次声作用后大鼠海马星形胶质细胞的变化

目的研究8Hz,90dB和130dB次声作用后不同时间点,大鼠海马中胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化。方法8Hz,90dB和130dB次声作用于大鼠,2h/d,分别作用1,7,14,21,28d后采用免疫组织化学方法,观察大鼠海马星形胶质细胞GFAP表达的时程改变。结果130dB组从作用1d开始大鼠海马中GFAP阳性星形胶质细胞数量开始增加,14d达到高潮,21d开始下降,但仍然维持较高水平;90dB组大鼠各时间点GFAP反应均比130dB组弱。结论8Hz,90dB和130dB次声作用可以激活海马大量星形胶质细胞,对神经元具有保护作用。     

促肾上腺皮质激素对脐静脉内皮细胞株及星形胶质细胞的毒性作用研究

目的 探讨促肾上腺皮质激素[ACTH(1-24) ]对脐静脉内皮细胞株(ECV304)和星形胶质细胞的细胞毒性作用.方法 采用体外细胞培养技术,以细胞形态学、细胞活性、乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞凋亡率的改变为指标,观察不同浓度的ACTH(1-24) 对ECV304和星形胶质细胞的影响.结果 ACTH(1-24)血药浓度在1 μg/ml、5 μg/ml、25 μg/ml、100 μg/ml、200 μg/ml范围内对ECV304和星形胶质细胞的形态、细胞活性、凋亡率及LDH的释放均无明显影响,组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ACTH(1-24)在1～200 μg/ml的浓度范围内对ECV304和星形胶质细胞均无毒性作用.     

川芎嗪对大鼠星形胶质细胞在氧糖剥夺损伤中的保护作用

目的　探讨川芎嗪对培养大鼠星形胶质细胞在氧糖剥夺损伤中的保护作用及可能机制。方法　利用氧糖剥夺 (OGD)建立星形胶质细胞缺血再灌损伤模型后 ,分别测定细胞培养上清中一氧化氮 (NO)、乳酸脱氢酶 (LDH)浓度。四甲基偶氮唑盐 (MTT)代谢率测定星形胶质细胞活力。免疫组化检测核转录因子 -κB(NF -κB)活化程度。结果　川芎嗪干预组与模型组比较 ,NO分泌量、LDH漏出、细胞活力下降均明显减少 (P <0 0 1) ;P6 5胞核移位明显减少 (P <0 0 1)。结论　川芎嗪对培养大鼠星形胶质细胞在氧糖剥夺损伤中具有保护作用 ,其作用机制之一可能是通过抑制NF -κB活化 ,减少NO分泌来实现的。     

次声作用后大鼠海马星形胶质细胞的变化

目的 研究8Hz,90dB和130dB次声作用后不同时间点，大鼠海马中胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）表达的变化。方法 Hz,90dB和130dB次声作用于大鼠，2h/d，分别作用于1，7，14，21，28d后采用免疫组织化学方法，观察大鼠海马星形胶质细胞GFAP表达的时程改变。结果 130dB组从作用1d开始大鼠海马中GFAP阳性星形胶质细胞数量开始增加，14d达到高潮，21d开始下降，但仍然维持较高水平90dB组大鼠各时间点GFAP反应均比130dB组弱。结论 8Hz,90dB和130dB次声作用可以激活海马大量星形胶质细胞，对神经元具有保护作用。     

大鼠海马脑片星形胶质细胞与NG2胶质细胞形态学及电生理特性比较

目的:比较研究大鼠海马脑片星形胶质细胞和NG2胶质细胞(以下简称NG2细胞)的形态学特点和电生理特性,为区别这两种胶质细胞提供依据,也为进一步研究两者的功能及相互关系等提供实验基础。方法:以P21～P25大鼠海马CA1区放射层胶质细胞为研究对象,通过脑片钳全细胞记录、记录后染色标记以及激光共聚焦成像等技术方法,比较星形胶质细胞与NG2细胞在形态学和电生理学特性上的异同。结果:形态学上,星形胶质细胞具有大量的突起,并且突起呈丛状分支,极细的突起非常发达,形成海绵样结构;NG2细胞也具有较多突起,但突起分支较少,突起呈长线状延伸出较长的距离,往往缺少星形胶质细胞典型的一个或多个粗大的一级突起。电生理特性上,两种细胞的静息膜电位(RMP)非常接近,而膜电容(Cm)和膜电阻(Rm)则差异非常大。对于星形胶质细胞,其I-V曲线呈线性,电流没有任何整流现象;而NG2细胞I-V曲线具有明显的外向整流特性,表达大量的快钾通道电流(Ka)、延迟整流钾电流(Kdr),以及比较小的内向整流钾电流(Kir);而且部分NG2细胞还表达低密度的电压依赖性钠电流。结论:大鼠海马脑片星形胶质细胞和NG2细胞在形态学和电生理上均存在一定的差异;在脑片钳实验中,根据这些差异,可以清楚地区分两者。     

次声刺激诱导原代培养大鼠星形胶质细胞释放谷氨酸的研究

摘要 目的：观察16Hz, 130dB次声刺激对原代培养的大鼠星形胶质细胞谷氨酸释放的影响,并探讨其释放机制。 方法：原代培养大鼠海马区星形胶质细胞,将其分为次声刺激组（IE group,n=6）,Gap26+次声刺激组（Gap26+IE group）,对照组（Ctrl group,n=6）。次声刺激组细胞暴露于次声舱中,分别给予15min, 30min, 60min, 90min, 120min和240min的次声刺激;对于Gap26+IE组,则在次声刺激前,选用Cx43半通道阻断剂Gap26预处理星形胶质细胞;对照组也置于次声舱,但不给予次声刺激。次声刺激频率为16Hz,强度为130dB。为了排除Gap26对谷氨酸释放的影响,还选用乱序Gap26肽段(Scrb Gap26)来预处理星形胶质细胞（Scrb Gap26+IE group,n=6）。采用免疫荧光染色测定细胞Cx43的表达情况,采用高效液相色谱（HPLC）来测定细胞外液谷氨酸浓度。 结果：次声刺激后,IE组细胞外液谷氨酸的浓度显著升高,并在刺激90min后,细胞外液谷氨酸浓度达峰值,为（4.6±0.3）nmol/ml,显著高于对照组（2.3±0.2）nmol/ml（P<0.05）,这说明次声刺激可以显著增高星形胶质细胞外液的谷氨酸含量。此外,次声刺激后,IE组细胞Cx43的表达也显著升高,刺激60mins时,Cx43平均荧光强度达到峰值,为（198±33）(AUC),显著高于对照组（P<0.05）。而对于Gap26+IE组,次声刺激后细胞外液谷氨酸浓度的升高受到抑制,90min后,细胞外液谷氨酸浓度为（3.58±0.17）nmol/ml,显著低于次声刺激组（P<0.05）。 结论：次声刺激可以诱导星形胶质细胞释放谷氨酸;Cx43半通道阻断剂Gap26抑制了谷氨酸释放,次声刺激诱导的谷氨酸释放可能是通过Cx43半通道来完成的。     

大鼠脑皮质未成熟星形胶质细胞的分离、鉴定及原代培养

目的探讨大鼠脑皮质未成熟星形胶质细胞的分离、鉴定及原代培养技术。方法采用差速贴壁法清除成纤维细胞及酶消化去除少突胶质细胞污染,应用免疫荧光进行细胞鉴定。取不同时间点的细胞在倒置显微镜下观察细胞形态变化,双重免疫荧光染色观察细胞生长过程的分化状态。结果细胞形态观察提示:6~14 d细胞呈均匀扁平多角状,16 d后部分细胞肥大增生,呈成熟状态。免疫组化染色显示:GFAP(+)细胞达97%。免疫荧光双重标记发现:16 d后细胞表达vimentin和nestin这两种蛋白减弱。结论本实验技术可获得纯度高,形态和功能良好,表达稳定的大鼠脑皮质未成熟星形胶细胞。     

吸氧预处理对大鼠大脑皮质星形胶质细胞的影响

目的 观察吸氧预处理对大鼠大脑皮质内胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响，探讨吸氧预处理产生的脑缺血耐受与星形胶质细胞的关系。方法 雄性SD大鼠6只，随机分为两组：吸氧预处理组和对照组各3只。吸氧预处理组大鼠吸入1000ml/L氧气，持续24h。间隔24h后经心脏多聚甲醛灌注，取脑，固定，冷冻切片机冠状切片；对照组大鼠不给予吸氧预处理，吸空气24h，余同吸氧预处理组。用免疫组化法（ABC法）进行免疫组化染色，观察胶质原纤维酸性蛋白在大鼠大脑皮质的表达，比较两组大鼠的表达差异。结果 吸氧预处理组大鼠各部大脑皮质内胶质原纤维酸性蛋白阳性细胞明显增多（P&;lt;0.05），包括枕皮质（t=8.32）、压后部皮质（t=6.l7）、顶皮质（t=4.76）、额皮质（t=4.93)、皮质前（t=6.17）和后肢区（t=7.48）等，细胞分布密集。胶质细胞形态亦与对照组不同：胞体肥大，突起粗而长，染色深。对照组大鼠大脑皮质内GFAP阳性细胞呈散在分布，阳性细胞的胞体小，突起细而短，染色浅淡。结论 吸氧预处理可以明显刺激大鼠大脑皮质GFAP的产生，使星形胶质细胞处于激活状态，与诱导脑缺血耐受的产生有关。     

丙泊酚对慢性神经痛大鼠脊髓星形胶质细胞激活的影响

目的 :研究丙泊酚对慢性神经痛大鼠脊髓星形胶质细胞激活的影响。方法 :Wistar大鼠 4 0只 ,随机分为 4组 ,Ⅰ组为正常对照 ;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组结扎左侧坐骨神经 ,术后第 7天 ,Ⅰ、Ⅱ组腹腔均注射生理盐水 5 0ml·kg 1,Ⅲ、Ⅳ组腹腔分别注射丙泊酚 5 0、75mg·kg 1( 1mgoml 1) ,共 7d ;术后第 6、10和 13天 ,使用VonFrey纤维分别测定各组动物触诱发痛阈 ,观察丙泊酚对其影响 ;随后取脊髓切片 ,观察星形胶质细胞在脊髓背角的分布。结果 :①与Ⅰ组比较 ,Ⅱ组双侧的 5 0 %缩足阈值 (PWTs)在术后第 6、10和 13d均较低 (P <0 .0 5 ) ;与Ⅱ组比较 ,Ⅲ、Ⅳ组双侧的PWTs在术后第 10、13天升高 (P <0 .0 5 )。②Ⅱ组星形胶质细胞在脊髓背角的分布密度 (AD)、平均光密度 (AOD)和积分光密度 (IOD)值显著高于Ⅰ组 (P <0 .0 1) ,Ⅲ、Ⅳ组低于Ⅱ组 (P <0 .0 5和P <0 .0 1)。③与Ⅱ组比较 ,Ⅲ、Ⅳ组星形胶质细胞在脊髓背角数量、体积依次减少。结论 :慢性神经痛大鼠的脊髓星形胶质细胞被激活 ,丙泊酚可抑制激活 ,抑制程度与剂量有相关性     

氯胺酮对脊神经结扎大鼠脊髓背角星形胶质细胞的影响

目的：观察腹腔注射氯胺酮（KET）对脊神经结扎（SNL）大鼠脊髓背角星形胶质细胞的影响.方法：雄性SD大鼠42只随机分为五组：SHAM组;KET0组和NS0组结扎后分别腹腔注射KET 10mg/kg和生理盐水（NS）10 ml/kg;KET7组和NS7组,结扎7天后分别腹腔注射KET 10 mg/kg和NS.每组（除SHAM组）给药,每天两次,共7天.结扎后第4、7、14、21、28天行机械性痛敏实验,并用组化方法测定右侧脊髓背角胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性细胞的变化.结果：与SHAM比较,KET0、NS0组机械痛敏试验的压力阈值（PWPT）下降,二者GFAP阳性细胞染色较SHAM深,GFAP免疫反应阳性产物表达相对面积分别增加45.0%（P＜0.01）和86.7%（P＜0.01）;与NS7比较,KET7组PWPT升高,KET7组GFAP阳性细胞染色较NS7组浅,相对面积（不同时段）分别下降40.3%（P＜0.01）和24.6%（P＜0.01）.结论：低剂量的KET能抑制星形胶质细胞的激活,从而起到治疗神经病理性疼痛的作用.     

olomoucine对星形胶质细胞增殖的影响及机制研究

目的:观察细胞周期抑制剂olomoucine对培养星形胶质细胞(AS)机械损伤后增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:建立体外培养大鼠纯化的AS物理损伤模型(划痕损伤模型),随机分为对照组、划痕组和干预组,划痕组和干预组均继续培养,干预组给予olomoucine干预。利用免疫荧光细胞化学方法观察损伤后BrdU表达;利用Westernblot印迹分析损伤后PCNA、p27的表达。结果:划痕损伤刺激12h开始出现损伤边缘区AS胞体肥大、数目增加,BrdU阳性细胞比率和PCNA表达水平较对照组增高(P<0.05),p27表达水平较对照组下降(P<0.05);干预组的BrdU阳性细胞比率和PCNA表达水平较划痕组明显减少(P<0.05),p27表达上调(P<0.05)。结论:损伤刺激可促使AS发生反应性胶质增生,CDK选择性细胞周期抑制剂olomoucine可以通过调控细胞周期抑制其反应性增生。     

缺氧/复氧条件下体外培养星形胶质细胞神经生长因子分泌的变化

目的:观察缺氧/复氧(H/R)条件下体外培养星形胶质细胞的活力变化及神经营养因子(NGF)的合成和分泌的变化。方法:采用原代培养的新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞,分为正常(N)组及H/R组。在H/R不同时间点,应用倒置显微镜进行形态学观察,并结合台盼蓝染色,明确缺氧不同时间对星形胶质细胞形态和活力的影响。在H/R不同时间后,应用ELISA检测星形胶质细胞培养上清液中NGF蛋白的含量,应用q RT-PCR检测NGF m RNA的表达。结果:缺氧6 h、复氧48 h内,H/R组的星形胶质细胞的细胞活力未发生明显改变。在缺氧6 h、复氧12 h以及24 h后,H/R组的NGF m RNA表达量及蛋白的分泌较N组显著增加(P0.01)。结论:H/R条件可促进体外培养星形胶质细胞NGF的分泌及合成量的增加。     

光基因技术选择性调控星形胶质细胞内 钙离子水平的研究

目的:研究光敏感通道蛋白(ChR2)选择性调控星形胶质细胞,对其细胞内钙离子水平的影响。方法:离体培养SD大鼠星形胶质细胞细胞,采用慢病毒载体Lenti-GFAP-ChR2-YFP感染星形胶质细胞后,钙离子荧光探针Rhod-2 AM作为钙离子活动的指示,以470 nm波长的蓝光刺激星形胶质细胞,实时在共聚焦荧光下检测星形胶质细胞钙离子活动。结果:成功将光敏感通道蛋白(ChR2)表达在星形胶质细胞;激活光敏感通道ChR2后,引起星形胶质细胞内钙信号活动,钙离子水平增加。结论:以光敏感通道ChR2为核心的光基因技术可运用于调控星形胶质细胞钙离子活动。     

Oltipraz ameliorates the progression of steatohepatitis in Nrf2-null mice fed a high-fat diet

Oltipraz, a synthetic dithiolethione, has chemopreventive effect through nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) activation. Nrf2 is known to be involved in the development of experimental steatohepatitis in rodents. In this study, to evaluate the effect of oltipraz on lipid and bile acid metabolism, wild-type and Nrf2-null mice were fed the standard diet (containing 4% soybean oil) with or without oltipraz. Based on these results, we examined the effect of oltipraz on the experimental steatohepatitis in high-fat diet (containing 4% soybean oil and 20% lard) fed Nrf2-null mice. Oltipraz induced hepatic mRNA expression of peroxisome proliferator-activated receptor α, carnitine palmityl transferase 1, and bile salt export pump by Nrf2 independent mechanisms. In Nrf2-null mice fed a high-fat diet for 12 weeks, moderate to severe inflammation and fibrosis were observed. Oral administration of oltipraz suppressed the degree of inflammation and fibrosis in Nrf2-null mouse liver fed a high-fat diet. These histopathological findings approximately corresponded to the data of mRNA expression of tumor necrosis factor α, monocyte chemoattractant protein-1, Timp-1, and collagen type 1α1. These results indicated that oltipraz administration ameliorated liver injury by Nrf2 independent manner in a model of steatohepatitis generated by Nrf2-null mice with high-fat diet.     

转染VMAT2基因的中国仓鼠卵巢细胞对毒物抵抗作用的研究

目的:研究毒物鱼藤酮和1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)对野生型及转染囊泡单胺转运蛋白(VMAT2)基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的毒性作用。方法:将不同浓度的MPP+、鱼藤酮与野生型CHO细胞(WT-CHO)和转染VMAT2基因的CHO细胞(VMAT2-CHO)共同培养,采用细胞MTT比色法和形态学观察,探讨毒物对细胞的毒性作用,通过激光共聚焦显微镜观察毒物对2种细胞的细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响。结果:VMAT2-CHO在一定时间(72 h)内对MPP+(0.2-2.0 mmol/L)和鱼藤酮(0.05-1.0μmol/L)的毒性有抵抗作用(P<0.05)。结论:VMAT2可以抵抗一定浓度的MPP+和鱼藤酮引起的神经细胞毒性作用。     

半乳糖凝集素-1对低氧去血清培养星形胶质细胞表达和分泌BDNF的影响

目的：研究不同浓度半乳糖凝集素-1（Gal-1）对低氧去血清培养的星形胶质细胞表达和分泌脑源性神经营养因子（BDNF）的影响。方法：建立星形胶质细胞原代培养,设定10mg／L Gal—1组、1mg／L Gal-1组、0．1mg／LGal-1组和对照组分别予以10、1、0．1、0mg／LGal-1干预并进行低氧去血清培养,在低氧去血清培养1h、3h、6h、12h、1d、3d时通过RT—PCR、Western blotting、ELISA检测星形胶质细胞BDNFmRNA、蛋白的表达水平和培养上清液中细胞分泌的BDNF的浓度。结果：与对照组比较,10mg／L Gal—1组低氧去血清培养3h～1d星形胶质细胞合成BDNF持续增加,6h～3d星形胶质细胞分泌BDNF明显增多,均以6h时最为明显;1mg／L Gal-1组低氧去血清培养12h--1d星形胶质细胞合成BDNF明显增加,但分泌BDNF没有明显变化;0．1mg／L Gal-1组对低氧去血清培养各时问点星形胶质细胞表达和分泌BDNF均无明显变化。结论：10mg／L Gal-1能有效促进低氧去血清培养的星形胶质细胞表达和分泌BDNF;Gal-1可能通过此途径在脑缺血后起到神经保护作用。     

Protective effect of melatonin on myenteric neuron damage in experimental colitis in rats

Inflammation of the colon in patients with ulcerative colitis (UC) causes pain and altered motility, at least in part through the damage of the myenteric neurons (MNs). Thus, it is important to evaluate new drugs for UC treatment that could also protect myenteric neurons efficiently. As a well‐known neural protective and anti‐inflammatory agent, melatonin could protect neurons from damage through the activation of the nuclear factor erythroid 2‐related factor 2 and antioxidant responsive element (Nrf2–ARE) signaling pathway. Therefore, we investigated the potential protective effect of melatonin against MN damage during colitis induced by 2,4‐dinitrobenzene sulfonic acid (DNBS) in rats. Colitis was induced by intracolonic (i.c.) instillation of DNBS and treated with melatonin at a dose of 2.5 mg/kg for 4 days. The damage of MN in the left colon was immunohistochemically evaluated in different groups. Ulcerations and inflammation in the colon were semiquantitatively observed. Myeloperoxidase (MPO), superoxide dismutase (SOD), and malondialdehyde (MDA) levels were detected to evaluate the inflammatory and oxidative stress status. The protein and mRNA expressions of Nrf2 and heme oxygenase‐1 (HO‐1) in the colon were detected by Western blot and quantitative polymerase chain reaction (qPCR), respectively. Melatonin partially prevented the loss of MN and alleviated the inflammation and oxidative stress induced by DNBS. In addition, melatonin markedly increased the Nrf2 and HO‐1 level in the colitis. These results indicate that melatonin protects MN from damage by reducing inflammation and oxidative stress, effects that are partly mediated by the Nrf2–ARE pathway.     

Nrf2及其信号通路在脓毒症相关脏器损伤中的研究进展

脓毒症(sepsis)是重症监护病房(ICU)患者死亡的常见病因,治疗难度大,且预后较差,给全球医疗卫生系统造成巨大经济负担。然而针对脓毒症的治疗仍缺乏有效的防治手段。核转录因子-E2相关因子2(Nrf2)是抗氧化应激体系中的关键转录因子,它通过调节抗氧化反应原(ARE)介导的抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶等的表达,在脓毒症治疗中发挥关键作用。本文总结了Nrf2相关信号通路及其在脓毒症器官损伤中的最新研究进展,以期为临床治疗脓毒症提供新的治疗策略。     

临床相关浓度硫喷妥钠对大鼠脑胶质瘤细胞核因子-κB活性的影响

目的探讨临床相关浓度的硫喷妥钠及其不同作用时间对大鼠脑胶质瘤细胞核因子(NF)-κB活性的影响。方法取大鼠脑胶质瘤C6细胞株,分别与10^-3mol/L、10^-4mol/L、10^-5mol/L硫喷妥钠作用1h,在收集细胞前30min用10ng/ml脂多糖进行处理;取大鼠脑胶质瘤C6细胞株,分别与10^-5mol/L硫喷妥钠作用0.5h、1h、2h、4h,在收集细胞前30min用脂多糖进行处理。提取细胞总RNA,逆转录得到c-DNA,之后行PCR反应;NF-κB表达结果进行凝胶电泳分析(EMSA)并用Bio-Rad密度仪进行半定量分析。结果经10^-3mol/L、10^-4mol/L、10^-5mol/L硫喷妥钠处理的电泳带窄于对照,密度测量值低于对照(P<0.05),但各处理浓度之间密度测量值的无显著性差异。经10^-5mol/L硫喷妥钠作用0.5h、1h、2h、4h的各电泳带宽度依次递减,亮度依次递减;密度测量数值也依次递减(P<0.05),且低于对照(P<0.05)。结论硫喷妥钠对脑胶质瘤细胞NF-κB活性具有明显影响。这种影响与硫喷妥钠浓度无关,随硫喷妥钠作用时间的延长而增强。