急性缺血性脑损伤后脑组织磷脂酶A2活性和脑细胞游离钙离子浓度变化及尼莫地平的保护作用

背景：磷脂酶A2能被Ca^2＋激活，而被激活的磷脂酶A2又能使Ca^2＋内流或细胞内Ca^2＋释放，形成恶性循环，使神经细胞游离Ca^2＋浓度持续增加，导致神经细胞严重损伤。目的：探讨尼莫地平对磷脂酶A2激活致急性缺血性脑损伤中的保护作用。设计：完全随机对照实验。单位：重庆医科大学儿童医院ICU。材料：实验于2001—01／2003—10在重庆医科大学儿科研究所完成，选择30只雄性Wistar大鼠，随机分为假手术组、缺血组、尼莫地平干预组，每组10只。方法：假手术组：大鼠仪在麻醉状态下分离右侧颈总动脉，不予阻断血流。缺血组：腑缺血前30min，每只大鼠腹腔注射2mL生理盐水。尼莫地平干预组：脑缺血前30min，每只大鼠腹腔注射0．2g／L的尼莫地平2mg／kg。3组大鼠自缺血开始至处死的时间均为120min。大鼠在麻醉状态下断头处死，取脑组织检测磷脂酶A2活性、脑细胞游离Ca^2＋浓度、脑组织水含量及检测脑组织中Ⅱ类A型分泌型磷脂酶A2和Ⅳ类胞浆型磷脂酶A2mRNA表达的改变。主要观察指标：①各组大鼠脑组织磷脂酶A2活性。②各组大鼠脑细胞游离Ca^2＋浓度。⑧各组大鼠腑含水量。④各组大鼠脑组织中Ⅱ类A型分泌型磷脂酶A2和胞浆型磷脂酶A2表达情况。结果：30只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠脑组织磷脂酶A2活性：缺血组、尼莫地平干预组均高于假手术组[（57．8&;#177;7．2），（42．5&;#177;6．1），（17．1&;#177;5．3）％，P〈0．05-0．01]，尼莫地平干预组低于缺血组（P〈0．05）。②各组大鼠脑细胞游离Ca^2＋浓度：缺血组、尼莫地平干预组均高于假手术组[（775．8&;#177;105．5），（497．2&;#177;45．9），（103．8&;#177;10．3）μmol／L，P〈0．05～0．01]，尼莫地平干预组低于缺血组（P〈0．01）。⑧各组大鼠脑含水量：缺血组、尼莫地平干预组均高于假手术组[（82．9&;#177;0．5），（80．0&;#177;1．1），（72．1&;#177;0．01）％，P〈0．05-0．01]，尼莫地平干预组低于缺血组（P〈0．05）。④假手术组脑组织中无明显Ⅱ类A型分泌型磷脂酶A2mRNA表达，胞浆型磷脂酶A2mRNA表达水半很低。缺血后120min后脑组织中出现Ⅱ类A型分泌型磷脂酶A2mRNA表达，胞浆型磷脂酶A2mRNA表达水平明显增强。尼莫地平干预组与缺血组比较，Ⅱ类A型分泌型磷脂酶A2mRNA表达水平无明显降低，胞浆璎磷脂酶A2mRNA表达水平有所降低。结论：尼莫地平可降低缺血后脑细胞游离Ca^2＋浓度，脑组织中磷脂酶A2的活性和脑含水量，但不能明显抑制脑缺血后Ⅱ类A型分泌型磷脂酶A2mRNA及胞浆型磷脂酶A2mRNA的表达。     

磷脂酶A2激活在鼠急性缺血性脑损伤中的作用机制

目的 探讨急性脑缺血后脑组织内磷脂酶A2（PLA2）激活及细胞内[Ca^2 ]i与脑损伤的关系，为预防和治疗急性缺血性脑损伤提供理论基础和新的思路。方法 将局灶性脑缺血模型大鼠分5组（假手术组、缺血30、60、90、120min组），测定脑组织PLA2活力、脑细胞[Ca^2 ]i、脑含水量及缺血120min组脑组织PLA2表达量的改变。结果 脑缺血120min脑组织PLA2活性、[Ca^2 ]i、脑含水量较假手术组明显升高，并与时间呈正相关，缺血120min后脑组织中出现sPLA2-ⅡAmRNA表达，且cPLA2-ⅣmRNA表达水平较假手术组明显增强。结论 磷脂酶A2激活参与了脑缺血后神经细胞内钙超载及脑损伤的整人病理过程。     

磷脂酶A2在小儿急性肺损伤中的作用及意义

目的探讨磷脂酶A2在急性肺损伤(ALI)恶化进程中的作用及意义.方法结合危重病例评分,采用ELISA检测28例ALI患儿血清PLA2含量,并监测患儿脏器功能及动脉血气.结果 ALI患儿血清PLA2含量明显高于正常组(P＜0.001),低于多脏器功能衰竭(MOF)组(P＜0.01).结论 PLA2参与ALI的病理生理过程,与ALI的病情有关,并可作为早期警示ALI及MOF的实验室参数.     

血小板型磷脂酶A2抗菌活性的研究进展

磷脂酶A2（PLA2）是一类能水解磷脂Sn-2位脂键的酶，也是生物化学、基因工程和药理学研究的热点酶类。近几年来一个重要发现就是某些型别PIA2具有抗菌功能，研究得最早且最多的是血小板型PLA2，它主要对G^＋菌具有强的抗菌活性，在宿主防御细菌感染中发挥重要作用。现就血小板型PLA2抗菌活性的研究进展作一综述。     

血小板型磷脂酶A2抗菌活性的研究进展

磷脂酶A2(PLA2)是一类能水解磷脂Sn-2位脂键的酶,也是生物化学、基因工程和药理学研究的热点酶类.近几年来一个重要发现就是某些型别PLA2具有抗菌功能,研究得最早且最多的是血小板型PLA2,它主要对G+菌具有强的抗菌活性,在宿主防御细菌感染中发挥重要作用.现就血小板型PLA2抗菌活性的研究进展作一综述.     

脂蛋白相关磷脂酶A2与急性缺血性脑卒中的相关性研究

目的 通过检测急性缺血性脑卒中患者血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)浓度,探讨两者的关系,为临床诊断、治疗提供依据.方法 选择急性缺血性脑卒中患者(151例)为研究对象,未卒中患者(100例)作对照,血浆Lp-PLA2检测采用酶联免疫吸附法(ELISA).结果 (1)急性缺血性脑卒中组血浆Lp-PLA2浓度高于对照组,差异有统计学意义(t=21.307,P=0.000).血浆Lp-PLA2浓度与急性缺血性脑卒中的风险呈正相关.(2)各型急性缺血性脑卒中血浆Lp-PLA2浓度差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 Lp-PLA2是急性缺血性脑卒中的危险标志物,测定Lp-PLA2浓度有助于制定预防策略,为急性缺血性脑卒中的预防及临床治疗提供依据.     

旋磁场拮抗脑缺血再灌注损伤中磷脂酶A2和内皮素作用的研究

探讨旋磁场对脑缺血再灌注大鼠磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）和内皮素（ＥＴ）含量的影响。方法：用四血管阻断法造成大鼠全脑缺血３０分钟后，再灌注３０分钟，此时大鼠脑组织ＰＬＡ２活性和脑组织、血浆ＥＴ的含量均显著提高，大脑皮层神经细胞和血脑屏障超微结构明显损伤。在大鼠脑缺血３０分钟后再灌注开始时，用旋磁场〔０．０８Ｔ，２５００ｒ／ｍｉｎ）作用于双侧颈总动脉区２０分钟。结果：大鼠脑组织ＰＬＡ２活性和脑组织、血浆ＥＴ含量的增高明显受抑，神经细胞和血脑屏障超微结构的损害程度减轻。结论：旋磁场有抑制ＰＬＡ２活性和降低ＥＴ水平的作用，对脑缺血再灌注损伤有一定的防治作用。     

联合检测冠心病患者ⅡA分泌型磷脂酶A2和脂蛋白相关磷脂酶A2的临床意义

目的 探讨冠心病患者联合检测血清ⅡA分泌型磷脂酶A2 （secretory groupⅡA phospholipase A2,ⅡA-sPLA2）及脂蛋白相关磷脂酶A2 （LP-PLA2）对于其诊疗的意义.方法 对健康对照组50例、急性心肌梗死（AMI）组13例、稳定型心绞痛（UAP）组17例和不稳定型心绞痛（SAP）组70例的生化指标（主要ⅡA-sPLA2和LP-PLA2水平）进行测定,统计分析各组之间的差异是否有统计学意义.结果 随着冠心病患者病变程度加剧,HDL水平有降低的趋势,即AMI组比SAP和UAP组患者的HDL水平均高,三组相比差异均有统计学意义（t=3.013-3.987,均P＞0.05）.ⅡA-sPLA2和LP-PLA2在冠心病各亚型患者中的水平明显比对照组高,且AMI组比SAP和UAP组,SAP比UAP患者的水平均高,差异有统计学意义（t=3.507-9.967,均P＜0.05）.ⅡA-sPLA2和LP-PLA2指标之间呈正相关关系（r=0.657,P＜0.05）,HDL分别和ⅡA-sPLA2与LP-PLA2之间呈显著的负相关关系（r=-0.351,-0.294,均P＜0.05）.结论 ⅡA-sPLA2与LP-PLA2含量将可能是治疗冠状动脉粥样硬化和预防心血管疾病的新指标.     

颅内感染患者脑脊液中磷脂酶A2活性的研究

目的　探讨常见颅内感染患者脑脊液中磷脂酶A2(PLA2)活性变化及其临床意义。方法　采用(     

尼莫地平与甘露醇联合应用对防止脑缺血再灌注损伤的实验研究

目的:研究尼莫地平与甘露醇联合疗法对大鼠脑缺血再灌注的的保护作用。方法:60只大鼠随机分为治疗组、对照组和正常组,采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,治疗组给予尼莫地平与甘露醇联合疗法处理。在再灌注1d、3d检测脑组织SOD活性及MDA含量,并用免疫组织化学方法检测脑内神经生长和修复相关蛋白GAP-43、MAP-2和cyclinD1的表达情况。结果:脑缺血再灌注后SOD活性降低,MDA含量增高(P<0.05),神经组织呈破坏性改变,缺血灶周围GAP-43、MAP-2和cyclinD1表达增高(P<0.01),治疗可减轻脑病理损害,并增强GAP-43和MAP-2的表达(P<0.01),抑制cyclinD1的表达。结论:尼莫地平与甘露醇联合疗法可减轻水肿,清除自由基,抑制细胞凋亡和蛋白水解,对缺血脑组织有明显的保护作用,并促进损伤神经组织的修复。     

甘露醇、尼莫地平及其两药联合应用对脑缺血大鼠神经保护作用的机制研究

目的:探讨甘露醇与尼莫地平联合应用治疗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法:SD大鼠60只,按随机对照实验设计等分成5组,每组12只。A组:假手术组;B组:模型组,即局灶性脑缺血再灌注组;C组:甘露醇组;D组:尼莫地平组;E组:甘露醇与尼莫地平合用组。采用TUNEL法及TBA法分别观察脑组织凋亡细胞数目及丙二醛含量。结果:①B组缺血侧脑组织凋亡细胞数目(46.6±11.0)个/视野及丙二醛含量(0.75±0.07)μmol/g均明显高于A组假手术侧(t=10.10,15.43,P<0.01)。②C组、D组、E组缺血侧脑组织凋亡细胞数目及丙二醛含量均较B组缺血侧脑组织降低(P<0.05),其中E组脑组织凋亡细胞数目及丙二醛含量降低最显著(P<0.05)。结论:甘露醇、尼莫地平及两药合用均可通过抑制神经细胞凋亡和降低丙二醛含量发挥对局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,其中两药合用效果更佳,为临床两药合用改善缺血性脑血管病患者的神经功能提供了理论依据。     

尼莫地平联合电针治疗脑缺血再灌注损伤的机理

目的：研究尼莫地平联合电针疗法对大鼠脑缺血再灌注的保护作用机理。方法：60大鼠随机分为3组，治疗组（24只）、对照组（24只）、正常组（12只），前两组制作脑缺血再灌注模型，治疗组给予尼莫地平联合电针处理，对照组给予生理盐水，正常组不治疗。再灌注1d,3d后检测脑组织过氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量，以及生长相关蛋白－43（GAP－43）、微管组关蛋白－2（MAP－2）和细胞周期蛋白（cyclin)-D1的表达情况。结果：缺血再灌注后SOD活性降低，MDA含量增高，缺血性周围GAP－43、MAP－2和cyclin-D1表达增高，治疗可减轻脑损害，增强GAP－43和MAP－2表达，抑制cyclin-Dl表达。结论：尼莫地坪联合电针疗法可清除自由基，抑制细胞凋亡和蛋白水解，并促进损伤组织的再生和修复。     

电针对脑局部缺血再灌流大鼠分泌型磷脂酶A2的影响

目的探讨电针在脑损伤时对脑细胞凋亡和分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2,sPLA2)及其相关介质的影响. 方法采用线栓法制成大脑中动脉缺血再灌注(middle cerebral artery ischemia reperfusion,MCA-IR)模型,用HE染色和TUNEL法观察脑细胞形态学变化,用免疫组化法检测sPLA2在脑细胞中的表达,用[3H]标记大肠杆菌为底物以及用ELISA法分别检测血清中sPLA2活性和TNF-α、PGE2水平. 结果在大鼠MCA-IR脑损伤时,电针能明显降低脑细胞凋亡与坏死,同时也可显著降低血清中sPLA2、TNF-α、PGE2水平及sPLA2在脑细胞中的表达,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.01). 结论电针对脑损伤有良好的保护作用,其机理在于抑制sPLA2的活性、蛋白表达及相关介质水平.     

大鼠急性脑缺血再灌注后血脑屏障的变化

目的研究大鼠急性脑缺血再灌注的血脑屏障变化以及MRI表现.方法 44只SD大鼠随机分为4组,采用大鼠线栓法建立急性脑缺血再灌注模型,A组、C组脑缺血2 h, B组、D组缺血6 h,A组、B组中每组10只分别于灌注前、再灌注后2 h和24 h行MRI检查,4只大鼠行组织学检查.C组、D组每组12只,分别于再灌注后2 h和24 h观察脑组织中伊文氏蓝染色情况并测量其含量. 结果 A、B两组再灌注前均无强化表现,再灌注后2 hA组10例中4例出现斑片状强化,B组10例均出现大片明显强化(P＜0.05),B组中3例再灌注24 h T1WI出现高信号,相应大体标本断面可见出血灶,组织学观察显示B组脑组织损伤较A组严重.C组中8例可见右尾壳核斑片状蓝染区,而D组12例右尾壳核及额顶叶皮质区均见蓝染,测量两组右侧大脑半球伊文氏蓝含量与对侧相比均有显著性差异(P＜0.05),两组之间右侧大脑半球伊文氏蓝含量相比有显著性差异(P＜0.01),C组中再灌注2 h与再灌注24 h伊文氏蓝含量相比较有显著性差异(P＜0.05),D组中再灌注2 h与再灌注24 h伊文氏蓝含量无差异(P＞0.05).结论缺血再灌注时血脑屏障的损伤随着缺血时间的延长而加重,MRI增强扫描作为一个无创性、可重复性检查方法,有助于评价急性脑缺血再灌注后血脑屏障的状况.     

局部脑缺血、再灌流损伤与氧自由基的关系

目的：探讨氧自由基在脑缺血，再灌流损伤中的作用，为临床进行抗氧化治疗提供依据。方法：用Ｗｉｓｔａｒ大鼠制成左侧大脑中动脉缺血，再灌流模型观察生化代谢，自由基代谢，组织和超微结构改变。结果：再灌流组较缺血组血清ＣＰＫ增高，ＭＤＡ升高，再灌流组脑组织中ＭＤＡ升高，血清中ＳＯＤ活力下降，再灌流组脑组织结构和超微结构破坏加严重，应用自由基清除剂后血清中ＣＰＫ降低，ＭＤＡ含量降低，ＳＯＤ活性升高，组织中ＭＤ     

芹菜素对大鼠急性脑缺血损伤的干预作用及机制研究

目的 探讨芹菜素在大鼠急性局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤中的抗炎作用及意义.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和芹菜素组,后两组按再灌注时间分为0.5 h组和4 h组,每组8只.采用改良大脑中动脉线栓法建立急性局灶性大鼠脑I/R模型;分别用干湿法和甲酰胺浸泡法定量测定各组大鼠脑组织含水量及伊文思蓝(EB)含量,用酶联免疫吸附法(ELISA)和比色法测定脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量以及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)活性.结果 与假手术组比较,模型组大鼠脑组织含水量、EB含量及TNF-α、IL-1β含量、iNOS活性均显著升高,并与时间呈正相关(P<0.05或P<0.01).芹菜素组各时间点脑组织含水量、EB含量及TNF-α、IL-1β含量、iNOS活性均较模型组显著下降(P<0.05或P<0.01).结论 芹菜素对急性局灶性脑I/R损伤的保护作用可能与抑制TNF-α启动的炎症反应有关.     

大鼠局灶性脑缺血后星形胶质细胞的活化及桂哌齐特对神经功能的影响

目的:观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑星形胶质细胞的不同活化状态的动态变化及桂哌齐特对鼠神经功能的影响,探讨星形胶质细胞在脑缺血损伤中的作用机制。方法:健康成年雄性SD大鼠24只,单纯随机分为3组:假手术组(n=6)、模型组(n=8)和桂哌齐特组(n=8)。采用免疫组织化学法检测脑缺血再灌注后22h和70h梗死灶周边区星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)的表达及药物的影响,并进行神经功能评分。结果:大鼠再灌注后22h皮质及纹状体梗死周边区的星形胶质细胞大量增生,细胞突起缩短增粗,染色增强;桂哌齐特组GFAP表达为8484.46±787.45,与模型组9565.17±1105.52比较显著减少(P<0.05)。再灌注后70h相应脑区域内星形胶质细胞GFAP的表达较22h有所减弱,桂哌齐特组GFAP表达显著增强(P<0.05),神经功能评分均明显减少(P<0.05)。结论:脑缺血损伤后GFAP的活化反应在不同的时间具有双向作用,桂哌齐特显著改善神经功能,可能与其调节反应性星形胶质细胞的活性有关。     

Activation of an efferent cholinergic pathway produces strong protection against myocardial ischemia/reperfusion injury in rats

OBJECTIVE: A vagus nerve-mediated, brain cholinergic protective mechanism activated by melanocortin peptides is operative in conditions of circulatory shock; moreover, there is anatomical evidence of dual vagal-cardiac efferent pathways in rats, which could play different roles in controlling heart function. Therefore, we investigated the role and functional mechanism of such vagal efferent pathway(s) in an experimental model of ischemic heart disease. DESIGN: Randomized experimental study. SETTING: Research laboratory. SUBJECTS: Adult Wistar rats of either sex. INTERVENTIONS: After bilateral cervical vagotomy (with or without pretreatment with atropine), efferent vagal fibers were electrically stimulated in rats subjected to coronary artery occlusion (5 mins) followed by reperfusion (5 mins). Other rats (intact, vagotomized, or pretreated with atropine) were treated with nanomolar doses of melanocortin peptides. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: Electrical stimulation of efferent vagal fibers (5 V, 2 m secs, 1-9 Hz, for the whole period of ischemia/reperfusion) strongly reduced the high incidence of severe arrhythmias and lethality, reduced the increase in free radical blood levels and left-ventricle histologic alterations, and augmented the extracellular signal-regulated kinase activation. Treatment with the melanocortin peptides adrenocorticotropin and gamma2-melanocyte-stimulating hormone (162 nmol/kg intravenously or 16.2 nmol/kg intracerebroventricularly, during coronary occlusion) produced the same protective effects of electrical stimulation and with the same muscarinic acetylcholine receptor-dependent mechanism, seemingly through brain activation (mediated by melanocortin MC3 receptors, as previously described) of such efferent vagal pathway. CONCLUSIONS: The present results give evidence for the identification of a protective, melanocortin-activated, efferent vagal cholinergic pathway, operative in conditions of myocardial ischemia/reperfusion. These data suggest that melanocortins and pertinent compounds able to activate such a pathway could provide the potential for development of a new class of drugs for a novel approach to management of ischemic heart disease.