部分去背根猫备用背根节和脊髓Ⅱ板层BDNF及其mRNA表达的变化

采用免疫组织化学和原位杂交技术探讨了部分去背根猫术后 3 d和 10 d的备用背根节和脊髓 II板层内 BDNF及其m RNA的表达变化。结果表明 ,正常组 ,BDNF主要分布于背根节的部分中、小神经元及脊髓背角浅层神经元内 ,II板层内还有大量的 BDNF阳性神经膨体。背根节同时也为 BDNF m RNA阳性 ,唯背角阴性。部分去背根后 10 d组 ,备用背根节 BDNF及其 m RNA阳性中、小神经元百分数较正常及 3 d者明显增加 (P<0 .0 5 )。而 L3,L5II板层 BDNF阳性神经膨体密度在术后两组均明显下降 (P<0 .0 5 ) ,唯 BDNF的含量在 3 d组者减少 (P<0 .0 5 ) ,10 d组者恢复 (P>0 .0 5 )。术后 II板层未见 BDNF m RNA的杂交信号。结果提示 :去背根术后 3 d组脊髓 II板层阳性膨体数的下降及 BDNF含量减少 ,可能是因背根切断导致输入脊髓 II板层的 BDNF中断所致 ;而 10 d时 II板层 BDNF合成得以恢复 ,可能来源于备用背根节中、小神经元的 BDNF增多所致 ,BDNF在脊髓可塑性中可能发挥作用     

部分去背根猫备用背根节和脊髓Ⅱ板层NT-3及其mRNA的表达变化

采用免疫组化和原位杂交技术探讨了部分去背根猫备用背根节 (L6 )和 L3、L5脊髓 II板层 NT-3及其 m RNA的表达变化。结果发现 ,正常组 NT-3及其 m RNA阳性产物主要分布于背根节的大型神经元和少数中、小型神经元。部分去背根后 ,3 d和10 d两时相 NT-3 m RNA大型神经元阳性数明显减少 ,而 NT-3阳性大型神经元数术后 10 d时方明显减少 (P<0 .0 1) ;NT-3及其 m RNA阳性小型细胞数在术后两时相均较正常组者增多 (P<0 .0 1) ;而在中型神经元只有 NT-3阳性神经元数有增加。相对地 ,在脊髓 板层 ,两时相 NT-3阳性神经元及胶质细胞百分数均较正常者明显增加 (P<0 .0 1) ,且以 3 d组者为最明显 ,但均未见 NT-3 m RNA阳性信号。结果表明 ,部分去背根不仅导致背根节各类神经元中 NT-3的表达发生了变化 ,且对 板层 NT-3阳性神经元及胶质细胞数量也有明显影响。提示 NT-3可能在脊髓 板层可塑性中发挥作用     

针刺对去部分背根猫脊髓和背根节NGF及NGF mRNA的影响

用免疫组织化学和地高辛标记 c RNA探针原位分子杂交技术 ,观察了针刺对成年备用背根猫 (切断一侧 L1～ 5 、L7～ S2节段脊髓背根 ,保留 L6 背根 )脊髓 板层、背核和背根节内神经生长因子和神经生长因子 m RNA的影响。结果证明 ,针刺促进了备用根背根节的神经生长因子基因的表达 ,使备用背根节内神经生长因子、神经生长因子 m RNA阳性神经元数量明显增多 ,并且针刺时间越长促进作用也越强 ;而对脊髓 板层与背核则无明显影响。本实验结果提示 ,针刺对备用根猫脊髓侧支生芽具有促进作用 ,这种作用主要体现在通过增加背根节神经生长因子基因的表达和神经生长因子的合成来实现的     

脑源性神经营养因子在部分去传入猫脊髓背角的表达

为探讨脑源性神经营养因子在部分去传入猫脊髓背角的表达状况 ,对成年雄性家猫切除 L1 ～ L5 ,L7～ S2 背根节、保留L6 节及背根 ,术后分别存活 3、6、12 d,对 L6 节段脊髓进行脑源性神经营养因子免疫组织化学反应。结果表明 :正常时 ,阳性反应物主要分布在脊髓 I、II板层的神经终末、膨体与少量神经元胞体内。术后 3 d,术侧 II板层阳性神经终末和膨体密度开始减少 ,6d减少至高峰 ,到第 12 d时两者又均恢复到正常水平 ,而阳性神经元胞体的数量却无明显变化。作者认为 3 d、6d的减少主要与邻近背根节切除后 ,其神经纤维和膨体溃变有关 ;12 d时 ,保留的 L6 背根逐渐侧支出芽 ,且与靶细胞再建功能联系 ,故脑源性神经营养因子阳性神经纤维和膨体数均趋于恢复。说明脑源性神经营养因子既参与脊髓的正常生理功能 ,也与其损伤后的可塑性有关。     

NGF,BDNF,NT-3和GDNF在背根节不同神经元的配布的免疫组织化学证据

为了探讨神经生长因子、脑源性神经生长因子 ,神经营养素 -3,胶原细胞源性神经生长因子在成年猫背根节神经元不同大小细胞的分布。取 L6背根节制成 2 0μm厚冰冻切片 ,用上述四种因子抗血清进行免疫组化反应。计数每一种因子阳性大、中、小型 (小于 42μm者为小型神经元 ;42～ 5 7μm者为中型神经元 ;大于 5 7μm者为大型神经元 )神经元的百分数。结果证明 ,此四种因子在背根节大、中、小神经元的阳性百分数分别为 :1.2± 0 .7,2 .1± 0 .9,3.3± 1.1;1.7± 0 .4,11.2± 1.2 ,30 .0± 1.5 ;2 6 .7± 2 .2 ,6 .2± 1.2 ,13.2± 2 .9;2 7.4± 3.3,8.1± 1.7,2 0 .1± 2 .4。表明 :在成年猫 L6背根节仅存在少数神经生长因子阳性细胞 ,而脑源性神经生长因子则主要配布于中、小神经元 ,神经营养素 -3和胶质细胞源性生长因子的免疫阳性细胞主要是大神经元 ,但也包括一些中小神经元。提示此四种因子在成年猫背根节的生理功能可能与神经元的不同大小有关。     

NGF及NGF mRNA在去部分背根猫脊髓和背根节表达的变化

用成年猫单侧备用根模型 (切断一侧 L1～ 5 、L7～ S2 节段脊髓背根 ,保留 L6 背根 ) ,用免疫组织化学和原位杂交技术 ,对脊髓背角 板层、背核和 L6 背根节中神经生长因子的表达进行了动态观察。结果证明 ,部分背根去传入后 :(1)脊髓各节段双侧背角 板层的神经生长因子和神经生长因子 m RNA阳性神经元的数量及体积显著增高、增大 ;(2 )手术侧背核神经生长因子和神经生长因子 m RNA阳性神经元的增高强于非手术侧 ,但术后两时间组的手术侧之间无差异 ;(3 )备用根背根节新出现了神经生长因子 m RNA阳性神经元 ,且神经生长因子阳性神经元数量明显高于正常组 ,且随术后时间增加而递增。以上结果表明 :部分背根去传入猫脊髓背角 板层及背核内神经生长因子水平提高 ,尤其备用根背根节神经元神经生长因子的增加 ,为备用背根传入纤维侧支生芽和突触重建提供了良好的条件 ,有助于解释脊髓初级传入纤维损伤溃变后代偿性机能恢复的机制     

针刺对备用背根节神经元表皮生长因子表达的影响

成年哺乳动物的脊髓具有可塑性,且针刺可促进脊髓可塑性,但其机制尚不清楚。有实验表明针刺可促进NGF、NT-3在部分去背根动物背根节的表达,表明了针刺可能通过改变背根节部分神经营养因子的表达进而在脊髓可塑性中发挥作用。表皮生长因子(EGF)与神经     

针刺对备用背根节神经元CNTF和PDGF表达的影响

目的探讨部分去背根后针刺对备用背根节神经元睫状神经营养因子(CNTF)及血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响。方法制备猫双侧备用背根模型(切除双侧L1～L5、L7～S2背根节,保留L6背根节为备用背根节)。针刺位于右侧备用根支配区的两组穴位。针刺7d及14d后取备用背根节用CNTF抗血清(1∶500)及PDGF抗血清(1∶200)行免疫组织化学ABC法染色。分别记数各组阳性总、大及中小神经元的数量。结果正常组左右L6背根节的细胞数无差异,CNTF、PDGF阳性神经元数在7d、14d时与正常组比较无差异。针刺侧CNTF阳性总、大及中小神经元数在针刺7d时均显著多于非针刺侧(P<0.05),而针刺14d时,只有阳性大神经元数多于非针刺侧(P<0.05)。PDGF阳性总及大神经元数针刺7d时多于非针刺侧(P<0.05),针刺14d时,阳性总及中小神经元多于非针刺侧(P<0.05)。结论针刺可促进去背根后备用背根节CNTF、PDGF的表达,这种促进作用显效的时间因不同因子和不同种类的背根节神经元而异。     

针刺对备用DRG的NGF及其mRNA阳性大、中、小神经元数量的影响

本研究观察了 NGF及其 m RNA阳性神经元在 DRG大、中、小神经元中的数量变化 ,目的在于探讨 DRG各类神经元NGF变化与针刺促进脊髓可塑性的关系。对 5只成年猫进行双侧备用根手术。术后当日开始针刺一侧 L6 脊神经后肢分布区的两组穴位即足三里和悬中、伏兔和三阴交 ,每天一次 ,每次 3 0 min,连续针刺 7d后处死动物。取针刺侧与非针刺侧 L6 的 DRG制成 2 0μm厚冰冻纵切片。分别用 NGF抗血清和 NGF的 c RNA探针进行免疫组织化学反应及原位杂交染色。计数两侧 DRG相同面积内大 (>5 7μm)、中 (4 2～ 5 7μm)、小 (<42 μm)型 NGF及其 m RNA阳性神经元的数量。结果显示 :针刺侧备用 DRG NGF及其 m RNA阳性大、小型神经元的数量明显增加 (P<0 .0 5 ) ,而对中型神经元数量影响不明显。结论 :针刺促进脊髓可塑性可能与备用 DRG大、小神经元表达 NGF增多有关。     

GDNFR-α在成年大鼠脊髓和背根节的分布的免疫组织化学研究

为了探讨胶质细胞源性神经营养因子对脊髓运动神经元和感觉神经元的作用 ,本实验采用抗胶质细胞源性神经营养因子受体 -α多克隆抗体免疫组织化学方法 ,观察了胶质细胞源性神经营养因子受体 -α在成年大鼠腰段脊髓和背根节的分布。结果发现 :胶质细胞源性神经营养因子受体 -α免疫反应出现于成年大鼠腰段脊髓神经元和背根节神经元中。提示 :胶质细胞源性神经营养因子受体 -α可能对脊髓运动神经元、背根节神经元具有一定的调节作用     

Roles of BDNF in spinal neuroplasticity in cats subjected to partial dorsal ganglionectomy

This study investigated the role of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) in neuroplasticity in cats subjected to the removal of dorsal root ganglia (DRG). Following partial ganglionectomy, the number of BDNF-positive varicosities from spared L6 DRG decreased significantly. This reduction was observed at 3 days post operation (dpo) in spinal lamina II of L3 and L5. Whereas the percentages of positive neurons for BDNF and its mRNA in spared L6 DRG at 10 dpo were significantly increased, and accumulated BDNF was seen on the DRG side of the ligated axons. Importantly, BDNF antibody neutralization in vivo results in a significant reduction in the number of varicosities in spinal lamina II, evidenced by BDNF and calcitonin gene-related peptide immunohistochemical staining. These findings suggested that peripheral-derived BDNF could play a critical role in spinal neuroplasticity in cats subjected to partial ganglionectomy. This may underlie the basis of molecular therapy depending on gene drug-like BDNF release.     

Roles of BDNF in spinal neuroplasticity in cats subjected to partial dorsal ganglionectomy

This study investigated the role of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) in neuroplasticity in cats subjected to the removal of dorsal root ganglia (DRG). Following partial ganglionectomy, the number of BDNF-positive varicosities from spared L6 DRG decreased significantly. This reduction was observed at 3 days post operation (dpo) in spinal lamina II of L3 and L5. Whereas the percentages of positive neurons for BDNF and its mRNA in spared L6 DRG at 10?dpo were significantly increased, and accumulated BDNF was seen on the DRG side of the ligated axons. Importantly, BDNF antibody neutralization in vivo results in a significant reduction in the number of varicosities in spinal lamina II, evidenced by BDNF and calcitonin gene-related peptide immunohistochemical staining. These findings suggested that peripheral-derived BDNF could play a critical role in spinal neuroplasticity in cats subjected to partial ganglionectomy. This may underlie the basis of molecular therapy depending on gene drug-like BDNF release.     

Electro-acupuncture induced NGF,BDNF and NT-3 expression in spared L6 dorsal root ganglion in cats subjected to removal of adjacent ganglia

This study evaluated the effect of electro-acupuncture (EA) on the NGF, BDNF and NT-3 expression in spared L6 dorsal root ganglion (DRG) in cats subjected to bilateral removal of L1-L5 and L7-S2 DRG, using immunostaining, in situ hybridization and RT-PCR. The positive products of NGF, NT-3 protein and mRNA in the small and large neurons of spared L6 DRG in EA side increased greatly more than that of control side, while the increased BDNF was only noted in small and medium-sized neurons. RT-PCR demonstrated that the mRNA level for three factors was not influenced by EA in intact DRG, when a significant increase was seen in the spared L6 DRG of EA side. As it has been well known that DRG neurons project to the spinal cord wherein morphological plasticity has been present after DRG removal, the present results might have some bearing to the observed phenomenon.     

Electro-acupuncture induced NGF, BDNF and NT-3 expression in spared L6 dorsal root ganglion in cats subjected to removal of adjacent ganglia

This study evaluated the effect of electro-acupuncture (EA) on the NGF, BDNF and NT-3 expression in spared L6 dorsal root ganglion (DRG) in cats subjected to bilateral removal of L1-L5 and L7-S2 DRG, using immunostaining, in situ hybridization and RT-PCR. The positive products of NGF, NT-3 protein and mRNA in the small and large neurons of spared L6 DRG in EA side increased greatly more than that of control side, while the increased BDNF was only noted in small and medium-sized neurons. RT-PCR demonstrated that the mRNA level for three factors was not influenced by EA in intact DRG, when a significant increase was seen in the spared L6 DRG of EA side. As it has been well known that DRG neurons project to the spinal cord wherein morphological plasticity has been present after DRG removal, the present results might have some bearing to the observed phenomenon.