃａ８１１３为对象，利用ＭＴＴ法对口腔颌面部肿瘤化疗常用的八种药物和七种方案进行了药敏试验，ＡＤＭ、５－Ｆｕ、ＣＤＤＰ等抗肿瘤作用较强；而ＰＹＭ、ＭＴＸ、ＶＣＲ单用对Ｔｃａ８１１３细胞无明显作用。化疗方案中以ＭＭＢＤ、ＰＦ、ＰＶＰ方案为佳，卡铂与顺铂在此疗方案中的作用无明显差异。实验结果提示：肿瘤化疗不能只凭经验用药，应注意化疗的耐药性问题。     

三氧化二砷对舌癌细胞鼠移植瘤的抑瘤作用

目的 探讨三氧化二砷在Ｓｃｉｄ小鼠体内的移植瘤抑制作用及可能作用机理。方法 将体外培养的人舌鳞癌细胞系Ｔｃａ８１１３细胞接种于Ｓｃｉｄ小鼠皮下,建立移植瘤模型,观察Ａｓ２Ｏ３对Ｔｃａ８１１３细胞移植瘤的抑瘤效果。结果 Ａｓ２Ｏ３对Ｔｃａ８１１３细胞移植瘤的抑制率为４９．１６％,且存在较煌诱导细胞凋亡作用。     

5种口腔颌面部肿瘤细胞系凝集素受体的分布特点

以ＲＣＡ、ｃｏｎＡ、ＷＧＡ、ＳＢＡ、ＵＥＡ、ＤＢＡ、ＰＮＡ７种凝集素作探针，检测粘液表皮样癌ＭＥＣ－１细胞、舌癌Ｔｃａ８１１３细胞、腺样囊性癌ＡＣＣ细胞、口底癌ＨＳＣ２细胞、牙龈癌Ｃａ９－２２细胞等５种口腔颌面部肿瘤细胞系的凝集素受体的情况。发现各种肿瘤细胞的凝集素受体各具特点，凝集素以ｃｏｎＡ、ＲＣＡ、及ＷＧＡ的阳性率最高，分布的部位（胞浆或胞膜等）和形式（大小不同的颗粒、疏密不等的网络等）则各有不同。     

顺铂诱导Tca8113细胞凋亡及周期特异性

目的探化疗药物顺铂（ＣＤＤＰ）对口腔鳞癌细胞凋亡及细胞周期特异性的诱导作用。方法选用人舌鳞状细胞癌细胞系Ｔｃａ８１１３为研究对象,应用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪等方法进行观察。结果ＣＤＤＰ作用Ｔｃａ８１１３细胞后,细胞增殖变慢,增殖指数下降,细胞变小,变圆,失去贴壁性,从附着处脱落。ＤＮＡ染色后荧光显微镜下观察,细胞核呈现橙红色,半月形,不规则块状等凋亡形态变化。透射电镜观察,细     

恒磁场诱导联合平阳霉素对舌癌化疗的实验研究

目的：观察平阳霉素对恒磁场诱导作用下的人舌癌细胞裸鼠种植瘤的化疗效果。方法：用体外培养的人舌癌Ｔｃａ８１１３系细胞，种植裸鼠成瘤后，随机分为空白对照（Ａ）组，恒磁场诱导化疗（Ｂ）组，化疗组（Ｃ）组，化疗药物均为平阳霉素，治疗１０天，从肿瘤体积大小，裸鼠体重变化，肿瘤组织病理学和术后复发方面评价化疗效果。     

癌基因c-myc抑癌基因p53在涎腺肿瘤中的表达

方法：本文采用免疫组化（ＳＰ）法，研究了３０例涎腺肿瘤。目的：观察ｃ－ｍｙｃ癌基因和ｐ５３抑癌基因在涎腺肿瘤中的表达。结果：多形性腺瘤中，ｃ－ｍｙｃ和ｐ５３阳性率分别为５０．０％和２５．０％，均分别低于恶性肿瘤的阳性率７５％和５０．８％，两组比较均有高度显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结论：ｃ－ｍｙｃ抑癌基因ｐ５３表达与涎腺上皮细胞增殖速度加快和突变有关，ｐ５３阳性率升高，虽与细胞恶变关系密切，但仅为判断细胞分化程度的一个参考指标。     

口腔癌肿瘤浸润淋巴细胞对人舌癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的探讨在体外具有强大细胞毒活性的口腔癌浸润淋巴细胞在体内的抑瘤效果以及化疗药物环磷酰胺（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，Ｃｙ）与肿瘤浸润淋巴细胞（ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ，ＴＩＬ）联合应用治疗口腔癌的可能性。方法将舌鳞癌细胞系Ｔｃａ８１１３注入裸鼠背部皮下建立移植瘤模型，取培养４周的ＴＩＬ联合低剂量Ｃｙ局部注射，观察肿瘤体积变化及肿瘤生长情况。结果①ＴＩＬ＋ｒＩＬ２和ＴＩＬ＋ｒＩＬ２＋Ｃｙ组在３周内抑瘤率较高（分别为：８６１％±０４％和９７７％±０６％），３周后抑瘤作用减弱；②ＴＩＬ＋ｒＩＬ２＋Ｃｙ组抑瘤率较ＴＩＬ＋ｒＩＬ２组高（第８周抑瘤率分别为：２００％±１４％和７５５％±２５％，Ｐ＜００１）。结论口腔癌ＴＩＬ在应用后３周内具较强抑瘤作用，３周后减弱；联合应用Ｃｙ可获得更佳抑瘤效果     

siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-2、-9及TIMP-1、-2蛋白表达的影响

【摘要】目的利用小干扰RNA （ small interfering RNA ,siRNA） 抑制人舌癌TcaSll3细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF ）表达,观察其对培养细胞和移植瘤基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs ）2、-9及基质金属蛋白酶抑制剂（tissue inhibitors of metalloproteinases ,T IMPs）-1、-2蛋白表达的影响。方法以稳定转染携带VEGF．siRNA真核表达载体的Tca8113细胞（VEGF—siRNAl、VEGF—siRNA2）为实验组,以转染空载体的及未转染的Tca8113细胞为实验对照组和空白对照组。将细胞分别接种于裸鼠皮下,用免疫组化法分别测定各组培养细胞和移植瘤VEGF、MMP-2、-9及TIMP．1、-2的蛋白表达。结果各组培养细胞及移植瘤VEGF免疫组化染色：VEGF．siRNAl组、VEGF—siRNA2组与实验和空白对照组相比,平均阳性率降低,平均灰度值增高（P〈0．05）;各组培养细胞均未检测出MMP-2、-9及TIMP-1、-2蛋白的阳性表达。各组移植瘤MMP-9、TIMP-1、-2可见阳性表达,但各组染色平均阳性率及平均灰度值之间的差异无统计学意义（P〉0．05）,而MMP-2未见明显阳性表达。结论以siRNA干扰沉默人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制细胞及移植瘤内VEGF蛋白表达,但是对MMP-2、-9及TIMP-1、-2蛋白的表达无明显影响。     

RhoA小干扰RNA对舌癌细胞Tca8113增殖、侵袭影响的体外实验

目的 体外实验研究Ras基因家族同源物A(ras homolog gene family,member A,RhoA)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在舌癌转移中的作用.方法 登录Genebank确定人RhoA基因序列,利用RNA干扰技术针对RhoA的基因序列设计4条短链RNA,构建干扰表达载体,利用LipofectamineTM2000介导法将RhoA siRNA转染至舌癌细胞系Tca8113.转染细胞后48 h检测瞬时表达效率,经杀稻瘟菌素筛选及克隆化培养获得稳定抗性克隆转染株后,蛋白质印迹法检测RhoAsiRNA转染后的抑制效应,细胞计数绘制细胞生长曲线以观察RhoA siRNA转染前后细胞株的生长速度;划痕实验和Millicell小室实验检测转染细胞株的迁移力与侵袭力.结果 舌癌细胞转染RhoA siRNA后:RhoA蛋白表达下降;细胞倍增时间从38.0 h延长至45.7 h;细胞克隆形成率由35.2%降低至15.8%;细胞迁移能力减弱;细胞侵袭能力由100%降至58.9%,显著减弱.结论 RhoA siRNA能有效抑制舌癌Tca8113细胞中RhoA的表达,从而降低细胞增殖水平以及细胞侵袭力和迁移力,表明RhoA siRNA具有抑制舌癌细胞生物学特性的能力,提示RhoA在舌癌转移中可能发挥重要作用.     

nm23-h1基因对口腔鳞癌细胞增殖及PKC-α表达的影响

目的探讨nm23-h1基因对口腔鳞癌细胞增殖的影响及可能机制。方法检测6个口腔鳞癌细胞系中nm23．h1的表达水平;挑选nm23-h1表达量最少、绿色荧光报告基因质粒转染效率最高的细胞系,瞬时转染pCMV—nm23．hl质粒,MTT法检测转染的细胞增殖活性;应用实时定量PCR检测nm23-h1功能相关基因PKC-α的表达。结果在Tca8113、Tb、Tca8113M、TSCC、OSC-4、Tca8113／CDDP6个口腔鳞癌细胞系中,高转移细胞系Th、Tca8113M的nm23-h1表达量最低。Th细胞转染pCMV—nm23-h1后,细胞增殖速度减慢,为对照组的79．69％（P〈0．01）;过表达nm23-h1的Th细胞PKC-α的mRNA表达量增加,为对照组的1．52倍（P〈0．01）。结论nm23-h1基因过表达能抑制口腔鳞癌细胞的增殖,该作用可能与PKC-α相关的信号通路有关。     

半导体量子点对舌鳞状细胞癌Tca8113系生物学行为影响的研究

目的：研究新型发光纳米材料半导体量子点（semiconductor quantumdots，QD）对舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113生物学行为的影响。方法：用不同浓度最大发射波长为605nm的QD与Tca8113共培养，观察QD对Tca8113细胞生长的影响。用QD标记Tca8113细胞（Tca8113-QD），利用transwell小室法和冲刷实验，观察Tca8113-QD细胞侵袭、黏附和趋化运动能力的变化。结果：Tca8113细胞与不同浓度QD共培养后，其细胞的生长曲线基本一致，差异无统计学意义。Tca8113-QD细胞和Tca8113细胞的侵袭、黏附和趋化运动能力差异无统计学意义。结论：用QD标记Tca8113细胞后，不影响肿瘤细胞生长、侵袭和转移能力，为半导体量子点在活体生理条件下用于肿瘤细胞和细胞内分子成像及示踪研究提供了科学依据。     

粘着斑激酶对Tca8113舌鳞癌细胞生物学特性的影响

目的研究粘着斑激酶（FAK）在Tca8113舌鳞癌细胞中的表达及对其生长、粘附、侵袭转移能力的影响。方法采用FAK寡核苷酸转染的方法处理Tca8113舌鳞癌细胞,采用逆转录- 聚合酶链反应（RT- PCR）测定FAKmRNA水平的变化,间接免疫荧光方法检测胞浆FAK蛋白的表达,以Transwell小室和冲刷实验的方法计数细胞,测定细胞的粘附和侵袭能力的变化,MTT法检测细胞的生长抑制情况。结果反义FAK寡核苷酸转染后,Tca8113细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低。转染48 h后,FAKmRNA和蛋白水平明显下降（P<0.05）。结论FAK对Tca8113细胞的增殖、存活、粘附及侵袭具有重要作用。     

舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系CD133+亚群生物学特性的研究

目的研究CD133在人舌鳞癌Tca8113细胞系中的表达,观察纯化的CD133肿瘤细胞体外生长特性。方法采用有限稀释法观察单细胞体外增殖的能力;利用超低黏附板,观察舌鳞癌Tca8113细胞体外悬浮肿瘤细胞成球;流式细胞仪检测舌鳞癌Tca8113细胞系中的CD133表达;免疫磁珠分选技术纯化CD133肿瘤细胞,体外培养并观察其增殖及分化能力。结果单细胞体外增殖12 d后,仅有5.23%的细胞具有持续增殖的能力。体外观察发现,超低黏附96孔培养板中细胞悬浮生长,部分可以形成肿瘤球;Tca8113细胞系中有占肿瘤部分0.95％的CD133肿瘤细胞呈阳性表达,且分选出的CD133+肿瘤细胞的增殖能力均高于CD133-肿瘤细胞及未分选的肿瘤细胞;CD133在培养体系中的比例逐日下降,由培养第1天的92.45％下降至第12天的1.62％。结论Tca8113细胞系中肿瘤细胞具有异质性,且CD133+细胞占肿瘤细胞比例较低,在体外分化和增殖能力较强,CD133可能是肿瘤起始细胞的表型标志之一。     

短发卡RNA介导的表皮生长因子受体基因沉默对舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)介导的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因沉默对舌鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响,为治疗舌鳞状细胞癌提供依据.方法 构建靶向人EGFR的shRNA真核表达载体并瞬时转染人舌鳞状细胞癌细胞株Tca8113细胞,用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法检测转染前后EGFR的mRNA和蛋白的变化,用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖活性,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 转染后Tca8113细胞的EGFR mRNA和蛋白的表达(0.217±0.047)和(0.324±0.059)均明显下调(P＜0.05),细胞增殖活性(0.340±0.009)明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率(39.4±7.7)%显著增高(P＜0.05).结论 shRNA介导的EGFR基因沉默可抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖并诱导其凋亡.     

热疗对舌鳞癌Tca8113细胞及其耐药细胞株耐药性的影响

目的 探讨热疗对舌鳞癌Tca8113细胞和耐药的Tca8113/CBDEA细胞耐药性的影响。方法 采用实时定量逆转录PCR（RT-PCR）检测42 ℃,0.5 h热疗对Tca8113细胞 和耐药的Tca8113/CBDEA细胞多药耐药基因1（MDR1）、多药耐药相关蛋白1基因（MRP1）和谷胱甘肽硫-转移酶π基因（GST-π）表达的影响以及检测热疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果 Tca8113/CBDEA细胞在热疗后4 h和24 hMDR1、MRP1、GST-π耐药基因表达量明显下降（P<0.01）,Tca8113细胞的MDR1、MRP1耐药基因表达在4 h和24 h时亦有明显下降（P<0.05）,GST-π在24 h有明显下降（P<0.01）。热疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显上升（P<0.01）。结论 热疗抑制了耐药基因的表达,增加了细胞内的药物浓度, 热疗可能是逆转肿瘤细胞耐药,提高化疗效果的一种有效手段。     

人口腔鳞癌细胞系对淋巴靶向葫芦素BE聚乳酸纳米微粒的敏感性研究

目的:探讨人口腔鳞癌细胞系(Tca8113和BcaCD885)对颈淋巴结靶向性葫芦素BE聚乳酸纳米微粒(CuBE- PLA-NP)的敏感性。方法:用四唑盐显色法(MTT法)检测用不同剂量的CuBE-PLA-NP和CuBE在1~8 d内8个时间点对Tca8113和BcaCD885的抗癌活性,计算出2种药物在8个时间点对2种癌细胞的抑癌率和药物的半数抑癌率浓度。结果:CuBE-PLA-NP和CuBE对Tca8113和BcaCD885均有强的杀伤作用,其杀伤效应均呈时间依赖性和剂量依赖性。结论:经改型后的淋巴靶向CuBE-PLA-NP没有降低CuBE成份的抗癌活性,同时,由于CuBE-PLA-NP具有淋巴靶向性,更有利于杀灭口腔癌颈淋巴结转移灶内的癌细胞。     

EGFR 抑制剂对舌鳞癌多药耐药细胞 Tca8113／CBP耐药蛋白的影响

目的：探讨表皮生长因子受体（ EGFR）抑制剂在舌鳞癌多药耐药中的作用。方法：免疫细胞化学技术和Western blot方法检测舌癌细胞系Tca8113及多药耐药细胞系Tca8113／CBP EGFR的表达,Western blot检测EGFR受到抑制后舌癌多药耐药细胞Tca8113／CBP耐药蛋白MRP,GTS-π的表达。结果：细胞系Tca8113和Tca8113／CBP均有EGFR的表达（P＞0．05）,EGFR受到抑制后细胞Tca8113／CBP的多药耐药蛋白MRP,GST-π的表达均下降（P＜0．05）。结论：抑制EGFR可下调舌癌多药耐药细胞耐药蛋白的表达。