IL—1ra对FnLPS诱导人牙髓细胞合成IL—1β的拮抗作用

目的：观察人重组白细胞介素１受体拮抗剂（ＩＬ－１ｒａ）对内毒素脂多糖（ＬＰＳ）刺激的人牙髓细胞分泌ＩＬ－１β的拮抗作用。方法：用ＥＬＩＳＡ夹心法检测ＩＬ－１β含量。结果：人牙髓细胞经ＬＰＳ刺激后,ＩＬ－１β含量明显增加。当加入高浓度的ＩＬ－１ｒａ后,ＩＬ－１β含量与对照组相比有显著降低,在ＩＰＳ刺激牙髓细胞６０分钟以前加入一定浓度的ＩＬ－１ｒａ,牙髓细胞培养上清液中ＩＬ－１β的含量显著降低,但在９     

白细胞介素1受体拮抗剂在人牙髓组织中的表达

目的：了解正常人牙髓组织及炎性牙髓组织中白细胞介素１受体拮抗剂（ＩＬ－１ｒａ）的表达,探讨它在牙髓组织正常防御和内毒素性牙髓炎中的作用机制。方法：用ＡＢＣ免疫组织化学法检测ＩＬ－１ｒａ在牙髓组织中的表达。结果：在正常牙髓组织中仅有少量血管内皮细胞、巨噬细胞表达ＩＬ－１ｒａ,在炎症牙髓组织中ＩＬ－１ｒａ染色呈阳性,主要表达细胞为中性粒细胞、浆细胞、淋巴细胞和血管内皮细胞。结论：内源性ＩＬ－１ｒａ在牙髓炎症的发生发展中可能起着重要作用。     

重组人白细胞介素1β对人牙髓细胞蛋白质组的影响

目的 创建牙髓损伤模型,比较牙髓细胞在不同条件下蛋白质表达的异同;探讨重组人白细胞介素1β(recombinant human IL-1β,rhIL-1β)对体外培养的人牙髓细胞(human dental pulpcells,HDPC)蛋白质的影响及牙髓损伤机制.方法 在HDPC的培养液中加入rhIL-1β 12 h,用双向凝胶电泳分离HDPC全蛋白,获得对照组(未加rhIL-1β)及诱导组(加入rhIL-1β诱导)HDPC蛋白质图谱,Image Master2D Elit 5.0软件分析确认差异表达蛋白.结果 诱导组牙髓细胞中有39个蛋白质点差异明显,其中15个蛋白质点高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达.结论 rhIL-1β诱导HDPC后有多种蛋白质分子发生变化,双向凝胶电泳能够显示HDPC的全蛋白,而且能够发现差异表达蛋白质,这些差异表达蛋白质可能参与了牙髓细胞损伤的过程.     

IL-lra对IL-1β诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL-6的拮抗作用

目的:研究白细胞介素-1受体拮抗剂对IL-1β所介导生物学功能的影响,为进一步临床应用提供理论依据.方法:采用细胞培养技术和ELISA夹心法.结果:经IL-1β单独作用,牙龈成纤维细胞培养上清液中IL-6含量明显增高,当一定浓度的IL-lra与1ug/L IL-1β共同作用人牙龈成纤维细胞后,培养上清液中IL-6的含量比单独IL-1β作用组低.结论:IL-lra能够抑制IL-l诱导的人牙龈成纤维细胞分泌IL-6.     

IL—1ra对人牙周膜成纤维细胞骨钙素分泌的调节作用

目的：观察白细胞介素1受体拮抗剂（IL－1ra）与IL－1β对人牙周膜成纤维细胞（HPLF）骨钙素分泌的影响。方法：采用骨钙素放射免疫测定法。结果：经IL－1β单独作用的HPLF的骨钙素浓度与对照组相比有显著性差异,一定浓度的IL－1ra与IL－1β共同作用HPLF后,骨钙素浓度比单独IL－1β作用组的低,结论：IL－1ra能竞争性地抑制IL-1β的生物学活性,为进一步临床应用提供理论依据。     

IL—1ra对IL—1β诱导人牙龈成纤维细胞分泌IL—6的拮抗作用

目的：研究白细胞介素－1受体拮抗剂对IL－1β所介导生物学功能的影响，为进一步临床应用提供理论依据。方法：采用细胞培养技术和ELISA夹心法。结果：经IL－1β单独作用，牙龈成纤维细胞培养上清液中IL－6含量明显增高，当一定浓度的IL－1ra与1μg/L IL-1β共同作用人牙龈成纤维细胞后，培养上清液中IL－6的含量比单独IL－1β作用组低。结论：IL－1ra能够抑制IL－1诱导的人牙龈成纤维细胞分泌IL－6。     

脂多糖诱导高迁移率族蛋白B1在人牙髓细胞中转位的研究

目的:观察低浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)中高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1,HMGB1)在细胞中的转位及其hDPCs细胞活性的影响.方法:采用原代组织块培养法,培养人牙髓细胞,...     

内毒素对重组人成骨蛋白-1诱导人牙髓细胞活性的影响

目的：研究具核梭杆菌的内毒素（ＬＰＳ）对重组人成骨蛋白－１（ｒｈＯＰ－１）诱导牙髓细胞增殖、分化的影响。方法：采用噻唑盐比色测定（ＭＴＴ）、酶动力学方法和放射免疫技术。结果：在较低浓度ＬＰＳ作用时,可协同增加ｒｈＯＰ－１对牙髓细胞增殖和碱性磷酸酶（ＡＬＰａｓｅ）活性,但对骨钙素（ＢＧＰ）无明显影响,而高浓度ＬＰＳ则起抑制作用。结论：提示适度的ＬＰＳ在牙髓对龋病的防御反应过程中起着一定调节作用。     

双向电泳分析重组人白细胞介素-1β对人牙髓细胞的影响

目的：观察rhIL-1β对培养的HDPCs产生蛋白质的影响,揭示rhIL-1β与牙髓炎的关系。方法：在HD-PCs的培养液中加入rhIL-1β,用2-DE分离HDPCs全蛋白,获得对照组和诱导组HDPCs蛋白质图谱,ImageMaster2DElit 5.0软件分析确认差异表达蛋白。结果：比较对照组和诱导组蛋白质图谱,发现了39个蛋白质点差异明显。其中15个蛋白质点在诱导组高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达。结论：HDPCs对rhIL-1β的应答反应是一个非常复杂的过程,多种蛋白质分子涉及其中。     

IL—1ra调节人牙周膜成纤维细胞ALP活性的实验研究

目的：观察人重组ＩＬ－１β对人牙周膜成纤维细胞（ＨｕｍａｎＰｅｒｉｏｄｏｎｔａｌＬｉｇａｍｅｎｔａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＨＰＬＦ）的碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）活性的影响以及ＩＬ－１ｒａ（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１ｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｔａｇｏ－ｎｉｓｔ，ＩＬ－１ｒａ）对ＩＬ－１β这一生物活性的阻断作用。方法：用碱性磷酸酶测定法。结果：经ＩＬ－１β作用后，ＨＰＬＦ的ＡＬＰ活性降低，经一定浓度的ＩＬ－１ｒａ作用后，ＩＬ－１β的这一作用相对减弱，ＡＬＰ活性增高。结论：ＩＬ－１ｒａ能够有效地阻断ＩＬ－１β对降低ＨＰＬＦ的ＡＬＰ活性的作用，进而有利于促进组织修复     

重组真核表达载体pEGFP-N1/hIL-1ra的构建及其在NIH3T3细胞中的稳定表达

目的构建重组人白细胞介素1受体拮抗剂（rhIL-1ra）基因真核表达载体pEGFP-N1/hIL-1ra,稳定转染小鼠成纤维细胞（NIH3T3）并检测其表达,为使用细胞因子拮抗剂基因治疗牙周炎奠定实验基础。方法Trizol法提取人乳腺癌组织总RNA,RT-PCR方法扩增目的基因。胶回收、纯化后产物与克隆载体pMD18-T连接、转化,测序鉴定正确后将重组克隆载体与真核表达质粒pEGFP-N1分别用HindⅢ和BamHⅠ双酶切,体外连接。重组DNA转化感受态细菌E.coliTOP10,筛选阳性克隆并鉴定。将构建正确的pEGFP-N1/hIL-1ra重组质粒DNA由脂质体介导转染NIH3T3细胞,G418加压筛选20d,RT-PCR检测基因的表达,ELISA检测蛋白的表达。结果重组质粒pEGFP-N1/hIL-1ra经PCR及双酶切鉴定均证实人IL-1ra基因已与pEGFP-N1正确重组。稳定转染NIH3T3细胞后,RT-PCR得到目的基因片段,ELISA检测到目的蛋白的表达。结论本实验成功构建了编码人IL-1ra基因的重组质粒pEGFP-N1/hIL-1ra,并获得了稳定表达目的蛋白人IL-1ra的NIH3T3细胞系,为牙周炎基因治疗的后续研究奠定了实验基础。     

五倍子水提取物对内毒素诱导人牙髓细胞分泌IL-6的影响

目的:观察不同浓度五倍子水提取物对内毒素诱导人牙髓细胞分泌IL-6的影响.方法:采用组织块法体外培养人牙髓细胞,以含不同浓度五倍子水提取物(1.25、2.5、5.10、20 μg/mL)、25μg/mL内毒素和20mL/L新生牛血清的DMEM培养基作用于第5代人牙髓细胞,用放射免疫法测定IL-6含量,采用单因素方差分析(完全随机设计)和t检验对实验数据进行统计学分析.结果:低浓度(1.25、2.5、5、10、20μg/mL)五倍子水提取物能明显抑制25μg/mL内毒素诱导人牙髓细胞分泌IL-6,这种抑制作用在一定范围内呈浓度依赖性.结论:低浓度五倍子水提取物具有抑制内毒素诱导人牙髓细胞分泌IL一6的作用.     

IL-1家族与牙周炎研究的新进展

IL-1家族包括IL-1α,IL-1β和IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)。本文综述了IL-1家族各成员与牙周炎发生、发展关系的研究进展。并描述了IL-1ra的临床前期动物模型研究成果。指出了IL-1ra成为一种治疗牙周炎的非激素类抗炎新药有关的问题。     

rhBMP2和rhTGF-β1联合应用对人牙髓细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的:探讨rhBMP2和rhTGF-β1联合应用对人牙髓细胞ALPase活性的影响.方法:采用酶动力学的方法,比较不同浓度rhBMP2和rhTGF-β1单独或联合应用对人牙髓细胞的ALPase活性的影响.结果 :rhBMP2对人牙髓细胞的ALPase活性呈浓度依赖性增强,rhTGF-β1对人牙髓细胞ALPase活性的影响与其本身浓度有关 .当rhTGF-β1浓度为1μg/L与rhBMP2联合应用时, ALPa se活性比rhBMP2单独应用明显增高.结论:rhBMP2、rhTGF-β1单独及联合应用于人牙髓细胞时,对人牙髓细胞的ALPase活性作用不同,其对人牙髓细胞的生理功能可能有调节作用.     

重组人白细胞介素-1β诱导人牙髓细胞蛋白质组的差异分析

目的分析重组人白细胞介素-1β（rhIL-1β）诱导前后牙髓细胞蛋白质的差异,鉴定2组间差异表达的蛋白质。方法采用双向凝胶电泳技术分离牙髓细胞全蛋白,获得对照组和诱导组牙髓细胞蛋白质图谱,Image Master2D Elit 5.0软件分析确认差异表达蛋白。通过基质辅助的激光解吸飞行时间质谱对差异表达的蛋白质点进行质谱鉴定,得到肽质量指纹图谱。结果比较对照组和诱导组蛋白质图谱,发现了39个蛋白质点差异明显。其中15个蛋白质点在诱导组高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达;质谱鉴定后,10个蛋白得到确认。结论牙髓细胞对rhIL-1β的应答反应是一个非常复杂的过程,多种蛋白质分子涉及其中。鉴定了牙髓细胞中与rhIL-1β作用密切相关的2个差异蛋白,为探索早期牙髓炎的应答机制提供了新的线索和思路。     

白细胞介素-1β诱导牙髓细胞的金属蛋白酶-1和COX2的表达

目的 :探讨白细胞介素 1β对人牙髓细胞金属蛋白酶 1(matrixmetalloproteinase 1,MMP 1)、环氧合酶 2 (cyclooxygenase 2 ,COX2 )基因表达变化的生物学意义。方法 :培养人牙髓细胞 ,传代至第 4代 ,PT PCR检测人牙髓细胞是否表达IL 1β受体 ,进而用 1nmol/L人的重组IL 1β刺激人牙髓细胞 18h ,提取细胞总RNA ,反转录为cDNA ,半定量PCR检测IL 1β对人牙髓细胞的金属蛋白酶 1、COX2的mRNA的表达变化。结果 :人牙髓细胞表达IL 1β受体 ,而且用 1nmol/L人的重组IL 1β明显地刺激牙髓细胞的金属蛋白酶 1、COX2的mRNA表达。结论 :牙髓炎时牙髓组织内的IL 1β生成增多 ,会进一步引发金属蛋白酶 1、COX2基因异常表达相应增多 ,而金属蛋白酶 1导致炎症基质降解、COX2将引发炎性痛的病理改变。     

IL-1β对体外培养人牙髓成纤维细胞中基质金属蛋白酶-2的影响

目的:探讨白细胞介素-1β(interleukin-β,IL-1β)对体外培养的人牙髓成纤维细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metallproteinase-I,MMP-2)的影响。方法:利用免疫组化和明胶酶谱法,检测正常和经IL-1β刺激后的牙髓成纤维细胞中MMP-2的表达、分泌和活性。结果:MMP-2在正常和经IL-1β刺激后的牙髓成纤维细胞中均有表达,后者表达明显强于前者。明胶酶谱分析显示,与对照组相比,经IL-1β刺激的牙髓成纤维细胞中MMP-2的水平在48 h后持续显著升高。结论:IL-1β可能参与调节牙髓成纤维细胞合成和分泌MMP-2,从而促进牙髓炎症的发生。     

人白细胞介素-1受体拮抗剂基因转染人颞颌关节软骨细胞的基因表达

目的 研究人白细胞介素-1受体拮抗剂（hIL-1ra）基因转染人颞颌关节软骨细胞的基因表达情况。方法hIL-1ra基因以阳离子脂质体介导转染体外培养的人颞颌关节软骨细胞,描记细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间,并采用酶联免疫吸附法检测瞬时转染和稳定转染细胞中hIL-1ra蛋白的表达。结果 转染细胞与正常细胞的增殖率有一定差异,转染细胞胞浆内和培养基上清液中均有hIL-1ra蛋白的表达。在细胞转染结束后48 h,细胞内hIL-1ra蛋白的表达量最高,稳定转染细胞中基因表达最长时间达72 d以上。结论 经阳离子脂质体介导hIL-1ra基因转染人颞颌关节软骨细胞后,目的基因在细胞内有一定数量的表达。     

内皮素促人牙髓细胞生长作用的体外研究

目的探讨不同浓度内皮素－１（ＥＴ－１）对人牙髓细胞的促增殖作用。方法采用人牙髓细胞体外培养技术和四唑盐（ＭＴＴ）显色分光光度法。结果不同浓度ＥＴ－１均有程度不同的促人牙髓细胞生长作用,并呈浓度依赖性。结论ＥＴ－１为促人牙髓细胞生长因子,可能对牙髓组织的再生修复起作用。     

双向电泳分析重组人白细胞介素-1β对人牙髓细胞的影响

在HD-PCs的培养液中加入rhIL-1β,用2-DE分离HD-PCs全蛋白,获得对照组和诱导组HDPCs蛋白质图谱,ImageMaster2D Elit5.0软件分析确认差异表达蛋白。结果:比较对照组和诱导组蛋白质图谱,发现了39个蛋白质点差异明显。其中15个蛋白质点在诱导组高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达。结论:HDPCs对rhIL-1β的应答反应是一个非常复杂的过程,多种蛋白质分子涉及其中。