女性散发性基底细胞型与非基底细胞乳腺癌ERα启动子甲基化的研究

目的:通过甲基化特异性PCR研究比较女性散发性基底细胞型乳腺癌和非基底细胞型乳腺癌中ERα基因启动子区甲基化情况。方法:筛选基底细胞型乳腺癌,用甲基化特异性PCR研究60例散发性基底细胞型乳腺癌及108例非基底细胞型乳腺癌的ERα启动子甲基化情况,比较二者ERα基因启动子区甲基化情况。结果:女性散发性基底细胞型乳腺癌组织中ERα基因启动子甲基化发生率为80.0%(48/60),高于其在女性散发性非基底细胞型乳腺癌ERα基因启动子甲基化率43.5%(47/108)(χ2=20.89,P<0.01),二者在ER1与ER5区域的甲基化无统计学差异,但在ER3与ER4区域的甲基化差异有统计学意义。结论:女性散发性基底细胞型乳腺癌组织中ERα基因启动子甲基化发生率明显高于非基底细胞型女性乳腺癌,且基底细胞型乳腺癌ER3与ER4区域的甲基化高于非基底细胞型乳腺癌,其可能与基底细胞型乳腺癌发生发展有关。     

乳腺癌中ERα及ERβ的表达与C-erbB-2表达关系的研究

 目的 研究ERα阳性表达的乳腺癌组织中ERβ蛋白的表达与C-erbB-2蛋白表达情况，探讨ERβ亚型表达的变化与内分泌治疗抵抗之间的关系，为乳腺癌临床内分泌治疗方案的确定提供更确切的理论依据。方法 对83例乳腺癌患者，用免疫组化法检测组织中ERα的表达，同时检测ERα阳性组织中原癌蛋白C-erbB-2及ERβ表达的变化。结果 48例ERα阳性的乳癌组织中，C-erbB-2表达阳性的乳腺癌中，ERβ的表达量显著升高（P＜0.001）。结论 ERβ高表达与内分泌治疗的耐药表现有关，检测ERβ的表达水平可作为另一预测内分泌治疗效果的有用指标。     

三阴性乳腺癌中DNMT1表达与ERα基因启动子甲基化的关系

目的:探讨三阴性乳腺癌中DNMT1表达与ERα基因启动子甲基化的关系,以及二者在三阴性乳腺癌中的临床意义。方法:采用免疫组化法检测了126例三阴性乳腺癌组织中DNMT1蛋白的表达情况,同时采用甲基化特异性PCR法检测了ERα基因启动子区甲基化水平。结果:126例三阴性乳腺癌中,DNMT1阳性表达率为38.1%,ERα基因启动子区甲基化率为54.8%,DNMT1表达水平与ERα基因甲基化呈显著正相关（r=0.220,P=0.013）。与TNM Ⅰ-Ⅱ期组织相比,在TNM Ⅲ-Ⅳ期组织中ERα基因甲基化显著增加（P=0.040）;与无淋巴结转移的组织相比,发生淋巴结转移的组织中DNMT1表达水平显著增加（P=0.043）。ERα基因启动子区甲基化与三阴性乳腺癌患者OS及DFS缩短显著相关（P=0.020,P=0.036）;DNMT1阳性表达可显著缩短患者OS（P=0.034）,同时可使患者DFS出现缩短趋势（P=0.054）。结论:三阴性乳腺癌中DNMT1蛋白参与了ERα基因甲基化,且该事件与三阴性乳腺癌的侵袭转移、病程进展及不良预后相关。     

ERα和ERβ在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的:观察ERα和ERβ蛋白表达与乳腺癌临床病理参数的相关性及临床意义。方法:收集散发性乳腺癌标本214例,乳腺纤维腺瘤组织25例,应用SP免疫组化法检测ERα和ERβ蛋白的表达情况,并分析与乳腺癌患者临床指标及病理参数的相关性。结果:乳腺癌中ERα、ERβ蛋白表达阳性率分别为56.5%（121/214）、62.1%（133/214）,乳腺纤维腺瘤中ERα、ERβ蛋白表达阳性率分别76.0%（19/25）、84.0%（21/25）,与乳腺纤维腺瘤组织比较,乳腺癌组织ERα蛋白阳性表达率无差异,ERβ蛋白阳性表达率显著低于乳腺纤维腺瘤组织（P=0.031）。在乳腺癌组织中,ERα蛋白表达水平与患者年龄、病理类型、临床分级及淋巴结转移、HER-2、p53蛋白表达均未见相关性,与PR蛋白表达正相关（P<0.000 1）。 ERβ蛋白表达与患者年龄和绝经状态相关,在不同的病理类型中,浸润性小叶癌的ERβ蛋白表达阳性率明显高于其它类型肿瘤（P=0.029）;ERβ蛋白表达与临床分级、淋巴结转移情况、HER-2、p53蛋白表达比较均未见相关性。生存分析发现,ERα和ERβ蛋白表达对乳腺癌患者总体生存期未见显著影响,ERα和ERβ均阳性表达的乳腺癌患者,OS时间明显延长（P<0.05）。结论:ERα、ERβ蛋白在乳腺癌组织的异常表达与患者年龄、绝经状态、病理类型相关,二者协同表达对于乳腺癌的发生和发展更具指导意义。     

散发性乳腺癌中影响BRCA1蛋白失表达的参数分析

目的: 探讨影响散发性乳腺癌中乳腺癌易感基因(BRCA1)蛋白表达的因素与临床病理指标的相关性。 方法: 免疫组织化学SP法检测乳腺良性病变组织和散发性乳腺癌组织中BRCA1、ERα和HER-2的表达,收集患者临床资料,通过Spearman相关分析和校正的Pearsonχ²检验进行统计分析。 结果: 在良性乳腺病变组织中,BRCA1和ERα蛋白在细胞核的阳性表达率分别为100.0%(20/20)和80.0%(16/20),HER-2在细胞膜阳性表达率为15.0%(3/20);在散发性乳腺癌组织中,BRCA1和ERα蛋白在细胞核阳性表达率分别为57.5%(88/153)和64.1%(98/153),HER-2在细胞膜阳性表达率为34.0%(52/153);与良性乳腺病变组织比较,乳腺癌组织中BRCA1阳性表达率明显降低,差异显著(P<0.05),ERα和HER-2表达率差异不显著(P>0.05)。蛋白表达相关分析及患者临床资料分析表明:BRCA1失表达与ERα失表达相关、与HER-2过表达相关,ERα失表达与HER-2过表达相关;在HER-2过表达、ERα失表达的癌组织中BRCA1失表达率最高;BRCA1失表达与患者高发病年龄、腋淋巴结转移相关,而与乳腺癌病理类型无明显相关。 结论: 在散发性乳腺癌组织中,BRCA1蛋白失表达与ERα失表达、HER-2过表达、患者年龄较高及伴有腋淋巴结转移等相关,BRCA1蛋白失表达参与散发性乳腺癌的发生发展。     

乳腺癌组织中YY1表达与E-cadherin甲基化状态的关系

  目的  探讨乳腺癌组织中YY1(Yin Yang-1, YY1)的表达与E-cadherin甲基化状态之间的关系。  方法  采用免疫组织化学法检测42例乳腺癌原发病灶以及18例正常乳腺组织中YY1的表达情况, 采用甲基化特异性聚合酶链反应法(MSP)进行E-cadherin基因甲基化检测。  结果  乳腺癌中E-cadherin甲基化率为57.1%(24/42), 显著高于正常乳腺组织的11.1%(2/18), 差异有统计学意义(P < 0.05)。乳腺癌组织中阳性YY1的表达(22/42, 52.3%)显著高于正常乳腺组织(2/18, 16.7%), 差异有统计学意义(P < 0.05), YY1阳性乳腺癌组中E-cadherin甲基化者为20/22(90.9%), 而YY1阴性组的乳腺癌E-cadherin甲基化者为4/16(25%), YY1与E-cadherin甲基化状态之间呈正相关(P < 0.05)。  结论  乳腺癌患者E-cadherin基因启动子甲基化发生率显著高于正常乳腺组织, 乳腺癌组织中YY1的高表达有可能是E-cadherin甲基化失活的主要原因。      

乳腺癌组织中bag-1、ER和PR的表达及意义

目的检测bag-1,ER和PR在乳腺癌组织中的表达与分布情况,探讨bag-1、ER和PR的表达水平在乳腺癌发病、早期诊断方面的价值。方法采用免疫组化SABC法观察了100例乳腺癌与35例乳腺良性肿瘤及10例正常乳腺组织的石蜡标本切片中bag-1,ER和PR的表达与分布情况。结果bag-1在乳腺癌组织中,乳腺良性肿瘤中,正常乳腺组织中阳性表达率分别为85.0%,11.5%,10.0%,差异明显(P<0.05)。ER在乳腺癌组织中,乳腺良性肿瘤中,正常乳腺组织中阳性表达率分别为61.0%,28.6%,30.0%,差异明显(P<0.05)。PR在乳腺癌组织中,乳腺良性肿瘤中,正常乳腺组织中阳性表达率分别为64.0%,31.5%,30.0%,差异明显(P<0.05)。结论在乳腺癌发病过程中,bag-1,ER和PR可能起着重要的作用,同时检测bag-1、ER和PR的表达与分布情况,在乳腺癌的早期诊断方面有一定价值。     

MTA—1表达水平与乳腺癌复发转移相关

鉴定早期乳腺癌特异的基因变化来预测远处复发转移的可能性 ,对乳腺癌的治疗很有价值 ,已报道代表杂合性缺失 (lossofheterozygosity ,LOH)的肿瘤标记物D1 4S6 2和D1 4S5 1在腋淋巴结阴性乳腺癌患者中明显高于腋结阳性乳腺癌患者 (6 8% 2 4 % ,P =0 .0 0 1 ) ,因此认为 ,除外假定的抑癌基因 ,这些LOH事件还包括一个转移相关基因 (metastasisassociatedgene 1 ,MTA 1 )。MTA 1是细胞核重建和乙酰化组蛋白 (NURD)复合物的子单位 ,与核受体的共阻遏物1 (nuclearreceptorco repressor,NCOR1 )基因同源。MTA 1与其他MTA家族成员MT…     

MTA1表达与乳腺癌浸润转移的关系

[目的]探讨转移相关基因1（metastasis assiciated gene 1,MTA1）在乳腺癌浸润与转移中作用。[方法]用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术联合Zvmed^TM免疫组化方法分别检测55例乳腺癌、癌旁组织中MTA1mRNA和蛋白表达情况。[结果]MTA1 mRNA在乳腺癌中阳性表达率为52．7％（29／55）．在癌旁乳腺组织的阳性率23．6％（13／55）：两者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。MTA1蛋白在乳腺癌组织中阳性表达率为49．1％（27／55）,在癌旁乳腺组织中阳性表达率为16．4％（9／55）：两者比较有统计学差异（P〈0．01）。MTA1在乳腺癌组织中的阳性检出率与临床分期、淋巴结转移数目（〉4）、病理分级和C-erbB-2阳性相关（P〈0．05）,与年龄、ER、PR无明显关系（P〉0．05）。[结论]MTA1对乳腺癌浸润、转移可能有促进作用。有可能成为预测乳腺癌浸润与转移的参考指标。     

RASSF1A及其甲基化与乳腺癌的关系

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。早期诊断在乳腺癌的治疗中起着重要的作用。近年来随着表观遗传学的发展,为肿瘤的早期检测提供了新的方向。在表观遗传学中DNA甲基化与乳腺癌的关系的研究最为广泛,RASSF1A(ras相关区域家族基因1A)甲基化发生在乳腺癌的早期,与肿瘤的TNM分期、侵袭性以及预后有关。同时RASSF1A的甲基化是可逆的,因此RASSF1A甲基化的研究可为乳腺癌的早期诊断提供生物靶点,也为乳腺癌的治疗提供了一个潜在的研究方向。     

女性散发性基底细胞型乳腺癌ERα启动子甲基化的研究

目的:探讨ERα甲基化与基底细胞型乳腺癌发生发展的相关性。方法:用甲基化PCR研究60例散发性基底型乳腺癌ERα启动子甲基化情况,并研究其与临床病因素之间的关系。结果:女性散发性基底细胞型乳腺癌组织中ERα基因启动子甲基化发生率为80.0%(48/60)。ERα基因启动子甲基化与淋巴结转移情况、肿瘤分期、p53蛋白、BRCA-1蛋白和BRCA-2蛋白表达情况有相关性,与患者年龄及绝经状态无关。结论:ERα基因启动子甲基化在基底细胞型乳腺癌发生发展中可能起重要作用。     

BRCA1 promoter methylation in sporadic breast tumors: relationship to gene expression profiles

BRCA1 is a tumor suppressor gene that functions in DNA repair. Basal-like tumors are a distinctive subtype of breast cancer defined by gene expression profiles. Hereditary BRCA1 breast tumors and basal-like sporadic tumors have a similar phenotype and gene expression signature, suggesting involvement of BRCA1 in the pathogenesis of sporadic basal-like cancer. This study evaluates the role of BRCA1 in sporadic breast tumorigenesis. BRCA1 protein expression and promoter methylation are compared to tumor histopathology and gene expression profiles. We find BRCA1 protein expression correlates with tumor mitotic rate, consistent with normal cell-cycle regulation of the BRCA1 gene. Methylation is found in 21% of tumors and is associated with lower BRCA1 protein, but not with specific pathologic features. Basal-like tumors, defined by hierarchical clustering of gene expression, have infrequent BRCA1 methylation and high levels of BRCA1 protein expression consistent with their high mitotic rate. Tumors with BRCA1 promoter methylation are present in all expression clusters; however, a subgroup of ER-positive high-grade tumors has a significantly greater number of BRCA1 methylated tumors. Absence of BRCA1 promoter methylation and high levels of BRCA1 expression in basal-like sporadic tumors suggest alternate explanations for the phenotypic similarities of these tumors to hereditary BRCA1 tumors.     

散发性乳腺癌组织中BRCA1基因启动子甲基化与蛋白表达的相关性

目的：探讨BRCA1基因启动子甲基化对BRCA1蛋白表达的影响,及与散发性乳腺癌发病之间的关系。方法：甲基化特异性PCR（MSP）法检测51例散发性乳腺浸润导管癌和10例乳腺良性组织的BRCA1基因启动子甲基化状态,SP法检测BRCA1蛋白表达水平。结果：10例乳腺良性组织中均未检测到BRCA1启动子的异常甲基化,BRCA1蛋白在细胞核均阳性表达,其中70％（7／10）为强阳性表达。在51例散发性乳腺浸润性导管癌组织中检测到7例（13．73％）BRCAl启动子发生异常甲基化,其余44例（86．27％）未检测到BRCA1启动子甲基化。7例BRCA1启动子甲基化的组织均未见BRCA1蛋白细胞核阳性表达（0／7）,仅有1例BRCA1蛋白细胞质表达;44例未检测到BRCA1启动子甲基化的浸润性导管癌中,30例（68．18％）BRCA1蛋白在细胞核阳性表达,14例（31．82％）BRCA1蛋白在细胞核阴性表达。BRCA1启动子甲基化与BRCA1蛋白核低表达密切相关,X^2=11．9591,P=0．0005;BRCA1蛋白的表达在乳腺良性组织与癌组织之间差异有统计学意义,X^2=4．5879,P=0．032。结论：乳腺癌易感基因BRCA1启动子甲基化可抑制BRCA1蛋白表达,并影响其参与散发性乳腺癌的发生发展过程。     

乳腺导管内增生性病变中 ERα基因启动子甲基化的探讨

目的：研究与乳腺浸润性导管癌风险密切相关的导管内增生性病变中 ERα基因启动子区甲基化情况。方法：用甲基化特异性 PCR 研究140例乳腺导管内增生性病变（UDH 40例、ADH 63例、DCIS 37例）的ERα第1、3、4、5启动子甲基化情况。结果：55．0％（22／40）UDH 出现 ERα基因启动子甲基化,11．1％（7／63） ADH 出现 ERα基因启动子甲基化,43．2％（16／37）DCIS 出现 ERα基因启动子甲基化,三者间差异显著（P ＜0．05）。结论：ERα基因启动子甲基化在乳腺癌的发生发展中是动态变化的,也许其并非是所有分子亚型乳腺癌的始动因素,但这个过程对于细胞的生物学行为改变是非常重要的。     

Decreased expression of angiogenesis antagonist EFEMP1 in sporadic breast cancer is caused by aberrant promoter methylation and points to an impact of EFEMP1 as molecular biomarker

EGF‐containing fibulin‐like extracellular matrix protein 1 (EFEMP1) was recently described as an antagonist of angiogenesis. Motivated by a strong dependence of tumor growth and metastasis on angiogenesis, we investigated the role of EFEMP1 in human breast cancer. We applied RNA microarray expression analysis and quantitative real‐time PCR (QRT) in a total of 45 sporadic breast cancer tissues and found EFEMP1 down‐regulation in 59% and 61% of the analyzed tissues, respectively. This down‐regulation was confirmed on protein level. Immunohistochemistry in 211 breast cancer tissues resulted in reduced or even abolished EFEMP1 expression in 57–62.5% of the tumors. Bisulphite genomic sequencing in breast cancer cell lines and primary breast cancer tissues revealed promoter methylation as the major cause of this down‐regulation. Furthermore, analysis of 203 clinically well characterized primary breast cancers displayed a significant correlation of reduced EFEMP1 protein expression with poor disease‐free (p = 0.037) and overall survival (p = 0.032), particularly in those node‐positive patients who received adjuvant anthracycline‐based chemotherapy, but not in those treated by either cyclophosphamide‐methotrexate‐5‐fluorouracil (CMF) or Tamoxifen. In summary, the presented data demonstrate for the first time the reduced EFEMP1 expression on RNA and protein level in a substantial number of sporadic breast carcinomas and its correlation with epigenetic alterations. Furthermore, these data point towards a possible predictive impact of EFEMP1 expression in primary breast cancer. © 2008 Wiley‐Liss, Inc.     

散发性乳腺癌患者血浆BRCA1基因启动子异常甲基化的检测

目的:探讨散发性乳腺癌组织及外周血浆中BRCA1基因启动子异常甲基化状况及其在散发性乳腺癌诊断中的价值。方法:用甲基化特异PCR方法对散发性乳腺癌患者癌组织、癌旁组织及相应血浆进行BRCA1异常甲基化检测。结果:93例散发性乳腺癌组织中,BRCA1基因启动子异常甲基化率为29%(27/93),相应血浆中BRCA1的甲基化检出率为24.7%(23/93),而癌旁组织、正常对照血浆未检出甲基化,只检出未甲基化的BRCA1。血浆中甲基化改变与肿瘤组织甲基化状况显著相关(P<0.05);BRCA1异常甲基化与髓样癌和粘液腺癌的组织分型显著相关(P<0.05),也与肿瘤淋巴结转移显著相关(P<0.005);但与散发性乳腺癌患者年龄(绝经与否)及肿瘤分级无显著的相关性(P>0.05)。结论:血浆BRCA1基因异常甲基化改变的检测在散发性乳腺癌的特异诊断、组织分型和淋巴结恶性转移等方面有一定的应用价值。     

BRCA1基因启动子甲基化在三阴性乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:评估三阴性乳腺癌（TNBC）患者中乳腺癌易感基因1（BRCA1）甲基化的表达及与患者预后的关系。方法:收集在我院甲乳科治疗的乳腺癌患者手术切除标本524例,应用联合亚硫酸氢钠限制性内切酶分析法,观察BRCA1启动子甲基化状态。应用定量逆转录聚合酶链反应评估BRCA1 mRNA表达,应用免疫组织化学法评估BRCA1蛋白表达。结果:共有157（30.0%）例TNBC患者,有25（4.77%）例存在BRCA1启动子甲基化,所有BRCA1启动子甲基化的肿瘤均为TNBC。TNBC患者中,BRCA1启动子甲基化患者的BRCA1 mRNA水平显著低于BRCA1启动子未甲基化患者［（0.019±0.005） vs （0.095±0.013）,P<0.001］,免疫组化分析未在BRCA1启动子甲基化患者中检测出BRCA1蛋白表达。BRCA1启动子甲基化患者的总生存率（OS）显著低于非甲基化患者（logrank P=0.038）。BRCA1蛋白低表达患者的OS与RFS均低于高表达组,但差异没有统计学意义（分别logrank P=0.526,P=0.467）。结论:BRCA1启动子甲基化导致了BRCA1表达的下降,并与TNBC患者较差预后相关。BRCA1启动子甲基化是一种促成BRCA1功能丧失的重要机制。     

转移相关基因MTA1及CD44V9mRNA在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的：检测乳腺癌中MTA1、CD44V9mRNA的表达,并结合临床、病理资料,分析其对乳腺癌侵袭和转移的影响及作用。方法：应用原位杂交和免疫组织化学方法,对45例乳腺癌患者的癌组织进行CD44V9mRNA及MTAl表达的检测,对实验结果进行半定量分析,应用等级相关分析对实验数据进行统计学处理。结果：MTA1及CD44V9mRNA在乳腺癌中的表达率分别为71％和76％,在淋巴结转移组两者的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组（P〈0．05）;两者表达间无明显相关性（P=0．136）。结论：MTA1及CD44V9mRNA高表达与乳腺癌的转移密切相关,可以作为判定乳腺癌转移及预后的重要指标。     

乳腺癌WIF-1基因表达及其临床病理特征与该基因启动子区域甲基化的关联

  目的  研究WIF-1（Wnt inhibitory factor-1）mRNA在乳腺癌组织中的表达及其启动子区域甲基化情况,进一步探讨WIF-1基因甲基化与乳腺癌临床病理特征的关系。   方法  收集2009年9月1日至2009年12月30日青岛大学附属医院乳腺外科手术切除新鲜组织标本69例,其中良性病变组织9例,乳腺癌及癌旁组织各30例,应用RT-PCR及甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）检测乳腺癌组织、相应癌旁组织和乳腺良性病变组织中WIF-1mRNA表达及其启动子甲基化情况。   结果   癌组织中WIF-1基因表达率明显低于相应癌旁组织及乳腺良性病变组织,具有显著性差异（χ2=41.786,P < 0.05）;与其他两组相比甲基化率在癌组织中明显升高（矫正χ2=16.484,P < 0.05）;WIF-1基因表达下降与其异常甲基化存在明显关联（P=0.023）;WIF-1异常甲基化与乳腺癌发病年龄、肿瘤分级、组织分型和淋巴结转移无相关性（P>0.05）。   结论  异常甲基化可能是乳腺癌WIF-1基因表达下降的重要原因,是乳腺癌发生、发展的重要机制。