维生素C对宫颈癌HeLa细胞增生和细胞凋亡的影响

目的探讨维生素C在体外对人宫颈癌HeLa细胞的增生和凋亡的影响,以促进维生素C在肿瘤治疗上的应用。方法倒置显微镜下观察其形态学改变;MTT法检测维生素C对HeLa细胞增生的影响;流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率;琼脂糖凝胶电泳分析凋亡过程中细胞基因组DNA的变化。结果维生素C以浓度和时间依赖的方式阻滞HeLa细胞于G0/G1期,抑制其生长并诱导凋亡。结论维生素C可抑制HeLa细胞生长,使细胞阻滞于G0/G1期并诱导细胞凋亡。其原因可能是HPVE6蛋白的表达上调而恢复了P53的功能。     

HPV感染与宫颈病变的关系探讨

目的结合临床与病理探讨HPV与子宫颈相关病变的关系。方法选取在我院妇科取得宫颈组织标本的患者,将其分为两组,一组为病理确诊为子宫颈癌及癌前病变;一组为病理确诊为正常子宫颈及宫颈炎性病变。进行免疫组化HPV检测,统计分析各组HPV检出率。结果子宫颈癌及癌前病变患者,共100例,26例HPV阳性,总阳性率为26%。正常子宫颈及宫颈炎性病变患者,共100例,13例HPV阳性,总阳性率为13%。子宫颈癌及癌前病变组HPV检出率明显增高,差异有统计学意义（P=0.020）。结论宫颈癌及癌前病变患者中HPV感染阳性率高于正常子宫颈及宫颈炎性病变患者,提示HPV可能与宫颈癌及癌前病变有关。     

西多福韦对HPV18阳性人宫颈癌HeLa细胞的凋亡作用及机制研究

【摘要】 目的 以抗肿瘤药物顺铂（Cisplatin,DDP）为阳性对照,研究抗病毒药物西多福韦（Cidofovir,CDV）对宫颈癌HPV18阳性HeLa细胞的凋亡现象和凋亡机制,探讨CDV在预防人乳头瘤病毒(HPV)感染和治疗宫颈癌方面的潜力和应用价值。方法 利用流式细胞仪观察DAPI单染后HeLa细胞中凋亡细胞的形态及数目;利用Western blotting技术分析HeLa细胞中E6、p53蛋白相对表达情况;利用免疫荧光技术研究HeLa细胞中p53蛋白的亚细胞定位情况。结果 流式细胞检测显示CDV和DDP能明显抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,使细胞周期阻滞在S期并引发细胞凋亡;Western Blotting结果显示CDV和DDP抑制HeLa细胞中E6蛋白表达,激活p53蛋白表达;细胞免疫荧光结果显示CDV和DDP可以抑制E6对p53的核输出。结论 CDV和DDP可抑制HeLa细胞增殖,呈浓度和时间依赖性;降低E6蛋白表达,恢复p53蛋白活性,进而调控细胞周期阻滞和细胞凋亡,因而CDV有可能成为宫颈癌治疗的新策略。     

端粒酶与宫颈癌的发生、发展

端粒酶在大多数恶性肿瘤中呈高表达。在宫颈癌中的表达率几乎为80％－100％。HPV感染在宫颈癌的发病中起着重要作用。高危型HPV中有两个重要的癌基因E6、E7，宫颈癌中E6、E7的表达与端粒酶的表达有一定的相关性。端粒酶反义寡核苷酸通过抑制端粒酶活性，延长肿瘤细胞的倍增时间，抑制移植瘤的生长，其治疗肿瘤的机制多数文献认为是启动了细胞的凋亡。     

人乳头瘤病毒16、18型检测在宫颈癌早期诊断中的应用

目的 :比较HPV16、18型检测与巴氏涂片在宫颈癌早期诊断的价值。方法 :病例来源于我院阴道镜门诊 ,病人均已在普通门诊做巴氏涂片 ,采用TBS细胞分类法 ,其中正常 10 0例 ,ASCUS/AGUS6 5例 ,LSIL4 9例 ,复诊时做阴道镜下多点活检和HPV16、18-DNA检测。结果 :巴氏涂片以ASCUS/AGUS以上为阳性 ,宫颈活检病理做为金标准 ,以CIN二级以上为阳性 ,HPV16、18-DNA定性检测的敏感性为 96 .3% ,特异性为84 .5 % ,巴氏涂片的敏感性为 87.3% ,特异性为 86 .6 % ,HPV16、18-DNA的敏感性高于巴氏涂片 (P <0 .0 5 ) ,而二者的特异性无差别 (P >0 .0 5 )。结论 :HPV16、18-DNA的检测可以作为宫颈癌早期诊断的方法。     

人乳头瘤病毒感染导致宫颈癌年轻化的研究进展

年轻宫颈癌是指年龄小于或等于35岁的宫颈癌患者。宫颈人类乳头瘤病毒（HPV）感染是宫颈癌发病的必要条件,而通过性接触传播的HPV感染相当普遍,可见于20%～40%的性活跃人群,但是HPV的感染是否能导致宫颈癌年轻化在国内外各学者的意见不一,本文综述近年来HPV感染与宫颈癌年轻化关系的研究进展。     

基因芯片法监测粤东地区妇女人乳头瘤病毒

目的：调查分析粤东地区妇女HPV感染率及其亚型的分布,有利于建立和完善粤东地区妇女的HPV监测体系。方法：采用凯普的基因芯片导流杂交HPV DNA基因分型检测法和亚能生物HPV基因分型检测法,本文共检测3304例标本,其中汕头市中心医院对2122例样本进行21种HPV亚型（凯普）的检测与分析,附二院对1182例（包括肿瘤医院28例）样本进行23种HPV亚型（亚能）的检测与分析。结果：中心医院2122例受检者HPV阳性例数为523例,总阳性率为24.7%,高危型感染的主要型别是HPV16、HPV52、HPV58;附二院1182例受检者HPV阳性例数为351例,总阳性率为29.7%,高危型感染的主要型别是HPV52、HPV16、HPV58。结论：粤东地区妇女HPV有较高的感染率,高危型感染的主要型别是HPV16、HPV52、HPV58;感染率分别为23.5%、21.5%1、3.5%。     

计算机辅助细胞检测配合阴道镜检查诊断早期子宫颈病变的探讨

目的：提高早期子宫颈病变的检出率。方法：采用计算机辅助细胞检测系统(CCT)检测子宫颈涂片1347例，对98例阳性病例行阴道镜下取活组织病理检查。结果：CCT检查1347例发现异常细胞涂片98例，占7．28％，98例均行阴道镜下取活组织病理检查，CCT与病理检查结果符合者为79例，符合率80．6％。ISIL以上病变者合并人乳头瘤病毒(HPV)感染为50％以上。结论：CCT检测方法简单，准确率在80％以上，就诊条件要求低，适合门诊初筛。阳性病例配合阴道镜下病理活检，能及时发现早期宫颈病变，防止宫颈癌的发生。     

瘦素（Leptin）对小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖状况的影响

目的探讨高Leptin水平在不同免疫状态下对小鼠细胞因子分泌及脾淋巴细胞增殖状况的影响。方法选用8周龄的清洁级BALB／c雄性小鼠共40只，分成五组，分别用外源性鼠Leptin和Leptin抗体人为形成小鼠的不同Leptin水平状态，并利用环孢素（CsA）将小鼠分为正常免疫和免疫抑制状态两类，两种状态各设对照组，测定脾淋巴细胞增殖情况，用ELISA方法检测外周血中IL-2、IL-4、IFN-γ和Leptin的浓度。结果正常免疫状态下，Leptin组的脾细胞增殖与对照组无差异，细胞因子除IFN-γ升高外，IL-2、IL-4均无差异；Leptin抗体组显示脾细胞增殖能力下降，各细胞因子测定显示差异；免疫抑制状态下，Leptin组的IL-2、IFN-γ水平上升、IL-4分泌降低，这种结果也在几乎所有体外加入Leptin的各组中出现。结论Leptin可以起免疫调节作用，增加IFN-γ、IL-2的合成，降低IL-4的产生，使免疫应答向Th1细胞方向偏离。在正常免疫状态下，Leptin的免疫调节作用不明显，而在免疫抑制情况下．汶种调节作用可以得到体现。     

顺铂对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用

目的 观察顺铂对HeLa细胞增殖、端粒酶活性及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响，以揭示顺铂抗宫颈癌的机理。方法 运用体外细胞培养技术，以不同浓度的顺铂作用于培养的HeLa细胞72小时，采用MTT法测定细胞代谢率，用端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP—ELISA)检测细胞端粒酶活性，以流式细胞术观察PCNA的表达。结果 顺铂能以浓度依赖方式减低细胞代谢率、下调端粒酶活性并降低PCNA的表达。细胞代谢率减低分别与端粒酶活性的下调(r=0．984)和PCNA表达的降低(r=0．996)均呈正相关，端粒酶活性的下调与PCNA表达的降低也呈正相关(r=0．993)。结论 顺铂能显著抑制HeLa细胞增殖、下调端粒酶活性并使PCNA的表达降低，这可能是顺铂抗癌作用的重要机理之一。     

胰岛素对人宫颈癌Hela细胞化疗敏感性的影响

目的探讨胰岛素能否增强人宫颈癌Hela细胞对顺铂（DDP）的化疗敏感性及其相关机制。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞株,MTr法检测5U／L胰岛素作用3、6、9、12、15、18、21h后,联合DDP（7．26mg／L）对人宫颈癌Hela细胞增殖抑制率的影响。流式细胞仪检测对照组、DDP组、胰岛素组及联合组（胰岛素化疗前作用6h）的细胞周期时相变化情况。结果DDP组、胰岛素化疗前作用不同时间组与对照组相比,Hela细胞的增殖抑制率明显上升（P〈0．01）;且胰岛素于化疗前提前作用3、6、9、12、15h后加入DDP,宫颈癌Hela细胞的增殖抑制率明显高于DDP组（P〈0．01）。流式分析显示DDP组及胰岛素组的S期细胞比例较对照组高（P均〈0．01）,联合组s期细胞比例较DDP组高（P〈0．01）。结论胰岛素具有较显著的DDP化疗增敏作用,胰岛素作用时机选择是胰岛素对宫颈癌细胞化疗增敏作用的关键。     

槲皮素对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

目的 研究槲皮素对人宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响,同时探讨槲皮素对抗宫颈癌的可能作用机制.方法 四唑盐比色法（MTT法）检测不同浓度及不同时间槲皮素对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞仪分析槲皮素对HeLa细胞凋亡的影响;Western blotting法检测癌细胞caspase-3蛋白水平的变化.结果 槲皮素作用于HeLa细胞后,细胞增殖水平明显下降（P〈0.05）,且在一定浓度范围内呈时间、浓度依赖性（r=0.720,P〈0.01;r=0.385,P〈0.05）;不同浓度槲皮素处理HeLa细胞后能诱导其凋亡,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;随着槲皮素浓度的增加,caspase-3蛋白水平明显上调（P〈0.05）.结论 槲皮素可显著抑制人宫颈癌HeLa 细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过激活caspase-3蛋白表达实现的.     

iNOS抑制剂1400 W对宫颈癌HeLa细胞株生长的抑制作用

 目的 探讨诱导型一氧化氮合酶抑制剂1400 W单独或者联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞株生长及凋亡的影响。方法 培养宫颈癌HeLa细胞株,应用MTT法检测1400 W及顺铂对HeLa细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测1400 W及顺铂对HcLa细胞凋亡的影响;RT-PCR检测1400 W及顺铂对HeLa细胞E6,p53 mRNA表达的影响。结果 1400 W和顺铂均能抑制HeLa细胞生长,其抑制作用与剂量呈正相关。1400 W单药并不增加HeLa细胞凋亡,而1400 W联合顺铂后明显增加HeLa细胞凋亡（P＜0.05）,两者联合也使HeLa细胞E6,p53 mRNA表达明显下降（P＜0.05）。结论 1400 W及顺铂均可抑制HeLa细胞增殖。1400W联合顺铂明显增加宫颈癌HeLa细胞凋亡率,并且较单独使用顺铂时作用更显著。顺铂联合iNOS抑制剂抗肿瘤可能是一种更有希望的新辅助疗法。     

黄芩素抑制宫颈癌HeLa细胞迁移作用机制的研究

目的：观察不同浓度黄芩素干预宫颈癌HeLa细胞后,细胞迁移、细胞培养基中基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase,MMP9）活性的变化,以及MMP2、MMP9 mRNA和蛋白表达水平的变化。方法：体外培养宫颈癌HeLa细胞,分空白对照（Control）组、50、100、200、300μmol/L干预组,培养12、24、48 h。镜下观察细胞形态及数量的变化;流式细胞技术法检测细胞周期的变化;细胞迁移实验观察细胞迁移的改变;明胶酶谱法检测细胞培养基中的MMP2、MMP9活性变化;RT-PCR检测MMP2、MMP9 mRNA表达水平的变化;Western Bloting检测MMP2、MMP9蛋白表达水平的变化。结果：黄芩素干预24 h后,与空白对照组相比较,各黄芩素干预组的细胞G1期均受阻滞,阻滞程度与黄芩素干预浓度成正向变化;黄芩素能有效抑制HeLa细胞的迁移,迁移距离与黄芩素干预浓度成反向变化;细胞培养基中MMP2及MMP9的活性受抑制,抑制程度与黄芩素干预浓度成正向变化;MMP2及MMP9 mRNA及蛋白表达随黄芩素干预浓度增加,呈逐渐降低的趋势（P〈0.05,P〈0.01）。结论：黄芩素可有效抑制宫颈癌HeLa细胞的迁移,阻滞细胞周期中G1期、降低MMP2、MMP9活性,下调MMP2和MMP9的表达,发挥抑制宫颈癌HeLa细胞增殖的作用。     

青蒿琥酯对人子宫颈癌细胞株HeLa凋亡与增殖的影响

目的研究青蒿琥酯（artesunate,ART）对人子宫颈癌细胞HeLa凋亡与增殖的影响。方法通过MTT法观察ART对HeLa细胞的生长抑制作用;荧光染色观察ART作用前后细胞形态的改变;免疫组化检测HeLa细胞caspase-3表达;流式细胞术观察ART对细胞周期的影响,并检测细胞线粒体膜电位△ψm。和细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的改变。结果ART对HeLa细胞的生长抑制作用呈时间、剂量依赖关系;荧光染色观察见凋亡小体形成;透射电镜见细胞染色质凝聚,边集呈新月形;免疫组化检测细胞质caspase-3呈阳性表达;流式细胞术检测ART可引起HeLa细胞周期S期阻滞;细胞内ROS明显升高（P〈0．01）,△ψm显著降低（P〈0．05）。结论ART作用于人子宫颈癌HeLa细胞,可能通过线粒体途径诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。