转基因小鼠常见传染病血清学液相芯片技术多重检测方法的建立

目的制备小鼠MHV、LCM、ECT和HANT液相芯片,建立转基因小鼠传染病抗体的xMAP多重检测方法。方法将荧光微球分别与小鼠MHV、LCM、ECT和HANT蛋白进行偶联,并且对最佳蛋白偶联量、检测抗体最佳工作浓度和Streptavidin-PE最佳工作浓度进行优化,制备小鼠MHV、LCM、ECT和HANT液相芯片,对56个转基因小鼠血清样品、阴性血清、阳性血清和质控血清进行xMAP多重检测。并应用传统的ELISA方法对xMAP检测结果进行验证。结果 1)小鼠MHV、LCM、ECT和HANT蛋白的最佳偶联量分别为20μg、20μg、40μg和20μg,检测抗体最佳浓度分别为2μg/mL、2μg/mL、2μg/mL和4μg/mL;Streptavidin-PE抗体最佳浓度均为2μg/mL;(2)xMAP检测结果显示,14号、23号、55号和56号转基因小鼠血清MHV MFI值和index值均高于质控血清,其余小鼠血清的MFI值和index值均低于质控血清,表明14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV抗体阳性,其余小鼠MHV、LCM、ECT和HANT抗体阴性;(3)ELISA检测结果显示,14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV A450值和index值均高于质控血清,其余小鼠血清的A450值和index值均低于质控血清,表明14号、23号、55号和56号转基因小鼠MHV抗体阳性,其余小鼠MHV、LCM、ECT和HANT抗体阴性,该ELISA检测结果与xMAP检测结果相一致。结论建立的xMAP多重检测技术可应用于转基因小鼠的传染病检测。     

液相芯片技术的原理与应用进展

液相芯片是20世纪90年代中期发展起来的被喻为后基因组时代的新型芯片技术,具有高通量、灵活、快速、准确、重复性好、操作简便等众多优点,可用作蛋白质和核酸等生物分子的高通量检测平台。本文简要介绍其原理、优点,并对该技术在基础研究、临床诊断等方面的应用进展作一综述。     

液相芯片检测轮状病毒和诺如病毒方法的建立

目的建立一种多重PCR结合液相芯片技术同时检测A型轮状病毒、GI型诺如病毒和GII型诺如病毒的方法。方法建立多重PCR扩增方法,将PCR产物与偶联核酸探针的微球混合物进行杂交,利用Luminex 200液相芯片检测仪来检测杂交结果。对建立的A型轮状病毒、GI型诺如病毒和GII型诺如病毒液相芯片检测方法进行灵敏度、干扰性分析,并应用该方法对68份粪便样品的核酸进行检测。结果灵敏性实验结果表明,该方法对GII型诺如病毒的检测灵敏度较高,检出限为10 pg/PCR;对轮状病毒的检出限为100 pg/PCR;该方法对GI型诺如病毒的检测灵敏度较低,检出限为1 ng/PCR。干扰性实验结果表明,轮状病毒、GI型诺如病毒和GII型诺如病毒的液相芯片检测,当病毒之间的模板量不同时(1∶1、1∶2、2∶1、1∶5、5∶1、1∶10、10∶1、1∶100、100∶1),仍能够准确检测;对68份临床粪便样品的核酸进行检测,检测出A型轮状病毒样品19份,GI型诺如病毒样品1份,GII型诺如病毒样品18份;轮状病毒和GII型诺如病毒混合感染1份,GI和GII型诺如病毒混合感染1份。结论本研究建立的轮状病毒和诺如病毒液相芯片检测方法通...     

3个肿瘤标志物联合检测液相芯片系统的建立

目的 探讨建立多个肿瘤标志物联合检测的luminex液相芯片检测方法.方法 应用配对好的AFP、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth facto,VEGF)、细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN/CD 147)3对单克隆抗体建立3个肿瘤标志物联合检测的luminex液相芯片检测体系并评估其敏感性,交叉反应并将其应用于血浆样本的检测.结果 3对抗体在luminex液相芯片系统中无交叉反应,敏感性分别为AFP 64 pg/ml、CD147 40 pg/ml、VEGF4 pg/ml.应用该体系检测了40例HCC患者,分别为AFP[6.5 (2.8,240.0)]ng/ml,CD147 (4.11 ±0.90) ng/ml,VEGF[40 (20,50)]pg/ml;40例健康对照组,分别为AFP [0.3 (0.1,1.0)]ng/ml,CD147(2.98±0.80)ng/ml,VEGF[10(0,10)]pg/ml.3个肿瘤标志物在肝癌患者外周血中的浓度显著高于正常对照组(P＜0.05).结论 成功建立高敏感性的3个肿瘤标志物联合检测的液相芯片检测体系.     

Luminex液相芯片同时检测tPSA和fPSA方法的建立与评价

 目的 建立用Luminex液相芯片技术同时测定前列腺特异性抗原（total prostate specific antigen,tPSA）和游离前列腺特异性抗原（free prostate specific antigen,fPSA）的方法,并对该方法进行评价。方法 制备抗体交联微球及藻红蛋白标记二抗,用双抗体夹心法对临床血清标本进行测定,并与ELISA方法进行比较。结果 Luminex液相芯片技术同时测定tPSA、fPSA与ELISA测定结果高度相关。Luninex方法测定tPSA的灵敏度为0.03 ng/L,批内精密度为4.38%~5.86%,批间精密度为3.40%~6.73%;测定fPSA的灵敏度为0.013 ng/L,批内精密度为5.08%~7.94%,批间精密度为3.77%~5.74%。结论 Luminex方法同时测定tPSA、fPSA具有灵敏度高、重复性好、系统误差小等优点,具有广泛的临床应用前景。     

液相芯片技术定量检测人血清PSA反应模式的建立

目的 建立利用液相芯片技术定量检测人血清中前列腺特异性抗原的反应模式,并对该方法进行评价.方法 应用液相芯片技术检测50例前列腺增生患者血清中的前列腺特异性抗原(PSA),评价该方法的线性范围、最低检测限、精密度等指标,并将结果与化学发光免疫分析法(CLLA)进行相关性分析.结果 液相芯片技术检测PSA标准曲线的线性范围为0.022～129.6ng/mL,PSA的最低检测限为0.018ng/mL,检测PSA的批内CV为2.18%～2.28%,批间CV为1.61%～4.18%.用液相芯片技术和化学发光法分别对受检血清标本进行PSA定量分析,结果表明两法差异无显著性(P>0.05),r=0.9984,相关性良好.结论 液相芯片技术具有线性范围广、灵敏度高、重复性好、节省样品和时间等优点,具有临床应用潜力.     

液相芯片分析技术及其应用简介

液相芯片是近年来兴起的一种新型的检测技术,它集中了分子生物学、免疫学、高分子化学、激光检测技术、微流体技术、计算机技术等方面的先进技术。本文主要介绍了液相芯片分析技术的检测原理、检测方法及分析仪器Luminex100的结构,并简要介绍了其在基础研究及临床检测方面的应用。     

兔胆红素钙结石成石过程中血清、胆汁免疫球蛋白和胆囊免疫球蛋白分泌细胞含量的变化

为动态观察胆红素钙结石成石过程中免疫球蛋白的变化,探讨在成石过程中免疫球蛋白的作用,将100只日本大耳白兔随机分为正常对照组(Con组,n=10),胆道不全梗阻组(BO组,n＝45)和胆道不全梗阻加感染组(BOI组,n＝45),动态检测实验组术后3、7、14和20天的胆汁,血清免疫球蛋白(Ig) 及胆囊Ig分泌细胞的含量,并比较其变化.结果:实验组各时相血清IgA浓度均明显高于Con 组(P＜0.001),血清中IgG浓度随结石形成增加而逐渐升高.胆汁细菌培养阴性者胆汁中IgA和IgG浓度高于Con组(P＜0.05),胆汁细菌培养阳性者胆汁中Ig浓度略低于Con组 .Con组兔胆囊粘膜存在少量的Ig分泌细胞,BO组胆囊粘膜IgG和IgA分泌细胞无明显变化,B OI组Ig分泌细胞明显高于Con组(P＜0.001),以IgG分泌细胞最为明显.以上结果提示 :兔胆红素钙结石成石过程中,血清和胆汁Ig有明显改变,而胆汁中Ig的含量与细菌感染密切相关,IgA在成石过程中起着主要作用.     

葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌肠毒素液相悬浮芯片方法的建立

目的 采用Luminex液相悬浮芯片检测方法,建立一管同时检测19种葡萄球菌肠毒素和蜡样芽胞杆菌肠毒素的快速筛查方法.方法 根据GenBank公布的葡萄球菌肠毒素entA-entR基因、蜡样芽胞杆菌cesB,nheB基因,设计特异性引物和探针,优化反应体系和条件,建立19种肠毒素的Luminex液相悬浮芯片检测法.结果 Luminex液相悬浮芯片体系检测19种肠毒素互不干扰,经验证80株金葡菌和蜡样芽胞杆菌菌株,均出现特异性荧光中值信号.Luminex液相悬浮芯片技术从样品处理到检测结果需3.5h左右.结论 Luminex液相悬浮芯片筛查方法可应用于食物中毒等应急检测的快速和高通量筛查.     

乌鳢血清免疫球蛋白IgM的分离纯化及其兔抗血清的制备

目的分离纯化乌鳢血清免疫球蛋白,并制备其兔抗血清。方法用Protein A亲和层析的方法纯化乌鳢血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,测定其重链、轻链的分子量,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价。结果纯化了乌鳢血清免疫球蛋白,SDS-PAGE测定其重链和轻链的相对分子质量分别为78×103和27×103左右,免疫双扩散法测定兔抗乌鳢免疫球蛋白抗血清效价为1∶32。结论成功纯化了乌鳢免疫球蛋白,制备了兔抗乌鳢IgM抗血清,为研究乌鳢的免疫机制、建立乌鳢的血清学检测系统奠定了基础。     

液态芯片检测多种肿瘤标志物在胃癌中的应用

目的①通过液态芯片（liquid Chip）技术检测胃癌（gastric callcer）患者和正常人群血清中多种肿瘤标志物（tumor markers）表达的差异;妫：讨运用液态芯片技术进行血清肿瘤标志物联合检测对胃癌的诊断价值。方法应用多肿瘤标志物液态芯片检测系统,检测82例胃癌患者和82例正常对照者血清中4种常见肿瘤标志物。结果①胃癌组CEA、CA125、CA242、CYFRA211表达水平均显著高于正常对照组,差异有统计学差异意义（P〈0．05）;②胃癌组CEA、CA125、CA242、CYFRA211联合检测的阳性率是73．2％,而胃癌组单项检测CEA、CA125、CA242、CYFRA211的阳性率分别为41．5％、31．7％、37．8％、29．3％,均显著低于联合检测的阳性率（P〈0．01）。结论血清CEA、CAl25、CA242、CYFRA211是胃癌辅助诊断的理想指标;应用液态芯片技术联合检测肿瘤标志物CEA、CAl25、CA242和CYFRA211有利于提高检出阳性率。     

兔VX2肺癌模型的建立及MSCT观察

目的：探讨肺内注入组织块悬液建立兔VX2肺癌模型的方法。方法：将VX2肿瘤组织块悬液注入12只中国大耳白兔右肺下叶内。利用CT扫描观察肿瘤生长和胸腔内转移情况,同时观察动物的一般情况。结果：建立的兔VX2肺癌模型组织学表现与荷瘤种兔相同。接种成功率为100%,胸壁种植率为8.3%,实验动物自接种到CT扫描发现肿瘤生长的时间为（7±1.5）d,从发现肿瘤生长到出现右侧胸腔积液间隔（8±1.6）d。12只中国大耳白兔自然存活时间为（27±4.7）d。结论：采用组织块悬液肺内注入法建立兔VX2肺癌模型方法简便,接种成功率高,是建立兔VX2肺癌模型的理想方法。     

细胞悬液法与组织块埋植法制作兔VX2肝癌影像模型的对照研究

目的：通过对照细胞悬液法与组织块埋植法,选择较合理的兔VX2肝癌模型的造模方法。方法：取传代荷瘤VX2种兔,分离肿瘤,制备肿瘤细胞悬液和肿瘤组织块,取新西兰大白兔各10只,分别经超声导引肝内注射和开腹肝内组织块埋植,3周后处死模型兔,观察原位肿瘤大小,肝内、腹腔及肺部转移情况。结果：两种方法造模,成模率均为100%;组织块埋植法组原位肿瘤体积明显大于细胞悬液组;组织块埋植造模较少引起异位种植,肿瘤生长较为均一。结论：组织块埋植法优于细胞悬液法。     

CK 7CK20 CA125及TTF-1在液基细胞学腺癌细胞中的表达及意义分析

目的:研究CK7、CK20、CA125及TTF-1在液基细胞学腺癌细胞中的表达情况并分析其临床意义.方法:选取从2015年2月至2016年3月,我院病理科经组织学确诊为腺癌的浆膜腔积液标本137例,利用液基薄层细胞学制片技术以及免疫细胞化学染色方法,观察不同组织来源腺癌细胞的CK7、CK20、CA125及TTF-1等抗体的表达情况.结果:CK7在肺腺癌的阳性率100%,卵巢浆液性癌大部分表达,肠道腺癌个别阳性;CK20在肠道腺癌中的表达阳性率为88.89%(32/36),在肺腺癌及卵巢浆液性癌中未见表达;CA125在卵巢浆液性癌中表达率为70.45%(31/44),在肺腺癌以及肠道腺癌中表达较少;TTF-1在肺腺癌中的表达阳性率为80.70%(46/57),在卵巢浆液性癌及肠道腺癌中未见表达,差异均有统计学意义(均P<0.05).低分化肺腺癌中TTF-1表达阳性率显著低于中高分化,差异均有统计学意义(均P<0.05).低分化卵巢浆液性癌中CA125表达阳性率显著低于中高分化,差异有统计学意义(P<0.05).低分化肠道腺癌中CK20表达阳性率显著低于中高分化,差异有统计学意义(P<0.05).结论:CK7、CK20、CA125及TTF-1在液基细胞学腺癌细胞中的表达情况有利于鉴别浆膜腔积液中来自肺、卵巢以及肠道的腺癌.     

实验猴身份自动识别、自动捕捉、电子芯片数据信息管理系统的研制

目的通过电子芯片植入与识别技术和计算机管理系统对接,建立每只实验猴的数据档案,其中包括遗传谱系、生理数据、实验记录。方法通过建立实验猴的电子通道,以非接触方式通过计算机管理,应用射频识别信号系统,实现实验猴身份快速自动识别、自动捕捉、数据读写、电子档案信息管理、数据远程传输的目的,减少人为因素对实验猴的干扰和引起的应激反应。结果该系统的建立极大的减少了实验和饲养实验猴过程中捕捉猴的困难,身份识别困难,减少了对工作人员和实验猴的伤害,减轻了工作量,减低了人为因素对实验结果的干扰和动物应激反应对实验数据的影响。电子档案具有终身有效,随猴携带,全球唯一序列号,不可复制,不可仿制,标签唯一性。结论实验猴身份自动识别、自动捕捉、电子芯片数据信息管理系统的研制成功,为实验动物个体电子档案建立和群体数据库的管理提供了一种高速、有效、科学、可靠的计算机管理手段,改变通道模式即可应用于大型凶猛动物或不适合人接触捕捉动物的识别和管理,具有广泛的应用前景,目前在国内外尚无同类系统。