麻疯树核糖体失活蛋白抗肿瘤作用

目的：研究麻疯树核糖体失活蛋白的抗肿瘤作用。方法：抗肿瘤活性、N-糖苷酶活性和蛋白合成抑制活性分别用MTT法、苯胺裂解法和兔网织红细胞系统测定;用计算机软件分析比较麻疯树核糖体失活蛋白N-糖苷酶的活性结构域。结果：麻疯树核糖体失活蛋白具有抑制胃癌细胞（SGC-7901）,小鼠骨髓瘤细胞（Sp2/0),人肝癌细胞体外增殖的能力,其IC50值分别为0.23(0.15-0.32)mg/L,0.66(0.35-0.97)mg/L和3.16（2.74-3.58)mg/L,但对Hela细胞和正常细胞（MRC）无抑制作用。结论：麻疯树核糖体失活蛋白具有较强的抗肿瘤活性,其作用机制与其具有的N-糖苷酶活性相关。     

聚乙二醇修饰对仅α-苦瓜素抗肿瘤活性的影响

目的 探讨苦瓜籽核糖体失活蛋白α-苦瓜素(α-MMC)经聚乙二醇(PEG)修饰后,其体外细胞毒性和体内抗肿瘤活性的变化.方法 用MTT法测定α-MMC和PEG-α-MMC结合物对小鼠乳腺癌细胞EMT-6的抑制率;通过BALB/C小鼠模型研究药物对EMT-6细胞嫁接瘤生长的抑制作用.结果 在相同的条件下,PEG-α-MM...     

尖吻蝮蛇毒中一种新类凝血酶的分离纯化

用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱技术,从尖吻蝮蛇毒中纯化得到一个具有凝血活性的组分.经Superdex 75 HR10/30预装柱检测,纯度达99.91%.SDS-PAGE显示为单一条带,还原、非还原条件下分子量分别为59.25k、52.58k.该组分的凝血酶比活为41.5u/mg,精氨酸酯酶比活为14.29u/mg,但不激活血浆凝血因子ⅩⅢ.EDTA不能抑制其凝血活性,而苯甲磺酰氟则产生不可逆抑制作用.结果表明该酶是一种新尖吻蝮蛇毒类凝血酶.     

155位Cys突变成Ser对IFN-ε纯化结果的影响

目的 比较重组人干扰素ε(recombinant human interferon-ε,rhIFN-ε)Cys155和rhIFN-εSet155两种蛋白质的回收率和抗病毒活性,以研究155位Cys突变成Ser对IFN-ε纯化和生物学活性的影响.方法 对rhIFN-εCys155和rhIFN-εSer155两种蛋白质分别进行纯化和抗病毒活性鉴定,并进行数据比对.结果 得到rhlFN-εCys155和rhlFN-ε Ser155两种活性蛋白,回收率分别为15.41%和29.18%,抗病毒活性分别为(1.293±0.268)×105IU/mg和(1.026±0.172)×105IU/mg.结论 两种蛋白质相比.突变样品回收率明显高于未突变样品,但氨基酸突变对rhlFN-ε的抗病毒活性没有明显影响.     

羊红细胞铜锌超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

目的从羊红细胞中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶 (Cu ,Zn SOD) ,并对其部分理化性质进行研究。方法采用有机溶剂去除血红蛋白、热变性、超滤浓缩、丙酮沉淀、DE FF柱色谱的方法 ,对羊红细胞Cu ,Zn SOD进行分离纯化。结果羊红细胞 5 2 0g得Cu ,Zn SOD总活力为 4 6 70 0 0u ,比活为 812 6u/mg·pro,纯化倍数为 2 6 .2 ,活性回收率为 6 1%。理化性质分析表明 :该酶的最大紫外吸收波长为 2 5 8nm ,亚基相对分子量为 16 .1kD ,每个亚基含 1个铜原子和 1个锌原子。pH在 6～ 11范围内该酶稳定性很好 ,在 35℃～ 75℃范围内 ,保温 2 0min ,酶活基本没有损失。 2mmol/L的SDS对Cu ,Zn SOD没有明显的抑制作用 ,而 2mmol/L的H2 O2 对该酶表现出较强的抑制作用。结论采用此方法分离纯化的Cu ,Zn SOD达到电泳纯 ,其理化性质与其它动物血液来源的Cu ,Zn SOD一致。     

牛血块高纯SOD的制备

利用牛血块制备出超氧化物歧化酶（SOD）粗品,比活≥5000u/mg pro。在此基础上,经DEAE离子交换展拆纯化SOD,比活≥10000 u/mg pro。聚丙烯酰胺凝胶电泳和 NBT活性染色证明,该品达电泳纯。     

α-苦瓜素及α-苦瓜素-PEG体外抗HSV-1的研究

目的研究苦瓜籽核糖体失活蛋白α-苦瓜素(α-MMC)体外抗单纯疱疹病毒(HSV-1)的活性及其聚乙二醇修饰物(α-MMC-PEG)保留这一活性的程度。方法采用MTT法测定α-MMC和α-MMC-PEG对Vero细胞的体外毒性;通过对所培养的上清液中HSV-1囊膜糖蛋白抗原的测定、细胞和病毒的预处理试验,研究了α-MMC和α-MMC-PEG体外抗HSV-1的活性。结果α-MMC和α-MMC-PEG对HSV-1囊膜糖蛋白抗原分泌的抑制作用均呈剂量依赖性,IC50分别为0.67、2.94μmol.L-1;相同剂量下,α-MMC-PEG可保留60%天然α-MMC的抑制活性。3.3μmol.L-1的α-MMC和α-MMC-PEG直接作用病毒后使Vero细胞的存活率分别提高了22%、17%。结论α-MMC经PEG修饰后可保留较高的抗HSV-1活性,修饰前后都对HSV-1有一定的直接灭活作用。     

酵母胱硫醚β-合成酶的表达及酶活鉴定

将重组质粒pET45b-yCBS转入E.coli BL21中,构建高效表达酵母胱硫醚β-合成酶(yeast cystathionine β-synthase,1)的重组菌.研究诱导时菌体浓度、诱导剂IPTG浓度、诱导时间和温度,以及在培养基中添加不同浓度的山梨醇、葡萄糖、甘油对1表达量的影响.使用Ni2+亲和色谱柱纯化重组蛋白,再经His-Trap脱盐柱脱盐,以茚三酮法检测蛋白活性.结果表明,培养基中添加0.05％的山梨醇,重组菌在37℃培养3h后,添加终浓度为0.1 mmo/L的IPTG于20℃诱导培养15h,可溶性1表达量达到110 mg/L;纯化后比活为1 320 u/mg.     

从猪胰制备甘油三酯测定用脂肪酶

从猪胰制取测定甘油三酯(TG)的脂肪酶,其活性大于2.7×10~4u/mg;比活为5.5×10~4u/mg 蛋白;酶作用的最佳 pH、最适反应时间及最适温度分别为7.5～10.0、15min 及37～50℃。聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得分子量为34700及20900;以橄榄油为底物的米氏常数为0.77%。     

食淀粉乳杆菌淀粉酶基因在E.coli中的克隆表达

以食淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)总DNA为模板,通过PCR扩增得到约1.3kb的α-淀粉酶基因保守区片段amyC。经双酶切插入到表达载体pET-32a的NcoI和NotI之间,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。经IPTG诱导表达后,发酵液淀粉酶总活性为3 623 u/L,培养液上清和细胞破碎液上清均有淀粉酶活性,分别为3.3 u/mL和14.1 u/mL。破碎上清经镍柱纯化后,得到单一的目的条带,纯化蛋白的比活力为26.9 u/mg蛋白,比纯化前(3.9 u/mg蛋白)提高了大约7倍。     

苦瓜水提物对实验性糖尿病小鼠血糖、血脂的影响

目的：研究苦瓜水提物对实验性2型糖尿病模型小鼠体重和血清中血糖值（GLU）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和游离脂肪酸（NEFA）的影响。方法：雄性昆明小鼠喂以高脂饲料（10％蛋黄。10％猪油,1％胆固醇,0．2％胆盐,78．8％基料）1个月,诱发胰岛素抵抗,继以低剂量四氧嘧啶（90mg·kg～,腹腔注射）,使之产生高血糖症,建立2型糖尿病小鼠模型。以苦瓜水提取物10g·kg^-1（相当于生药材重量）的剂量通过灌胃给药,30d后测定小鼠空腹血糖、糖耐量、血液各项生化指标。结果：显著降低了2型糖尿病小鼠的GLU、NEFA、TC、TG和MDA值（P〈0．05）;显著升高了2型糖尿病小鼠SOD值（P〈0．05）。结论：苦瓜水提物能够显著降低2型糖尿病小鼠的血糖值,并可调节其血脂代谢。     

Isolation of a ribosome-inactivating and abortifacient protein from seeds of Luff a acutangula

A glycoprotein with a molecular weight of 28 000 as estimated by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis was isolated from seeds of Luffa acutangula using a procedure that involved acetone precipitation, ion exchange chromatography on CM Sepharose CL-6B and gel filtration on Sephadex G-50. In immunodiffusion studies it was found to be immunologically distinct from abortifacient proteins isolated from other members of the Cucurbitaceae family including Momordica charantia, Momordica cochinchinensis, Trichosanthes kirilowii and Trichosanthes cucumeroides. There were some differences in amino acid composition among the proteins although there was a gross similarity. The protein from L. acutangula was capable of inducing mid-term abortion in mice and inhibiting protein synthesis in a cell-free system.     

正交实验法优选苦瓜根总皂苷提取工艺

目的 优选苦瓜根中苦瓜总皂苷的最佳提取工艺. 方法 以提取液中苦瓜总皂苷含量为考察指标,分光光度法测定其含量,采用L9(34)正交实验法优选苦瓜根总皂苷的提取工艺. 结果苦瓜根中苦瓜总皂苷较优的提取工艺为提取2次,每次2 h,乙醇浓度60%,乙醇用量8倍,提取温度80 ℃. 结论 优选得到的提取工艺稳定、可行、重复性好,可为苦瓜根总皂苷的提取提供参考.     

Proteins with abortifacient, ribosome inactivating, immunomodulatory, antitumor and anti-AIDS activities from Cucurbitaceae plants.

1. The biochemical characteristics and biological activities of eight Cucurbitaceae plant proteins designated trichosanthin (isolated from tubers of Trichosanthes kirilowii), beta-trichosanthin (isolated from tubers of Trichosanthes cucumeroides), alpha- and beta-momorcharins (isolated from seeds of Momordica charantia), momorchochin (isolated from tubers of Momordica cochinchinensis), luffaculin (isolated from seeds of Luffa acutangula) and luffin-a and luffin-b (isolated from seeds of Luffa cylindrica), were reviewed. 2. The isolation procedures for all eight proteins are based on aqueous extraction, acetone fractionation and ion exchange chromatography. Ammonium sulfate precipitation and gel filtration are steps which may be included to improve purification. 3. The proteins are basic in nature and possess a molecular weight of approx. 30,000. All except trichosanthin are glycoproteins. The content of Asx and Glx residues is high. The N-terminal amino acid residue is Asp. Their amino acid compositions and N-terminal amino acid sequences are similar. 4. Circular dichroism spectroscopic studies revealed that trichosanthin, alpha- and beta-momorcharins possess similar secondary but different tertiary structures. 5. Most of the proteins are immunologically distinct. 6. The proteins exhibit abortifacient, antitumor, ribosome inactivating and immunomodulatory activities. Trichosanthin manifests anti-human immunodeficiency virus activity.     

Suppressive activity of the fruit of Momordica charantia with exercise on blood glucose in type 2 diabetic mice

The antidiabetic activity of Momordica charantia L. (Cucurbitaceae) with exercise was investigated in KK-Ay mice, an animal model with type 2 diabetes with hyperinsulinemia. The water extract of the fruit of Momordica charantia L. (MC) with exercise reduced the blood glucose of KK-Ay mice 5 weeks after oral administration (p<0.001), and also significantly lowered the plasma insulin of KK-Ay mice under similar conditions (p<0.01). The blood glucose of MC with exercise is lower than that of MC only or exercise only 5 weeks after the administration. MC with exercise decreased blood glucose in a glucose tolerance test. These results suggest that MC with exercise is useful for type 2 diabetic cure.     

rhIL-6表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

通过PCR技术扩增出约0.5kb的IL-6基因片段,并且采用含有P_RP_L串联启动子及SD区的高效表达载体pBV_220,经DNA重组技术,成功地构建了rhIL-6的基因工程菌E.coli DH_5a/pBV_220IL-6。所表达的IL-6经SDS-PAGE证明约17.5kD,表达量占菌体总蛋白的30%以上。以IL-6依赖细胞株MH_60·BSF_2检测,表达产物粗提物1:100复性后效价可达到5×10~8u/ml,每升发酵菌液可获10~12u IL-6粗品。     

苦瓜蛋白提取工艺的研究

目的优选苦瓜蛋白提取工艺。方法考察乙醇浓度、温度、加氯化钠的量三因素对结果的影响,用L9(34)正交表优选提取工艺。结果影响苦瓜蛋白结晶得率的主要因素依次是加入氯化钠的倍数,温度及乙醇浓度,最佳工艺为A3B1C3。结论确定最佳工艺为:在19℃下,用95%的乙醇,加0.05倍氯化钠所得的结晶得率最高。     

重组人超氧化物歧化酶的复性

目的将E .coli以包含体形式表达的重组人超氧化物歧化酶 (rhSOD)恢复天然活性。方法分离包含体 ,用 6mol/L尿素处理 ,透析 ,添加Cu2 + 、Zn2 + ,温浴。结果Cu2 + 、Zn2 + 的加入对于恢复SOD的活性和稳定性是必需的 ,适当提高温度将大大缩短复性时间 ,获得的rhSOD比活可达到 6 0 0 0u/mg以上。结论恢复重组蛋白的天然构型是rhSOD有效结合Cu2 + 、Zn2 + 和完全复性的必要条件