肿瘤坏死因子受体p55/p75在重症急性胰腺炎发病机制中的作用

目的探讨肿瘤坏死因子受体p55/p75(TNFR p55/TNFR p75)在重症急性胰腺炎(SAP)发病机制中的作用。方法36只雄性SD大鼠均分为对照组与SAP组。SAP组采用5%牛黄胆酸钠1ml/kg胰胆管逆行穿刺注射建立模型,对照组仅给予剖腹假手术。两组大鼠分别在造模后3、6和12h处死,收集外周血与胰腺标本。ELISA法检测血清TNFα水平,RT PCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)与胰腺组织中TNFR p55/TNFR p75mRNA表达,采用血清淀粉酶与病理组织学评分作为SAP严重程度的指标。结果SAP组不同时间点血清淀粉酶、TNFα水平及胰腺组织炎症评分均显著高于对照组(P<0.01)。在PBMC中TNFR p55/TNFR p75mRNA的表达在各时间点均较对照组显著上调(P值均<0.01),且在6h达峰值,分别为1.32±0.07和0.95±0.04;而对照组在6h点为0.84±0.01和0.68±0.04。胰腺组织中TNFR p55/TNFR p75mRNA的表达在各时间点也均高于对照组(P值均<0.05)。结论TNFα是SAP病程中重要的细胞因子并可能通过结合胰腺组织中TNFR p55/TNFR p75参与胰腺组织损伤;同时,TNFα又可能通过与PBMC中TNFR p55/TNFR p75相互作用导致外周血中白细胞活化,从而加重胰腺炎的严重程度。     

抗TNFR1中和抗体对急性肝衰竭小鼠肝细胞TNFR1表达的影响

目的 通过半定量测定实验小鼠肝细胞TNFR1mRNA表达，观察抗TNFR1中和抗体对肝衰竭小鼠肝细胞TNFR1mRNA表达的影响。方法联合应用D-氨基半乳糖和肿瘤坏死因子-α造模，RT-PCR检测肝细胞TNFR1的表达情况。结果治疗组各时间点TNFR1mRNA的表达强度与模型组各相应时间点比较有统计学差异（P〈0．01）。结论TNFR1表达水平与血清TNF-α水平明显相关，而抗TNFR1中和抗体可下调TNFR1的表达。     

抗TNFR1中和抗体对急性肝衰竭小鼠肝细胞的保护作用

目的探讨抗TNFR1中和抗体对急性肝衰竭小鼠肝细胞的作用。方法联合应用D-氨基半乳糖和肿瘤坏死因子-α造模，酶联免疫吸附试验测定血清ALT、AST浓度。HE染色检查肝脏组织病理变化、脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）技术检测肝细胞的凋亡程度。结果模型组各时间点（4、8、12h）均可见明显的肝细胞凋亡，治疗组各时间点亦可见少量凋亡细胞，但与模型组比较各时间点均明显减少（P〈0．01），其血清ALT、AST浓度较模型组也有下降。结论抗TNFR1中和抗体对TNF—α能诱导肝细胞损伤具有保护作用肝。     

TNF-α/TNFR1与急性肝衰竭小鼠肝损伤的关系

目的研究肿瘤坏死因子-α及抗TNFR1对急性肝衰竭小鼠肝细胞的作用。方法联合应用D-氨基半乳糖和肿瘤坏死因子-α造模，酶联免疫吸附试验测定血清TNF-α、ALT、AST浓度。结果模型组小鼠血清TNF-α水平与肝脏损伤的严重程度相一致，肝功能的变化稍晚于TNF-α的变化，且TNF-α水平越高，其后ALT与AST升高的水平也越高，两者间有正相关；组织学变化则随着时间的延长肝细胞由凋亡发展到坏死。治疗组小鼠血清TNF-α水平升高较模型组明显降低。结论TNF-α能诱导肝细胞损伤，抗TNFR1中和抗体能阻断其效应，说明抗TNFR1中和抗体对肝细胞具有保护作用。     

肿瘤坏死因子α致暴发性肝功能衰竭小鼠肠上皮细胞凋亡的作用

目的研究肿瘤坏死因子α(TNFα)对暴发性肝功能衰竭(FHF)小鼠肠黏膜上皮细胞凋亡的作用。方法用D-氨基半乳糖(GalN) 脂多糖(LPS)或TNFα造FHF小鼠模型;酶联免疫吸附法测定血清TNFα含量;光学显微镜和电子显微镜观察肠组织;末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测肠组织细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测肿瘤坏死因子受体I(TNFRⅠ)蛋白在肠组织的表达与分布。结果实验各组动物各时间点光学显微镜下肠黏膜上皮细胞结构均保持完整,电镜下可见肝功能衰竭组有典型的凋亡细胞;对照组、LPS组、GalN组血清TNFα水平几乎正常,凋亡率低且基本没有TNFRⅠ蛋白表达;GalN LPS组血清TNFα水平12h明显升高(P<0.01),且TNFRⅠ蛋白在6h(大肠:2.82e 4±4.60e 3;小肠:1.14e 4±2.13e 3)即有表达,此时肠上皮细胞凋亡不明显,9h和12hTNFRⅠ蛋白表达明显增加,同时肠上皮细胞凋亡也明显。用GalN TNFα造FHF模型,结果也与GalN LPS组类似。应用抗TNFα抗体,可降低TNFRⅠ蛋白表达和减少肠上皮细胞凋亡的发生。结论TNFα能诱导肝功能衰竭小鼠肠上皮细胞凋亡,抗TNFα抗体能阻断这一作用;在FHF的模型动物中,TNFRⅠ蛋白表达增多,TNFRⅠ蛋白表达与肠上皮细胞凋亡在一定程度上呈正相关。     

周期素激酶抑制剂p27在肿瘤坏死因子-α诱导系膜细胞增生中的作用

目的 研究周期素激酶抑制剂p27在肿瘤坏死因子－α（TNF－α）诱导系膜细胞（MC）增生中的作用。方法 采用蛋白印迹（Western杂交）方法测定MC裂解液p27蛋白水平。[^3H]胸腺嘧啶核苷（[^3H]TdR）测定MC增生的情况,观察p27反义寡核苷酸（ODN）转染对TNF-α刺激MC中的p27水平及其对增生程度的影响。结果 TNF－α（200000U/L）可使无血清培养24h的MC中的p27水平降低（P＜0.01）,同时使[^3H]TdR掺入增加（P＜0.01）;p27反义ODN转染可降低TNF－α刺激24h的MC中的p27水平（P＜0.01）,同时可使[^3H]TdR掺入增加更为明显（P＜0.05）。结论 p27水平降低可能在TNF－α诱导MC增生中起重要作用。     

丹参单体IH764-3对血管平滑肌细胞细胞间黏附分子-1和核因子-κB的影响

目的研究丹参单体IH764-3对肿瘤坏死因子（TNF—α）诱导的血管平滑肌细胞（SMC）细胞间黏附分子-1（ICAM—1）表达和核因子-κB（NF-κB）激活的影响，探讨丹参单体IH764-3对动脉粥样硬化（AS）的防治机制。方法体外培养大鼠血管SMC；用流式细胞仪检测血管SMC表面ICAM—1的表达量；免疫细胞化学方法检测血管SMCNF—κB p65的分布情况。结果TNF—α能使血管SMC ICAM—1表达显著增加，丹参单体IH764-3可使TNF—α的这种作用明显减弱。免疫细胞化学染色显示，TNF—α促使SMCNF—κB向细胞核内转移，丹参单体IH764—3能部分阻止TNF-α诱导的NF-κB核内转移。结论丹参单体IH764—3抗AS机制之一是通过抑刹血管SMC ICAM—1表达，这种抑制作用是通过部分抑制NF-κB的核移位实现的。     

骨关节炎患者软骨组织中TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-9的表达变化及意义

目的观察骨关节炎（OA）关节软骨中肿瘤坏死因子α（TNF—α）、转化生长因子β（TGF—β）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-9（IL-9）的表达变化,探讨其与软骨退变的关系。方法选取20例因OA行关节置换患者的软骨组织,常规HE染色观察其组织形态,免疫组化ABC法检测关节软骨组织中的TNF—α、TGF—β和IL-6、IL-9;2例因意外受伤截肢患者的正常膝关节软骨作为对照。结果OA患者关节软骨出现裂隙、纤维化,软骨细胞增多、排列紊乱,并出现大量簇聚软骨细胞和肥大软骨细胞。TNF—α和IL-6在正常软骨全层均呈低表达,在OA患者软骨中的表达则明显增多（P〈0．01）。结论OA患者关节软骨中TNF—α、IL-6与TGF—β、IL-9表达失衡,是导致关节软骨退变的原因之一。     

抗TNF-α中和抗体通过升高脂联素水平减轻小鼠心肌缺血/再灌注损伤的作用

目的:阐明心肌缺血/再灌注(MI/R)时,脂联素(APN)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的关系,以及使用中和抗体阻断TNF-α可否提高血浆APN,进而发挥心肌保护作用。方法: 96只成年雄性C57小鼠和36只ob/ob小鼠均采用30 min缺血/再灌注(I/R)建立MI/R模型。96只C57小鼠分为假手术组、手术+盐水对照组及手术+抗TNF-α中和抗体治疗组(n=32);36只ob/ob小鼠分为ob/ob假手术组、ob/ob手术+盐水对照组及ob/ob手术+抗TNF-α中和抗体治疗组(n=12)。假手术或缺血20 min后,腹腔注射给予单次抗TNF-α中和抗体或盐水干预。分别采用ELISA检测TNF-α与APN血浆水平;小鼠心脏超声评估心脏LVEF;伊文氏蓝/TTC染色检测心脏梗死面积;以及TUNEL/Caspase-3活性检测观察心肌细胞凋亡。结果: 血浆ELISA测定发现,MI/R后,小鼠血浆TNF-α水平在再灌后1 h即显著升高,后缓慢下降。注射抗TNF-α中和抗体可在再灌后1 h即中和TNF-α（P<0.01）,同时在再灌注3 h、8 h、1 d及3 d后4个时间点,较给予盐水对照显著升高血浆APN（P<0.01）。通过小鼠心脏超声、伊文氏蓝/TTC染色和TUNEL/Caspase-3活性检测发现,与给予盐水的对照相比,腹腔注射抗TNF-α中和抗体可提高小鼠的心肌功能（P<0.05）、减少梗死面积（P<0.01）及心肌细胞的凋亡（P<0.01）。而在ob/ob小鼠中,通过以同样的实验方法证实,单次注射抗TNF-α中和抗体已不能提高血浆APN的含量,其减轻心肌损伤的作用同样被显著削弱,但给予APN球状片段仍可发挥心肌保护作用。结论: 以抗TNF-α的中和抗体阻断TNF-α可逆转MI/R后血浆APN的降低并发挥心肌保护作用,提示抗TNF-α中和抗体发挥的心肌保护作用可能部分通过提高APN实现。     

p38MAPK介导Ghrelin对TNF-α诱导的人脑微血管内皮细胞MCP-1 mRNA表达的抑制

目的探讨Ghrelin对TNF-α诱导的人脑微血管内皮细胞（HBMEC）单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的影响及p38MAPK的作用。方法培养HBMEC,TNF-α组加入不同浓度TNF-α;Ghrelin预处理组先加入Ghrelin预处理1 h后,加入TNF-α。采用RT-PCR法检测MCP-1 mRNA的水平,免疫印迹法检测磷酸化p38（p-p38）的表达。结果经TNF-α刺激后,MCP-1 mRNA表达明显增强,并呈一定的浓度剂量依赖关系（P〈0.05）,胞质中的p-p38蛋白表达亦明显增加（P〈0.05）。Ghrelin预处理可以减少MCP-1 mRNA及胞质中的p-p38蛋白表达（P均〈0.05）。结论 Ghrelin可能通过抑制p-p38通路抑制TNF-α介导的HBMEC MCP-1 mRNA表达。     

人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因转染对肿瘤坏死因子α诱导肝细胞凋亡的影响

TNFα能诱导肝细胞凋亡,其过度表达是肝衰竭发生发展过程中的一个重要因素。可溶性TNFα受体1（sTNFR1）可中和TNFα的部分毒性作用。为有效抑制TNFα诱导的细胞凋亡以及治疗肝衰竭,我们拟构建sTNFR1的真核表达载体,并将重组质粒pcDNA3-1（-）sTNFR 1瞬时转染QSG7701细胞,研究其对TNFα诱导细胞凋亡的抑制作用。[第一段]     

肿瘤坏死因子可溶性受体与充血性心力衰竭

肿瘤坏死因子 （TNF）在充血性心衰及恶液质患者血清 （浆 ）中浓度升高 ,且 TNF是一种具有负性肌力作用的前炎性介质 ,TNF-α的生物活性作用是通过结合在细胞膜表面受体 TNFR（分两型 TNFR 和 TNFR ）而起作用。研究发现 ,除了细胞膜上存在 TNF受体外 ,血清中也存在 TNF受体 ,称为可溶性受体 ,分两型 :STNFR ,STNFR 。 STNFR 及 STNFR 系由 TNFR 和 TNFR 经蛋白酶剪接后进入血中而产生的。而血浆中可溶性肿瘤坏死因子受体 （STNFR）可拮抗 TNF的生物活性 ,是 TNF作用的主要调节物质 ,同时 STNFRI升高幅度可反映心功能损害的严重程度 ,另一方面 ,也是判断心衰预后的一个独立而可靠的因素     

内质网跨膜蛋白肌醇需求酶1α介导的凋亡通路在兔骨关节炎发病中的作用及机制

目的探讨内质网跨膜蛋白肌醇需求酶(IRE)1α介导的凋亡通路在骨关节炎(OA)发病中的作用及机制。方法新西兰兔膝关节注射木瓜蛋白酶模拟OA模型,HE染色检测OA关节软骨以及关节滑膜的形态,ELISA法检测OA关节滑膜中炎性因子白细胞介素(IL)-6的含量。检测闭合性松解术关节软骨的组织形态以及IL-6的含量。Western印迹检测IRE1α介导的凋亡通路在OA滑膜中的表达水平。结果 HE染色结果显示木瓜蛋白酶诱导的OA模型中,关节软骨细胞发生明显坏死,纤维组织变性、机化以及纤维蛋白坏死物沉积,ELISA结果显示关节滑膜中的IL-6水平明显升高,闭合性松解术后的OA关节软骨细胞凋亡减少,且关节滑膜中IL-6水平也明显降低。蛋白水平显示OA膝关节滑膜中IRE1α的磷酸化水平以及Caspase3的表达水平明显升高,介导关节软骨细胞的凋亡,而闭合性松解术后Caspase3的表达水平降低。结论闭合性松解术可缓解OA的症状,抑制IRE1α-Caspase3信号通路介导的凋亡作用。     

肿瘤坏死因子α对肝细胞脂肪变性模型裂解激活蛋白表达的影响

目的探讨TNFα对油酸诱导的脂肪变性肝细胞模型固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白（SCAP）的表达及TG含量的影响。方法以正常肝细胞株L02进行细胞培养,用油酸诱导建立肝细胞脂肪变性模型,在对照组（C组）及模型组（F组）中加入TNFα（C1组和F1组）与抗TNFα抗体（C2组和F2组）分组进行培养,采用RT PCR法检测SCAP mRNA的表达,Western blot检测SCAP蛋白的表达,采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,并检测细胞内甘油三酯含量。结果TNFα作用组SCAP mRNA的表达上调,C1组比C组上调67%,F1组比F组上调55%,F-212.98,P〈0.01,差异有统计学意义。TNFα作用组SCAP蛋白的表达也上调,C1组比C组上调45%,F1组比F组上调95%,F-104.3,P〈0.01,差异有统计学意义。而使用抗TNFα抗体作用后表达显著下调,细胞内TG含量,对照组为（2.02±0.67）mg/10^7细胞,模型组为（7.79±1.35）mg/10^7细胞,模型组TNFα组为（13.36±1.99）mg/10^7细胞,F-82.94,P〈0.01,TNFα作用组较对照组脂变细胞数量增多,差异有统计学意义,而使用抗TNFα抗体作用后脂变细胞数量减少,细胞内TG含量显著下降。结论TNFα上调L02肝细胞SCAP的表达,促进细胞内TG的合成,可能参与了肝细胞脂肪变性的形成。     

急性胰腺炎发病过程中肿瘤坏死因子受体p55／p75的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子受体p55/p75(TNFR-p55/TNFR-p75)在实验性急性水肿型胰腺炎(AEP)发病机制中的作用。方法36只雄性SD大鼠随机分为对照组与AEP组。AEP组采用雨蛙肽(20μg/kg体重)腹腔注射,每小时1次,共4次建立大鼠急性水肿型胰腺炎模型,对照组仅给予腹腔注射生理盐水。两组大鼠分别在造模后3、6、12 h处死,收集外周血与胰腺标本。应用ELISA法检测血清TNF-α水平,运用RT-PCR的方法检测外周血单核细胞(PBMC)与胰腺组织中TNFR-p55/TNFR- p75mRNA表达,同时测定血清淀粉酶与病理组织学评分作为急性胰腺炎严重程度的指标。结果MAP组3个时间点血清淀粉酶、TNF-α水平及胰腺组织炎症评分均显著高于对照组(P<0.01),在PBMC及胰腺组织中TNFR-p55/TNFR-p75 mRNA的表达均显著上调(P<0.05)。结论TNF-α是急性胰腺炎病程中的重要细胞因子并通过结合胰腺组织中TNFR-1355、TNFR-p75参与引起胰腺组织损伤;同时TNF-α通过与PBMC中TNFR-p55/TNFR-p75相互作用导致外周血中白细胞活化,从而影响急性胰腺炎的严重程度。     

细胞因子对肺癌H460细胞MMP表达的影响及地塞米松的干预作用

目的 在肺癌H460细胞的三维立体培养过程中,直接观察细胞因子[肿瘤坏死因子α（TNF-α）和IL-1β]对肺癌H460细胞关于基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和MMP-9表达的诱导作用及地塞米松的干预作用.方法 在肺癌H460细胞三维立体培养过程中加入细胞因子TNF-α和IL-1β来诱导MMP的表达,同时加入地塞米松干预MMP-2和MMP-9的表达;用明胶酶谱法测定MMP-2、MMP-9,同时在培养5d后测定胶原含量大小.结果 TNF-α和IL-1β诱导培养在立体胶原内的肺癌H460细胞产生大量MMP-2和MMP-9,并促进其活化,引起大量胶原降解,地塞米松抑制了MMP-2及MMP-9的表达及活化,进而抑制了胶原的降解,对抗了细胞因子TNF-α和IL-1β对胶原的降解作用.结论 细胞因子TNF-α和IL-1β可诱导MMP的表达,MMP可直接降解肺内胶原,进而促进肺癌的侵袭或转移;地塞米松通过抑制MMP的表达与活化对抗MMP对肺组织的破坏作用,进而抑制了肺癌的侵袭与转移.     

慢性酒精性胰腺炎患者血清肿瘤坏死因子受体检测及其临床意义

前炎性介质肿瘤坏死因子（TNFα）的生物活性是通过特异性膜受体所介导的。血清可溶性肿瘤坏死因子受体（sTNFR）能竞争性与膜受体结合而阻断TNFα的生物活性。我们用ELiISA方法对慢性酒精性胰腺炎患者血清sTNFRp55、p75进行了定量测定，发现sTNFRp75含量较对照组明显增高。提示慢性酒精性胰腺炎的发病机理与TNFα和sTNFR的调节紊乱有关。     

抗TNF-α蛋白Fab抗体的制备和鉴定

目的制备人源性抗肿瘤坏死因子（TNF）-α蛋白的可溶性Fab抗体。方法用固相化的TNF-α蛋白从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选出表达抗TNF-α蛋白Fab抗体的阳性克隆,经酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒并转化至大肠杆菌BL21（DE3）pLysS中,IPTG高效可溶性表达,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定抗体表达情况,ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性。结果筛选并表达了人源性抗TNF-α蛋白的Fab抗体,在非还原SDS-PAGE中形成相对分子质量47 kD的条带;Western blot分析证实表达的蛋白即Fab抗体;ELISA筛选出的2株抗体（TA-04、TA-13）具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与小牛血清白蛋白无交叉反应。结论成功制备并鉴定了人源性抗TNF-α蛋白的可溶性Fab抗体。     

基质金属蛋白酶9作用后大肠癌细胞肿瘤坏死因子受体1的变化

目的研究基质金属蛋白酶9（MMP-9）对大肠癌细胞肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）表达的影响以及通过促进其脱落形成可溶性肿瘤坏死因子受体1（sTNFR1）从而促进大肠癌侵袭和转移的可能途径。方法免疫荧光法研究TNFR1在大肠癌细胞SW1116中的表达；用MMP-9干预培养的大肠癌SW1116细胞，用流式细胞术检测MMP-9不同剂量和不同作用时间时TNFR1表达变化，同时应用双抗体夹心ELISA法检测细胞培养上清中sTNFR1的变化。结果SW1116细胞表达TNFR1；MMP-9使SW1116细胞表面TNFR1脱落形成sTNFR1有剂量和时间依赖性。结论MMP-9促进大肠癌细胞表面TNFR1脱落形成sTNFR1，可能与大肠癌侵袭转移密切相关。     

晚期糖基化终产物修饰的β2—微球蛋白刺激人关节滑膜细胞分泌促炎症细胞因子

目的 旨在探讨晚期糖基化终产物（AGEs)修饰的β2－微球蛋白（AGE-β2m)对人关节滑膜细胞的病理生物学作用。方法 分离、培养正常人关节B型滑膜细胞,与AGE－β2m共同孵育,用ELISA法检测培养上清液中肿瘤坏死因子－α（TNF-α）和白细胞介素－1β（IL-1β）。结果 AGE－β2m诱导滑膜细胞分泌TNF－α和IL－1β,诱导作用具有时间和剂量依赖规律。抗AGE受体抗体预处理滑膜细胞能明显抑制AGE－β2m引起的TNF－α和IL－1β分泌。结论 AGE－β2m通过AGE受体介导的作用,刺激人类关节B型滑膜细胞产生TNF－α和IL－1β,这种生物学效应可能参与了透析相关性淀粉样变（DRA）时关节局部的炎症反应和组织损伤。