心肌细胞钙的电子显微镜放射自显影和冷冻复型放射自显影实验

[目的 ]从形态学角度进一步研究钙离子在心肌细胞中的转运机制和分布规律 .[方法 ]以放射性钙离子为放射源 ,利用电子显微镜放射自显影和冷冻蚀刻 电子显微镜放射自显影方法对小鼠心肌细胞进行研究 .[结果 ]电子显微镜放射自显影实验结果显示 ,正常组的线粒体嵴完好 ,缺血对照组的线粒体肿胀 ,嵴不完整 ;腺苷三磷酸氯化酶组的线粒体较缺血对照组破坏较轻 ,嵴较完整 ;同位素标记的正常、缺血对照组、腺苷三磷酸氯化酶组中可观察到菊花状的银丝团散布于组织切片上 ,且主要分布于内质网和线粒体上 ,缺血对照组的线粒体上有较多的银丝团 .冷冻复型 电子显微镜放射自显影结果显示 ,缺血对照组细胞核膜的E片劈裂面和P片劈裂面上核孔稀少 ,分布不均匀 ;腺苷三磷酸氯化酶组质膜蛋白颗粒丰富 ,且分布均匀 ;在各组复型膜上可见到菊花状银丝团 .缺血缺氧时细胞质膜蛋白颗粒减少 ,提示做为钙通道的糖蛋白受体减少 ,而此时线粒体钙却增加 .[结论 ]钙离子的进入更多地依赖于钠、钙交换 ,而不是钙通道 .高能磷酸盐制剂改善了细胞膜的功能 ,防止了钙离子在线粒体内的聚集 .     

放射自显影在移植器官低温保存研究中的应用

目的：研究外源笥三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）是否能够进入低温保存大鼠肝脏细胞内。方法：采用大鼠肝脏持续低温机器灌流保存模型,利用放射自显影技术判定[α-^32P]ATP是否进入细胞内。结果：灌流液中不加[α-^32P]ATP的A组光镜照片显示大鼠肝细胞内外均未见特异性标记银粒显影,而灌流液中含37MBq[α-^32P]ATP的B组光镜照片显示大鼠肝细胞内可见多个大小不等的[α-^32P]ATP自显影银粒分布,而肝窦及肝小叶中央静脉等血管内则几乎无黑色自显银粒分布。结论：外源性ATP能够进入低温保存大鼠肝细胞内。     

放射自显影和高速闪烁自显影在中枢神经系统中的应用

本文选用30只猫和20只大白鼠进行了放射自显影及高速闪烁自显影联合应用的研究。将~3H—亮氨酸分别注入猫和大白鼠的中枢神经核团内,并严格按照放射自显影神经追踪术和高速闪烁自显影程序制备标本。结果放射自显影神经追踪术具有敏感性高、定位精确、神经元处于生理状态下进行实验等优点。同时结合高速闪烁自显影可早期判断注射位点。关于标记物的注人我们认为以高浓度、小体积,慢匀速注射为好。本文还对动物存活期,冰冻切片等问题进行了讨论。     

~3H-ATP-MgCl_2,~3H-ATP-Mg~(2+)和~3H-ATP在心肌组织自显影的研究

利用放射自显影术从形态学上观察~3H-ATP-MgCl_2、~3H-ATP-Mg~(2+3)H-ATP在正常和缺血氧心肌组织、细胞超微结构中的分布规律.结果表明.~3H-ATP-Mg~(2+)、~3H-ATP-Mg~(2+)和~3H-ATP在缺血缺氧心肌超微结构中均有分布,但三者均以线粒体内为多.从银粒数目上看,~3H-ATP-MgCl_2和~3H-ATP-Mg~(2+)较~3H-ATP多.外源性ATP对缺血氧心肌细胞有保护作用,而且外源性ATP对缺血缺氧心肌细胞的作用基点可能在线粒体上.     

电针“足三里”对脾虚大鼠心肌细胞AMPK-线粒体通路的影响

目的观察电针"足三里"对脾虚大鼠心肌细胞线粒体能量代谢、线粒体自噬的影响。方法 48只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、足三里组、非经非穴组,每组12只。采用三因素复合法复制脾虚证模型,持续14 d。足三里组针刺大鼠双侧足三里穴,非经非穴组针刺大鼠双侧髂嵴上非经非穴点,电针治疗10 d。高效液相色谱法检测大鼠心肌细胞三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)以及磷酸腺苷(AMP)的含量;Western blotting法检测大鼠心肌细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、微管相关蛋白1轻链3-I(LC3-I)以及LC3-II蛋白的表达;利用透射电镜观察大鼠心肌细胞线粒体及线粒体自噬体的超微结构。结果与正常对照组相比,模型组、足三里组以及非经非穴组大鼠心肌AMP/ATP、LC3-II/LC3-I均明显上调(P﹤0.01);模型组大鼠心肌p-AMPK/AMPK有所上调(P﹤0.05),足三里组大鼠心肌p-AMPK/AMPK显著上调(P﹤0.01)。与模型组相比,足三里组大鼠心肌LC3-II/LC3-I显著上调(P﹤0.01)。模型组大鼠心肌线粒体损伤明显,足三里组线粒体损伤有所改善,见大量的线粒体自噬体。结论电针"足三里"可能通过激活脾虚大鼠心肌细胞AMPK,调节线粒体能量代谢、提高线粒体自噬水平,对脾虚大鼠起到干预作用。     

皮肤污染钚去污后组织放射自显影研究

根据鲍埃德(G.Boyd)记载,1904年伦敦(E.S.London)在圣彼德堡皇家实验医学院第一次把放射自显影应用于生物学上的研究。自1940年放射自显影技术及其应用的范围与成就大有增加。但专门关于皮肤污染钚的组织放射自显影的文献报告,国外较少,1958年N.L.Dochum和A.C.Case曾有过报告,国内至今没有报告。本文应用国产核—2液体乳胶法放射自显影术,测定皮肤污染钚去污后的残余放射性,探讨了皮肤污染钚组织放射自显影的有关技术问题,同时也为皮肤污染钚的去污效果评价提供一个重要的指标和方法。     

整体放射自显影切片技术的改进

整体放射自显影术发展于70年代,现已成为研究化学物质在体内代谢分布的重要手段。在冷箱内制备整体放射自显影实验标本时,必须使用粘合胶带才能得到完整的动物切片标本。国内各医学研究的自显影实验室,均采用进口塑料粘合胶带,或使用国产聚酯薄膜手工涂上一层“曙光”粘合剂。进口胶带价格昂贵,自制胶带由于粘合剂手工涂布厚薄不匀,影响切片标本制备质量。为此,我们选用国内市售商品胶粘带,试用于放射自     

改良浸沾法涂布Hw-4乳胶的电镜放射自显影技术

电子显微镜与放射自显影相结合的电镜放射自显影技术(EM—ARG),是直接研究细胞超微结构与生理功能相互关系的重要方法。由于电镜性能的限制,只能使用低能β放射性核素,因此单分子层乳胶膜制备的成功与否是EM—ARG成败的关键之一。为此人们创立了滴加法、浸沾法、平基法、环套法和喷涂法等多种制膜方法。但各厂家生产的乳胶物理性能不一,国内有报道用Hw-4以改良平基法制备出单分子层乳胶膜。笔者采用的是改良浸沾法,具体     

大鼠脑损伤后脑组织腺苷A1受体的放射自显影研究

腺苷是中枢神经系统中一种重要的内源性保护因子。通过腺苷 A1 受体介导 ,可抑制多种兴奋性神经递质释放及神经元的激活 ,对缺血性脑损伤和颅脑外伤有明显的保护作用 [1 ,2 ] 。本研究采用放射自显影方法 ,观察大鼠液压脑损伤后大脑皮质、海马、小脑等部位腺苷 A1 受体密度的变化 ,探讨腺苷 A1 受体在脑外伤中的作用机制 ,为腺苷及其类似物治疗颅脑损伤提供实验依据。1　材料和方法1.1　主要试剂与器材　 3H-环已基腺苷 (3H- CHA ) :0 .74TBq/ mm ol,腺苷 A1 受体配体 ;腺苷脱氨酶 (ADA ) ;环已基腺苷 (CHA ) ,均为 Sigma公司产品。…     

线粒体自噬在心肌梗死中的作用及研究进展

心肌梗死(MI)是指营养心脏的冠状动脉发生病变后,灌注血流急剧减少或中断,使心肌出现持久而严重的急性缺血缺氧导致的心肌缺血性坏死。心肌梗死患者心肌损伤的机制亟待明确,寻找干预靶点具有重要的临床价值。线粒体作为提供能量的细胞器,是心肌细胞内的主要能量来源,负责三磷酸腺苷(ATP)生成和能量代谢,线粒体完整性和功能的丧失是改变心脏结构和功能的重要病理因素,是心肌细胞不断收缩和舒张的关键保障。心肌梗死时线粒体功能异常是心肌损伤的重要机制,线粒体质量控制是指线粒体在生成与清除之间维持平衡,对维持细胞的生存及功能显得尤为重要。线粒体自噬与神经退行性疾病、心血管疾病、癌症等多种疾病相关。线粒体自噬是以损伤的线粒体作为自噬底物的一种选择性自噬,在心血管功能稳态的维持中具有重要作用。心肌缺血时,心肌细胞发生线粒体损伤,而线粒体自噬能通过促进降解和回收受损的线粒体以进行线粒体质量控制,进而保护缺血的心肌细胞。对于正常心肌细胞来说,足够的线粒体生成能够保证充足的能量供应;但当外界刺激导致线粒体损伤时,如果受损线粒体未及时清除造成堆积,会造成心肌细胞氧化应激损伤甚至引起细胞凋亡。线粒体自噬过程复杂,涉及诸多...     

关于轴浆运输放射自显影术(讲座)

轴浆运输放射自显影术(ARNT),辣根过氧化酶逆行标记法(HRP)及组织荧光技术(HF),可称当今神经解剖学三大技术。由于这些新技术的出现,使十年前沉闷的神经解剖学研究重新振兴起来,促成神经科学领域的知识爆炸性地扩展。辣根过氧化酶法已在国内普遍展开,放射自显影术也必将在国内推广,本文仅就轴浆运输放射自显影术的基本概念与国外研究的某些进展,加以概括介绍。     

腺苷三磷酸-氯化镁对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

[目的 ]通过观察肾脏组织中钠钾 腺苷三磷酸酶和钙 腺苷三磷酸酶活性和病理组织学变化 ,探讨腺苷三磷酸 氯化镁对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用机理 .[方法 ]将大鼠随机分为 3组 ,分别用生物化学方法观察再灌注 0h ,2h ,6h的钠钾 腺苷三磷酸酶和钙 腺苷三磷酸酶活性的变化以及组织病理学变化 .[结果 ]腺苷三磷酸 氯化镁组和对照组肾小管上皮细胞变性、坏死数低于缺血再灌注组 ,而腺苷三磷酸 氯化镁组和对照组之间无显著性差异 .钠钾 腺苷三磷酸酶和钙 腺苷三磷酸酶的活性在腺苷三磷酸 氯化镁组和对照组之间无显著性差异 ,但两组均高于缺血再灌注组 .[结论 ]腺苷三磷酸 氯化镁对大鼠肾脏缺血再灌注损伤有保护作用 .     

高速放射自显影术的改进及临床应用

放射自显影技术是同位素示踪研究的一种较好手段,在许多领域里已有较广泛的应用,在实验血液学和细胞动力学方面,尤其是一个重要的研究手段。目前应用的放射自显影技术由于曝光时间较长(一般需7～10天或更长时间),致使临床应用受到很大限     

慢性缺氧小鼠心肌酶组织化学分析及超微结构观察

目的 探讨慢性缺氧对心肌酶的含量和眼微结构的改变。方法 ３０只小鼠随机分为３组；正常对照组，吸入１５％低氧混合气组和复方丹参注射组。实验２周后，取新鲜心肌标本，测琥珀酸脱氢酶，三磷酸腺苷酶，乳酸脱氢酶，光镜，电镜观察心肌病理性变化。结果 缺氧组ＳＤＨ，ＡＴＰ酶减少，ＬＤＨ升高，心肌间质水肿，心肌细胞线粒体肿胀，肌丝排列紊乱。     

同型半胱氨酸通过抑制心肌线粒体自噬诱导线粒体损伤

本研究旨在探究同型半胱氨酸(Hcy)与心肌细胞线粒体自噬及线粒体损伤的关系。通过高蛋氨酸饮食法构建高同型半胱氨酸血症(HHcy)大鼠模型,利用免疫荧光共定位染色法和Western blot检测HHcy大鼠心肌的线粒体自噬水平。运用透射电镜观察HHcy大鼠心肌的线粒体形态结构的改变。体外培养H9C2细胞,用Hcy刺激H9C2,利用流式细胞术和JC-1染色法检测线粒体膜电位(MMP)的改变。采用18F-FDG PET/CT在体心肌代谢成像技术检测心肌葡萄糖摄取情况以及直接检测心肌组织的三磷酸腺苷(ATP)含量来评价HHcy大鼠心肌的能量供应情况。结果显示,与正常对照组相比,在HHcy大鼠模型心肌组织中,线粒体自噬水平降低;线粒体排列紊乱,轮廓模糊,膜破损溶解,嵴消失;Hcy刺激的H9C2细胞,线粒体膜电位降低,膜结构完整性受损。HHcy大鼠心肌葡萄糖摄取率增加,ATP含量下降。结果提示,同型半胱氨酸可通过抑制心肌线粒体自噬诱导线粒体损伤。     

放射自显影在受体定位研究中的应用

本文在对~3H-DHA与冰冻组织切片中β肾上腺素能受体结合特性研究的基础上,应用放射自显影的方法,确定了β受体在豚鼠肺各组织结构中的分布,并探讨受体定位研究的应用价值。     

放射自显影慢曝光和高速曝光方法的比较

目的 在放射自显影中，比较闪烁液加速曝光与普通慢曝光的结果．结果 用氚标记的氨基酸和氚标记的脱氧葡萄糖进行放射自显影，分别对切片进行常规的慢光曝（８周）和用闪烁液加速曝光的高速曝光（１０ｈ）。结果 慢曝光和高速曝光两种处理的片切所显示的结果没有显著差别。结论 通过闪烁液来加速曝光，可以大大缩短放射自显影的实验周期。     

促红细胞生成素对幼兔心肌缺血再灌注损伤的实验研究

目的 研究不同剂量促红细胞生成素(EP0)对幼兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法 32只幼兔随机分成对照组(A组)、3 000 U/kg EP0预处理组(B组)、5 000 U/kg EP0 预处理组(C组)和7 000 U/kg EP0 预处理组(D组),每组8只.B、C、D组均提前24 h腹腔注射EPO,A组腹腔注射2 ml生理盐水.建立Langendorff幼兔离体心脏灌注模型,测定缺血前和缺血再灌注120 min时的冠状动脉流量、心排血量、左心室收缩压和左心室舒张期末压.收集缺血再灌注60 min时的冠脉流液2 ml,检测肌酸激酶和乳酸脱氢酶的含量.取缺血再灌注后心肌,测定心肌含水量、心肌丙二醛含量、心肌三磷酸腺苷及磷酸肌酸含量;测定缺血前和缺血再灌注120 min时心肌细胞线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性.结果 缺血再灌注后B、C、D组心功能恢复明显优于A组(P < 0.05).B、C、D组的心肌含水量及心肌乳酸脱氢酶、肌酸激酶、丙二醛含量均显著低于A组(P <0.05),B、C、D组心肌三磷酸腺苷、磷酸肌酸含量及心肌细胞线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性均显著高于A组(P <0.05).C、D两组间比较,各项生化指标及心功能恢复均无显著性差异,但C、D组的心肌保护作用明显优于B组(P < 0.05).结论 EPO预处理可显著降低未成熟心肌缺血再灌注损伤,具有良好的心肌保护作用.     

戊巴比妥钠诱导心力衰竭心肌细胞损伤模型的构建及鉴定

目的:探讨戊巴比妥钠诱导心力衰竭相关的H9c2大鼠心肌细胞损伤模型的制作并明确相关机制。方法:不同浓度不同造模时间戊巴比妥钠对H9c2心肌细胞进行干预,利用透射电镜检测细胞超微结构、三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)、细胞凋亡、自噬等细胞改变。结果:模型组(戊巴比妥钠干预组)线粒体可见肿胀边缘不清、内膜破裂、嵴断裂等改变,并伴随自噬小体增多。模型组ATP含量显著减少(P<0.01),ROS水平明显增加,细胞凋亡率显示出增长趋势(P>0.05)。结论:戊巴比妥钠诱导的H9c2心肌细胞损伤模型符合心衰心肌细胞病理改变,明确戊巴比妥钠对心肌细胞的影响,可为体外心衰模型的研究提供基础理论。     

血清铁蛋白放射火箭免疫电泳自显影测定法

铁蛋白在血清中含量甚微,采用一般生化方法不能测定。近年来国外多采用放射免疫分析法(包括双抗体法,固相法)。因其有灵敏度高特异性强等优点,由于一般放射免疫测定法因需要昂贵同位素设备故不易于普及推广。近年来我们在铁蛋白的提取鉴定及其特异性抗体制备取得初步成果的基础上,根据放射免疫原理,参考αFP放射火箭免疫电泳自显影法,初步建立了血清铁蛋白放射火箭免疫电泳自显影的测定法。迄今国内外尚未见应用此法测定人血清铁蛋白的报导,现将具体方法及其实验结果介绍如下: