致敏豚鼠咳嗽反应与气道炎症的关系

目的:研究致敏豚鼠不同强度的嗜酸细胞气道炎症对咳嗽反应的作用。方法:卵蛋白致敏豚鼠34只,分成致敏对照组(7只)、低浓度卵蛋白组(7只)、中浓度卵蛋白组(8只)和高浓度卵蛋白组(12只),分别雾化吸入生理盐水、0.04%、0.2%和1%卵蛋白溶液激发。24h后,比较各组豚鼠吸入辣椒素溶液诱导的咳嗽反应,气道对乙酰甲胆碱的反应性(PC₁₅₀)和支气管肺泡灌洗液的细胞数量及成分。结果:致敏对照组和低浓度卵蛋白组无豚鼠死亡,而中浓度卵蛋白组和高浓度卵蛋白组激发后分别有1只和5只豚鼠因严重喘息发作死亡。随激发的卵蛋白浓度增高,吸入辣椒素溶液诱发的咳嗽频率从致敏对照组豚鼠的(6±2)次/3min增加到在高浓度卵蛋白组的(22±4)次/3min(P<0.05);低浓度卵蛋白组的PC150无明显改变,中浓度和高浓度卵蛋白组明显降低,伴有支气管肺泡灌洗液中的细胞数量和嗜酸细胞比例增加。豚鼠的咳嗽反应与支气管肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸细胞比例存在显著的正相关(分别为r=0.84和0.78,P<0.01),与PC150存在显著的负相关(r=-0.78,P<0.01)。PC150与支气管肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸细胞比例存在显著的负相关(分别为r=-0.80和-0.85,P<0.01)。     

气道速激肽在卵蛋白致敏豚鼠模型咳嗽反应中的作用

目的：研究气道速激肽在卵蛋白致敏和激发豚鼠咳嗽发生机制中的作用。 方法： 正常和卵蛋白致敏豚鼠各20只，卵蛋白雾化吸入激发。24 h后，正常组和致敏组豚鼠随机各分为2组，每组10只，分别依次腹腔注射生理盐水，0.1 mg/kg、0.3 mg/kg和1.0 mg/kg的NK1受体拮抗剂SR140333 或NK2受体拮抗剂SR48968，观察吸入10-4 mol/L的辣椒素溶液诱导的咳嗽反应。用非侵入性方法测量正常和卵蛋白致敏豚鼠注射SR140333或SR48968前后吸入辣椒素溶液所产生的特异性气道阻力。 结果： 致敏豚鼠咳嗽反应明显高于正常对照组［(9.3±1.2)times/3 min vs (19.5±5.7)times/3 min，P<0.05］。SR140333不影响正常对照组豚鼠的咳嗽反应，而SR48968则可降低咳嗽频率达30% (P<0.05)，两者均抑制吸入辣椒素后增加的气道阻力。而在卵蛋白致敏豚鼠，SR140333或SR48968均抑制吸入辣椒素溶液诱导的咳嗽频率［(9.9±4.7)times/3 min，(8.0±1.6)times/3 min，P<0.05］和增高的气道阻力。 结论： NK受体拮抗剂抑制致敏豚鼠卵蛋白激发后增高的咳嗽反应。因此，气道速激肽可能是嗜酸性粒细胞性气道炎症所致咳嗽的重要介质。     

磷酸二酯酶4抑制剂药效团模型的构建

目的 构建磷酸二酯酶4（PDE4）抑制剂药效团模型，为中草药的相关虚拟筛选研究提供新的方法。 方法 以22个具有PDE4抑制活性的化合物作为训练集化合物，其半数抑制浓度（IC50）范围在0．042～23000nmol·L^-1。利用Catalyst／HypoGen系统，对训练集化合物进行构象分析，通过对训练集化合物多个构象进行叠合，提取药效团特征及三维空间限制构建药效团模型。结合数据库搜索命中率筛选最优药效团。结果 最优药效团模型包含2个氢键受体、1个脂性疏水基团和1个芳香环特征，排除体积数为6个。模型相关系数、Totalcost值、Fixedcost值、Nullcost值、△cost值和Configuration cost值分别为0．9047、117．7、90．84、180.4、62．7和15．71。利用所得较优模型对MDL药物数据报道数据库进行搜索，该模型的命中已知活性化合物数与命中已知活性化合物总数比值为58．95％。 结论 利用Catalyst系统构建的PDE4抑制剂药效团具有较好的预测能力，可作为提问结构用于数据库的搜索，有助于中草药中具有抑制PDE4活性的化合物的虚拟筛选研究。     

糖皮质激素对哮喘豚鼠模型Eotaxin、CCR3表达的调控

目的:观察哮喘豚鼠外周血、肺和骨髓组织嗜酸性粒细胞(EOS)百分比和肺组织Eotaxin和CCR3的表达及激素对其影响.方法:健康雄性豚鼠40只,以卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型,随机分为正常组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松干预组(C组)、布地奈德干预组(D组),每组10只,在末次激发6 h后处死豚鼠;取豚鼠颈动脉血、骨髓和肺组织,分别制备血涂片、骨髓涂片和肺组织切片;外周血和骨髓涂片用Wright染色,光学显微镜下计数细胞总数和EOS百分比;肺组织切片HE染色,光学显微镜下计数细胞总数和EOS百分比;肺组织切片用Eotaxin和CCR3多克隆抗体免疫组化染色,光学显微镜下分别计数阳性细胞百分比;用Western blot法测定肺组织中Eotaxin蛋白表达变化.结果:豚鼠外周血、骨髓和肺组织中EOS百分比,A组为(1.33±0.52)%、(1.17±0.41)%、(1.67±0.52)%;B组为(4.83±0.98)%、(3.17±0.75)%、(4.00±0.89)%;C组为(2.68±1.03)%、(1.67±0.82)%、(2.83±0.75)%;D组为(2.67±0.52)%、(1.83±0.75)%、(2.67±0.52)%;B组与A、C、D组比较差异有统计学意义(P＜0.05),A组与C、D组比较差异有统计学意义(P＜0.05),C组与D组比较差异无统计学意义(P＞0.05),但C组较D组降低骨髓EOS百分比似乎更明显;豚鼠肺组织Eotaxin和CCR3多克隆抗体免疫组化染色阳性细胞百分比,A组为(2.29±0.35)%、(2.07±0.15)%;B组为(3.27±0.42)%、(3.66±0.47)%;C组为(2.80±0.22)%、(2.98±0.45)%;D组为(2.75±0.31)%、(2.65±0.25)%;B组与A、C、D组比较差异有统计学意义(P＜0.05),A组与C、D组比较差异有统计学意义(P＜0.05),C组与D组比较差异无统计学意义;免疫印迹法检测发现豚鼠肺组织Eotaxin在A、B、C、D组表达量分别为0.447 ±0.026、0.836±0.012、0.639±0.034、0.668±0.023,B组表达较A、C和D组明显升高(P＜0.01),C组与D组比较差异无统计学意义,但仍高于A组(P＜0.05);相关性分析结果提示哮喘豚鼠肺组织中EOS百分比和Eotaxin和CCR3在肺组织的表达皆呈正相关(r=0.852,P＜0.001)、(r=0.671,P＜0.001).结论:哮喘豚鼠外周血、骨髓和肺组织EOS均明显增加,并与肺内Eotaxin和CCR3的表达相一致,激素可通过抑制Eotaxin和CCR3的表达和活性,有效发挥抗EOS炎症作用,是激素控制哮喘发病的重要机制.     

磷酸二酯酶抑制剂对慢性阻塞性肺疾病患者PBMC中IL-8mRNA表达的影响

目的:探讨磷酸二酯酶(PDE)抑制剂对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-8mRNA表达的影响及机制。方法:采集20例急性发作期COPD患者(A组)和15例正常人(B组)的PBMC。A组的每份PBMC分4组培养:A1组为空白对照,A2组和A3组分别加入100μmol/L及1mmol/L的非选择性PDE抑制剂茶碱,A4组加入选择性PDEⅣ抑制剂Rolipram。应用RT-PCR检测IL-8mRNA的表达,以免疫组化法检测NF-κB阳性细胞的百分率,用Westernblot检测I-κB蛋白的含量。结果:(1)A1组PB-MC中IL-8mRNA的表达及NF-κB阳性细胞的百分率,均显著高于B组;IκB的水平显著低于B组(P<0.01)。(2)与A1组比较,A2组和A3组的PB-MC中IL-8mRNA的表达无显著差异(P>0.05);A4组IL-8mRNA的表达明显下降(P<0.01)。(3)与A1组比较,A2组NFκB阳性细胞的百分率及IκB的水平无显著差异(P>0.05);而A3组的PBMC中NFκB阳性细胞的百分率下降(P<0.05),IκB蛋白的水平无显著变化(P>0.05)。A4组PB-MC中,NF-κB阳性细胞的百分率较A1组明显下降,I-κB蛋白的水平明显增加(P<0.01)。结论:COPD患者PBMC中IL-8mRNA的表达较正常增高,提示IL-8参与了COPD的发病过程;选择性PDEⅣ抑制剂Roli-pram可抑制IL-8基因的表达,其作用机制可能与NF-κB阳性细胞百分率的下降有关。非选择性PDE抑     

一种以虾原肌球蛋白为致敏原的Th2 反应小鼠模型的建立

目的:采用虾原肌球蛋白为致敏原建立Th2 反应小鼠模型。方法:虾原肌球蛋白腹腔注射小鼠6 周诱导Th2反应,ELISA 测定小鼠血清总IgE、sIgE 和sIgG 水平、脾淋巴细胞分泌Th1 和Th2 细胞因子的含量,采用流式细胞术检测血液中嗜碱性粒细胞的活化。结果:与对照组比较,致敏6 周的小鼠血清总IgE、sIgE 和sIgG(sIgG1、sIgG2a 和sIgG2b)均显著升高;脾淋巴细胞在抗原刺激后分泌Th2 细胞因子(IL-4、IL-5、IL-10 和IL-13)增加,而Th1 细胞因子INF-α则出现明显降低;血液中嗜碱性粒细胞表面标志物CD200R 和CD41 表达增强。结论:成功建立一种以虾原肌球蛋白为致敏原的Th2 反应小鼠模型。     

组蛋白去乙酰化酶3抑制剂通过减轻氧化应激降低缺氧/复氧引起的PC12细胞凋亡

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）抑制剂（HDAC3I）RGFP966在PC12细胞缺氧/复氧（H/R)损伤中的作用。 方法 采用PC12细胞缺氧4 h复氧24 h培养建立H/R细胞损伤模型。H/R+抑制剂组采用RGFP966预处理1 h后进行H/R处理。实验分为3组,对照组、H/R组和H/R+抑制剂组,每组重复3次。采用MTT法测定细胞活性,比色法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH),流式细胞术分别检测细胞凋亡率和胞内活性氧簇（ROS）,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）含量,Western blotting法检测Bcl-2促凋亡基因(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、剪切型Caspase-3（cleaved-Caspase-3）和HDAC3蛋白表达。 结果 与对照组相比,H/R组与H/R+抑制剂组细胞活力均显著降低（P<0.05）,细胞LDH（P<0.05）和凋亡率（P<0.05）均显著升高。H/R+抑制剂组与H/R组相比,H/R+抑制剂组细胞活力显著高于H/R组（P<0.05）,而H/R+抑制剂组细胞LDH（P<0.05）和凋亡率显著低于H/R组（P<0.05）。此外,与对照组相比,H/R组与H/R+抑制剂组ROS和MDA（P<0.05）均显著增加,SOD显著降低（P<0.05）;H/R+抑制剂组与H/R组相比,H/R+抑制剂组ROS和MDA（P<0.05）显著低于H/R组,而SOD水平高于H/R组（P<0.05）;Western blotting结果表明,与对照组相比,H/R组与H/R+抑制剂组Bax、cleaved-Caspase-3均显著升高,Bcl-2显著降低（P<0.05）,H/R+抑制剂组Bax、cleaved-Caspase-3均显著低于H/R组,Bcl-2显著高于H/R组（P<0.05）;与对照组相比,H/R组HDAC3蛋白表达显著升高（P<0.05）,而H/R+抑制剂组HDAC3蛋白显著降低（P<0.05）。 结论 HDAC3I通过减轻氧化应激降低缺氧/复氧引起的PC12细胞凋亡。     

气道炎症介质检测对评价咳嗽变异性哮喘患者肺功能的价值

咳嗽变异性哮喘(CVA)是以咳嗽为惟一症状或主要症状的一种特殊类型支气管哮喘。CVA的发病机制目前仍不甚清楚,有文献显示,哮喘患者的血循环中炎症性细胞因子分泌紊乱,认为炎症性细胞因子可能在其病程中发挥了重要作用,检索国内外文献关于患者气道炎症介质水平与患者肺功能状态的临床研究目前仍不多见。本文以CVA患者为对象,通过观察CVA患者治疗前后气道炎症介质及肺功能     

caspase-3、caspase-9在哮喘大鼠模型嗜酸性粒细胞中的表达及糖皮质激素的影响

支气管哮喘是以嗜酸性粒细胞（EOS）浸润为主，多种细胞参与的慢性气道变应性炎症。患者哮喘发作时，其外周血及气道内嗜酸性粒细胞均明显增多，当EOS被激活后，可诱发哮喘时一系列的炎症级联反应。哮喘病人可能存在EOS凋亡受抑或EOS凋亡缺陷。天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶家族（caspases）是细胞凋亡的分子机制中重要的效应因子。     

副流感病毒感染豚鼠咳嗽反射敏感性变化及其神经源性炎症机制探讨

目的: 探讨人副流感病毒Ⅲ型(PIV3)感染豚鼠的咳嗽反射敏感性(CRS)变化和机制,以及神经源性炎症在CRS变化和病毒性咳嗽中的作用。方法: 豚鼠50只,随机分成正常对照组以及病毒感染6、12、28和42 d组;通过滴鼻方法接种PIV3。Buxco肺功能仪测定CRS。免疫荧光和FQ-PCR方法检测PIV3抗原和核酸。ELISA法检测肺组织匀浆的P物质(SP)含量;FQ-PCR检测肺组织SP受体NK1、辣椒素受体亚型1(VR1)的mRNA水平;免疫组化方法检测肺组织SP、VR1和蛋白基因产物(PGP-9.5)的表达及半定量分析,并对它们各自与CRS的相关性进行分析。结果: 各感染组豚鼠CRS均较对照组明显升高,以42 d组为最高。免疫荧光可见PIV3抗原表达;FQ-PCR显示病毒RNA含量在6 d组最高,并随感染时间逐步降低。各组SP和VR1 mRNA,以及12、28和42 d组NK1 mRNA水平均明显高于对照组。6、12及28 d组SP,28和42 d组VR1及42 d组PGP-9.5蛋白表达均增强。相关分析显示,6和28 d组肺匀浆SP含量,12、28和42 d组NK1 mRNA以及各感染组VR1 mRNA均与CRS呈正相关;6、12和42 d组SP的蛋白表达,12和28 d组VR1及12 d组PGP-9.5蛋白表达亦与CRS呈正相关。结论: 神经肽的释放增加提示神经源性炎症的发生。CRS和神经肽的时空变化以及两者的正相关提示神经源性炎症在CRS增高和病毒感染性咳嗽中起重要作用。     

Phosphodiesterase 7 inhibitor reduced cognitive impairment and pathological hallmarks in a mouse model of Alzheimer's disease

Elevated levels of amyloid beta (Aβ) peptide, hyperphosphorylation of tau protein, and inflammation are pathological hallmarks in Alzheimer's disease (AD). Phosphodiesterase 7 (PDE7) regulates the inflammatory response through the cyclic adenosine monophosphate signaling cascade, and thus plays a central role in AD. The aim of this study was to evaluate the efficacy of an inhibitor of PDE7, named S14, in a mouse model of AD. We report that APP/Ps1 mice treated daily for 4 weeks with S14 show: (1) significant attenuation in behavioral impairment; (2) decreased brain Aβ deposition; (3) enhanced astrocyte-mediated Aβ degradation; and (4) decreased tau phosphorylation. These effects are mediated via the cyclic adenosine monophosphate/cyclic adenosine monophosphate response element-binding protein signaling pathway, and inactivation of glycogen synthase kinase (GSK)3. Our data support the use of PDE7 inhibitors, and specifically S14, as effective therapeutic agents for the prevention and treatment of AD.     

Modulation of experimentally-induced cough by stimulation of nasal mucosa in cats and guinea pigs

We measured ventilation (VI) and arterial blood gases in Pekin ducks during acclimatization to 3800 m altitude for 1-90 days. Four experimental series were conducted over 4 years using both natural altitude and a hypobaric chamber. PaCO2 decreased to 3.5 Torr, relative to the value measured during acute hypoxia after 1 day and remained at this level for up to 90 days. However, PaO2 did not increase. Arterial pH showed an unexpected metabolic alkalosis during the first hours at altitude but after 3 days, a metabolic acidosis partially compensated the respiratory alkalosis and pHa was constant thereafter. When normoxia was restored after hypoxia, PaCO2 was 5.5 Torr less than the original normoxic control value, but PaO2 was not increased. VI showed variable changes during acclimatization but if metabolic rate was constant in our study, as reported by others, then effective parabronchial V(VP) increased during acclimatization. Increased VP tends to restore PaO2 toward normoxic levels and decreases adverse effects of gas exchange limitation, which apparently increased during acclimatization in ducks.     

下丘脑室旁核对胃食管反流豚鼠咳嗽敏感性的调控机制

目的:探究下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)在胃食管反流(gastro-esophageal reflux,GER)豚鼠咳嗽敏感性增高中的作用及其可能的调控途径。方法:利用健康雄性白化Hartley豚鼠制备GER模型,并通过柠檬酸咳嗽激发试验测定咳嗽敏感性;应用免疫荧光组织化学染色方法分别观察PVN内Fos蛋白和P物质(SP)的表达情况,以及Fos/SP双标神经元的分布;利用假狂犬病毒(PRV)示踪剂进行气管壁逆行神经束路追踪,并结合免疫荧光组织化学染色方法观察追踪剂的分布情况。结果:模型组与对照组相比,咳嗽敏感性明显增高。免疫荧光染色结果显示:Fos表达于PVN神经元的细胞核内,SP免疫阳性物质主要表达于PVN神经元的细胞浆内,模型组Fos和SP的表达显著增多(P0.05),且PVN内部分Fos阳性神经元同时呈SP免疫阳性,这些Fos/SP免疫双标神经元大约占SP单标神经元数量的77.25%。神经束路追踪结果显示:气管壁内注射PRV 48 h后,在延髓迷走复合体(dorsal vagal complex,DVC)内可观察到PRV标记的神经元胞体,72 h后PRV标记的神经元胞体可见于PVN内。结论:PVN在GER豚鼠咳嗽敏感性增高中发挥重要作用,可能是PVN内SP能神经元通过PVN-DVC-气道神经通路调控实现的。     

T-lymphocyte response in a guinea pig model of tuberculous pleuritis.

The ability to induce tuberculous pleuritis in Mycobacterium bovis BCG-vaccinated guinea pigs was investigated as a model of human disease. A pleural effusion of 5 to 10 ml was obtained 6 to 7 days after the bilateral pleural injection of a suspension of heat-killed M. tuberculosis cells. Histological lesions were indicative of granulomatous pleuritis. Comparative studies of T lymphocytes obtained from pleural fluid and peripheral blood revealed increased antigen-driven lymphoproliferation and E rosette formation in pleural effusion lymphocytes. The CD2+ T-lymphocyte population appeared to be expanded or concentrated in pleural fluid, suggesting a compartmentalization of antigen-reactive T lymphocytes. These data demonstrate that experimental tuberculous pleuritis with effusion, closely resembling the human disease, can be produced in BCG-vaccinated guinea pigs.     

Trichostatin A attenuates airway inflammation in mouse asthma model

BACKGROUND: Histone deacetylase (HDAC) inhibition has been demonstrated to change the expression of a restricted set of cellular genes. T cells are essential in the pathogenesis of allergen-induced airway inflammation. It was recently reported that treatment with HDAC inhibitors induces a T cell-suppressive effect. OBJECTIVE: The purpose of this study was to determine whether treatment with trichostatin A (TSA), a representative HDAC inhibitor, would reduce allergen-induced airway inflammation in a mouse asthma model. METHODS: BALB/c mice were intraperitoneally sensitized to ovalbumin (OVA) and challenged with an aerosol of OVA. TSA (1 mg/kg body weight) was injected intraperitoneally every 2 days beginning on day 1. Mouse lungs were assayed immunohistochemically for HDAC1, a major HDAC subtype, and for infiltration of CD4+ cells. The effect of TSA on airway hyper-responsiveness (AHR) was determined, and the bronchoalveolar lavage fluid (BALF) of these mice was assayed for the number and types of inflammatory cells, and for the concentrations of IL-4, IL-5, and IgE. RESULTS: HDAC1 was localized within most airway cells and infiltrating inflammatory cells of asthmatic lungs. Treatment with TSA significantly attenuated AHR, as well as the numbers of eosinophils and lymphocytes in BALF. TSA also reduced infiltration of CD4+ and inflammatory cells and mucus occlusions in lung tissue, and decreased the concentrations of IL-4, IL-5, and IgE in BALF. CONCLUSION: TSA attenuated the development of allergic airway inflammation by decreasing expression of the Th2 cytokines, IL-4 and IL-5, and IgE, which resulted from reduced T cell infiltration. Our results suggest that HDAC inhibition may attenuate the development of asthma by a T cell suppressive effect.