肝癥口服液含药血清抑制肝癌细胞SMMC-7721血管内皮生长因子表达的研究

目的:观察服用肝癌口服液的原发性肝癌病人和正常志愿者含药血清对肝癌细胞SMMC-7721 VEGF mRNA表达的影响.方法:采用血清药理学方法,以正常志愿者和肝癌患者用药前后血清培养人肝癌细胞SMMC-7721细胞,应用RT-PCR技术观察含药血清对肝癌细胞VEGFmRNA表达的影响.结果:正常人服用肝癌口服液前后血清对SMMC-7721细胞的VEGF mRNA表达无影响,VEGF/β-actin灰度值差异无显著性;SMMC-7721细胞在肝癌病人服药后血清中生长,VEGFmRNA的表达显著降低,统计学差异具有显著性.结论:肝癌病人肝癌口服液的含药血清可明显降低肝癌细胞VEGF mRNA的表达,而对健康人群无影响.     

消癌解毒方含药血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的 探讨消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 消癌解毒方含药血清作用人肝癌SMMC-7721细胞后,采用电镜技术观察细胞的形态改变,流式细胞仪Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况.结果 消癌解毒方能明显促进肝癌细胞的凋亡.电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变;凋亡作用以高剂量组效果最佳,凋亡率与顺铂组相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方通过诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长.     

消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

目的 观察消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT 法、流式细胞仪Annexin V-FITC法检测消癌解毒方含药血清对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 消癌解毒方具有良好的抑制肝癌细胞生长、促进凋亡的作用,尤其以高剂量组[抑制率为35.8％,凋亡率为(23.0±1.6)％]的效果最佳,作用程度与化疗药物顺铂[抑制率为35.3％,凋亡率为(22.8±4.4)％]相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方含药血清能抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,作用机制需要进一步的研究.     

没食子酸体外诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的机制研究

目的 研究没食子酸(gallic acid,GA)体外诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其作用机制。方法 体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖;Hoechst-33258、AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法研究凋亡抑制基因Survivin mRNA的变化。结果 6.25～50 μmol·L-1 GA可抑制SMMC-7721细胞的生长,并呈剂量依赖性;不同剂量的GA作用48 h后,SMMC-7721细胞出现明显的凋亡形态,细胞凋亡率有显著的剂量依赖性。RT-PCR法检测结果显示,GA能明显抑制肝癌细胞中Survivin mRNA的表达。结论 GA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,这可能与下调凋亡抑制基因Survivin有关。     

秦艽总苷对人肝癌细胞SMMC-7721体外作用的研究

目的 观察秦艽总苷对肝癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测秦艽总苷对人肝癌SMMC-7721细胞生长的影响,流式细胞仪分析细胞凋亡率,瑞-姬氏染色观察细胞形态变化.结果 秦艽总苷浓度为125,250,500,1 000 μg/ml时,SMMC-7721细胞的生长受到不同程度的抑制,且有时间和浓度依赖性;流式细胞术检测显示一定浓度的秦艽总苷可诱导SMMC-7721细胞凋亡;倒置显微镜下SMMC-7721细胞出现细胞凋亡的形态学改变.结论 一定浓度的秦艽总苷对人肝癌细胞SMMC-7721有抑制增殖和诱导凋亡的作用.     

熊果酸抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长及凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用.方法:将不同浓度的熊果酸分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,72 h后,采用中性红染色法测定吸光度(A),评定熊果酸对肝癌细胞株的增殖抑制作用;流式细胞术测定其对肝癌细胞凋亡及细胞周期的影响.结果:不同浓度熊果酸对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01),呈时间和剂量依赖关系;24,72 h的半数抑制浓度(IC50)为12.59,8.32 mg·L-1.流式细胞仪检测结果表明,熊果酸12.5 mg·L-1对肝癌SMMC-7721细胞凋亡率14.07％,凋亡率随药物浓度的增加而上升;SMMC-7721细胞阻滞S期,作用与药物剂量呈正相关.结论:熊果酸对肝癌细胞株SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抗肿瘤作用机制可能与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞于S期有关.     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及机制研究

目的:研究氯化两面针碱在体外诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用与机制。方法:通过MTT法测定氯化两面针碱细胞毒作用,通过酶解可见光底物DEVD-pNp法测Caspase-3的活性;免疫组化技术研究氯化两面针碱对SMMC-7721细胞中p53、bax和bcl-2三种细胞凋亡相关蛋白表达的影响,透射电镜观察细胞的超微结构。结果:氯化两面针碱作用SMMC-7721细胞48h后的IC50值为3.8μg/ml;药物处理后的细胞中p53、Bax蛋白水平表达显著增强,Bcl-2蛋白水平表达减弱,与对照组比较,差异有统计学意义,典型的凋亡形态学特征表现出细胞核裂解、染色质聚集、细胞膜皱缩、有空泡形成,出现凋亡小体。结论:氯化两面针碱对SMMC-7721细胞有明显抑制作用,其机理可能与恢复p53的功能,激活Caspase-3的活性,Bcl-2/Bax的表达进行性下调,诱导细胞凋亡有关。     

华蟾素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的:探讨华蟾素诱导人肝癌细胞凋亡及作用机理。方法:采用 MTT 法、AO/EB 荧光染色法、流式细胞仪及免疫组化等方法,观察华蟾素对人肝癌 SMMC-7721细胞株的作用。结果:华蟾素可显著抑制SMMC-7721细胞的生长;经药物处理后,AO/EB 染色时,肝癌细胞在显微镜下呈现出典型的凋亡形态学改变;在流式细胞仪上可见华蟾素能将细胞周期阻断在 S 期;对抗凋亡基因 bcl-2表达有一定的抑制作用。结论:华蟾素能抑制人肝癌 SMMC-7721细胞生长;能诱导人肝癌细胞凋亡;其诱导细胞凋亡的机理与其能阻断细胞周期、抑制 bcl-2基因表达有关。     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡及作用机制的研究

氯化两面针碱(Nitidine chloride)属于苯菲啶型生物碱,为黄治勋等[1]从芸香科花椒属植物两面针的干燥根提取的一种生物碱.     

牛樟芝提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:研究牛樟芝提取物(ANCA-E-D)抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,揭示其可能机制。方法:取对数生长期人肝癌细胞SMMC-7721,以6×104/m L接种于96孔板,每孔100μL,随机分为调零组、空白对照组、溶剂对照组以及20,40,60 mg·L-1ANCA-E-D药物组,每组设5个复孔,分别作用24,48,72 h,采用MTT比色法检测ANCA-E-D对SMMC-7721细胞增殖的影响;通过瑞氏染色观察以上浓度的ANCA-E-D对肝癌细胞SMMC-7721形态学的影响;通过流式细胞仪检测以上浓度的ANCA-E-D对SMMC-7721细胞周期和早期凋亡的影响。结果:MTT实验结果表明,20,40,60 mg·L-1的ANCA-E-D对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有显著的抑制作用(P0.05),呈时间和剂量依赖性,其半数致死率(IC50)分别为31.21,24.12,21.48 mg·L-1;形态学观测结果提示,ANCA-E-D药物组的细胞核碎裂、凋亡小体形成;流式细胞仪检测发现,不同浓度的ANCA-E-D作用后,SMMC-7721细胞凋亡以晚期凋亡为主,并呈剂量依赖性。结论:ANCA-E-D可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,可能与其诱导SMMC-7721细胞凋亡有关。     

陕重楼甾体皂苷类单体B(BM-61)对SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:观察陕重楼甾体皂苷单体B(BM-61)对人肝癌SMMC-7721细胞的影响。方法:将不同浓度BM-61与人体肝癌SMMC-7721细胞分别在24 h、48 h、72 h处理后,采用MTT法,测定吸光度OD值,并计算细胞增殖抑制率,检测陕重楼单体B对肿瘤细胞增殖的影响。结果:本品1.6 mg·L-1、8 mg·L-1、40 mg·L-1、200 mg·L-1、1 000 mg·L-1剂量组在24 h、48 h、72 h与对照组比较吸光度A值有显著性降低(P0.01或P0.05),本品0.3 mg·L-1剂量在24 h、48 h吸光度A值也有显著性降低(P0.05),其中8 mg·L-1在24 h、48 h、72 h吸光度最小,抑制率分别为19%、23%、17%。结论:陕重楼BM-61对人肝癌SMMC-7721细胞具有一定的抑制作用,且最强抑制浓度为8 mg·L-1。     

健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响

目的:观察健脾益气方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖与侵袭能力的影响。方法:以TGF-β1诱导人肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化(EMT)模型,制备健脾益气方大鼠含药血清,分别以0%、5%、10%、15%、20%、30%含药血清浓度干预人肝癌细胞SMMC-7721 12 h、24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖能力,采用Transwell细胞体外侵袭实验观察细胞的侵袭能力。结果:健脾益气方对SMMC-7721 EMT细胞的增殖有抑制作用,且随含药血清浓度增高而递增,呈时间依赖性;12 h 10%含药血清,24 h 15%、20%、30%含药血清,48 h 15%含药血清与相对应浓度空白血清比较,均具有显著性差异(P0.01),其中以48 h 15%含药血清浓度对细胞增殖的抑制效果最明显。健脾益气方含药血清各个浓度组与对照组相比,细胞侵袭能力均有不同程度的下降,其中10%、15%、20%、30%浓度的含药血清都具有显著性差异(P0.01);而与空白血清组相比,15%、20%、30%浓度的含药血清均具有显著性差异(P0.01),其中以15%浓度的含药血清对细胞侵袭的抑制作用最明显。结论:15%健脾益气方含药血清作用48 h,对人肝癌细胞SMMC-7721EMT模型增殖与侵袭的抑制效果最好。     

二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株凋亡的影响

目的:观察二母颗粒含药血清对肺腺癌A549及肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响。方法:采用形态学及MTT法观察二母颗粒组(10g/kg)5%、10%、20%含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖的抑制作用;通过流式细胞法观察药物对细胞凋亡的影响。结果:形态学观察表明二母颗粒含药血清使A549及SMMC-7721细胞株发生形态改变;MTT结果显示二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株增殖有抑制作用,且随含药血清浓度的增高以及作用时间的延长,抑制作用亦有所加强。其中20%含药血清作用于A549及SMMC-7721细胞株48h,10%含药血清作用于A549 48h,其OD值与对照组比较均有统计学差异;流式细胞技术检测结果表明20%含药血清作用于A549细胞株24h及48h,10%含药血清作用于A549 48h,与同时间段阴性对照组比较凋亡率明显升高;20%、10%含药血清作用于SMMC-7721细胞株24h及48h,对肿瘤细胞的凋亡率也有明显升高的作用。结论:二母颗粒含药血清对A549及SMMC-7721细胞株的增殖有抑制作用,其作用机制与其诱导细胞凋亡有密切的关系。     

复方斑蝥胶囊血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞蛋白质组差异表达分析

目的：考察复方斑蝥胶囊血清对SMMC-7721细胞蛋白质组的影响,从分子水平探讨复方斑蝥胶囊的抗癌作用机制。方法：用血清药理学方法制备复方斑蝥胶囊血清并处理人肝癌SMMC-7721细胞,用双向电泳、图像分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定复方斑蝥胶囊对癌细胞中有影响的蛋白质。结果：双向电泳分离到SMMC-7721细胞蛋白质组约450个点,其中47个点在对照组和实验组之间有2倍以上量变,质谱鉴定发现实验组出现膜联蛋白A5、热休克70×10³蛋白表达显著上调,真核翻译起始因子5A和硫氧还蛋白过氧化酶2表达显著下调。结论：研究发现了4种与肿瘤的增殖、免疫、凋亡相关的差异表达蛋白质,为进一步研究复方斑蝥胶囊的作用机制提供了线索。血清药理学与蛋白质组学相结合能够有效地展示与药物作用相关的蛋白质,可以作为研究复方药理的一个初步技术平台。     

自噬对槲皮素诱导人肝癌SMMC-7721细胞死亡的影响

 目的 研究自噬在槲皮素（quercetin,Que）诱导的人肝癌细胞系SMMC-7721死亡中的作用。方法 采用四甲基偶氮唑蓝法测定槲皮素对SMMC-7721细胞的抑制作用;单丹磺酰戊二胺、免疫荧光法观察给药后自噬的发生; 乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率、蛋白印迹法观察槲皮素诱导的SMMC-7721细胞死亡的分子机制。结果 槲皮素对SMMC-7721生长有显著抑制作用,呈明显的时间、剂量依赖性; 槲皮素可激活SMMC-7721 细胞的LC3的表达、诱导自噬的发生;乳酸脱氢酶漏出率实验结果表明,在槲皮素给药前用3-甲基腺嘌呤（3-MA）阻断自噬或者氯喹碱化溶酶体,可增强槲皮素对SMMC-7721细胞的细胞毒作用; 蛋白印迹结果显示,槲皮素可使SMMC-7721细胞溶酶体组织蛋白酶B的表达明显增强。结论 槲皮素能明显抑制SMMC-7721 细胞的生长,并诱导其发生自噬;自噬激活能降低槲皮素对SMMC-7721细胞的毒性;自噬的发生与溶酶体酶组织蛋白酶B表达增强相关。     

大叶蛇葡萄提取物对SMMC-7721细胞增殖抑制作用的研究

目的:研究大叶蛇葡萄叶及嫩茎提取物对SMMC-7721细胞增殖的影响,筛选其有效抗肿瘤活性物质。方法:采用MTT法检测不同质量浓度的大叶蛇葡萄石油醚萃取物部位、乙酸乙酯萃取物部位及水溶性物部位,以及该植物中含有的蛇葡萄素、杨梅素、杨梅苷、大黄素及槲皮素分别作用24、48、72 h后对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用。结果:乙酸乙酯萃取物部位和大黄素均能不同程度地抑制SMMC-7721细胞增殖,乙酸乙酯萃取物部位对细胞的抑制作用在100μg·mL~(-1)时具有一定的时效关系,大黄素对细胞的抑制作用在40、80、160μmol·L~(-1)时也具有一定的时效关系,乙酸乙酯萃取物部位和大黄素作用SMMC-7721细胞72 h的IC_(50)分别为110.81μg·mL~(-1)和53.20μmol·L~(-1)。结论:大叶蛇葡萄提取物具有较好的体外抗肿瘤活性。     

复方斑蝥注射液对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用

目的:探讨复方斑蝥注射液(Compound Cantharis Injection,CCI)对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用.方法:分别用用MTT法和细胞生长曲线研究CCI对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用.结果:与阴性对照组比较,CCI在2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml、16mg/ml剂量时对肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制率分别为11.63%、20.54%、38.11%、62.44% (P<0.05);平均半数抑制浓度(IC50)为11.29mg/ml.生长曲线结果显示:CCI对肝癌细胞的抑制作用且呈明显的量效和时效关系.结论:CCI能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,具有一定的剂量依赖性.     

六神丸含药血清制备的方法学研究

[目的]研究六神丸含药血清的制备,探讨六神丸血清药理学的实验方法。[方法]分不同的给药剂量、给药天数和不同的采血时间制备含药血清。用原子吸收法测定血砷含量;薄层色谱法定性检测六神丸含药血清中蟾酥成分。用四氮唑溴盐(MTT)法确定最佳血清制备方案。[结果]血砷含量随着给药剂量、给药天数增加和采血时间的延长而升高;薄层色谱表明六神丸含药血清中有蟾酥成分。六神丸含药血清对人髓系白血病细胞株-60(HL-60)细胞的抑制率,随给药剂量、天数增加、采血时间的延长而升高,且随着含药血清的添加量而升高。[结论]中药血清药理学含药血清的制备应区分不同的中药,采用相应的方案。     

去甲斑蝥素对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡相关因子半胱天冬酶3、bax和细胞色素C表达的影响

目的:了解去甲斑蝥素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响,通过分子生物学手段探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制。方法:以1、5、25、125mg/L去甲斑蝥素作为药物组,不加药物的细胞作为对照组。通过MTT比色法检测去甲斑蝥素对SMMC-7721细胞生长的抑制率;采用Annexin V-FITC/PI双染色法测定肿瘤细胞的凋亡率;通过免疫印迹法测定caspase-3、bax和细胞色素C的表达水平。结果:相同浓度的去甲斑蝥素作用时间越长,细胞生长抑制率越高;作用相同时间的去甲斑蝥素浓度越高,细胞生长抑制率越高。药物组细胞均有不同程度的早期凋亡和晚期凋亡。随着去甲斑蝥素浓度的提高,总凋亡率相应升高;药物组的总凋亡率均高于对照组(t=10.758、16.931、33.955、22.358,P均0.05)。随着去甲斑蝥素的浓度提高,caspase-3、bax和细胞色素C的表达量均升高;浓度为25、125mg/L的去甲斑蝥素处理细胞后,caspase-3、bax和细胞色素C的蛋白表达量均高于对照组(t=4.246、2.521、5.842、6.654、7.137、4.825,P均0.05)。结论:去甲斑蝥素通过诱导细胞凋亡抑制SMMC-7721细胞生长,其作用机制在于上调凋亡相关因子caspase-3、bax和细胞色素C的表达。