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1.
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的克隆,表达及重新折叠 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:人的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)基因经扩增后,克隆在大肠杆菌中表达并重新折叠并获得有活性的TRAIL蛋白。方法:用PCR的方法从人胎盘cDNA库中扩增TRAIL基因,经序列分析鉴定,再克隆到原核表达载体pET11a,经E.coli BL21(DE3)表达,电泳鉴定后,柱层析纯化,重新折叠,流式细胞术等 相似文献
2.
目的分离人染色体8p11.2亚带ANK1位点附近区域基因的表达序列。方法采用cDNA选择法从定位于该区域的人工酵母染色体(YAC)中分离基因的表达序列,并从分离的表达序列中选取1个序列用于筛选人胎脑cDNA文库。结果获得7个表达序列,其中5个可与目的YAC反杂交。所得的表达序列BHLC152与鼠的CArG盒结合因子基因高度同源,BHLC74与编码心室肌肌球蛋白的碱性轻链1(MLC1)基因高度同源,表明BHLC74可能编码一种MLC1的同工蛋白。分离的其它表达序列与数据库内一些位置和功能尚不清楚的表达序列标签(expresedse-quencetag,EST)仅有部分同源性。用表达序列BHLC119筛选人胎脑cDNA文库,获得1个插入片段长1951bp的克隆,序列分析表明它编码174个氨基酸,该序列与所有已知的蛋白质序列无同源性。Northern印迹分析结果显示,在人胎脑总RNA中呈现1条约3.5kb带;组织表达分析表明,此系一广泛表达的基因。结论BHLC74可能作为与8p相关的心脏病候选基因,其它序列至少可以作为定位在ANK1位点附近区域的肿瘤抑制基因的初筛基因。 相似文献
3.
目的:建立能高效表达人端粒重复序列结合因子1第^33-277位(TRF1^33-277)氨基酸的菌株并制备多抗。方法:设计一对引物,分别带有Kpn I和EcoRI位点,从已经克隆了TRF1cDNA全长的重组质粒pCRⅡ-TOPO-TRF1扩增TRF1^33-277cDNA片段,克隆入PGEM-T质粒,测序和酶切图谱鉴定,EcoRI酶切后亚克隆入pGEX-3X的EcoRI位点之间,筛选在向插入重组子 相似文献
4.
癌胚抗原cDNA真核表达重组质粒的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:将人特异表达的癌胚抗原(CEA)-cDNA克隆到逆转录病毒质粒载体pLXSN中,构建成真核表达重组质粒pLXSN-CEA,为进一步表达表达人CEA的动物肿瘤细胞模型作准备。方法:用内切酶EcoRI酶切质粒pLXSN及p91023B-CEA-17,得到线状载体pLXSN及外源基因CEA-cDNA,然后通过连接酶的连接反应将CEA-cDNA插入到pLXSN的EcoRI位点,用EcoRI和BamHI鉴定。结果:成功地将CEA-cDNA克隆到pLXSN中,通过鉴定筛选获得有意义的正向重组质粒pLXSN-CEA。结论:利用基因克隆技术能将人CEA-cDNA定向插入逆转录病毒质粒载体中,构建成真核表达重组质粒pLXSN-CEA,为进一步建立CEA阳性动物肿瘤细胞模型及研究CEA阳性肿瘤的免疫防治奠定了基础。 相似文献
5.
为研究人脑胶质细胞来源的神经营养因子(glialcellline derived neurotrophic factor, GDNF) 在神经系统疾病中的作用,根据GDNF 的cDNA 序列设计并合成引物,以流产胎儿脑组织为来源,分别提取RNA 和基因组DNA 作模板,经RT PCR 和PCR 技术扩增人GDNF 基因片段,采用DNA 重组技术将其克隆于pGEM T Easy 载体中并测序。结果:RNA 和基因组DNA 体外扩增得到的片段均是410 bp ,两者无差异。PGEM GDNF 经酶切鉴定正确,测序结果与Genebank 比较基本相同。由于RNA 和基因组DNA 扩增得到的片段大小相同,证实该基因片段内无内含子插入,该片段可用于真核及原核表达。 相似文献
6.
采用热酚法从登革2型病毒43株(D2-43)感染的C6/36细胞中提取了病毒RNA,以病毒RNA为模板,进行D2-43株NS3基因cDNA片段的反转录-PCR扩增,片段长度为1176bp。将扩增的cDNA片段克隆到T载体pBluescript-ksⅡ中。通过双脱氧法测定了cDNA片段序列,与国际标准株NGC株序列一致。 相似文献
7.
人GDNF基因的克隆 总被引:2,自引:0,他引:2
克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因。方法;从脑胶质细胞瘤患术后的脑瘤组织中提取总RNA,以RT-PCR方法扩增出了一般约558bp的cDNA片段,将这一片段克隆于pUC18载体中,进行全序列分析。结果:证实该研究所克隆的cDNA是编码正确的GDNF基因。 相似文献
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目的:克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因。方法:从脑胶质细胞瘤患者术后的脑瘤组织中提取总RNA,以RTPCR方法扩增出了一段约558bp的cDNA片段,将这一片段克隆于pUC18载体中,进行全序列分析。结果:证实该研究所克隆的cDNA是编码正确的人GDNF基因。与发表于GeneBank上的序列相比,发现该研究克隆的基因有一段78bp的核苷酸序列缺失,但不影响密码子的阅读框。结论:克隆到了编码正确的人GDNF的cDNA全序列,对帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。 相似文献
9.
HCV E2/NS1基因的PCR检测克隆与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道了利用PCR技术检测了34例丙型肝炎病毒E2/NS1基因的cDNA并与5非编码区基因的cDNA检测技术进行了比较,应用pUC18质粒对此扩增片段进行了克隆与序列分析,结果表明克隆片段HCV-S1为我国主要流行的HCV基因亚型-II型,其与HCV-II型的核苷酸与氨基酸的同源性均在90%以上,序列分析表明该片段富含脯氨酸和胱氨酸,可能具有复杂的空间构型,且与4个糖基化位点一样保持稳定,另外, 相似文献
10.
人甲状腺特异性转录因子-1基因的分子克隆及鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 克隆人甲状腺特异性转录因子-1基因片段,为进一步从事分子甲状腺学研究打下基础。方法采用RT-PCR法从人甲状腺组织RNAK 扩增出甲状腺牧场生围 因子-1基因片段(440-803bp);应用TA克隆对CP拉物进行分子克隆;EcoPⅠ双酶解法鉴定重组体。结果 获得TTF-1cDNA的一重组体(pCR^TMⅡ/TTF-1),经EcoRI双酶解表明克隆成功。结论TTF-1基因的分子克隆可进 一步研 相似文献
11.
12.
目的 探讨原癌基因蛋白质C-erb B-2及增殖细胞核抗原(PCNA)在结肠癌中含量及与结肠癌生物学行为的关系。方法 利用免疫组织化学及自动化图像分析技术定量检测C-erb B-2及PCNA在10例正常肠粘膜,30例结肠腺瘤,53例结肠癌中的表达。结果 阳性总面积、积分光密度、阳性率1、平均光密度1及半定量测定的阳性率等6个参数值均按正常肠粘膜→Ⅰ级不典型增生腺瘤→Ⅱ级不典型增生腺瘤→Ⅲ级不典型增生腺瘤→腺癌的顺序呈递变趋势,伴有淋巴结转移的腺癌组中,上述各参数值明显增高。结论 C-erb B-2及PCNA一起可作为判断肿瘤的恶性程度及评价预后的指标,应用图像分析技术对结肠癌及癌前病变进行多指标多参数的计量分析,具有鉴别诊断的重要意义,为结肠癌的早期诊断提供客观依据。 相似文献
13.
糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中S腺苷蛋氨酸合成酶基因的表达及其意义 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 比较正常大鼠和糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中基因表达的差异,探讨糖尿病性心肌病的发病机制。方法 实验大鼠分为两组:对照组和糖尿病性心肌病组。从心肌组织中抽提mRNA,经逆转录分别用Cy3、Cy5荧光标记,获得两组动物来源的cDNA探针。cDNA探针与基因表达谱芯片杂交,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果 S腺苷蛋氨酸合成酶的表达水平在糖尿病性心肌病时明显上调。结论 S腺苷蛋氨酸合成酶通过影响糖尿病性心肌病大鼠心肌组织中高半胱氨酸的含量在糖尿病性心肌病发病机制中起重要作用。 相似文献
14.
胃肠道恶性肿瘤端粒酶活性的表达与意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨端粒酶在胃肠道恶性肿瘤癌组织和癌旁正常组织中的表达及其临床意义。方法 应用端粒酶PCR-ELISA检测法检测胃癌11例、结肠癌14例及25例癌旁正常组织中的端粒酶活性。结果 25例胃肠道肿瘤组织中21例端粒酶呈阳性(84.0%);25例癌旁正常组织 5例阳性(20.0%)。癌组织和癌旁正常组织中端粒酶的表达均与肿瘤临床病理特征无关,癌旁正常组织存在端凿酶阳性表达的病例,病理上多伴有不典型增生或癌细胞的浸润转移。结论 端粒酶可作为实质性肿瘤早期诊断的辅助指标。对癌旁正常组织中端粒酶阳性的患者加强观察,有助于早期发现某些胃肠道恶性肿瘤的术后再发或复发。 相似文献
15.
西罗莫司产生菌——吸水链霉菌的FK506结合蛋白 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 分离吸水链霉菌菌体蛋白质,探讨西罗莫司产生菌-吸水链霉菌的FK506结合蛋白(FKBPs)。方法 制备西罗莫司产生菌-吸水链霉菌菌体蛋白,分离蛋白质并进行PPIase酶活性测定。结果 获得吸水链霉菌的蛋白谱型,其中25kD蛋白质及15.5kD蛋白质具有PPIase活性,初步认定相当于FKBP25及FKBP12。结论 西罗莫司产生菌-吸水链霉菌中存在二种FKBPs,即FKBP25和FKBP12,与前人报告不合。 相似文献
16.
人外周血树突细胞的分离与提纯 总被引:8,自引:2,他引:6
目的 从人外周血中分离、培养及鉴定树突细胞(DC)。方法 从正常人外周血分离获得单个核细胞,培养2小时后,取会细胞,在无血清培养基中加入不同的细胞在子,于2的第1,6,8天对形态,表型和功能分擀行测定,并在光镜、电镜下观察DC的纯度与得率。结果 体外培养6~8天可获得高纯度大量的DC,较高表达HLA DR、CD40、CD83和CD86,能强烈激发同种慢体T淋巴细胞增殖。结论 上述方法可以从人外周血 相似文献
17.
MPP+对SHSY5Y细胞凋亡的诱导作用 总被引:5,自引:2,他引:3
目的 探讨1-methyl-4-phenylpyridium iodide(MPP^ )对SHSY5Y细胞的毒性作用。方法 采用体外培养的SHSY5Y细胞,通过TUNEL染色、细胞超微结构观察和DNA倍体分析检测MPP^+对SHSY5Y细胞凋亡的诱导作用。结果 MPP^ 可明显地抑制SHSY5Y细胞的生长,并诱导SHSY5Y细胞发生凋亡,主要表现为TUNEL染色阳性的细胞增多,细胞核异染色质增多,线粒体肿胀、嵴断裂、消失,在DNA周期中的G0-G1期前出现明显的亚二倍体峰。结论 MPP^ 通过诱导SHSY5Y细胞凋亡的方式发挥毒性作用。 相似文献
18.
糖脂平治疗小鼠实验性糖尿病的药理研究 总被引:4,自引:2,他引:2
目的 观察糖脂平对正常和实验性糖尿病小鼠的降血糖作用。 方法 糖脂平以生药 3.5 ,7.0和14 .0 g/kg给小鼠连续灌胃给药 1/d× 5 ,实验性糖尿病模型用肾上腺素、葡萄糖和四氧嘧啶塑造。 结果 糖脂平能维持正常小鼠空腹血糖的稳定性 ,对葡萄糖、肾上腺素、四氧嘧啶所致的小鼠高血糖均有明显的抑制作用。该药给小鼠灌胃 ,其最大耐受量为 6 8.75 g/kg,相当于成人日用量的 395倍。 结论 糖脂平具有降血糖作用 ,毒性极小 ,口服安全。 相似文献
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L-Arg-NO通路对大鼠延髓腹面加压区心血管活动的影响及与L-Glu通路的关系 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:研究一氧化氮(NO)前体L-精氨酸(L-Arg)单侧微量注入大鼠延髓腹面加压区(VSMp)对动脉血压(AP)、心率(HR)、肾灌流压(PPk)的影响及与L-谷氨酸(L-Glu)升压作用的关系。方法 采用延髓腹外侧部微量注射法,以整体灌流肾为模型观察与NO有关药物对心血管活动的影响。结果 (1)VSMp内微量注入L-Arg(40~100nmol),AP和HR呈剂量依赖性下降,与生理盐水注入后的变化相比较,差异均有显著性。如预先注入NO合酶抑制剂L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)或鸟苷酸环化酶抑制剂甲基蓝,L-Arg的降压效应被衰减。(2)VSMp内微量注入L-Arg(100nmol),PPk与AP同步下降,与基础值比较,差异有显著性。(3)VSMp内微量注入L-Glu(350nmol),AP上升。如预先注 相似文献
20.
胰岛素样生长因子-1受体在实验性肝纤维化中的表达及IL-10的干预作用 总被引:7,自引:2,他引:5
目的 观察胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)在实验性大鼠肝纤维化过程中的表达情况及白细胞介素-10(IL-10)对肝纤维化大鼠IGF-1R表达的影响。方法 建立CCl4诱导大鼠肝纤维化模型并行IL-10干预实验。取对照组、模型组及IL-10干预组大鼠肝脏组织,采用SP免疫组织化学方法检测分析在肝纤维化进程不同阶段大鼠肝组织IGF-1R4的表达情况。结果 经CCl4诱导成功建立大鼠肝纤维化模型。随着肝纤维化程度的加重,IGF-1R在肝组织中阳性表达明显增强;经Ridit分析,对照组与模型组IGF-1R阳性表达差异有显著性(P<0.01);IL-10干预组IGF-1R阳性表达较模型组明显减弱,差异有显著性(P<0.05),且随IL-10干预时间的延长,IGF-1R在肝组织中阳性表达逐渐减弱。结论 随着肝纤维化程度的进展IGF-1R阳性表达增强,外源性IL-10可降低CCl4诱导大鼠肝纤维化中IGF-1R的表达。 相似文献