异补骨脂素对小鼠胚胎前成骨细胞TGF-β受体影响的实验研究

目的:探讨经不同浓度异补骨脂素干预对小鼠胚胎前成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、Ⅰ型骨胶原的表达、TGF-βⅠ、Ⅱ型受体的影响以及与原发性骨质疏松症的关系。方法:细胞分为正常对照组与不同浓度异补骨脂素组。各组细胞采用MTT方法检测MC3T3-E1细胞增殖情况,天狼星红染色法测定Ⅰ型骨胶原的表达,荧光素酶报告基因检测TGF-β1通路活性以及Western-Blot法检测TGF-βⅠ、Ⅱ型受体的表达。结果:经不同浓度异补骨脂素刺激,可明显促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05);Ⅰ型胶原表达逐渐增强;荧光素酶报告基因检测显示TGF-β1通路活性明显增强;Western-Blot结果显示TGF-βⅠ、Ⅱ型受体表达明显增强。结论:异补骨脂素可促进小鼠胚胎前成骨细胞的增殖及Ⅰ型骨胶原表达,对原发性骨质疏松症具有治疗作用。其作用机制可能是通过激活TGF-β信号通路而发挥抗骨质疏松作用。     

异补骨脂素对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化成熟的影响

目的:研究异补骨脂素(Isopsoralen,IP)对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖与分化成熟的影响。方法:取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法获得成骨细胞,培养于含10%FBS的MEM培养液中,3 d后首次换液,铺满90%皿底后传代培养;增殖分析采用96孔板,加入在培养液中终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L的异补骨脂素,MTT法分析;分化分析采用24孔板,于成骨性诱导培养第3、6、9、12、15天分别测碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性、钙含量、骨钙素,第12天进行ALP组织化学染色,第14天进行茜素红染色和钙化结节计数。结果:终浓度为1×10-4mol/L的异补骨脂素对细胞增殖有抑制作用,而1×10-5mol/L浓度虽对ROB增殖无明显影响,但能显著提高细胞ALP活性、增加钙含量、促进骨钙素分泌,并增加钙化结节数量。结论1×10-5mol/L异补骨脂素能促进ROB分化成熟,应为中药补骨脂抗骨质疏松的有效成分。     

pH对补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素浸出率的影响

目的：观察pH对补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素浸出率的影响。方法：用不同pH值水溶液对补骨脂进行提取，通过HPLC梯度洗脱测定补骨脂紊和异补骨脂素的含量。结果：在实验pH值下，补骨脂素和异补骨脂素的含量均有变化。结论：pH影响补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的浸出率。     

补骨脂素对酒精性成骨细胞凋亡的影响

目的:观察补骨脂素干预酒精性成骨细胞凋亡的影响。方法:体外分离培养成骨细胞,随机分为四组:空白组、酒精组、补骨脂素组及补骨脂素+酒精组,利用ALP染色观察细胞凋亡形态学改变、FITC-Annexin V/PI凋亡检测凋亡细胞的发生率。结果:四组中酒精组成骨细胞凋亡率最高,其次是酒精+补骨脂素组,再次是补骨脂素组,最后是空白组,四组之间两两比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:根据实验结果,说明酒精能促进成骨细胞凋亡,酒精组凋亡率最高,而在补骨脂素加入酒精组后,成骨细胞凋亡率明显降低,说明补骨脂素能延缓成骨细胞的凋亡。     

深加工对补骨脂浸出物及其补骨脂素、异补骨脂素含量的影响

目的:改进补骨脂加工炮制方法.方法:将补骨脂用自制轧药机轧扁至裂开,与未轧的药材分别加水或乙醇提取,以水或醇溶性浸出物量及其补骨脂素、异补骨脂素含量为考察指标,用高效液相色谱法测定,条件为:Supelco ODS C18柱,柱温30℃,流动相为甲醇-水(43:57),检测波长为246 nm.结果:在相同条件下,补骨脂轧扁样品的水或醇溶性浸出物量及其补骨脂素、异补骨脂索含量均比未轧的整粒高,其中,水溶性浸出物增加了0.61倍,醇溶性浸出物增加了1.53倍,水溶性及醇溶性浸出物中补骨脂素、异补骨脂素含量均增加了1.22倍,两者得率悬殊,差异显著.结论:补骨脂经轧扁法加工后能显著提高浸出物量及其有效成分的提取率,增进临床疗效,方法合理,值得推广.     

磷脂对骨康方补骨脂素、异补骨脂素煎出的增溶作用探讨

选用Ｌ１２（２＾１１）正交表，观察骨康方中各药与补骨脂配伍后，磷脂和补骨脂素，异补骨脂的煎出量，探讨磷脂对补骨脂有效成分煎出的影响。实验结果提示，中药复汶配伍对有效成分的增溶，存在着多种影响因素；磷脂含量是主要影响因素之一。     

腰疼丸中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定

研究建立HPLC法测定腰疼丸中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法 ,回归方程为 :补骨脂素Y =16 5 96 384C -94 80 ,r=0 9999;异补骨脂素 :Y =16 5 7985 3C 114 10 ,r=0 9999;线性范围 :补骨脂素 0 10 14～ 0 70 98μg;异补骨脂素 0 10 38～0 72 6 6 μg。     

不同产地补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定

应用高效液相色谱法,测定了不同产地补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的含量.色谱柱为Kromasil-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:甲醇-水(45: 55),检测波长:245 nm,流速:1.0 ml/min,柱温:35℃.结果:补骨脂素在0.0448～0.448μg(r＝0.9999)范围内、异补骨脂素在0.0356～0.356μg(r＝0.9997)范围内线性关系良好,补骨脂素和异补骨脂素平均回收率分别为98.69%(RSD＝1.97%)和101.09%(RSD＝3.06%).     

HPLC测定腰痛片中补骨脂素和异补骨脂素的含量

腰痛片收载于《部颁标准》中药第5册,是由杜仲、补骨脂、续断、当归等12味药组成,具有强腰补肾,活血止痛的功效。该制剂质量标准目前尚无定量指标。其中补骨脂为补肝肾强筋骨的主药之一,现特以HPLC法测定补骨脂素和异补骨脂素的含量,作为该制剂的定量分析方法,为该制剂的质量标     

补肾益脑胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定

目的:建立补肾益脑胶囊(补骨脂,红参,茯苓等)中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法。方法:采用HPLC法,用C18色谱柱,以甲醇-水(55∶45)为流动相,检测波长247 nm。结果:补骨脂素在0.038~0.309μg,异补骨脂素在0.036~0.295μg范围内线性关系良好,平均加样回收率:补骨脂素为99.50%,RSD为0.91%(n=5);异补骨脂素为100.52%,RSD为1.70%(n=5)。结论:该法简便快速,准确实用,可用于控制补肾益脑胶囊的质量。     

补肾宁心方对小鼠绝经后骨质疏松的选择性作用

目的:探讨补肾宁心方防治绝经后骨质疏松的作用。方法:建立BALB/c小鼠绝经后骨质疏松模型,灌服补肾宁心方浓缩液(简称补肾方),并以17β-雌二醇为阳性对照(简称E2组),以生理盐水为阴性对照(简称模型组)。12周后处死,取血测Th1/Th2型细胞因子;取椎骨(L3-4)和左股骨测骨密度(BMD);取右股骨行骨组织形态计量分析;胫骨提取总RNA,半定量RT-PCR分析护骨素(OPG)的mR-NA表达。计算子宫对体重的比值,并行子宫组织切片观察。结果:补肾方组的IFNγ-水平较模型组明显升高(P<0.01);而IL-4水平低于模型组(P<0.05)。补肾方组与E2组均可改善小鼠的BMD,增加骨小梁面积,使OPG mRNA表达增加。补肾方组的子宫与模型组比较无显著性差异。结论:补肾方能够选择性地防治绝经后骨质疏松,对子宫无或仅有轻微的刺激作用。其机制与调节Th1/Th2的偏离及提高OPG的表达,抑制破骨细胞的活性有关。     

硒化壳聚糖对NB4细胞的生长抑制作用与Ras信号通路的关系(英文)

目的研究硒化壳聚糖(Sc)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4增殖的影响,探讨这种影响与PML-RARα融合蛋白及其激活的Ras信号途径的关系。方法 NB4为表达PML-RARα融合蛋白阳性的细胞株,K562为表达PML-RARα融合蛋白阴性的细胞株,应用MTT法检测Sc对两种细胞株增殖的影响,应用流式细胞术和Western blot的方法检测两种细胞株相关蛋白含量的变化。结果 Sc对两种细胞株均可产生剂量和时间依赖性的抑制作用,相比之下,对K562细胞的抑制作用明显较弱(P<0.05)。Sc处理后,NB4细胞内PML-RARα融合蛋白和c-Jun信号蛋白含量明显减少,而K562细胞内c-Jun信号蛋白含量则轻微减少。结论 Sc可特异性地减少PML-RARα融合蛋白的含量从而下调其激活的Ras信号途径,最终抑制NB4细胞增殖。     

柔毛淫羊藿对去卵巢小鼠骨密度、破骨细胞和IL-1β的影响

目的:探讨单味中药柔毛淫羊藿( EPM)对去卵巢小鼠骨密度、破骨细胞和白介素-1β(IL-1β)的影响.方法:切除雌性小鼠双侧卵巢制备骨质疏松动物模型,随机分为模型组、己烯雌酚( DES,2 mg·kg-1)组及EPM水煎浸膏高、中、低剂量( 200,100,50 mg·kg-1)组,另设正常对照组.术后45 d开始给予相应药物,1次/d,60d后检测小鼠骨组织骨密度、破骨细胞数和骨组织中IL-1β.结果:模型组动物呈现明显的骨质疏松表现;给药组动物骨密度增加;EPM高、中、低剂量骨组织破骨细胞数分别为(1.9±1.0),(0.9±0.6),(0.8±0.4)个,明显低于模型组(3.4±1.6)个,(P ＜0.05或P＜0.01);EPM高、中、低剂量骨组织IL-1β阳性细胞数分别为(11.6±2.1),(12.4±2.2),(16.4±2.7)个,明显低于模型组(20.6±3.2)个(P＜0.01).结论:EPM能增加去卵巢骨质疏松症小鼠的骨密度、降低破骨细胞数和IL-1β的表达.     

胶原诱导类风湿关节炎小鼠的重要脏器病理变化

目的：观察胶原诱导关节炎（Collagen Induced Arthritis, CIA）小鼠发病高峰期重要脏器的病理变化。方法：20只雄性DBA/1小鼠随机分为正常组和模型组,模型组给予牛II型胶原混合完全弗氏佐剂诱导CIA模型。造模后每周进行关节炎指数评分,于第63天处死小鼠,取心、肝、脾、肺、肾各组织和踝关节,利用HE染色法观察各脏器的病理变化,并采用Real-time PCR法检测小鼠肺组织中转化生长因子β1（Transforming Growth Factor Beta 1, TGF-β1）以及肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factor Alpha, TNF-α）的mRNA表达水平。结果：成功建立了DBA/1小鼠胶原诱导关节炎模型。HE染色结果表明,除了踝关节出现明显的病理变化外,CIA小鼠的肺部有大量的炎细胞浸润,肺泡间隔增厚,肺泡腔中有炎性浸出物,而心脏、肝脏、脾脏和肾脏没有出现明显的病理变化。Real-time PCR结果显示病变的小鼠肺组织中TGF-β1和TNF-α的含量均显著高于正常的肺组织。结论：胶原诱导的DBA/1小鼠,其踝关节呈现严重的病理变化,其肺部也出现明显的炎症,且与类风湿关节炎肺部并发症的病理变化有相似之处,这些结果提示该模型可用于类风湿关节炎肺部病变的相关研究。     

磷脂对骨康方补骨脂素、异补骨脂素煎出的增溶作用探讨

选用Ｌ１２（２１１）正交表，观察骨康方中各药与补骨脂配伍后，磷脂和补骨脂素、异补骨脂素的煎出量，探讨磷脂对补骨脂有效成分煎出的影响。实验结果提示，中药复方配伍对有效成分的增溶，存在着多种影响因素；磷脂含量是主要影响因素之一。     

中药复方对骨质疏松大鼠雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨自拟中药复方对实验性骨质疏松大鼠雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响及骨细胞数目的影响.方法:切除大鼠卵巢造成骨质疏松模型,随机分组对照处理,3月后应用原位杂交法和HE色观察雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的表达及成骨细胞数量.结果:中药复方组成骨细胞数目增加(P＜0.01),雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达水平提高(P＜0.01).结论:自拟中药复方具有拟雌激素样作用,可使骨质疏松大鼠骨内雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达增强,调节骨代谢,增加骨质疏松大鼠成骨细胞数目.     

白花前胡甲素对Ang II诱导的核转录因子c-Jun蛋白表达的影响

目的:探讨白花前胡甲素(Pd-Ia)对Ang II诱导的核转录因子c-Jun蛋白表达水平的影响。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞;免疫细胞化学检测核转录因子c-Jun蛋白表达情况。结果:AngII(10-6mol/L)刺激心肌细胞2h后,细胞核内c-Jun蛋白表达显著增强,为对照组的2.8倍(P<0.01);白花前胡甲素对此有显著抑制作用(P<0.05)。结论:白花前胡甲素能够拮抗AngII诱导心肌细胞c-Jun蛋白表达上调。     

针灸对实验性骨质疏松症的影响

通过切除大鼠双侧卵巢造成实验性骨质疏松症动物模型,以假手术组和西药（肌注雌激素）组作为对照,观察针刺和艾灸对骨质疏松大鼠骨代谢的影响。结果显示,针刺和艾灸能提高雌激素水平,抑制骨吸收,促进骨形成,从而改善骨代谢负平衡状态,对雌激素缺乏引起的骨质疏松症有一定的治疗作用。     

补骨脂素和异补骨脂素体外透皮特性研究

目的：探讨补骨脂素和异被骨脂素透皮特性。方法：采用V－C水平扩散池，和常用促透剂乙醇，氮酮，甘油研究补骨脂素和异补骨脂素在裸鼠皮肤中的透过性。结果：补骨脂素和异补骨脂素能够透过裸鼠皮肤，异补骨脂素渗透系数较补骨脂素大，所选用的促渗剂中以10％乙醇－1％氮酮的复合促渗剂为好。结论：本研究为补骨脂透皮制剂研究提供了依据。