特异性反义寡核苷酸抑制白血病细胞株HLA—DPB1基因表达

反义寡核苷酸可以特异性地抑制基因表达，将ＨＬＡ０ＤＰＢ１特异性反义寡核苷酸加入细胞培养基中，对ＨＬ－６０和Ｋ５６２白血病细胞株由γ－干扰素诱导的ＨＬＡ－ＤＰＢ１表达有特异性抑制作用。当反义寡核苷酸浓度在４０μｇ／ｍｌ时，１小时后即出现ＨＬＡ０ＤＰＢ１基因表达抑制现象，持续时间达４８小时，７２小时后表达又逐渐恢复；反义寡核苷酸抑制基因表达有很高的特异性，在ＨＬＡ－ＤＰＢ１表达完全被封闭的情况下，与它     

抗PML-RARα反义核酸的设计、合成和对NB4细胞生长、凋亡的影响

目的合成针对长型ＰＭＬＲＡＲα融合基因ｍＲＮＡ起始部位和融合位点的反义核酸（ＡＳ），探讨ＡＳ的稳定性、特异性及其对ＮＢ４细胞生长、凋亡的影响。方法以ＮＢ４细胞株为研究对象，采用台盼蓝拒染法进行细胞计数；聚丙烯酰胺凝胶进行寡核苷酸的电泳；流式细胞仪、ＤＮＡ电泳、细胞荧光染色进行细胞凋亡检测。结果合成的ＡＳ稳定、耐细胞内外核酸酶、无非特异性作用；起始部位ＡＳ（ＳＴＡＳ）和融合位点ＡＳ（ＦＵＡＳ）明显抑制细胞增殖，且呈剂量依赖性。浓度２０μｇ／ｍｌ时增殖抑制率０％～１１．３％；８０μｇ／ｍｌ时，抑制率５０．０％～６７．７％。ＦＵＡＳ（６０μｇ／ｍｌ）处理第７天、第９天出现明显的凋亡细胞群，处理后３天、５天、７天、９天的凋亡细胞率分别为９．３％、２４．５％、４１．０％、３４．２％。结论针对长型ＰＭＬＲＡＲα融合基因的ＡＳ设计、合成是成功的；抗ＰＭＬＲＡＲαＡＳ能抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。     

鬼臼叉甙阿糖胞苷对HL－60细胞诱导分化的研究

鬼臼叉甙阿糖胞苷对ＨＬ－６０细胞诱导分化的研究贝龄，范蕾蕾，高雪芝，戴梅美我们以对ＨＬ－６０细胞具有确定分化作用的诱导剂维甲酸（ＲＡ）和１．２５二羟维生素Ｄ＿３（ＶＤ＿３）为参照，来比较鬼臼叉甙（ＶＰ－１６）和阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）对ＨＬ－６０细胞的...     

微量聚合酶链反应对人类白细胞抗原的基因分型

目的 探讨应用于移植的人类白细胞抗原（ＨＬＡ）二类基因（ＤＲＢ／ＤＱＢ）快速分型新技术。方法 采用快速ＤＮＡ抽提技术,建立了ＨＬＡ＿ＤＲＢ／ＤＱＢ微量序列特异性引物聚合酶链反应基因分型方法,对１４２份供受者ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型,并与单克隆抗体一叔法ＨＬＡ血清学分型技术进行对比研究。结果 应用微量ＰＣＲ－ＳＳＰ方法共检出１３种ＤＲＢ１等位基因和 ＤＱＢ１等位基因,与血清学分型结果     

HLA—DR基因反义RNA导入脐血干／祖细胞对HLA—DR抗原表达的影响

目的：探讨组织相容性抗原Ⅱ类（ＭＨＣ－Ⅱ）基因反义ＲＮＡ是否可调控脐血细胞ＭＨＣ－Ⅱ类基因的表达及降低脐血细胞的免疫原性和脐血细胞移植时发生移植物抗宿主反应（ＧＶＨＲ）的程度。方法：应用分子克隆技术构建了含人ＨＬＡ－ＤＲβ基因的逆转录病毒表达载体，经过狭缝杂交、电泳、酶切分析鉴定，获得了ＨＬＡ－ＤＲβ基因反义ＲＮＡ重组体，用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（脂质体）将重组体导入包装细胞ＰＡ３１７。结果：产重组病毒的细胞ＰＡ３１７的病毒滴度可达１×１０５ｃｆｕ／ｍｌ。用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）可从转染的脐血干细胞中扩增出ＤＲ－β基因ｃＤＮＡ，说明反义ＲＮＡ重组体目的基因已有效表达。用流式细胞仪测定转染的脐血细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原阳性细胞率为２８％（对照组为４５％），其抑制率为３８．２％。结论：导入脐血干细胞的ＨＬＡ－ＤＲ基因反义ＲＮＡ重组体成功地降低了其ＨＬＡ－ＤＲ抗原的表达程度，为临床上降低脐血移植的ＧＶＨＲ提供了理论依据和实验基础。     

足叶乙甙诱导HL-60细胞凋亡过程中电化学行为的研究

目的研究药物诱导白血病细胞凋亡中的电化学变化及其意义。方法使用电化学传感器检测经足叶乙甙（Ｖｐ１６）诱导的ＨＬ６０细胞凋亡。结果２～２００μｇ／ｍｌＶｐ１６作用于ＨＬ６０细胞２４小时的过程中,随着药物剂量的增大,细胞峰值电流逐渐降低,Ｖｐ１６２μｇ／ｍｌ时即可观察到细胞电化学活性较对照组下降,２０μｇ／ｍｌ时明显下降。以Ｖｐ１６２００μｇ／ｍｌ诱导细胞凋亡,通过ＤＮＡ含量分析显示在２,３,４小时细胞凋亡率为１０．５％～２０．０％,用电化学传感器方法检测细胞电化学活性改变差异明显,峰值电流从１．８μＡ降至０４μＡ,４小时时峰值电流降至用药前的１／５。结论在细胞凋亡早期启动阶段的电化学信号改变具有一定的早期意义和蓄积性。     

CD3AK细胞治疗晚期恶性肿瘤疗效观察

为探索肿瘤免疫治疗的新方法，我们应用ＰＨＡ（１０μｇ／ｍｌ），ｒＩＬ－２（５００Ｕ／ｍｌ）和ＣＤ３Ａｂ（抗ＣＤ３单克隆抗体，２００ｎｇ／ｍｌ）共同激活，ｒＩＬ－２（５００Ｕ／ｍｌ）维持培养的自体人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）－ＣＤ３ＡＫ细胞治疗晚期恶性肿瘤，结果显示：（１）治疗有效率（ＰＲ＋ＭＲ）为３６．３６％，（２）治疗后Ｔ细胞亚群中ＣＤ８＋下降（Ｐ〈０．０５），ＣＤ３＋，ＣＤ４＋以及ＣＤ４＋／Ｃ     

WT1基因表达对K562、HL-60细胞增殖作用的研究

目的：探讨ＷＴ１基因反义ＲＮＡ对髓系白血病细胞生长增殖和细胞凋亡的影响及作用机制。方法：用ＷＴ１基因反义ＲＮＡ培养Ｋ５６２、ＨＬ６０细胞，用氮蓝四氮唑盐染色、流式细胞仪检测、逆转录聚合酶链反应等方法观察细胞增殖、凋亡、细胞动力学和基因表达情况。结果：ＷＴ１反义ＲＮＡ可以特异性抑制Ｋ５６２细胞增殖，诱导Ｋ５６２、ＨＬ６０细胞凋亡；对ＨＬ６０细胞的增殖无影响，对ＷＴ１、ｂｃｌ２、ｍｄｍ２基因表达无显著影响。结论：ＷＴ１基因与白血病细胞的增殖、凋亡密切相关，对白血病细胞凋亡的影响与ｐ５３、ｂｃｌ２基因无关。     

WT1反义寡核苷酸对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的 了解ＷＴ１反义寡核苷酸对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法 应用ＷＴ１基因的反义寡核苷酸（ＷＴ１ＡＳＯ）处理Ｋ５６２、Ｕ９３７、ＨＬ－６０细胞系,白血病患以及正常人骨髓细胞,然后以台盼蓝拒染法、细胞集落法及流式细胞仪检测法确定白血病细胞的增殖和凋亡。结果 ＷＴ１ ＡＳＯ能够抑制ＷＴ１表达阳性的Ｋ５６２细胞生长,对ＷＴ１表达阴性的Ｕ９３７细胞则无抑制作用;ＷＴ１ ＡＳＯ对８例急性髓系白血病患     

多药耐药基因反义寡核苷酸逆转肿瘤细胞耐药的初步研究

目的：克服肿瘤细胞的多药耐药（ＭＤＲ）。方法：用人工合成互补于ｍｄｒ１基因５′端转录起始部位的反义寡核苷酸（ＯＤＮ），直接转染耐药细胞株ＫＢ－８－５细胞，或以脂质体ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ为载体进行基因转染实验，通过ＭＴＴ法检测细胞对柔红霉素（ＤＮＲ）的敏感性，流式细胞仪分析细胞内ＤＮＲ含量及免疫组化方法确定细胞表面糖蛋白（Ｐｇｐ）的表达水平。结果：ＯＤＮ可增加ＫＢ－８－５细胞内的ＤＮＲ浓度从而提高耐药细胞对ＤＮＲ的敏感性，ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ进一步加强上述作用。在ＤＮＲ浓度为３．０ｍｇ／Ｌ组中，约有７４．４３％的被转染细胞对ＤＮＲ敏感而致死，基本达到药物敏感细胞株ＫＢ－３－１的水平。ＯＤＮ转染的ＫＢ－８－５细胞的Ｐｇｐ为弱阳性表达，低于阳性对照ＫＢ－８－５细胞的Ｐｇｐ表达水平。结论：ＯＤＮ的逆转作用可能与其互补结合的ｍｄｒ１ｍＲＮＡ降解或直接阻滞了Ｐｇｐ合成使其表达降低有关。