MK801 对局灶性脑缺血大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体基因表达的影响

目的　探讨 MK80 1 (Dizocilpine)对局灶性脑缺血大鼠海马 N-甲基 - D-天冬氨酸受体 1 m RNA(NR1 m RNA)表达的影响。方法　线栓法制备大脑中动脉阻断 (MCAO)大鼠模型 ,观察 MK80 1对 MCAO大鼠神经行为和海马 NR1 m RNA表达的影响。结果　局灶性脑缺血后 ,NR1m RNA表达上调 ,随着时间的延长 ,表达有上升趋势 ,且脑梗死体积有增大趋势 ;缺血 2 4 h MK80 1组神经功能缺损评分、梗死体积及海马 NR1m RNA表达明显低于 MCAO组 (P<0 .0 1 )。结论　 MK80 1可能通过下调兴奋性氨基酸受体的基因表达而达到神经保护作用。     

水蛭素对缺血性脑卒中大鼠微血管新生及HIF-VEGF-Notch通路的影响

目的 探讨水蛭素对缺血性脑卒中大鼠脑组织微血管新生及缺氧诱导因子(HIF)-血管内皮生长因子(VEGF)-Notch通路的影响。方法 将120只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、阳性对照组、水蛭素低剂量组(0.5 mg/kg)和水蛭素高剂量组(1.0 mg/kg),每组20只。采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),以尼莫地平为阳性对照药物(1 mg/kg),阳性对照组及水蛭素各剂量组连续腹腔注射7 d,应用Longa法对各组大鼠进行神经功能学评分,干/湿重法测定脑组织含水量,2,3,5-氯化三苯基四氯唑(TTC)染色观察脑组织梗死体积,免疫组化法测定梗死灶周围微血管密度(CD31)表达情况,免疫印迹法(Western Blot)检测脑组织HIF-VEGF-Notch通路相关蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠神经功能评分增高(P<0.01),脑组织含水量及脑梗死体积增大(P<0.01),脑组织中CD31阳性细胞表达及HIF-1α、VEGF、Notch1的蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01)。水蛭素低剂量组、水蛭素高剂量组神经功能评分...     

苗药通窍化栓汤对脑缺血再灌注大鼠脑组织中ET和NO的影响

目的探讨苗药通窍化栓汤对脑缺血再灌注(MCAO/R)模型大鼠神经功能的影响及可能的作用机制。方法采用改良Zea-Longa法制备MCAO/R模型大鼠,将30只12周龄SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、MCAO/R模型+通窍化栓汤干预组即苗药组。评价各组神经功能,并测定各组脑组织中内皮素(ET)和一氧化氮(NO)水平。结果治疗前,模型组和苗药组的神经功能评分均较假手术组明显增高(P0.05),模型组与苗药组之间无显著性差异(P0.05);治疗后,苗药组神经功能评分较治疗前明显下降且较模型组治疗后神经功能评分明显降低(P0.05)。模型组及苗药组脑组织中ET和NO水平均较假手术组明显增高(P0.05);苗药干预后,脑组织中的ET、NO较模型组明显降低(P0.05)。结论通窍化栓汤能降低MCAO/R模型大鼠脑组织中ET和NO的含量,其改善神经功能缺损的疗效可能与改善内皮功能损伤有关。     

小脑顶核电刺激对大鼠脑梗死后皮层神经纤维再生的促进作用

目的 观察预防性小脑顶核电刺激对自发性高血压大鼠实验性脑梗死后神经功能缺损评分及脑组织内 GAP-43 mRNA 表达的影响.方法 自发性高血压大鼠持续性双侧顶核电刺激60 min,24 h后行大脑中动脉栓死术(MCAO),而对照组仅行MCAO,两组动物在脑梗死后不同时相处死,定期测定大鼠神经运动功能评分,同时取脑组织标本送荧光定量PCR.结果 在MCAO后3 d及7 d,FN组神经运动功能缺损评分分别为2.25±0.46和1.0±0.82较MCAO组(2.33±0.82和1.43±0.79)无明显差异,而FNs组梗死后14 d为0.50±0.55,较MCAO组(1.25±0.71)明显降低(P＜0.05). 脑梗死后病灶边缘区12 h和3 d时相点GAP-43mRNA表达水平在FNs组分别为0.70±0.23及1.44±0.62和MCAO组0.57±0.25及1.18±0.42无明显差异,FNs组GAP-43 mRNA在7 d及14 d时相点分别升至3.03±1.45和1.82±0.9,较MCAO组1.55±0.72及0.92±0.52明显升高(P＜0.05).结论 预防性小脑电刺激可明显降低脑梗死后神经运动功能缺损,使梗死边缘区GAP-43 mRNA的表达上调,可能与促进神经可塑性有关.     

蒙成药扎冲十三味丸对预处理急性脑梗死大鼠的影响

目的探讨蒙成药扎冲十三味丸预处理对局灶性脑缺血大鼠神经功能、梗死脑组织病理学改变、脑梗死区重量及脑梗死区重量/全脑重量变化的影响。方法将Wistar大鼠36只,随机分为正常组、模型组、扎冲十三味丸组,线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),神经功能行为评分,按时间点取脑,脑组织TTC染色,称量脑梗死重量及其与全脑重量之比。光镜下观察脑组织的结构变化。结果与模型组比较,扎冲十三味丸组神经功能缺损好转,脑梗死区重量及脑梗死区重量/全脑重量均明显小于模型组,光镜下梗死区水肿减轻。结论扎冲十三味丸对局灶性脑缺血大鼠具有神经保护作用。     

SIRT1信号通路在白藜芦醇保护脑缺血再灌注损伤中的作用机制

目的探讨白藜芦醇(Res)对大脑缺血再灌注损伤后大鼠神经元凋亡的影响及其作用机制。方法采用线栓法制作短暂性大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。将60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注模型组(MCAO组)、白藜芦醇低剂量(10 mg/kg)组(Res 10组)、白藜芦醇高剂量(30 mg/kg)组(Res 30组)。栓塞缺血2 h、再灌注24 h后对各组大鼠进行神经功能损伤评分、脑组织含水量及脑梗死体积评估,TUNEL染色检测细胞凋亡,同时测定缺血再灌注损伤缺血测脑组织中SIRT1、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平。结果脑缺血再灌注后24 h,MCAO组脑梗死体积大于Sham组(P0.01),神经功能损伤评分、脑组织含水量、TUNEL(+)细胞数及Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表达量均明显高于Sham组(P0.01),而SIRT1 mRNA表达量较Sham组明显降低(P0.01)。与MCAO组比较,Res 10组、Res 30组脑梗死体积明显缩小(P0.01),神经功能损伤评分、脑组织含水量、TUNEL(+)细胞数以及脑组织中Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表达量明显降低(P0.01),SIRT1 mRNA表达明显增加(P0.01)。结论白藜芦醇可通过减轻缺血脑组织神经元凋亡对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥神经保护作用,其可能通过激活SIRT1信号通路从而抑制或逆转脑缺血再灌注神经损伤的发生。     

阻断谷氨酸-谷氨酰胺循环对大鼠脑缺血-再灌注损伤的神经保护作用

目的探讨阻断星形胶质细胞内谷氨酸-谷氨酰胺循环在脑缺血-再灌注损伤中的神经保护作用。方法采用大脑中动脉栓塞(MCAO)线栓法制备脑缺血-再灌注损伤动物模型,首次Longa神经功能评分1~3分者为模型建立成功。采用随机数字表法,将清洁级健康雄性SD大鼠30只完全随机分为空白对照组、假手术组、MCAO模型组、再灌注0 h和1 h给药组,每组各6只。MCAO模型组为栓线穿过大脑中动脉起始段并达大脑前动脉近端;假手术组为栓线至颈总动脉内,不阻断大脑中动脉血流;再灌注0 h给药组为拔出栓线后立即腹腔注射L-蛋氨酸砜亚胺(MSO)50 mg/kg;再灌注1 h给药组为拔出栓线再灌注1 h后,腹腔注射MSO 50 mg/kg。拔出栓线24 h后,行神经功能评分检测、脑梗死体积测定、谷氨酰胺合成酶(GS)活性和凋亡细胞检测。结果空白对照组和假手术组神经功能评分正常,脑组织内均未见梗死灶及凋亡细胞,GS酶活性差异无统计学意义(P0.05);MCAO模型组GS活性低于空白对照组和假手术组,差异均有统计学意义[(176.7±2.8)×1 0~3U/g比(1 9 8.8±1.2)×1 0~3U/g和(1 9 6.1±2.6)×1 03U/g,均P0.0 1]。再灌注0 h和1 h给药组神经功能评分、脑梗死体积比、GS活性、凋亡细胞百分比分别与MCAO模型组比较,差异均有统计学意义[(1.2±0.4)分和(1.3±0.8)分比(2.5±0.6)分,(10.0±2.0)%和(20.9±1.1)%比(26.8±1.5)%,(22.2±1.2)×10~3U/g和(22.0±1.2)×10~3U/g比(176.7±2.8)×10~3U/g,(2.35±0.23)%和(4.36±0.30)%比(7.85±0.27)%,均P0.05];再灌注1 h给药组神经功能评分、脑梗死体积比、GS活性与再灌注0 h给药组比较,差异均无统计学意义(均P0.05);再灌注0 h和1 h给药组凋亡细胞百分比差异有统计学意义(P0.01)。结论抑制GS酶活性,可阻断星形胶质细胞内谷氨酸-谷氨酰胺循环,发挥神经保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血模型制备方法的比较

目的比较线栓法、电凝大脑中动脉同时结扎单侧颈总动脉（简称电凝单侧结扎）和电凝大脑中动脉同时结扎双侧颈总动脉（简称电凝双侧结扎）3种方法制作局灶性大鼠脑缺血模型的优劣。方法按照动物模型制备方法的不同,将20只大鼠随机分为线栓组（6只）、电凝单侧结扎组（7只）和电凝双侧结扎组（7只）。采用三种方法制备大鼠局灶性脑缺血模型,用激光多普勒血流仪测得梗死前后的脑血流量的相对值,24h后对模型进行神经功能缺损评分,行2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色,计算脑梗死体积。结果①线栓组（9．6±0．6）和电凝双侧结扎组（9．8±0．6）大鼠的神经功能缺损评分高于电凝单侧结扎组（5．7±0．7）,差异有统计学意义,P〈0．01;②线栓组（132±16）mm3和电凝双侧结扎组（142±20）mm3大鼠的梗死体积高于电凝单侧结扎组（40±11）mm3,差异有统计学意义,P〈0．01;③电凝双侧结扎组的脑血流量相对值低于电凝单侧结扎组,差异有统计学意义,P〈0．05;再灌注后,线栓组的脑血流量相对值高于电凝双侧结扎组,差异有统计学意义,P〈0．05。结论三种方法建立大鼠局灶性脑缺血模型,各有优缺点,应根据研究目的采用不同的模型。     

永久性大脑中动脉闭塞大鼠梗死周围组织p-Akt(Ser473)、p-Bad(Ser136)表达与细胞凋亡

目的 探讨永久性大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠脑梗死周围组织p-Akt(Ser473)、p-Bad(Serl36)表达的变化及其与细胞凋亡关系.方法 60只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术、MCAO 3 h、MCAO 12 h、LY294002干预MCAO 3 h和 LY294002干预MCAO 12 h组,每组12只.改良线栓法制作永久性MCAO模型,LY294002干预组在模型制作前15min经侧脑室给药.采用Longa法进行神经功能评分,氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)法检测梗死体积,免疫组织化学染色法检测梗死周围组织p-Akt(Ser473)和p-Bad (Ser136)表达,TUNEL法检测梗死周围组织凋亡细胞.结果 模型制作后3h,所有实验大鼠均从麻醉中清醒.假手术组神经功能缺损评分为0分,MCAO 3 h组、MCAO 12 h组、LY294002干预MCAO 3 h组和LY294002干预MCAO 12 h组分别为(2.25±0.45)、(2.92±0.99)、(3.00±0.95)和(3.02 ±0.36)分,各组间存在显著性差异(F =26.520,P=0.000).其中,LY294002干预MCAO 3 h组显著性高于MCAO 3 h组(P=0.009),LY294002干预MCAO 12 h组与MCAO 12 h组无显著性差异(P=0.354).TTC染色显示,假手术组未见梗死灶,MCAO 3 h组、MCAO 12 h组、LY294002干预MCAO 3 h组和LY294002干预MCAO 12 h组梗死体积分别为(23.4±1.4)、(40.3±1.1)、(31.9±6.0)和(44.4±3.8)mm3,各组间存在显著性差异(F=30.440,P=0.000).其中,LY294002干预MCAO 3 h组显著性大于MCAO 3 h组(P =0.002),LY294002干预MCAO 12 h组与MCAO 12 h组无显著性差异(P=0.113).与假手术组相比,MCAO 3 h组梗死周围组织p-Akt(Ser473)表达显著性增高,MCAO 12 h组显著性下降;p-Bad(Ser136)表达水平随着MCAO时间的推移呈现进行性下降,同时凋亡细胞数量进行性增多.LY294002干预后,MCAO 3 h时梗死周围组织p-Akt(Ser473)和p-Bad(Ser136)表达水平均显著性下降,凋亡细胞数量显著性增多(P＜0.05),但对MCAO后12 h时的各指标无显著性影响.结论 脑梗死早期P13K/Akt信号转导通路的激活以及该通路关键蛋白p-Akt(Ser473)的应激性升高具有脑保护作用,而脑梗死后期该通路活性的衰竭及其关键蛋白的急剧降低则与脑损伤有关.     

藏药十八味诃子利尿丸对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨十八味诃子利尿丸对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用。方法 SD大鼠随机等量分为藏药、西药、模型及假手术组,预处理10 d。采用加长栓线改良Zea Longa线栓法建立局灶性脑缺血/再灌注动物模型,神经功能缺陷评分;断头取脑观测脑组织含水量、梗死灶面积、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,观察海马CA1区组织病理学改变。结果十八味诃子利尿丸可显著降低神经功能缺陷评分、梗死灶面积及MDA含量,提高SOD活性,差异有统计学意义(P0.05),可降低脑组织含水量但无统计学意义(P0.05);组织病理学显示,相比于模型组,藏药组海马CA1区神经元损伤较轻,存活数目较多,差异有统计学意义(P0.05)。结论十八味诃子利尿丸可对抗局灶性脑缺血/再灌注损伤,其机制与提高抗氧化能力关系密切。     

Thrombolysis by rotational thrombectomy followed by tissue plasminogen activator: Evaluation by angioscopy

Thrombus removal using percutaneous rotational thrombectomy (PRT), followed by tissue plasminogen activator (t-PA), was studied by contrast angiography and fiberoptic angioscopy in a canine femoral artery model of thrombosis. After thrombus induction and following each treatment, comparisons were made between angioscopy and angiography for the detection of thrombus and subintimal dissection. Angioscopic images were scored in a blinded fashion for lining, protruding, or occlusive thrombus (class 1, 2, or 3) as well as estimated wall coverage by thrombus. Angiograms were studied for percent diameter stenosis and the presence of flaps. Following external forceps crush Injury of 18 arteries, two hour occlusion, and injection of thrombin, mean angiographic stenosis was 66%, thrombus coverage by angioscopy was 81%, and mean angioscopy class was 2.5. Following PRT, stenosis decreased to 27% (p < 0.008), thrombus coverage was reduced to 49% (p < 0.02), and angioscopy class dropped to 2.0 (p < 0.07). After t-PA treatment, these values were further reduced to 25% (p = NS), 26% (p < 0.02), and 1.3 (p < 0.008), respectively. In comparison to angiography, subintimal dissection (seen as flaps) and thrombus (lining, protruding, or occlusive) were present significantly more often by angioscopy (p < 0.001). It is concluded that PRT results in significant thrombolysis, apparent by angiography and angioscopy. Follow-up t-PA can produce additional, incremental thrombolysis, apparent only by angioscopy. A beneficial role for t-PA following mechanical thrombolysis is suggested by this model. The superior sensitivity of angioscopy for detection of flaps and thrombus Is underscored by this study.