NF—κB／IκB—α信号通路对ATRA诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的探讨NF-κB／IκB-α信号通路对全反式维甲酸（ATRA）诱导HL-60细胞凋亡的影响。方法将HL-60细胞与不同浓度的ATRA共同孵育，MTF法观察ATRA对细胞增殖作用，流式细胞术及电镜分析细胞凋亡．Western—Blot检测NF-KB及JKB吨的变化。结果MTT显示ATRA呈时间-剂量依赖方式抗HL-60细胞增殖．作用72h流式细胞术DNA直方图上出现典型的亚二倍体凋亡峰．透射电镜下见细胞核染色质致密浓缩．凋亡小体形成，Western—Blot产物艟示HL-60细胞NF—κBp65下降，而IκB—α上升。结论ATRA能抗HL-60细胞增殖诱导捌亡．该过程可能与抑制IKB—α的降解阻止NF—κB的活化有关。     

Bay117802抑制羟基喜树碱诱导的人乳腺癌Bcap37细胞凋亡

目的:探讨IκB-α磷酸化抑制剂Bay117082特异性阻断NFκB信号转导途径对羟基喜树碱(HCPT)诱导Bcap37细胞凋亡的影响。方法:采用MTT法测定细胞的增殖活力;琼脂糖凝胶电泳观察细胞调亡;Western blot研究细胞调亡所涉及的蛋白表达;DIG-EMSA研究NFκB/DNA结合状况。结果:5μmol.L-1Bay117082可以抑制HCPT对IκB-α的磷酸化,阻断NFκB信号转导途径,阻滞HCPT诱导的细胞凋亡,同时也抑制HCPT诱导pro-Caspase3和Bcl-2的降解。结论:Bay117082对HCPT诱导的乳腺癌细胞凋亡有明显的抑制作用,其作用机制与NFκB信号转导途径有关,NFκB起促进凋亡的作用。     

丹皮酚通过抑制NF-κB信号通路诱导Tca8113细胞凋亡

目的 研究丹皮酚对核因子κB（NF-κB）信号通路的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法 将丹皮酚以不同浓度及不同时间作用于人舌鳞癌Tca8113细胞,应用MTT法观察不同浓度丹皮酚在不同作用时间下对Tca8113细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33342荧光染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2,以及NF-κB信号通路组分中IκBα和p-IκBα的表达情况,并采用凝胶电泳迁移率检测（EMSA）对NF-κB活性进行测定。结果 经丹皮酚作用后,Tca8113细胞生长受到明显抑制,并呈明显的时间、剂量依赖效应关系。丹皮酚有明显诱导Tca8113细胞凋亡的作用,Western Blot 以及EMSA检测结果显示,丹皮酚上调Tca8113细胞中Bax与IκBα的表达,下调Bcl-2的表达,并能下调IκBα磷酸化及NF κB活性。结论 丹皮酚能够抑制NF-κB信号转导通路,进而抑制Tca8113细胞的增殖并诱导其凋亡。     

NF-kB/IκB-α信号通路对ATRA诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的探讨NF-kB/IκB-α信号通路对全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞凋亡的影响。方法将HL-60细胞与不同浓度的ATRA共同孵育,MTT法观察ATRA对细胞增殖作用,流式细胞术及电镜分析细胞凋亡,Western-Blot检测NF-κB及IκB-α的变化。结果MTT显示ATRA呈时间-剂量依赖方式抗HL-60细胞增殖,作用72h流式细胞术DNA直方图上出现典型的亚二倍体凋亡峰,透射电镜下见细胞核染色质致密浓缩,凋亡小体形成,Western-Blot产物显示HL-60细胞NF-κBp65下降,而IκB-α上升。结论ATRA能抗HL-60细胞增殖诱导凋亡,该过程可能与抑制IκB-α的降解阻止NF-κB的活化有关。     

oridonin部分通过TNFα信号转导途径诱导小鼠成纤维L929细胞凋亡

目的比较冬凌草甲素(oridonin)和TNFα诱导小鼠成纤维L929细胞凋亡的分子机制。方法MTT法、Hoechst33258荧光染色、DNA片断化分析和Western blot分析法。结果Oridonin和TNFα均能诱导L929细胞发生凋亡,其半数有效抑制浓度IC50分别为(24·8±1·2)μmol·L-1和(20·9±1·9)μg·L-1。Oridonin和TNFα均能引起L929细胞凋亡形态学变化,TNFα处理过的细胞在琼脂糖凝胶电泳上可见典型的凋亡DNA梯状条带,但是oridonin处理的细胞却不能,称之为非典型凋亡;caspase-3,-8抑制剂和caspase家族抑制剂能明显得促进25μmol·L-1oridonin和20μg·L-1TNFα诱导的L929细胞凋亡,caspase-9抑制剂只能促进oridonin诱导的L929细胞凋亡;ERK的抑制剂PD98059能明显的抑制oridonin和TNFα诱导的L929细胞凋亡,但是p38的抑制剂SB203580只能抑制TNFα诱导的L929细胞凋亡;在L929细胞中oridonin能促进内源性pro-TNFα的表达和其上游蛋白IκB的磷酸化。结论Oridonin通过激活转录因子NF-κB而促进内源性pro-TNFα的表达,并且部分通过细胞因子TNFα信号转到途径诱导L929细胞凋亡。     

IKBα、IKKα、IKKβ与Tim-3在肿瘤患者中表达及相关性研究

核因子(NF)-κB是重要的转录调控因子,其广泛存在于各种细胞中,参与免疫应激、细胞增殖、生长分化及细胞凋亡.NF-κB通常与其抑制蛋白IκB相结合,以非活性状态储存于细胞质中,只有当激活IκB激酶(IKK),水解IκB,解除了IκB的抑制作用,NF-κB才能进入细胞核中并与相应靶基因上的DNA序列(κB位点)结合,发挥基因转录功能.T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域相关分子-3(Tim-3)蛋白特异性表达于Th1细胞表面并参与自身免疫疾病的发病,也参与肿瘤免疫[1].为进一步探讨IκBα、IKKα、IKKβ及Tim-3在肿瘤患者体内之间的关系,本研究检测了IκBα、IKKα、IKKβ及Tim-3mRNA水平,并分析这些指标之间的相关性,报告如下.     

霉酚酸抑制内皮细胞核因子—κB的活性

目的：研究霉酚酸对内皮细胞核因子－κB（NF－κB）活力及其抑制因子IκBa的影响。方法：利用凝胶迁移率实验（EMSA）检测不同浓度的霉酚酸对一般培养状态和佛波脂（PMA）激活的内皮细胞的NF－κB活力影响。并用Western blot方法检测霉酚酸对NF－κB抑制因子IκBa的作用。结果：PMA显著激活内皮细胞中的NF－κB活性。降低IκBα的蛋白水平,霉酚酸抑制PMA刺激的内皮细胞NF－κB活性升高,并抑制内皮细胞胞浆IκBα蛋白的降解,结论：霉酚酸可影响内皮细胞NF－κB的活性,这可能是MPA影响内皮细胞功能的作用机制之一。     

大黄素对心肌梗死后小鼠心肌组织TNF-α、IL-10基因表达和NF—κB活性的影响

目的：研究大黄素对小鼠缺血后心肌局部细胞因子TNF—α和IL-10表达及NF—κB活性的影响。方法：持续性结扎小鼠冠状动脉左前降支造成心肌缺血损伤模型,用大黄素进行干预。实时定量PCR检测干预后心肌组织的TNF—α和IL-10的mRNA,ELISA法检测TNF—α和IL-10蛋白水平,EMSA测定NF—κB的活性。结果：经大黄素干预后,心肌组织TNF—α的表达明显减少（P〈O．01）,IL-10的表达增加（P〈0．01）,IL-10／TNF—α的比值显著性升高,NF—κB的活性明显减弱（P〈0．01）。结论：大黄素显著抑制干预后心肌组织促炎性细胞因子的表达,抑制NF—κB的活性。     

脂氧素A4、保护素D1、ResolvinD1抑制多种激动剂引起的NFκB的活化

目的探讨脂质小分子脂氧素A4(LXA4)、保护素D1(ProD1)、ResolvinD1(RvD1)对核因子κB(NFκB)活性的影响及作用机制。方法稳定表达NFκB荧光素酶报告基因的中国仓鼠卵巢细胞分别由100 nmol/L LXA4、ProD1、RvD1预处理30 min后,细胞被激动剂LPS、HSP70、HMGB1或S100A4刺激。通过检测荧光素酶活性以评价脂质小分子对激动剂激活NFκB活性的作用。细胞培养上清中TNFα的含量由ELISA检测,胞核中NFκB的含量由Western印迹检测。结果 LPS、HSP70、HMGB1和S100A4显著上调NFκB的活性,增加细胞分泌的TNFα的量。LXA4、ProD1、RvD1显著抑制NFκB激活,降低细胞分泌的TNFα含量,减少NFκB的入核。结论 LXA4、ProD1、RvD1显著抑制多种激动剂活化NFκB,其作用机制可能与其能降低NFκB的入核有关,这几个脂质小分子在研制新型抗炎药物方面具有进一步开发和研究的潜力。     

丹参酮ⅡA对TNF-α诱导的ECV304细胞NF-κB、IκB-α表达及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对血管内皮细胞株ECV304NF-κB、IκB-α及粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达的影响,以阐明其抗动脉粥样硬化作用及机制。方法通过建立TNF-α诱导的ECV-304细胞损伤模型,以抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)做为对照,间接细胞ELISA方法定量检测NF-κB、IκB-α的表达,RT-PCR方法检测各组细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA的表达。结果TNF-α可增加ECV304细胞转录因子NF-κB的表达,同时降低其抑制因子IκB-α的表达,低浓度的丹参酮ⅡA对TNF-α引起的ECV304细胞NF-κB的表达升高无明显抑制作用,但可增加其IκB-α的表达;高浓度的丹参酮ⅡA可明显抑制NF-κB的表达,同时增加其抑制因子IκB-α的表达。同时丹参酮ⅡA抑制TNF-α诱导的ECV304细胞ICAM-1、VCAM-1mRNA表达。结论丹参酮ⅡA可通过抑制转录因子NF-κB的激活及其相关粘附分子ICAM-1、VCAM-1mRNA表达,这有利于抑制动脉粥样硬化过程中的炎症从而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

NF-κB在甘精胰岛素拮抗胰岛β细胞脂性凋亡中的作用

目的探讨①核因子κB(NF-κB)在游离脂肪酸(FFA)诱导的胰岛β细胞凋亡中的作用;②观察甘精胰岛素(glargine)对FFA诱导的胰岛β细胞凋亡的拮抗作用是否与NF-κB有关。方法Western blot检测FFA对RIN-m细胞NF-κB活性的影响,以及glargine或普通胰岛素(RI)和FFA共同孵育细胞对NF-κB活性的影响;流式细胞仪测定NF-κB抑制剂Bay-117082对FFA诱导的RIN-m细胞凋亡的影响,以及Bay-117082对glargine和RI的抗凋亡作用的影响。结果NF-κB活性在FFA孵育后增加,抑制NF-κB活性使FFA诱导的凋亡增加;glargine和RI增加FFA所导致的NF-κB激活,抑制NF-κB活性能阻断glargine及RI的抗凋亡作用。结论NF-κB在FFA诱导胰岛β细胞凋亡时被激活,NF-κB激活对FFA诱导的凋亡可能起拮抗作用;glargine和RI的抗凋亡作用可能通过NF-κB途径。     

曲古抑菌素对肿瘤坏死因子α诱导U937细胞IκB-α蛋白降解的影响

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(trichostatin A,TSA)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)分别或联合作用于人类单核细胞白血病细胞株U937细胞前后,IκB-α蛋白的表达变化及其在NF-κB激活过程中的作用。方法:分别将TSA、TNF-α单独或联合作用于U937细胞,用免疫印迹法及荧光显微镜检测NF-κB/P65蛋白在该细胞中的表达及定位的变化;流式细胞术和免疫印迹法分析IκB-α蛋白表达的变化。结果:①荧光显微镜观察:分别作用45min后,NF-κB/P65蛋白分布于对照组及TSA处理组的细胞浆;而TNF-α处理组胞浆、胞核中均可见P65蛋白分布;TSA TNF-α联合处理组仅胞浆表达P65蛋白。免疫印迹结果同样证实,作用相同时间后,TNF-α处理组细胞核表达P65蛋白,TSA TNF-α联合处理组细胞核内P65蛋白表达较前者明显减少;②流式细胞术结果表明,经相同时间处理后,TSA TNF-α联合处理组的IκB-α蛋白平均荧光强度较TNF-α处理组明显增高(P<0.05);免疫印迹结果也显示,作用45min后,TNF-α处理组细胞IκB-α蛋白表达较对照组明显降低,TSA TNF-α联合处理组细胞IκB-α的表达较前者明显增高,但在作用2h后二者IκB-α蛋白表达差异无显著性。结论:TSA能部分抑制TNF-α诱导的U937细胞IκB-α的降解,从而抑制NF-κB的激活。TSA有可能通过影响NF-κB信号途径发挥抗肿瘤作用。     

丹参酮II-A通过调控TLR4/IκBα/NFκB信号通路抑制LPS诱导的细胞炎症

目的建立脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)炎症模型,探究丹参酮II-A(Tan IIA)的抗炎活性及其机制。方法CCK-8法测定Tan IIA对细胞活力的影响;迁移小室测定Tan IIA对LPS诱导细胞迁移能力作用;ELISA法测定细胞上清液中小鼠肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factoralpha,TNF-α)、白介素6(interleukin 6,IL-6)、IL^-1β、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量;Western blot法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases,MMP-2)、MMP-9、Toll样受体-4(TLR4)、IκB-α、p-IκB-α、NFκB和p-NFκB蛋白的表达。结果Tan IIA对LPS诱导的RAW264.7细胞培养液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL^-1β和MCP-1的分泌有明显的抑制作用;明显下调MMP-2、MMP-9、TLR4、p-IκB-α和p-NFκB的蛋白的表达,抑制IκB-α磷酸化和NFκB的入核和活化。结论Tan IIA可通过抑制MMP-2和MMP-9的表达以及TLR4/κB-α/NF-κB信号通路,调控TNF-α、IL-6、IL^-1β等炎症因子的释放而发挥抗炎活性。     

宝华玉兰种子提取物对NF-κB及IκBα表达的抑制作用

目的探讨宝华玉兰种子提取物对核转录因子-κB(NF-κB)、核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)表达的抑制作用机制。方法使用宝华玉兰种子提取物处理人肝癌细胞HepG2后,用Western blotting法检测NF-κB及IκBα蛋白的表达变化情况。结果宝华玉兰种子提取物对IκBα的磷酸化及降解有抑制作用。宝华玉兰种子提取物可有效抑制NF-κB介导的基因转录。结论宝华玉兰种子提取物可能通过抑制IκBα磷酸化及降解,阻断NF-κB活性,进而抑制COX-2而发挥其抗炎和抗肿瘤作用。     

N-乙酰半胱氨酸防治内毒素所致肝损伤的实验研究

目的　探讨N 乙酰半胱氨酸 (NAC)可否对内毒素性肝损伤进行抑制及相应的细胞、分子机制。方法　健康雄性昆明种小鼠 30只随机分为肝损伤组、NAC组和对照组 ,不同给药后检测肝匀浆肿瘤坏死因子(TNF) α、丙二醛 (MDA)和还原型谷胱甘肽 (GSH)含量变化 ,并行聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,分析NAC对核因子(NF) κBp6 5、IκBα的影响。 结果　NAC不但使肝组织TNF α、MDA含量降低 ,GSH含量升高 ,且抑制了内毒素诱导胞质IκBα降解和NF κBp6 5的表达。 结论　NAC可能通过调整库普弗细胞氧化还原平衡 ,影响NF κBp6 5活化 (核易位 ) ,从而抑制了TNF α等炎性因子基因的表达 ,减轻肝损伤。     

雌激素通过对p38和p44／42 CCDPK的相反作用阻止TNF—α诱导牛主动脉内皮细胞凋亡

目的：研究雌二醇（17β－estradiol,E2)对肿瘤坏死因子α（TNF－α）诱导牛主动脉内皮细胞（BAEC）凋亡的影响及机制。方法：BAEC培养并传代于DMEM.BAECHoechst 33258染色后用荧光显微镜观察形态学变化及计数凋亡细胞;用MTT法测定细胞活性;用琼脂糖凝胶电泳分析DNA降解;用Western blot法检测磷酸化p38和p44/42 CCDPK表达。结果：TNF－α诱导BAEC产生典型的凋亡细胞形态学变化（核浓梁,核碎裂）和DNA断片。E2（0.1pmol/L-100nmol/L)能增强TNF－α诱导的磷酸化p44/42表达,同时抑制p38 CCDPK的活化而浓度依赖性阻止TNF－α诱导的BAEC凋亡;E21nmol/L明显减弱TNF－α所致DNA断裂;p44/42 CCDPK抑制剂U0126可拮抗E2的作用。结论：雌激素通过激活p44/42 CCDPK ,同时抑制p38 CCDPK而产生的抗凋亡效应,是其使内皮细胞存活的重要机制。     

青蒿琥酯对类风湿关节炎滑膜细胞TNF-α分泌的抑制作用及其机制研究

目的研究青蒿素衍生物青蒿琥酯对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞(FLS)分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响,并进一步探讨其机制。方法来自活动性RA患者的FLS用脂多糖(LPS)刺激和青蒿琥酯处理,TNF-α水平用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定,核因子(NF)-κB活性检测采用电泳迁移率改变试验(EMSA)。结果青蒿琥酯显著抑制LPS诱导的TNF-α分泌,并且呈剂量依赖性。青蒿琥酯对LPS刺激的NF-κB活化有明显抑制作用,NF-κB抑制剂二硫代氨基吡咯烷(PDTC)亦显著抑制LPS刺激的滑膜细胞分泌TNF-α。结论青蒿琥酯通过调节NF-κB活性抑制LPS诱导的RA滑膜细胞分泌TNF-α,提示青蒿琥酯可能具有抑制RA滑膜炎症的作用。     

阿托伐他汀对LPS诱导人血管内皮细胞IκBα表达的影响

目的通过观察阿托伐他汀对LPS诱导的人血管内皮细胞IκBα表达的影响来探明其抑制核因子κB活性的机制。方法将培养的人血管内皮细胞株ECV304,分为对照组、LPS组、阿托伐他汀低、中、高3个浓度组。阿托伐他汀3组加入不同阿托伐他汀孵育后与LPS组均加入LPS刺激30min。用免疫荧光法观察核因子κB活化情况,用逆转录-聚合酶链反应观察IκBα mRNA的表达情况,用蛋白印迹法观察IκBα及p-IκBα蛋白含量的变化。结果阿托伐他汀3组能够抑制p65由胞质转移至核内、能够剂量依赖性的降低pIκBα蛋白表达、减少IκBα的降解;阿托伐他汀高浓度组IκBα mRNA的表达增加。结论阿托伐他汀可以通过影响IκBα的表达和降解来抑制核因子κB活性。     

槲寄生通过抑制NF-κB活性来诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡

目的：探讨槲寄生诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡所涉及的信号转导途径。方法：采用MTT法测定细胞的增殖活力,琼脂糖凝胶电泳观察细胞调亡,流式细胞仪进行细胞周期分析,Western blotting和DIG-EMSA研究细胞调亡途径。结果：槲寄生对HCT116细胞有明显的生长抑制作用,琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯状条带;槲寄生可通过抑制IκBα蛋白磷酸化进而抑制NF-κB;槲寄生可增强羟基喜树碱对HCT116细胞诱导的凋亡作用。结论：槲寄生对HCT116细胞有明显的生长抑制和诱导调亡作用,并且通过抑制NF-κB活性来诱导人大肠癌HCT116细胞凋亡。     

白介素-1受体相关激酶-2反义寡核苷酸对白介素-1和肿瘤坏死因子激活核因子-κB的不同影响

目的　研究白介素 1受体相关激酶 2 (IRAK 2 )在白介素 1(IL 1)与肿瘤坏死因子 (TNF)激活核因子 κB(NF κB)过程中的作用。方法　IRAK 2反义寡核苷酸转染人胚肾细胞 (2 93细胞 ) ,阻断IRAK 2的表达 ,用IL 1及肿瘤坏死因子刺激细胞后 ,用夹心ELISA方法检测NF κB活性。结果　以IRAK 2反义寡核苷酸预处理可明显减弱IL 1诱导的NF κB活性 ,此效应强度存在时间和浓度依赖性 ,但I RAK 2反义寡核苷酸对肿瘤坏死因子诱导的NF κB活性无影响。结论　IRAK 2反义寡核苷酸对IL 1和TNF激活NF κB有不同影响。IRAK 2在IL 1诱导的NF κB信号转导通路中起关键作用