大黄鞣质对人肾小管上皮细胞毒性作用及量-毒关系研究

目的:考察大黄鞣质类物质对HK-2细胞的毒性作用及量毒关系,阐述大黄的毒效相关性的影响因素。方法:以大黄鞣质有效部位作用于正常HK-2细胞,通过细胞形态学观察,细胞增殖活性测定,细胞LDH漏出量测定,细胞周期分析及凋亡率测定考察其毒性及量-毒关系。结果:大黄鞣质部位在剂量12.5~200mg/L范围内对HK-2细胞的毒性作用轻微,对于细胞形态的影响只是轻微的使细胞形状变得狭长,抑制率在较高浓度200mg/L时仅达到20%;LDH的光密度值没有显著变化;在100mg/L时G0/G1期细胞有所减少,凋亡率有所增加。结论:大黄鞣质的肾细胞毒性作用较弱,100mg/L下的微弱毒性可能与影响细胞周期及凋亡相关。     

白花丹醌对人肝星状细胞的细胞毒性及其机制的研究

目的研究白花丹醌对人肝星状细胞株(HSC-LX2)的细胞毒性作用,并通过细胞周期及凋亡率的变化探讨该药抑制细胞增殖的机制。方法 HSC-LX2与药物孵育48h,以MTT法检测细胞毒性;以流式细胞术PI染色法检测各周期细胞DNA的含量及细胞晚期凋亡率。结果白花丹醌低、中、高浓度对HSC-LX2细胞均具有明显的细胞毒性并抑制其细胞增殖;G_0/G_1期细胞的比例发生升高而S期+G_2/M期细胞总数降低;且细胞的晚期凋亡率明显增高。以上作用具有剂量依赖性,有统计学差异(P0.05)。结论白花丹醌对HSC-LX2具有明显的细胞毒性而对肝纤维化进程有干预作用,原因为将细胞周期阻滞在G_0/G_1期而阻止细胞的分裂增殖,并能诱导细胞发生凋亡。上述能力均有剂量依赖性;且中、高剂量白花丹醌的干预能力强于秋水仙碱和复方鳖甲软肝片。     

朱砂七总蒽醌抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的:研究朱砂七总蒽醌(ZSQ)对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用,探讨其抗肿瘤作用及其机制。方法:应用MTT法检测朱砂七总蒽醌对HL-60细胞的生长抑制作用,Giemsa染色观察细胞形态学改变,DNA ladder和流式细胞术等方法检测朱砂七总蒽醌诱导肿瘤细胞凋亡及对细胞周期的作用。结果:32、3.2、0.32、0.032mg/ml朱砂七总蒽醌作用HL-60细胞72h后,细胞生长抑制率分别为28.69%,36.84%,63.76%和80.57%,抑制作用呈时间及浓度依赖性,朱砂七总蒽醌在48h的IC50约为3.2mg/ml。形态学观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征,伴有多核细胞形成。FCM分析发现朱砂七总蒽醌阻断HL-60细胞生长于细胞周期的G2/M期,诱导凋亡作用呈时间及浓度依赖性,能够诱发肿瘤细胞产生凋亡小体、DNA ladder和细胞凋亡峰。结论:朱砂七总蒽醌能抑制HL-60肿瘤细胞的增殖并诱导凋亡。     

健脾化瘀方对胃癌细胞SGC-7901凋亡和周期的影响

目的:观察健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:①采用MTT法观察不同浓度健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用;②用Annexin V/PI荧光双染法检测健脾化瘀方诱导肿瘤细胞进入凋亡的影响;③用流式细胞仪检测健脾化瘀方对SGC-7901细胞周期的阻滞效应。结果:①健脾化瘀方能抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,随着药物浓度的增大以及作用时间的延长,其对细胞的抑制率也明显增强,呈现剂量及时间依赖性。②当2mg/ml和4mg/ml健脾化瘀方作用于人胃癌SGC-7901细胞48h可显著诱导细胞凋亡的产生。③细胞周期方面,健脾化瘀方作用于人胃癌细胞SGC-7901后G2/M期比例与阴性对照组相较显著上升,G0/G1期稍有上升,而S期比例下降,表明细胞被阻滞于G2/M期。结论:健脾化瘀方可明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖作用并能够诱导该细胞凋亡,改变细胞周期。     

雷公藤红素对胆管细胞的毒性作用及机制研究

目的研究雷公藤红素对人肝内胆管上皮细胞(human biliary epithelial cells,HIBEC)的毒性作用及机制。方法通过CCK-8实验及显微镜观察记录雷公藤红素对细胞形态和活力的影响;通过细胞划痕实验检测雷公藤红素对细胞迁移能力的影响;通过流式细胞术检测雷公藤红素对细胞周期的影响和对细胞凋亡的诱导作用;通过qRT-PCR和Western blotting检测雷公藤红素对凋亡相关基因Caspase-3、Bax、Bcl-2基因和蛋白的表达情况。结果雷公藤红素在400～2 000 nmol/L下,抑制细胞增殖,改变细胞形态;在200～800 nmol/L下,抑制细胞的迁移能力;在800～1 200 nmol/L下,出现G_0/G_1期阻滞作用;在400～1 200 nmol/L下,诱导细胞凋亡并增加相关基因的表达量。结论雷公藤红素可通过影响胆管细胞活力,改变其迁移能力,阻滞细胞周期并促进细胞凋亡的方式产生胆管毒性。     

汉黄芩素对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖和周期的影响

目的:研究汉黄芩素对人肺腺癌SPC-A-1细胞增殖和周期的影响。方法:以不同浓度的汉黄芩素作用于SPC-A-1细胞,检测细胞抑制率、凋亡及细胞周期。结果:MTT法测得汉黄芩素的IC50为24.7 mg.L-1,能够明显抑制SPC-A-1细胞的集落形成能力。汉黄芩素作用于SPC-A-1细胞后,荧光倒置显微镜下观察到细胞凋亡的形态学改变。Annexin V-FITC/PI双标法证实汉黄芩素可以诱导SPC-A-1细胞凋亡,并具有剂量依赖性。流式细胞仪结果显示,不同浓度汉黄芩素使SPC-A-1细胞周期出现显著的变化,10,20 mg.L-1汉黄芩素可将周期阻滞在G0/G1期,30,40 mg.L-1汉黄芩素则使细胞周期堆积在S期,并且随着给药剂量的增加,凋亡峰显著升高。结论:汉黄芩素能明显抑制SPC-A-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,并对细胞G0/G1和S期具有阻滞效应,具有抗肿瘤作用。     

茜草蒽醌诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其分子机制的研究

目的:探讨茜草提取物蒽醌单体对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制作用,诱导凋亡作用及对凋亡相关基因bcl-2表达的影响,为肝癌的基因治疗提供有效靶点。方法:采用MTT法检测生长的抑制作用;以形态学,DNA凝胶电泳,流式细胞仪单染、双染检测细胞凋亡;以RT-PCR来分析蒽醌对bcl-2 mRNA的影响。结果:蒽醌能抑制肝癌细胞的生长;蒽醌处理肝癌细胞后,倒置显微镜和光镜下可见典型的凋亡细胞;DNA琼脂糖凝胶电泳显示出典型的细胞凋亡梯形带,PI单染表明细胞周期的G1期前有异常二倍体细胞的凋亡峰,并将细胞周期阻滞在G1期,Annexin V-FITC/PI定量检测进一步证实了蒽醌诱导肝癌细胞凋亡的作用;RT-PCR检测表明蒽醌可使bcl-2 mRNA表达水平下降。结论:蒽醌能显著抑制肝癌细胞的生长,并诱导肝癌细胞凋亡,其分子机制可能与下调bcl-2基因的表达有关。     

姜黄素对人喉癌Hep-2细胞放疗敏感性的实验研究

目的:探讨姜黄素对人喉癌Hep-2细胞的放疗敏感性影响。方法:不同浓度姜黄素作用人喉癌Hep-2细胞24h、48h、72h后,加入DMSO或SDS使用MTT法检测姜黄素毒性;克隆形成实验观察其对放射敏感性的影响。紫杉醇与20μmol/L姜黄素联合作用Hep-2细胞24h。流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率、细胞周期分布。结果:姜黄素对人喉癌Hep-2细胞有明显抑制作用,存在剂量和时间依赖;20μmol/L姜黄素可降低放射后Hep-2细胞的克隆形成率。联合用药诱导细胞凋亡作用增强。姜黄素及姜黄素联合辐射组的细胞周期阻滞在辐射敏感时相G2/M期。结论:姜黄素可提高人喉癌Hep-2细胞放射敏感性,可能与其引起瘤细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡有关。紫杉醇与姜黄素联合化疗有减毒增效作用。     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制研究

目的 研究氯化两面针碱(NC)在体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用与机制.方法 通过MTT法测定NC细胞毒作用,光镜及吖啶橙染色观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳法、流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期.结果 NC作用于细胞后,呈浓度依赖性抑制HepG2细胞的生长,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)为(3.52±0.23) μmol/L;吖啶橙荧光染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA lader NC各剂量组(0.75,1.5,3 μmol/L)对细胞周期的影响表现为G2/M期阻滞,作用肝癌HepG2细胞24 h后的凋亡指数分别为(17±1.23)％、(25.2±3.52)％、(35.9±3.19)％,明显高于生理盐水(NS)对照组(0.29±0.1 1)％.结论 NC对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,NC抗肿瘤作用的机理可能是:阻滞细胞于G2/M期,诱导肿瘤细胞凋亡.     

吴茱萸碱对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用

目的探讨吴茱萸碱对小鼠肝癌细胞H22的生长抑制、诱导凋亡和对细胞周期的影响.方法体外试验MTT法测存活率,甲基绿-派诺宁联合染色观察细胞凋亡形态,流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察DNA损伤及细胞周期.结果吴茱萸碱0.5、1、2、4mg/L浓度组对小鼠肝癌细胞H22作用72h细胞存活率分别为60.3±6.6%、54.0±4.3%、40.7±4.8%、26.9±0.9%,作用24h、48h和72h的IC50依次为4.2、3.3和1.4mg/L.甲基绿-派诺宁染色后0.5、1mg/L吴茱萸碱组癌细胞均表现出凋亡特征;2mg/L吴茱萸碱组部分癌细胞开始出现坏死特征;4mg/L有较多癌细胞坏死.48h流式细胞仪检测表明1、2mg/L吴茱萸碱组出现亚二倍体凋亡峰,细胞周期阻滞于G2期,4mg/L吴茱萸碱组亚二倍体凋亡峰不典型,出现坏死单峰.凋亡率对照组为1.2、1、2和4mg/L吴茱萸碱分别为6.4、9.1和11.2%.48h琼脂糖凝胶电泳表明,4mg/L吴茱萸碱组细胞DNA裂成大片段,DNA损伤呈凋亡特征.结论吴茱萸碱能诱导小鼠肝癌细胞H22的凋亡.