雷公藤内酯醇诱导PC3细胞凋亡的机制研究

目的观察雷公藤内酯醇（triptolide,TPL）对去势后抵抗性前列腺癌（Castration—Resistant Prostate Cancer,CRPC）PC3细胞的生长增殖抑制作用,对其诱导凋亡相关基因进行分析。方法MTY比色法观察TPL对PC3细胞的生长增殖抑制作用;Annexin—V／PI标记分析细胞凋亡;RT-PCR方法检测0、6、12、24h BCL-2、BAX、PIG3、P21、FAS、CASPASE3等与凋亡相关基因表达变化。结果什L抑制PC3细胞生长呈时间和剂量依赖性,24h和48h半数抑制浓度分别为18．3ng／ml和13．5ng／ml,与24h组相比,48h组低浓度（5ng／ml,t=1．47,P〉0．05）和高浓度（160ng／ml,t=0．91,P〉0．05）差异无统计学意义。而10ng／ml（t=3．26,P〈0．05）、20ng／ml（t=4．21,P〈0．05）、40．g／ml（t=4．09,P〈0．05）、80ng／ml（t=2．91,P〈0．05）差异有统计学意义。Annexin-v／PI检测经18．3ng／ml,I’PL处理后的PC3细胞凋亡随着作用时间的延长而增多,相对于对照组,6、12、24h组Anexin—V阳性／PI阴性表达率分别为（5．42±2．21）％（t=3．52,P〈0．05）、（13．51±3．37）％（t=6．53,P〈0．01）、（29．3±4．53）％（t=8．74,P〈0．01）差异有统计学意义,并且各组间差异有统计学意义（P〈0．05）;RT—PCR显示经18．3ng／ml TPL处理后,BAX、HG3表达递增,P21、BCL-2表达递降,FAS、CASPASE3表达无明显改变。结论TPL可以抑制PC3生长增殖并诱导细胞凋亡,而在凋亡的过程中,BAX、BCL-2、PIG3、P21等基因的改变可能扮演着重要的角色。     

Survivin在冬凌草甲素介导下对人前列腺癌细胞PC-3凋亡的作用

目的观察冬凌草甲素对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株-PC-3细胞的诱导凋亡作用,探讨Survivin在此过程中的作用。方法用不同浓度的冬凌草甲素干预PC-3细胞,MIT试验分析观察其对PC-3细胞活力的影响;通过用流式细胞仪分析PC．3早期凋亡细胞的百分率;用Western印迹检法、实时荧光定量PCR方法检测PC-3细胞Survivin的蛋白和mRNA表达的变化。结果（1）细胞生长抑制力呈一定的时间、剂量依赖性,冬凌草甲素浓度为2．5、5、10、20、40μmol／L时,干预48h后相对应的平均细胞生长抑制率依次为9．2％、25．3％、39．3％、77．2％、92．5％,药物抑制PC-3细胞活力的IC50约为10．29μmol／L;流式细胞仪检测经不同浓度的冬凌草甲素（0,10,20,40μmol／L）干预48h后,PC-3细胞的早期凋亡率分别为4．8％,15．4％,19．5％和27．4％（P〈0．05）。（2）冬凌草甲素以浓度依赖性方式抑制PC-3细胞的Survivin的蛋白和mRNA表达。结论冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导PC-3细胞凋亡。冬凌草甲素通过影响Survivin的表达来诱导PC-3细胞凋亡。     

EGCG对人前列腺癌裸鼠移植瘤生长和间隙连接蛋白43表达的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸脂（EGCG）对前列腺癌裸鼠移植瘤生长和间隙连接蛋白43（Cx43）表达的影响,探讨EGCG防治前列腺癌的作用机制。方法分别采用四甲基偶氮唑蓝法、膜联蛋白／碘化丙锭双标流式细胞术和划痕标记荧光染料传输技术,体外观察不同浓度的EGCG（10、20、40mg/L）对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制率、凋亡率、细胞间间隙连接通讯功能（GJIC）的变化。采用PC-3细胞建立裸鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为对照组和不同剂量的EGCG组（10、20、40mg/kg）,14d后称量移植瘤体重并计算抑瘤率,DNA原位缺口末端标记法和免疫组织化学分别检测凋亡指数（AI）和肿瘤微血管密度（MVD）,半定量逆转录聚合酶链反应检测移植瘤组织cx43mRNA的表达水平。结果20mg/L和40mg／L的EGCG均能明显抑制PC-3细胞的生长[（22．33±4．62）％,（38．67±5．67）％VS（3．47±0．31）％,P〈0．01]和诱导细胞凋亡[（7．84±1．37）％,（24．53±2．28）％V8（2．17±0．70）％,P〈0．01],并增强细胞间的GJIC功能。不同剂量的EGCG均能抑制裸鼠前列腺癌移植瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡,减少肿瘤血管生成。（20、40mg/kg）EGCG能显著上调移植瘤组织Cx43mRNA的表达（0．58±0．08,0．80±0．07V80．42±0．04,P〈0．01）。EGCG对前列腺移植瘤的抑制作用、诱导细胞凋亡和上调Cx43表达的效应均随剂量的增加而增强,呈剂量依赖性（P〈0．05）。结论EGCG能上调Cx43在裸鼠前列腺癌组织中的表达和增强Cx43介导的间隙连接通讯功能,从而有效抑制前列腺癌移植瘤的生长。     

莱菔硫烷对人小细胞肺癌NCI—H446细胞增殖、侵袭以及MMP-9活性的影响

目的探讨莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对人小细胞肺癌NCI—H446细胞增殖、侵袭以及基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9,MMP-9）活性的影响。方法体外培养NCI—H446细胞,用0、25、50、100txmol／LSFN处理24～72h后,MTT法检测细胞的增殖情况;小室侵袭实验分析细胞的侵袭力改变,明胶酶谱实验检测MMP-9的酶活性变化。结果经25、50、100Ixmol／LSFN处理24～72h后,NCI．H446生长均能受到不同程度抑制。其中72h后,25、50、100μmol／LSFN组NCI．H446细胞的抑制率分别为（11．1±2．26）％,（25．2±3．24）％和（44．6±4．2）％,与溶剂对照组相比差异具有统计学意义（t=10．685,8．417,5．264,P〈0．05）。25、50、100μmol／LSFN作用NCI—H446细胞24h后,NCI—H446细胞穿膜数分别为（48．6±1．84）％,（35．4±2．22）％和（27．8±1．36）％,与溶剂对照组[（68．4±2．21）％]相比差异具有统计学意义（t=6．341,5．562,4．925,P〈0．05）。明胶酶谱实验显示,25、50、100ixmol／LSFN处理后,MMP-9活性的灰度值分别为764±18．4,685±14．74和638±21．54,与对照组相比（822±12．53）,差异有统计学意义（t=4．971,7．582,11．235,P〈0．05）。结论SFN对肺癌NCI—H446细胞生长、侵袭力及MMP-9的活性具有抑制作用。     

大黄素对膀胱癌细胞BIU87增殖和凋亡的影响

目的探讨大黄素对人膀胱癌细胞BIU87生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法采用甲基噻唑（MTT）比色法测定不同浓度大黄素在不同作用时间内对在体外培养BIU87细胞增殖的影响,同时应用流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化,免疫组化SP法检测细胞内bcl-2和caspase-3蛋白的表达水平。结果在一定范围内,大黄素的浓度（10—80μg/ml）越高、作用时间越长,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高[分别为（9．84±21．13）％、（18．32±22．14）％、（29．73±1．42）％、（42．13±2．36）％],与对照组[（2．01±20．92）％]相比,差异均有统计学意义（F=531．85,P〈0．01）;大黄素可在G0／G1期阻滞人膀胱癌细胞BIU87的增殖,使S期细胞比率降低[分别为（33．27±1．26）％、（29．17±1．39）％、（16．94±0．86）％、（10．85±1．47）％],与对照组[（35．45±0．38）％]相比,差异均有统计学意义（F=524．64,P〈0．01）。大黄素作用48h后,BIU87细胞中bel-2蛋白表达下降（灰度值分别为122．65±2．12、131．37±1．62、134．81±1．36、145．55±2．01）,easpase-3蛋白表达上调（灰度值分别为135．26±1．41、130．22±1．74、126．11±1．77、118．36±1．53）,呈浓度依赖性,与对照组（灰度值分别为108．42±3．73、149．35±1．82）相比,差异均有统计学意义（F=216．23、224．83,P〈0．01）。结论大黄素在体外能抑制人膀胱癌细胞株BIU87的生长、诱导细胞凋亡,其作用与下调bcl-2蛋白表达、上调easpase一3蛋白表达和阻滞细胞周期于Go／G．期有关。     

神经生长因子诱导肝星状细胞凋亡及其相关机制的研究

目的观察神经生长因子（nerve growthfactor,NGF）对大鼠肝星状细胞（hepatic stellatecell,HSC）凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC—T6,将HSC—T6与100ng／mlNGF孵育24h后,流式细胞术检测细胞凋亡;细胞免疫化学法检测HSC中凋亡相关基因P^53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的情况;免疫荧光法检测NGF、神经生长因子低亲和力受体p75NTR表达的情况。结果NGF作用HSC后凋亡率较对照组明显增高[（22．364±9．51）％VS（5．88±1．36）％,P〈0．05]。凋亡相关蛋白P^53、Caspase-3的阳性细胞百分率与对照组比较明显增高[（78．41±4．00）％、（39．26±1．57）％VS（34．96±3．84）％、（9．27±1．01）％,P〈0．05],而Bcl-2表达实验组阳性细胞百分率较对照组降低[（18．12±1．38）％vs（91．53±2．98）％,P〈0．05]。NGF作用HSC后NGF表达增多（6．53±1．40vs1．77±0．17,P〈0．05）,而p75NTR表达无明显变化（3．52±0．36VS4．24±0．38,P〉0．05）。结论NGF可能通过使凋亡相关基因p、Caspase-3表达上调、Bcl-2表达下调,而诱导HSC凋亡。NGF作用HSC后可作为始动因子和效应因子增加NGF的表达,而对p75NTR表达无影响。     

卵巢癌患者围手术期血清胰岛素样生长因子-2和胰岛素样生长因子结合蛋白-3检测的临床意义

目的探讨卵巢癌患者围手术期血清胰岛素样生长因子-2（IGF-2）和胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）的变化及其临床意义。方法采用酶联吸附免疫法（ELISA）测定40例健康对照组及82例卵巢癌患者手术前后血清IGF-2和IGFBP-3的水平,观察健康对照组与卵巢癌患者手术前后血清IGF-2和IGFBP-3的水平变化,分析卵巢癌病人血清IGF-2和IGFBP-3水平与临床特征的关系。结果卵巢癌手术前病人血清IGF．2及IGFBP-3水平明高于正常对照组[（101．5±22．2）ne／ml,（49．3±15．6）ng／mlvs（69．6±17．7）ng／ml,（23．9±11．3）rig／ml,t=3．74,2．85,P〈0．05];卵巢癌病人有淋巴结转移者血清IGF-2水平[（109．4±20．0）rig／m1]高于无淋巴结转移者[（89．9±16．6）ng／frll]（t’=4．10,P〈0．05）,而IGFBP-3水平[（39．8±11．1）ng／m1]低于无淋巴结转移者[（55．8±19．2）ng／m1]（t’=4．49,P〈0．05）;肿瘤临床TNM分期中III—IV期者血清IGF-2水平[（107．5±24．0）ng／m1]高于I—II期者[（91．6±17．7）ng／m1]（t=2．83,P〈0．05）,而IGFBP-3水平[（41．7±16．9）ng／m1]低于I～II期者[（56．9±19．1）ng／m1]（t=2．37,P〈0．05）,根治性手术组病人术后IGF-2及ICFBP-3水平明显低于术前[（103．4±27．2）ng／ml,（50．2±16．6）ng／mlvs（86．6±12．3）ng／IIll,（41．1±17．1）ng／ml,f=2．48,3．32,P〈0．05],姑息性手术组病人术前术后血清IGF-2及IGFBP．3水平无明显变化（P〉0．05）。根治性手术组病人术后血清IGF-2及IGFBP-3水平低于姑息性手术组术后[（86．6±12．3）ng／ml,（41．1±17．1）ng／mlvs（103．2±26．0）rig／ml,（45．3±14．9）ng／ml,t’=3．46,t=2．67,P〈0．05]。结论卵巢癌患者血清IGF-2和IGFBP-3的水平与肿瘤的浸润转移、临床分期及根治性手术有关,动态检测卵巢癌患者血清IGF-2和IGFBP-3的变化,有助于估计患者的预后。     

分化型甲状腺癌术后复发患者血管内皮生长因子及内皮抑素在血清中表达的临床意义

目的探讨血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）及内皮抑素（Endostatin,ES）在分化型甲状腺癌术后复发患者血清中表达的临床意义。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测分化型甲状腺癌术后肺转移患者7例、局部复发患者18例及对照组30例正常人群血清VEGF（serum VEGF,sVEGF）及内皮抑索（Serum Endostatin,sES）的表达水平及化学发光法检测血清FT,、Fr4、TsH、Tg、TgA的浓度,应用SPSS13．0统计学软件包分析,计量资料数据比较应用t检验,sVEGF、sES与血清甲状腺球蛋白浓度相关关系采用Spearman等级相关分析。结果复发后肺转移组患者sVEGF、sES[（623．2±139．4）pg／ml,（38．7±9．2）ng／m1]明显高于局部复发组[（397．5±60．2）pg/ml,（31．2±7．6）mg／ml）,两者比较差异具有统计学意义（t=4．136,2．092,P〈0．05）,肺转移组在复发前后sVEGF、sES[（207．6±33．4）pg／ml,（26．2±6．8）ng／ml;（623．2±139．4）pg／ml,（38．7±9．2）ng／ml],两者比较差异具有统计学意义（t=7．671,2．891,P〈0．05）,局部复发组在复发前后sVEGF、SES[（216．3±42．7）pg,／ml,（25．4±4．9）ng／ml;（397．54-60．2）pg／ml,（31．2±7．6）ng／ml],两者比较差异亦具有统计学意义（t=9．609,2．721,P〈0．05）,甲状腺癌术后复发的患者血清甲状腺球蛋白浓度与sVEGF及sES表达呈直线正相关（r=0．786,0．327,P〈0．01）。结论sVEGF、sES在分化型甲状腺癌术后局部复发及肺转移患者血清中高表达,可作为评估分化型甲状腺癌生物学行为的一项指标。     

系统性红斑狼疮血清中抗卵巢细胞抗体与性激素水平及月经异常关系的研究

目的探讨女性系统性红斑狼疮（SLE）血清中抗卵巢细胞抗体与性激素水平及月经异常的关系。方法对本院SLE患者（78例）及对照组（40例）的临床资料进行分析,并测定性激素E2、T、P水平,同时采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血清中抗核抗体（ANA）等自身抗体及抗卵巢细胞抗体,分析系统性红斑狼疮（SLE）血清中抗卵巢细胞抗体与性激素水平及月经异常的相关因素。结果SLE组患者抗卵巢细胞抗体阳性率高于健康对照组（34．6％vs2．5％,P〈0．01）。SLE组患者性激素E2、T、P均明显低于健康对照组[E2：（80．96±36．2）ng／L vs（118．53±42．4）ng／L;T：（3．85±1．18）nmol／Lvs（6．43±2．28）nmol／L;P：（1．374-0．59）μg/L vs（3．92±1．23）恤g／L,P〈0．01或P〈0．05],而FSH、LH及PRL水平显著高于健康对照组[FSH：（19．17±9．26）IU／Lvs（10．18±7．27）IU／L;LH：（21．19±12．44）IU／Lvs（13．79±8．27）IU／L;PRL：（6．18±2．27）μg／Lvs（2．37±0．63）μg/L,P〈0．05或P〈0．01]。SLE组患者月经异常率显著高于健康对照组（59％vs22％,P〈0．05）。SLE组患者血清抗卵巢细胞抗体阳性者SLEDAI积分及月经异常率显著高于抗体阴性者（6．3±2．8vs3．5±1．7,81％vs47％,P〈0．05或P〈0．01）,而E2水平明显低于抗体阴性者[（64．13±26．36）ng／L vs（82．83±28．71）ng／L,P〈0．05]。结论SLE患者中抗卵巢细胞抗体的阳性率为34．6％,并可能与患者的性激素水平异常及月经异常相关。     

越橘总黄酮对人宫颈癌细胞中TRAIL及其受体表达的影响

目的研究越橘总黄酮对人宫颈癌细胞株Hela细胞中TRAIL及其受体表达的影响。方法用浓度为0、0．025、0．25、2．5、和25μg／ml的越橘总黄酮处理Hela细胞24h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测越橘总黄酮对Hela细胞增殖的抑制作用,采用Hoechst33342／PI染色观察越橘总黄酮对Hela细胞凋亡的诱导作用,采用RT—PCR法检测不同浓度越橘总黄酮处理后的Hela细胞中TRAIL及其受体mRNA基因表达变化。结果0．025、0．25、2．5、和25μg／ml的越橘总黄酮对Hela细胞增殖的抑制率分别为22．08％、36．04％、42．10％和44．70％;0．25～25μg/ml的越橘总黄酮处理组细胞呈现明显的凋亡形态学改变;TRAIL和TRAIL—R2表达量明显高于空白对照组（P〈0．05）,TRAIL—R3和TRAIL—R4表达量明显低于空白对照组（P〈0．05）,而TRAIL—R1在各处理组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论越橘总黄酮诱导Hela细胞凋亡的机制可能与上调TRAIL及其受体TRAIL—R2基因的表达有关。     

中链脂肪酸复合物和亚油酸对卵巢癌多细胞球体化疗效果的影响

目的观察中链脂肪酸复合物（MCFA）和亚油酸（LA）对卵巢癌多细胞球体（MCS）化疗效果的影响。方法分别用含有MCFA和LA的培养液培养卵巢癌MCS，观察在化疗药物顺铂（DDP）作用下，MCS细胞抑制率和细胞周期各时相细胞数量的变化情况。结果当DDP浓度为10μmol/L时，MCFA组（51．60％）和LA组（42．97％）的细胞抑制率均明显高于对照组（30．27％）（P〈0．01），其中MCFA组抑制率也明显高于LA组（P〈0．05）。当两种脂肪酸分别与DDP（10μmol/L）合用时，MCFA＋DDP组和LA＋DDP组处于GO／GI期的细胞数量均明显高于其他组（P〈0．05），且MCFA＋DDP组也明显高于LA＋DDP组[（70．2±5．3）％伪．（68．3±4．5）％，P〈0．05]。结论MCFA和LA都可增强DDP的化疗效果，其中MCFA的作用更强。MCFA和LA的协同作用可能与其阻滞卵巢癌MCS细胞的增殖和抑制癌细胞生长有关。     

白藜芦醇对小鼠前脂肪细胞凋亡及细胞周期的影响

目的研究白藜芦醇（Res）对小鼠前脂肪细胞凋亡及细胞周期的影响及其机制。方法分别用25、50、75、100μmol／L的Res干预小鼠前脂肪细胞24、48、72h,并设0μmol／LRes为阴性对照组（每组设3个复孔,重复3次）。全自动倒置荧光显微镜观察细胞的形态学变化、细胞增殖．毒性检测试剂盒检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡与细胞周期。结果形态学上．经50μmol／LRes干预48h后的小鼠前脂肪细胞具有典型凋亡形态学改变。细胞增殖-毒性检测发现,0、25、50、75、100μmol／LRes干预24h细胞增殖率分别为100％、（97．00±1．00）％、（91．00±2．65）％、（90．67±2．52）％和（86．00±3．61）％;干预48h细胞增殖率分别是100％、（86．67±2．52）％、（76．00±2．00）％、（34．33±2．08）％和（30．33±2．52）％;干预72h,细胞增殖率分别是100％、（82．00±2．65）％、（65．67±3．06）％、（21．00±3．61）％和（16．33±3．21）％。偏相关分析结果显示细胞增殖率与干预时间、Res浓度均呈负相关关系（r=-0．72、-0．83,均P〈0．01）。0、25、50、75、100μmol／LRes干预24h,G0／G1期的细胞比例分别为（27．23±2．63）％、（39．03±2．74）％、（80．20±5．15）％、（87．97±3．12）％和（90．80±2．08）％;S期的细胞比例分别为（72．43±2．99）％、（63．93±6．90）％、（19．80±5．15）％、（12．20±2．86）％和（9．20±2．08）％,2个细胞周期的50、75、100μmol／LRes干预组与阴性对照组之间的细胞比例差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。0、25、50、75、100μmol／LRes干预48h,细胞凋亡率分别为（2．90±0．10）％、（5．40±3．81）％、（8．23±4．24）％、（29．77±6．18）％和（27．23±3．17）％;细胞坏死率分别为（7．50±0．87）％、（12．00±4．89）％、（12．27±3．81）％、（12．67±6．13）％和（20．73±2．64）％,100μmol／L的干预组的细胞调亡率、坏死率与阴性对照组的差异均具有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）,其他各组与阴性对照组的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论在一定的剂量范围内（0～100μmol／L）,Res可能抑制小鼠前脂肪细胞生命周期并促进其凋亡。     

大豆异黄酮对辐射小鼠骨髓细胞的防护作用

目的研究大豆异黄酮(SI)对辐射小鼠骨髓细胞的防护作用,为SI应用于抗电离辐射药物和功能食品的研究提供依据。方法24只雄性昆明小鼠,随机分为正常对照组、辐射对照组和辐射补充0.5%SI组,喂养2周后,后两者给予4.0Gyγ射线照射。照射后7d处死小鼠,分离双侧股骨,观察骨髓细胞(BMC)形成细胞集落的能力。体外实验取正常组小鼠的股骨,制成BMC单细胞悬液,4.0Gyγ射线照射,测定BMC的细胞周期和3H-TdR掺入量。结果辐射使小鼠BMC的粒-巨细胞集落形成单位(CFU-GM)和成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)明显减少,辐射补充SI组BMC的CFU-GM〔(26.0±6.9)个/105BMC〕和CFU-F〔(23.4±8.6)个/106BMC〕明显高于辐射对照组〔相应为(17.3±4.4)个/105BMC和(15.6±4.9)个/106BMC)(P0.05)〕。体外实验结果表明,辐射使细胞周期的G0-G1期细胞数量明显增加,S和G2-M期细胞明显减少,细胞的3H-TdR掺入量明显减少;补充SI组与辐射对照组相比,G0-G1期细胞数量明显减少(P0.05),S和G2-M期的细胞数明显增加(P0.05),细胞的3H-TdR掺入量明显增加(P0.05)。结论大豆异黄酮对小鼠骨髓细胞辐射损伤有一定的防护作用。     

Ca2＋／CaN-NFATc信号通路在哮喘大鼠淋巴细胞增殖和活化中的作用

目的探讨Ca2＋／CaN-NFATc信号通路在哮喘大鼠淋巴细胞活化、增殖中的作用。方法哮喘组和CsA（cyclospoin A,CaN的抑制物,环孢菌素A）干预组大鼠以卵蛋白溶液致敏及激发,对照组以生理盐水致敏及激发,无菌分离脾淋巴细胞,加PHA—P（终浓度为5μg／ml）培养24h,CsA干预组同时加入CsA稀释液（终浓度为1．0μg／ml）。检测淋巴细胞内[Ca2＋]i浓度、CaN活性、去磷酸化NFATc蛋白和CyclinE蛋白的表达、细胞周期各时相分布及上清液中IL-4和IL-2的水平。结果与对照组相比,哮喘组淋巴细胞Ca2＋／CaN-NFATc的活性[（81．21±14．39）V8（63．66±9．02）]增加（P〈0．05）;CyclinE蛋白的表达量[（0．9327±0．0370）VS（0．8374±0．0637）]增加（P〈0．01）,处于G0／G1期的淋巴细胞比例[（89．3300±3．3850）VS（94．1260±1．4389）]减少,s期[（7．8600±2．8241）VS（4．0270±1．8650）]及S＋G2／M期比例[（10．6700±3．3850）V8（5．8740±1．4389）]增加（P均〈0．01））;上清液中IL4水平[（1．55±0．19）pg／ml vs（0．99±0．12）pg／m1]及IL-4／IL-2比值[（0．81±0．12）vs（0．49±0．49）]增加（P均〈0．01）。CsA可使哮喘大鼠淋巴细胞Ca2＋／CaN—NFATc的活性（47．19±7．16）下降（P〈0．05）;CyclinE蛋白的表达量（0．6840±0．0485）减少（P〈0．01）,使处于S期（4．8600±1．9595）和S＋G2／M期（7．9900±1．9405）的淋巴细胞比例减少,G0／G1期比例（92．2100±1．9267）增加（P均〈0．01）,细胞增殖受到抑制;使上清液中IL-4（0．47±0．09）pg／ml水平减少（P〈0．01）,IL-4／IL-2比值下降（0．78±0．20）;淋巴细胞Ca2＋／CaN-NFATc的活性与IL4的水平及CyclinE蛋白的表达量均呈正相关（r=0．711,P〈0．01和r=0．749,P〈0．01）。结论哮喘大鼠淋巴细胞Ca2＋／CaN-NFATc的活性增加;其活性的增加可通过促进IL4的产生和分泌,导致Th1／Th2的失衡,也可通过促进Cyclin E蛋白的表达而引起淋巴细胞的增殖。     

靶向抑制存活素表达对卵巢癌细胞株生物学行为的影响和意义

目的：通过存活素（ Survivin）反义寡核苷酸（ ASODN）转染人卵巢癌SKOV3细胞株抑制存活素Survivin蛋白表达,分析靶向抑制 Survivin 表达对卵巢癌细胞生长、细胞周期改变、凋亡、侵袭迁移能力的影响和意义。方法用脂质体（LipofectamineTM2000）介导Survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,通过四唑盐比色法（MTT法）分析细胞生长活性改变,通过流式细胞仪检测Survivin蛋白表达改变、细胞周期分布和细胞凋亡率,通过Transwell小室检测细胞侵袭迁移能力的改变。结果转染Survivin ASODN后卵巢癌细胞株中Survivin蛋白表达明显下降（t＝7．82,P＜0．01）。细胞生长明显减慢（F＝3．75,P＜0．01）,600nm/L ASODN转染48小时细胞存活率为49．50±20．76％,接近IC50值。细胞凋亡明显增加（t＝6．37,P＜0．05）,细胞增殖明显下降（t＝-10．35,P＜0．01）,更多的细胞停留在G0/G1期（t＝10．38,P＜0．01）。细胞迁移和侵袭能力下降（t值分别为19．26、27．42,均P＜0．01）。结论 Survivin ASODN通过靶向抑制卵巢癌细胞存活素表达,可抑制细胞生长,促进细胞凋亡,减少进入有丝分裂的细胞数,降低细胞的侵袭迁移能力,从而达到治疗卵巢癌的作用。靶向抑制存活素的治疗将成为卵巢癌治疗的重要手段。     

黄芪联合顺铂对喉癌Hep-2细胞的体外抑制作用

目的 研究黄芪与顺铂联合对体外培养的人喉癌Hep-2细胞的抑制作用.方法 用MTT法检测黄芪、顺铂单独或联合作用对人喉癌Hep-2细胞的抑制率;用流式细胞技术及Western-blotting法检测黄芪、顺铂单独或联合作用对人喉癌Hep-2细胞凋亡的影响.结果 作用24h后黄芪组、顺铂组、黄芪联合顺铂组对Hep-2细胞的抑制率分别为(53.83±17.12)％、(69.12±27.12)％、(84.55±27.84)％,与对照组(0％)比较差异有统计学意义(t=16.87,16.67,40.90,P＜0.01).黄芪组、顺铂组、黄芪联合顺铂组Hep-2细胞的凋亡率[(38.2±13.6)％、(67.2±17.8)％、(86.4±25.1)％]与对照组[(17.1±1.3)％]比较差异有统计学意义(t =8.11,12.77,24.92,P＜0.05),且联合用药组的效果较任一单独用药组更为明显(t=11.33,9.37,P＜0.01).结论 黄芪通过促进细胞凋亡有效提高顺铂对Hep-2细胞抑制作用的敏感性,通过调节Bcl-2/Bax蛋白表达,能提高顺铂对喉癌的治疗效果.     

通心络对溶血磷脂酰胆碱所致人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的观察通心络（TXL）对溶血磷脂酰胆碱（LPC）致人脐静脉内皮细胞损伤作用的影响。方法制备通心络含药血清,人脐静脉内皮细胞培养,分为（1）正常对照组;（2）LPC损伤组;（3）通心络血清组;（4）通心络＋LPC干预组。观察细胞形态变化,MTr法检测各组细胞OD值。结果与对照组（0．380±0．023）相比,溶血磷脂酰胆碱（0．320±0．024）明显降低细胞活性,促进细胞死亡（P〈0．05）;通心络干预后（0．424±0．034）,细胞活性明显增加,细胞死亡减少（P〈0．05）。结论通心络对溶血磷脂酰胆碱致人脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用。     

喉鳞癌组织NF—kB的表达和淋巴管计数的临床意义及相关性研究

目的研究喉鳞癌组织中核因子-kB（NF—kB）表达水平和淋巴管计数,探讨两者在喉鳞癌中的临床病理意义及相互关系。方法收集50例喉鳞癌手术切除组织标本,另取10例声带息肉组织作对照,常规制作石蜡包埋切片,NF-kB表达的检测和淋巴管计数均采用SP免疫组化法。结果喉鳞癌NF-KB表达阳性率和淋巴管计数为明显高于声带息肉组[60％vs10％,P〈0．05,（13．3±3．4）个／HP vs（6．1±3．8）个／HP,P〈0．01];高分化喉鳞癌和未转移病例NF—KB表达阳性率和淋巴管计数明显低于低分化喉鳞癌和转移病例[33．3％vs84．2％,（9．6±2．7）个／HP vs（16．9±3．4）个／HP,P〈0．05或P〈0．01];NF—KB表达阳性的喉鳞癌淋巴管计数明显高于阴性表达者[（14．9±4．1）个／HP vs（9．8±3．1）个／HP,P〈0．01]。结论NF—kB表达和淋巴管计数均为反映喉鳞癌进展、转移等生物学特性及预后的重要标记物,喉鳞癌细胞分泌的NF—kB可能促进淋巴管生成。