原发性肝癌发生与ras基因突变的关系

目的 探讨H-ras、K-ras、N-ras基因突变与原发性肝癌发生发展的关系.方法 采用HotStarTaq聚合酶链反应(PCR)检测32例原发性肝癌组织中H-ras、K-ras、N-ras基因的表达并采用PCR直接测序分析H-ras、K-ras、N-ras基因突变x2检验检测H-ras突变与临床病理的关系.结果 在32例原发性肝癌组织中均可检测到H-ras、K-ras、N-ras基因的表达,32例原发性肝癌标本PCR结果经测序后,17例标本发现H-ras基因发生突变(17/32,53.1％),14例40密码子中A突变成G,3例62密码子中G突变成A.K-ras、N-ras基因未发生突变,H-ras突变与肿瘤转移有关.结论 H-ras基因异常表达与肝癌相关,可能导致了原发性肝癌的发生.     

直肠癌患者中K-ras基因12位点突变及p21蛋白表达的研究

目的 检测K-ras基因12位点突变和p21蛋白表达在直肠癌中的作用,并探讨K-ras基因12位点突变、p21蛋白表达与临床、病理参数之间的关系.方法 收集52例直肠癌手术标本,应用常规方法提取直肠癌组织和相应癌周正常组织的DNA、聚合酶链反应(PCR)扩增、单链构象多态性(SSCP)电泳,检测K-ras基因12位点的突变情况,用免疫组织化学方法检测p21蛋白的表达.结果 直肠癌发生K-ras基因12位点突变为44.2%,相应癌周正常组织中未检出K-ras基因12位点突变,差异有统计学意义(P＜0.01).p21蛋白表达率为63.46%,明显高于相应癌周正常组织的表达率,差异有统计学意义(P＜0.01).K-ras基因突变与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤浸润深度、组织学类型、淋巴结转移、远处转移无关.p21蛋白高表达与淋巴结转移密切相关(P＜0.01),与远处转移有关(P＜0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤浸润深度、组织学类型无关(P＞0.05).结论 K-ras基因12位点的突变是直肠癌发生的重要事件,可作为一种诊断标志物.p21蛋白表达与直肠癌发生密切相关,可作为一种免疫标志物,并可用于判断直肠癌的预后.     

针对K-ras基因点突变的反义寡核苷酸对人胰腺癌Patu 8988细胞的抑制作用

目的 检测人胰腺癌Patu8988细胞K-ras基因点突变形式，并观察针对该点突变的硫代反义寡核苷酸在体内外对Patu8988细胞增殖和凋亡的影响。方法顺序特异引物聚合酶链反应（PCR-SSP）法和基因测序检测Patu8988细胞K-ras点突变形式，根据点突变形式设计并合成硫代反义寡核苷酸（K-ras mutation ASODN）作用Patu 8988，通过噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长情况；流式细胞术（FCM）检测K-ras蛋白表达和细胞凋亡；逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测K-ras mRNA表达水平；以Patu8988细胞建立裸鼠胰腺癌模型观察K-ras mutation ASODN在体内的抗肿瘤效果。结果 PCR-SSP法和基因测序检测表明Patu 8988细胞存在K-ras基因第12密码子点突变，其突变方式为GGT→GTT.体外实验表明K-rasmutation ASODN组较正义寡核苷酸（SODN）组、随机寡核苷酸（RODN）组和空白对照组可明显抑制Patu8988细胞生长（P〈0．01），并呈时间．剂量效应关系；转染48h后，K—ras mutation ASODN组的K-ras蛋白和mRNA表达程度较SODN组、RODN组和对照组均明显降低（P〈0．01），而细胞凋亡明显增多（P〈0．05）。体内实验表明K-ras mutation ASODN较SODN组、RODN组和对照组能有效抑制BALB／C裸鼠人胰腺癌的生长（P〈0．01）。结论 针对K-ras基因第12密码子点突变的反义寡核苷酸可明显抑制人胰腺癌Patu 8988细胞生长，促进细胞凋亡，其机制可能是通过下调K-ras蛋白和K—ras mRNA表达而起作用。     

反义K-ras基因对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨反义K-ras癌基因对胰腺癌细胞增殖和凋亡及Fas/FasL、Bcl-2、Bax表达的影响.方法 将重组逆转录病毒载体pLXSN转染包装细胞PT-67,获得重组逆转录病毒.在细胞和动物水平将该重组逆转录病毒分别感染PC-3和BxPC-3胰腺癌细胞,经G418筛选获得稳定细胞系,应用MTT、流式细胞仪和免疫组化法分别研究其增殖、凋亡及其相关基因表达情况.结果 成功制备含反义K-ras基因的重组逆转录病毒.感染含反义K-ras基因重组病毒后,胰腺癌PC-3细胞和移植瘤(有K-ras基因第12密码子点突变GGT→GTT)增殖受到抑制,G<,0/1>期细胞增加而S期细胞明显减少,细胞凋亡增加.免疫组化显示含反义K-ras癌基因逆转录病毒感染后PC-3细胞Bax/Bcl-2比值升高,Fas表达上调.结论 反义K-ras基因可使胰腺癌细胞及移植瘤增殖受到抑制,并可通过上调Bax/Bcl一2比值和(或)促进Fas表达诱导细胞凋亡.     

结肠癌K-ras突变与对西妥昔单抗耐药的实验研究

目的：研究结肠癌K-ras基因突变导致对西妥昔单抗耐药的可能机制。方法：通过基因测序及免疫细胞化学染色,筛选表皮生长因子受体（EGFR）表达阳性,同时K-ras基因呈突变型及野生型的结肠癌细胞各1株,应用细胞增殖实验（CCK8方法）、流式细胞技术（Annexin V标记）,检测西妥昔单抗（C225）在体外对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响。同时用K-ras呈野生型和突变型的结肠癌细胞株,分别建立裸鼠皮下移植瘤模型,分成HT29-C225、HT29-NS、SW620-C225及SW620-NS组,给予西妥昔单抗（每3天注射1次,每次0.5mL,共4周）。治疗后,绘制肿瘤生长曲线,用TDT介导的缺口末端标记技术（TUNEL）检测细胞凋亡,用定量PCR、免疫组织化学染色（IHC）及蛋白印迹（Western-blot）等技术检测移植瘤标本中EGFR信号转导通路中AKT及其磷酸化蛋白的表达。结果：体外增殖及凋亡实验显示,西妥昔单抗对不同K-ras基因型的结肠癌细胞均未能显示细胞毒作用。而体内研究发现,西妥昔单抗能明显抑制K-ras野生型结肠癌裸鼠皮下移植瘤的生长,但对K-ras突变型者抑制作用较差。对K-ras突变型结肠癌裸鼠皮下移植瘤的定量PCR检测结果显示,西妥昔单抗治疗组裸鼠的AKT基因表达率高于对照组。IHC及Western-blot显示,西妥昔单抗治疗组与对照组间AKT蛋白的表达率无明显差异,但西妥昔单抗治疗组裸鼠的p-AKT表达率高于对照组。结论：K-ras突变状态与西妥昔单抗的疗效相关,K-ras突变型者EGFR信号通路中的衔接蛋白AKT呈自主激活状态,该基因突变可能是导致对西妥昔单抗耐药的机制之一。     

针对于K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌细胞株PC-2作用的研究

目的探讨针对于胰腺癌K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌细胞株PC-2的作用。方法用脂质体将针对于K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸转染体外培养的人胰腺癌细胞株PC-2（反义组）,转染正义寡脱氧核苷酸（正义组）和生理盐水（对照组）,免疫组化和原位杂交检测靶基因表达,人工计数、噻唑蓝（MTT）和集落形成实验检测细胞增殖情况。结果转染48h后,反义组ras蛋白和K-ras基因mRNA的表达强度较正义组和对照组均明显降低（P〈0．05）。人工计数、MTT检测和集落实验均证实反义组细胞增殖受到明显抑制（P〈0．05）。结论针对于K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸转染体外培养的胰腺癌细胞,对靶基因表达和细胞增殖有明显的抑制作用。     

胆管癌K-ras基因12密码子点突变的检测

目的 研究K-ras基因在人胆管癌中的突变。方法 采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)检测了43例胆管癌17例胆管良性病变K-ras基因12密码子点突变情况。结果 胆管癌K-ras基因12密码子点突变率为81．4％(35／43)。1例胆总管囊肿中检测到突变。结论 K-ras基因12密码子点突变在胆管癌发生中起重要作用，其检测有可能用于临床进行胆管癌的基因诊断。     

K-ras基因突变与结直肠癌临床病理因素的关系

目的 建立K-ras基因简单、快捷、经济的检测方法,并将检测结果与临床病理因素进行相关性分析.方法 采用PCR-直接测序法和聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性测序法(PCR-RFLP)同时检测40例结直肠癌肿瘤组织标本K-ras基因第12、13密码子突变情况;另113例患者仅用PCR-RFLP-测序法检测K-ras基因第12、13密码子突变情况.将K-ras基因突变检测结果与临床病理因素进行相关性分析.结果 40例结直肠癌患者的肿瘤组织经常规PCR扩增后直接测序无一例发现K-ras基因第12、13密码子的突变;而这40例标本经PCR-RFLP-测序法检测发现:8例含有K-ras基因第12密码子突变,3例含有K-ras基因第13密码子突变,总突变检出率为27.5%(11/40).153例结直肠癌肿瘤组织标本经PCR-RFLP-测序法检测共发现突变58例,突变率为37.9%(58/153),其中第12密码子突变46例,第13密码子突变12例.G→A是K-ras基因突变最常见的突变形式(25/58,43.1%).K-ras基因第12和13密码子突变与患者性别、肿瘤浸润深度、分化程度、与淋巴结转移、远处转移及分期无明显相关性(P＞0.05),与年龄、肿瘤发生部位密切相关(P＜0.05),年龄越大突变概率越低,突变最常发生的肿瘤部位为升结肠.结论 PCR-RFLP-测序法能够快捷、灵敏地检测出肿瘤组织中K-ras基因的突变,适合作为K-ras基因突变常规检测方法.K-ras基因第12和13密码子突变是结直肠癌中一个常见的分子事件,与患者年龄、肿瘤发生部位有相关性.     

转化生长因子β激活酶1在结肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨转化生长因子β激活酶1(TAK1)在结肠癌组中的表达与临床意义。方法:收集141例结肠癌患者手术标本,用免疫组织化学方法检测TAK1蛋白在结肠癌及癌旁正常组织中的表达,并分析其表达与患者临床病理因素及预后的关系,同时检测结肠癌组织中K-ras基因突变情况,分析TAK1表达与K-ras基因突变的关系。结果:TAK1在结肠癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(68.8%vs.16.3%,P0.05);TAK1的阳性表达与Dukes分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移有关(P0.05);TAK1阳性表达患者的5年生存率明显低于低表达的患者(P0.05);TAK1阳性表达的结肠癌组织K-ras基因的突变率明显高于TAK1阴性表达的结肠癌组织(52.6%vs.13.6%,P0.05)。结论:TAK1可能参与了结肠癌的恶性进展,且TAK1的表达可能与K-ras基因突变密切相关。     

胰液中K-ras基因突变和p16基因甲基化改变联合检测在胰腺癌诊断中的初步研究

目的 探讨胰液中K-ras基因突变和p16基因启动子区5′CpG岛甲基化联合检测在胰腺癌诊断中的价值.方法 采用ERCP下放置鼻胰管收集胰液,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)法检测胰液中K-ras基因12密码子点突变,PCR-MSP法检测胰液中p16基因甲基化状态.结果 所有胰液标本均成功抽提出DNA,30例胰腺疾病病人胰液标本同时进行了K-ras基因突变和p16基因启动子区5′CpG岛甲基化检测,其中20例胰腺癌病人胰液中K-ras基因突变率为70%(14/20),p16基因甲基化率为35%(7/20),8例慢性胰腺炎中K-ras基因突变率为25%(2/8),2例胰腺囊腺瘤病人中K-ras基因突变率为50%(1/2),慢性胰腺炎和胰腺囊腺瘤病人胰液中无p16基因甲基化.单纯胰液中K-ras基因突变检测诊断胰腺癌的敏感性为70%(14/20),特异性为70%(7/10),阳性预测值为82.4%(14/17),阴性预测值为53.8%(7/13),诊断准确性70%(21/30).胰液中p16基因甲基化与K-ras基因联合诊断胰腺癌的敏感性为70%(14/20),特异性为100%(10/10),阳性预测值为100%(14/14),阴性预测值为62.5%(10/16),诊断准确性80.0%(24/30).结论 鼻胰管收集的胰液可用于分子生物学检测,联合检测胰液中K-ras基因突变和p16基因启动子区5′CpG岛甲基化更有助于胰腺癌的诊断.     

维吾尔族和汉族直肠癌患者K-ras基因第12、13位密码子突变情况的研究

目的探讨新疆地区维吾尔族和汉族直肠癌患者K-ras基因外显子2中第12、13位密码子的突变情况,为新疆地区直肠癌患者的临床及基因诊断提供理论参考。方法收集2010年1月至2011年12月期间在新疆维吾尔自治区人民医院手术切除的临床资料完整的直肠腺癌石蜡包埋组织144例,同时选取距癌缘近端10 cm以远的正常直肠石蜡包埋组织144例作为对照组。提取癌组织DNA,经聚合酶链反应扩增K-ras基因,采用DNA直接测序法检测K-ras基因的突变情况。结果 144例直肠癌患者中有32例(22.22%)K-ras基因第12、13位密码子发生突变,汉族与维吾尔族突变率分别为20.41%(20/98)和26.09%(12/46),二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组中均未见K-ras基因第12、13位密码子的突变。K-ras基因突变仅与肿瘤浸润深度有关(T1+T2为25.0%,T3+T4为75.0%,P=0.01),与民族、性别、肿瘤部位、分化程度及淋巴结转移均无关(P>0.05)。结论在维吾尔族与汉族直肠癌患者中K-ras基因第12、13位密码子突变均很常见,但在突变频率上维吾尔族与汉族直肠癌患者间无差异,K-ras基因突变与直肠癌的侵犯深度有关。     

寡核苷酸芯片技术在胰腺癌诊断中的应用

目的 探讨基因突变寡核苷酸芯片技术检测K-ras基因与p53基因突变在胰腺癌诊断中的价值。方法应用芯片技术检测25例胰腺癌和5例慢性胰腺炎患者外周血浆游离DNA和组织标本中K-ras基因与p53基因突变。结果胰腺癌病人外周血血浆游离DNA中K-ras基因突变率为52.0％,p53基因突变率为20.0％;联合检测阳性率为60.0％,肿瘤组织标本中K-ras基因突变率为76.0％,p53基因突变率为32.0％,联合检测阳性率为92.0％。结论寡核苷酸芯片技术能够为胰腺癌的相关基因分析提供可靠的数据,检测K-ras基因突变有助于胰腺癌早期诊断,联合检测p53基因突变可提高诊断的敏感性和特异性。     

良、恶性胸腹水K-ras和p53基因序列分析

我们通过对癌性胸、腹水K-ras基因外显子1、2及p53基因外显子7、8测序分析，评价胸、腹水K-ras和p53基因突变联合检测的临床意义。     

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多药耐药基因mdrl产物P-糖蛋白(P-gp)在正常胃、大肠组织及其肿瘤中表达水平均较高，表现为原发性耐药。通过肿瘤细胞个体的遗传背景预测肿瘤化疗敏感性是恶性肿瘤个体化治疗的基础。本文研究P-gp表达与K-ras基因表达的关系，为从基因水平逆转胃肠癌多药耐药提供理论依据。     

基因枪转导突变特异性K-ras siRNA对胰腺癌细胞生长的抑制作用

目的探讨基因枪转导突变特异性K-ras siRNA对胰腺癌细胞生长的抑制作用。方法根据胰腺癌细胞系突变特征，设计突变特异性K-ras siRNA；应用基因枪将siRNA转导入胰腺癌细胞系，提取总RNA和胞浆蛋白；应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹法（Western blot）方法。检测基因枪转导突变特异性K，ras siRNA对突变型K-ras基因表达的干扰作用；行细胞爬片K-ras p21蛋白免疫组织化学染色，探讨siRNA对K-ras p21蛋白表达的抑制作用；采用CCK-8（cell countingkit，8）活细胞计数法，绘制转基因前后细胞生长曲线，观察siRNA的抑瘤效果。结果RT-PCR结果显示，K-ras突变特异性siRNA，能有效抑制K-ras基因表达（P〈0．05）；Western blot和免疫组织化学结果表明，K-ras p21蛋白的表达明显降低（P〈0．05）；细胞生长曲线显示，转导siRNA组较对照组细胞生长明显受抑制（P〈0.05）。结论基因枪可以有效地对小片段双链siRNA进行细胞内转导；突变特异性K-ras siRNA，可显著下调胰腺癌细胞系突变型K-ras mRNA及K-ras p21蛋白表达，并能有效抑制肿瘤细胞的增殖。     

结直肠癌中P53和Kras基因突变与血管内皮生长因子表达的关系

目的探讨结直肠癌中P53和K-ras基因突变与血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法采用RT-PCR技术和聚合酶链式反应-单链构像多态性分析(PCR-SSCP)方法,对46例结直肠癌的新鲜癌组织进行P53、K-ras基因突变率和VEGF表达率的检测。结果46例结直肠癌中VEGF表达阳性率为52.2%(24/46),P53基因突变率为63.0%(29/46),K-ras基因突变率为43.4%(20/46)。P53基因突变的29例中VEGF表达阳性20例,占68.9%,表达阴性9例,占31.0%,P<0.05。K-ras基因突变的20例中VEGF表达阳性14例,占70.0%,表达阴性6例,占30%,P<0.05。结论结直肠癌组织中P53基因突变和K-ras基因突变与VEGF表达呈正相关,此点为临床基因治疗肿瘤提供了重要理论依据。     

K-ras突变多肽致敏树突状细胞对CCL19、CCL22和fascin-1表达的影响

目的探讨K-ras突变多肽致敏树突状细胞(DC)对细胞趋化因子CCL19、CCL22和细胞骨架蛋白fascin-1表达的影响。方法联合应用重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素(IL)-4诱导培养外周血DC,收集培养7d后的DC并分为未负载组(加入RPMI1640培养液50μg/ml)和K-ras负载组(加入K-ras突变多肽50μg/ml).流式细胞仪测定负载前、后DC表面标志CD1a、CD80及CD86;扫描电镜和透射电镜观察负载K-ras突变多肽后的DC形态结构;ELISA法检测2组DC培养上清液中IL-12、CCL19和CCL22的表达;Westernblot法测定2组DC骨架蛋白fascin-1的表达。结果①K-ras突变多肽负载DC后,CD1a、CD80及CD86表面分子表达率明显高于负载前(P0.01).②扫描电镜下见负载后的DC呈花瓣状、树枝样突起;透射电镜下见负载后的DC形态非常不规则,树枝状或毛刺状的突起明显增多。③K-ras负载组负载后不同时相(6、12、24及48h)的IL-12、CCL19及CCL22的表达水平明显高于未负载组(P0.01).④K-ras负载组fascin-1蛋白的表达水平也高于未负载组(P0.01).结论K-ras突变多肽能够促进DC成熟,并使细胞趋化因子和骨架蛋白表达水平增加,能够增强DC游走迁移。     

非小细胞肺癌胸腔积液细胞蜡块检测EGFR与K-rasras基因突变和EML4-ALK融合基因及其临床病理特征

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)、K-ras基因突变和EML4-KLA融合基因与非小细胞肺癌(NSCLC)患者的临床病理特征的关系。方法收集2012年1月至2014年6月淄博市中心医院住院肺癌患者268例的胸腔积液标本,患者年龄53.6(31~76)岁,其中男165例、女103例。采用免疫组织化学对患者胸腔积液进行分析,确诊为NSCLC 76例,其中腺癌39例,鳞癌37例。检测76例NSCLC的细胞蜡块及肺肿瘤穿刺标本中EGFR、K-ras基因突变及EML4-ALK融合基因。结果 EGFR突变率为34.21%(26/76),K-ras基因的突变率为6.58%(5/76),EML4-ALK融合基因阳性率为7.89%(6/76)。EGFR基因突变、K-ras基因突变或EML4-ALK融合基因多见于不吸烟的、年轻的、女性、腺癌(P0.05)。未发现EGFR基因突变、K-ras基因突变或EML4-ALK融合基因存在于同一病例,可能与病例数少有关,有待更多研究进一步探讨。结论采用NSCLC胸腔积液细胞学标本进行EGFR、K-ras和EML4-ALK基因检测,方法可行,尤其适用于无法获取组织学标本的NSCLC患者。     

结直肠癌肝转移与门静脉血K-ras基因突变的关系

目的 检测结直肠癌患者门静脉血液、原发癌组织及肝转移灶中K-ras基因突变,探讨K-ras突变与结直肠癌肝转移的关系.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术和基因测序技术检测48例结直肠癌患者门静脉血液、原发肿瘤组织、相应的癌旁肠黏膜以及8例肝转移灶组织中K-ras基因突变.结果 48例结直肠癌组织中17例(35.4%)发现K-ras基因突变,48例癌旁黏膜中4例(8.3%)发现K-ras基因突变,明显低于癌组织的基因突变率(P＜0.05).48例结直肠癌患者中16例(33.3%)门静脉血中发现K-ras基因突变,与癌组织的基因突变率差异无统计学意义(P＞0.05).有肝转移患者门静脉血中K-ras基因突变率(7/10,70.0%)明显高于无肝转移者(9/38,23.7%,P＜0.05).16例门静脉血存在K-ras基因突变者,其相应的肿瘤组织中均发现K-ras突变.而结直肠癌组织中无K-ras基因突变者,患者门静脉血及癌旁黏膜无基因突变.8例同时性肝转移患者中5例门静脉血发现K-ras基因突变,且其相应的肝转移灶组织也发现相同的K-ras突变.2例异时性肝转移患者门静脉血检测到K-ras基因突变,手术时无肝转移,但分别于术后第6个月和第9个月经CT检查证实有肝转移.原发肿瘤组织K-ras基因突变类型与门静脉血、肝脏转移灶的K-ras基因突变一致,即K-ras基因12密码子GGT突变为GAT或GTT.结论 结直肠原发癌组织和患者门静脉血有K-ras基因的突变,预示着肿瘤可能有肝脏转移.

Abstract：

Objective To detect mutations of K-ras oncogene in portal vein blood of patients with colorectal cancer, and to find out the relationship between mutated K-ras oncogene and liver metastases in colorectal cancer. Methods Forty-eight patients with colorectal cancer were screened for the mutations of K-ras oncogene in tissue samples from their tumors, portal vein blood, proximally adjacent mucosa and 8metastatic liver biopsies by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (PCR) and DNA sequencing. The results were analyzed with their clinical data. Results Sixteen of the 48 patients with colorectal cancer had K-ras point mutations at codon 12 in their portal vein blood, and 17 of 48 patients had K-ras mutations in their primary tumors, but only 4 of 48 patients had K-ras mutations in proximally adjacent mucosa. There was no significant difference in rate of K-ras mutation between tumor tissues and portal vein blood (P ＞ 0. 05 ), but significant difference was found between the tumor tissue and the proximally adjacent mucosa ( P ＜0. 05 ). The rate of K-ras mutations in portal vein blood of colorectal cancer with liver metastases (70. 0% ) was higher than that of without liver metastases (23.7%). Sixteen cases of mutated K-ras in portal vein blood showed mutations in tumor tissues. Patients without mutated K-ras in tumor tissue had no mutations in their portal vein blood and proximally adjacent mucosa. In 5 of 8 patients with simultaneous liver metastasis, mutated K-ras oncogenes were detected in portal vein blood, and the type of K-ras mutation detected in the tumor tissue was accord with that in metastatic liver biopsies. Two patients with mutated K-ras detected in their portal vein blood had no liver metastases during perioperation, but liver metastases were diagnosed by CT at the postoperative month 6 and 9 respectively. The main types of K-ras mutations at codon 12 included GGT to GAT and GGT to GTT. No one had point mutation at codon 13. Conclusion Mutated K-ras detected in both cancer tissue and portal vein blood may indicate livermetastases from colorectal cancer.     

PCR-MASA检测胰腺癌十二指肠液及腹水中K-ras基因点突变的研究

目的:了解胰腺癌病人十二指肠液和腹水中K-ras基因点突变检测的临床价值。方法:采用PCR-MASA(突变特异性等位基因扩增法)分别检测胰腺癌十二指肠液和腹水中K-ras基因点突变。结果:胰腺癌十二指肠液及腹水标本中K-ras基因突变率分别为17.4%(4/23)和31.6%(6/19),而所有同时被检的急、慢性胰腺炎、胰岛素瘤、壶腹癌、胆管癌、十二指肠乳头癌、胃癌及肝癌病人的十二指肠液及腹水标本中均无K-ras基因突变发现。结论:①PCR-MASA方法简捷、特异、敏感,扩增产物只需常规电泳、染色即可观察到结果,无需酶切、杂交、放射性和非放射性显影等法。②对十二指肠液及腹水标本检测K-ras基因第12位密码子有无突变,有助于判断胰腺良、恶性病变及胰腺癌的诊断。其实用价值还有待进一步验证。