10份不同产地哈蟆油营养保健价值的评价研究

目的:收集不同产地哈蟆油样品,比较各样品的营养成分。方法:采用化学及仪器分析的方法测定不同产地哈蟆油样品的营养成分,从营养成分角度出发,评价哈蟆油的营养保健价值。结果:哈蟆油含有丰富的营养成分,具有较高的营养保健价值。结论:不同产地哈蟆油所含的营养成分具有一定的相似性。     

原子吸收光谱法测定哈蟆油发酵乳中钙、铁、锌含量

目的建立哈蟆油发酵乳中钙、铁、锌的含量测定方法,为今后能够更好的开发和合理利用哈蟆油资源提供理论依据。方法采用微波消解—原子吸收光谱法对哈蟆油发酵乳中钙、铁、锌的含量进行测定。结果测定3批哈蟆油发酵乳的钙、铁、锌含量分别为286.611 1,2.342 6,1.787 0μg/mL。结论哈蟆油发酵乳中含有大量的钙及微量的锌和铁,具有广大发展前景。     

哈蟆油非水溶性成分酶解物的抗疲劳作用

目的:研究哈蟆油非水溶性成分酶解物抗疲劳生物活性。方法:采用碱性蛋白酶酶解法制备哈蟆油非水溶性成分酶解物。以哈蟆油非水溶性成分酶解物高、中、低(0.6g/kg,0.3g/kg,0.15g/kg)3个剂量组对小鼠进行连续灌胃给药30天,空白对照组给予等体积蒸馏水,分别观察小鼠负重游泳时间、血清尿素氮含量、肝糖原含量、血乳酸含量等指标的变化。结果:中剂量组小鼠负重游泳时间与对照组比较时间显著延长(P<0.05),低剂量组肝糖原与对照组比较含量显著增加(P<0.05),各剂量组血乳酸曲线下面积与对照组比较显著减小(P<0.01),各剂量组血清尿素氮与对照组比较含量均无显著下降(P>0.05)。结论:哈蟆油非水溶性成分酶解物具有明显抗疲劳作用。     

林蛙油对运动训练大鼠睾酮含量、物质代谢及抗运动疲劳能力的影响

目的:研究林蛙油对运动训练大鼠睾酮含量、物质代谢及抗运动疲劳能力的影响。方法:以大强度耐力训练大鼠为模型,55只42 d龄雄性Wistar大鼠为对象,随机分为5组:静止对照组(C组)、运动对照组(M组)、运动+低剂量林蛙油组(OML组),运动+中剂量林蛙油组(OMM组),运动+高剂量林蛙油组(OMH组),每组10只(剔除不符合实验要求的大鼠5只)。每天灌胃(ig)1次,林蛙油组剂量分为0.5,1.0,3.0 g·kg-1,灌胃体积为5 mL·kg-1,C,M组ig等量生理盐水。42 d力竭游泳训练后,测定体重、力竭游泳时间及血睾酮等生化指标。结果:体重:运动对照组小于静止对照组(P<0.05);林蛙油各组大于运动对照组(P<0.05),组间无显著差异。力竭游泳时间:运动对照组与静止对照组无明显差异;林蛙油各组明显长于运动对照组(P<0.01),且随剂量增大而延长。血清睾酮水平:运动对照组(P<0.01)低于静止对照组;林蛙油各组分别为(4.96±1.60),(5.19±1.60),(5.35±1.66)nmol·L-1,高于运动对照组(P<0.01),组间无显著差异。血清皮质酮水平:各组间均无显著差异。血清睾酮与皮质酮比值变化与睾酮变化较为一致。肝、肌糖原水平:运动对照组(P<0.01)低于静止对照组;林蛙油各组高于运动对照组(分别为P<0.05,P<0.01),组间无显著差异。促黄体生成素、促卵泡激素各组间无显著差异。血尿素水平:运动对照组(P<0.01)高于安静对照组;林蛙油各组低于运动对照组(P<0.01),且组间无显著差异。血红蛋白水平:运动对照组(P<0.01)低于静止对照组;林蛙油各组高于运动对照组(P<0.01),且组间无显著差异。结论:林蛙油可以减轻血睾酮受高强度运动量的影响,并维持在正常生理水平;可以促进蛋白质合成,抑制氨基酸和蛋白质分解,提高运动训练大鼠血红蛋白含量和糖原的储备。     

不同生境及地区哈蟆油药材中氨基酸成分比较分析△

目的:比较不同生境及地区的哈蟆油药材中氨基酸的含量,为评价该药材质量提供依据。方法:6mol·L-1盐酸110℃水解24h,加衍生化试剂2,4-二硝基氟苯,于60℃水浴中衍生1h,P230II依利特氨基酸自动分析仪测定。结果:同一地区林下产的哈蟆油药材中氨基酸含量,普遍高于稻田产的;相同生境中,林下产哈蟆油药材以吉林产的氨基酸最高;稻田产哈蟆油药材以辽宁产的最高。结论:以哈蟆油药材中氨基酸的含量对其药材质量进行评价,具有一定的实际意义。     

不同生境及地区哈蟆油药材中氨基酸成分比较分析

目的：比较不同生境及地区的哈蟆油药材中氨基酸的含量,为评价该药材质量提供依据。方法：6mol·L^-1。盐酸110℃水解24h,加衍生化试剂2,4-二硝基氟苯,于60℃水浴中衍生1h,P230II依利特氨基酸自动分析仪测定。结果：同一地区林下产的哈蟆油药材中氨基酸含量,普遍高于稻田产的;相同生境中,林卜产哈蟆油药材以吉林产的氨基酸最高;稻田产哈蟆油药材以辽宁产的最高。结论：以哈蟆油药材中氨基酸的含量对其药材质量进行评价,具有一定的实际意义。     

哈蟆油非水溶性成分酶解前后降血脂功效比较研究

目的比较哈蟆油非水溶性成分酶解前后对饮食性高脂血症大鼠的降血脂作用。方法通过给正常大鼠饲喂高脂饲料,建立高脂大鼠模型,将实验大鼠随机分为基础饲料对照组、高脂模型组、非水溶性成分(低、中、高剂量)组及其酶解物(低、中、高剂量)组,测定各组大鼠的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等含量。结果 TC含量,酶解前仅高剂量组降低且具有显著性意义,酶解后各剂量组均降低且具有显著性意义;TG含量,酶解前后各剂量组均降低且具有显著性意义;HDL-C含量,酶解前后各剂量组均无显著性变化。结论哈蟆油非水溶性成分酶解前后均具有辅助降血脂作用,且酶解后作用进一步加强。     

蛤士蟆油的鉴别研究进展及资源开发

对名贵药材蛤士蟆油的来源、性状、显微、理化等四个方面进行鉴别研究进展，并对资源开发提出了设想     

高效液相色谱法测定哈蟆油中雌二醇的含量

目的:建立高效液相色谱法测定哈蟆油中雌二醇含量的方法。方法:采用HPLC法,样品经丙酮超声提取,蒸干,甲醇定容,色谱柱Kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm),甲醇-水(55∶45)为流动相,流速:1.0mL.min-1,检测波长205nm,柱温:30℃。结果:雌二醇在0.001～0.016μg(R=0.9997,n=5)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.75%,RSD为1.01%(n=9)。结论:研究所建立的方法适合雌二醇的定量分析,该方法简便易行,灵敏度高,重现性好,可用于控制哈蟆油及其制剂中雌二醇的含量。     

哈蟆油与蟾蜍输卵管水试鉴定初探

实验观察了浸泡时间、水温等因素对哈蟆油及蟾蜍输卵管体积膨胀倍数的影响,在此基础上提出关于水试的仪器、操作、结果分析等方面的初步设想。     

HPLC测定哈蟆油中十六烷酸胆甾醇酯含量研究

目的:建立测定哈蟆油中的十六烷酸胆甾醇酯的含量方法。方法:采用ZorbaxSilica色谱柱,流动相为环己烷-乙醚(40:1);检测波长203nm;柱温40℃;流速1mL·min^-1。结果:十六烷酸胆甾醇酯在0.60-8.92μg具有良好线性关系,平均回收率为98.4%,RSD1.8%,具较好的精密度及稳定性。结论:HPLC测定哈蟆油中的十六烷酸胆甾醇酯的含量,不仅操作简单、准确,而且重复性好。     

哈蟆油石油醚提取物的抗抑郁作用

目的:探索哈蟆油石油醚部位(ROS)的抗抑郁作用及可能的机制.方法:雄性ICR小鼠,分为2批,每批均设空白对照组(生理盐水)和6个治疗组(分别给予阳性药氟西汀10 mg·kg-1和ROS不同剂量10,30,100,300,900 mg· kg-1),连续灌胃给药8d.第1批动物在第7天给药后1h和第8天给药后1h,分别采用小鼠强迫游泳和小鼠悬尾2种“行为绝望”抑郁动物模型进行行为学观察;行为学观察结束后小鼠眼球取血,用放射免疫法检测小鼠血清皮质酮(CORT)水平.第2批动物在第8天给药后采用利血平拮抗模型,观察ROS对由利血平引起小鼠体温下降和运动不能的影响.结果:ROS 100,300,900 mg· kg-1均能不同程度地缩短小鼠强迫游泳和悬尾不动时间(P＜0.05),能拮抗利血平致小鼠体温下降和运动不能(P＜0.05),降低小鼠血清皮质酮水平(P＜0.05).结论:ROS具有抗抑郁作用,其机制可能与单胺类神经递质以及下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴密切相关.     

蟾蜍油炮制工艺及质量评价方法研究

目的 优化蟾蜍油干燥工艺,并建立以高效液相色谱法（HPLC）指纹图谱及氨基酸含量测定为主的质量评价方法。方法 以氨基酸和浸出物为指标,进行蟾蜍油热风干燥、自然阴干、冷冻干燥及真空干燥工艺的优选,分别考察了热风干燥的加热温度、加热时间、物料厚度,冷冻干燥的预冻时间、冷冻干燥时间,真空干燥的温度及时间对蟾蜍油的影响。采用HPLC建立15批蟾蜍油的指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价;同时,采用柱前衍生化法测定氨基酸含量。结果 蟾蜍油最佳工艺为不叠加样本,50 ℃热风干燥11 h。HPLC指纹图谱中共确定7个共有峰,相似度均大于0.99;异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸质量分数分别为0.40%~0.57%、0.57%~0.78%、0.54%~0.75%、0.26%~0.86%。结论 所确定的工艺及质量评价方法简便、重复性好,可为蟾蜍油的加工炮制及质量评价提供参考。     

基于COI序列的哈蟆油基原动物DNA条形码鉴定研究

哈蟆油具有较高的经济和社会价值,其混伪品较多,给市场造成了很大的混乱。利用基于COI序列的DNA条形码技术对已鉴定的东北林蛙、中国林蛙、桓仁林蛙和黑龙江林蛙进行PCR扩增和测序,建立4种林蛙COI基因数据库;将所测的序列与Gen Bank上的序列进行比对,显示为上述4种林蛙;应用MEGA(molecular evolutionary genetics analysis)7.0软件计算K2P遗传距离并构建NJ(neighbor-joining)系统聚类树,所测4种林蛙的序列和Gen Bank上下载的4种林蛙的序列分别聚为1支,但与Gen Bank上下载的2个外群独立分开,东北林蛙的COI基因可能存在地域性差异,但该技术并不能鉴别林蛙的雌雄。结果显示DNA条形码技术能够准确鉴定哈蟆油的基原动物,说明DNA条形码COI为哈蟆油基原动物的鉴定提供一个新的手段和方法。     

RP-HPLC测定哈蟆油中1-甲基海因的含量

 目的建立哈蟆油中1-甲基海因反相高效液相色谱(RP-HPLC)含量测定方法。方法采用ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈柱(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,检测波长为235 nm,乙腈-水(10∶90)为流动相,流速为0.3 mL·min^-1。结果在0.32～1.58μg内峰面积与其浓度呈良好的线性关系(r=0.999 9),方法的精密度RSD为0.8%。平均回收率为99.5%,RSD为1.3%。结论测定方法简便快捷、精密度高、准确性好,可以作为哈蟆油中1-甲基海因的测定方法,以控制其原料的质量。     

酶法水解林蛙油蛋白质的工艺研究

目的:林蛙油的蛋白质由体内消化转变为体外消化,提高蛋白质利用率。方法:采取双酶水解技术对林蛙油进行水解。结果:最佳工艺条件为:底物含量0.025g·g^-1,采用木瓜蛋白酶在pH7,温度60℃,酶含量0.4%,酶解3～4h后,再用胃蛋白酶水解,pH2～2.5,温度60℃,酶含量0.3%,酶解时间6～8h。结论:水解液冻干粉改善了林蛙油的溶解性和流动性,为制作各种药物制剂提供了方便。     

哈蟆油蛋白对骨质疏松预防及ALP,Osteocalcin,Runx-2基因表达的调节作用

目的:观察哈蟆油蛋白(ROP)的抗骨质疏松作用,并探讨其对骨生长相关基因的调节作用。方法:采用去势法建立大鼠骨质疏松模型,随机分为空白组,模型组,戊酸雌二醇组,ROP高、中、低剂量组(0.15,0.075,0.037 5 g·kg~(-1));利用X射线技术测量股骨和腰椎骨密度(BMD);利用骨骼强度仪检测股骨的最大载荷量;应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测骨生长相关基因的表达。结果:与空白组比较,模型组股骨、腰椎骨密度明显降低(P0.05,P0.01),碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP),Osteocalcin,Runx-2基因表达均显著下调(P0.01);与模型组比较,ROP高、中剂量组腰椎BMD均有显著增加(P0.01),ROP高剂量组ALP,Osteocalcin,Runx-2基因表达显著上调(P0.01)。结论:ROP能显著提高大鼠BMD和最大载荷量;ROP可能通过上调ALP,Osteocalcin,Runx-2基因的mRNA表达,促进成骨分化,调节骨代谢平衡,从而发挥防治骨质疏松的作用。     

哈蟆油基原物种DNA分子鉴定研究

目的建立一种简单、可行的蛤蟆油基原物种DNA分子鉴定方法,并为其鉴定提供有效的手段。方法以COI作为条形码序列,对蛤蟆油基原物种中国林蛙和黑龙江林蛙进行DNA提取,PCR扩增和双向测序,用CodonCode Aligner V 4.2.7校对拼接,并用MEGA6.0对其样品进行种内分析。结果实验样品可以获得蛤蟆油基原物种的序列,中国林蛙有34个碱基变异位点,种内平均K2P距离为0.042,种内最大K2P距离为0.058。黑龙江林蛙有3个碱基变异位点,种内平均K2P距离为0.003,种内最大K2P距离为0.005。结论运用COI条形码序列能够准确鉴定蛤蟆油基原物种,为其鉴定提供新方法。     

哈蟆油动物基原问题探讨

目的 :根据历史文献及现代在中国林蛙分类方面研究成果 ,确定哈蟆油的正品动物基原。方法 :查阅历代本草著作及相关历史文献资料与近代国内外对中国林蛙有关研究报道 ,进行整理、分析、总结。结果 :本草著作中记载的山蛤原动物为中国林蛙 ;中国林蛙是独立的种 ,而不是欧洲林蛙的一个亚种 ;中国林蛙有 4个亚种 ,分别为中国林蛙指名、兰州、康定、长白山亚种 ;哈什蟆的原动物为中国林蛙长白山亚种。结论 :中国林蛙长白山亚种为哈蟆油正品动物基原。     

哈蟆油石油醚提取物的抗抑郁作用及其机制

目的 研究哈蟆油石油醚提取物（PERO）对慢性温和应激抑郁模型大鼠的抗抑郁作用及其作用机制。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、盐酸氟西汀（10 mg/kg）阳性对照组和PERO各剂量（30、100、300 mg/kg）组,每天给药1次,连续给药21 d。PERO和模型组末次给药后1 h、盐酸氟西汀于末次给药后0.5 h,每天进行慢性应激刺激,制备抑郁模型,连续21 d。观察大鼠体质量变化;采用旷场实验和蔗糖偏好实验检测大鼠行为学变化;酶联免疫吸附（ELISA）法测定大鼠血清皮质酮的水平;Western blotting法检测大鼠海马中脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白的表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠的体质量、蔗糖偏爱度下降,在旷场实验中的运动距离明显减小,血清中皮质酮水平显著升高,海马中BDNF蛋白表达显著下降。与模型组相比,PERO各剂量组均能不同程度地改善抑郁大鼠体质量的下降,增加蔗糖偏爱度和在旷场实验中的运动距离,降低大鼠血清皮质酮的水平,增加大鼠海马中BDNF的蛋白表达。结论 PERO具有明显的抗抑郁作用,其机制可能与调节下丘脑-垂体-肾上腺轴功能和提高BDNF蛋白的表达有关。