CXCR4单克隆抗体抑制乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤的实验研究

目的：研究CXC趋化因子受体4（CXC chemokine receptor 4,CXCR4）单克隆抗体（CXCR4 mAb）对人乳腺癌MCF-7细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响,并初步探讨CXCR4 mAb抗肿瘤的作用机制。方法：采用8周龄Balb/c雌性裸鼠,建立乳腺癌MCF-7细胞裸鼠皮下移植瘤模型。运用CXCR4 mAb进行干预,从整体水平观察CXCR4 mAb对肿瘤生长的影响,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱氨酸天冬氨酸酶3（Caspase-3）和血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达情况。结果：CXCR4 mAb可明显抑制移植瘤的生长,瘤体抑制率达到71.4%;CXCR4 mAb治疗后的肿瘤组织中PCNA和VEGF表达明显下降,而Caspase-3表达上升。结论：CXCR4 mAb可能是通过抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤血管形成而发挥抗肿瘤生长的作用。     

CXCR4单克隆抗体抑制乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤的实验研究

目的 研究CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)单克隆抗体(CXCR4 mAb)对人乳腺癌MCF-7细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响,并初步探讨CXCR4 mAb抗肿瘤的作用机制.方法 采用8周龄Balb/c雌性裸鼠,建立乳腺癌MCF-7细胞裸鼠皮下移植瘤模型.运用CXCR4 mAb进行干预,从整体水平观察CXCR4 mAb对肿瘤生长的影响,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase-3)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达情况.结果 CXCR4 mAb可明显抑制移植瘤的生长,瘤体抑制率达到71.4%;CXCR4 mAb治疗后的肿瘤组织中PCNA和VEGF表达明显下降,而Caspase-3表达上升.结论 CXCR4 mAb可能是通过抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤血管形成而发挥抗肿瘤生长的作用.     

ETS2在乳腺癌细胞中调控CXCR4转录的机制研究

背景与目的：肿瘤转移是乳腺癌患者死亡的主要原因。趋化因子受体CXCR4与乳腺癌转移密切相关。本研究探讨转录因子ETS2(人红血细胞增多症病毒致癌基因同源体2)对人乳腺癌细胞中趋化因子受体CXCR4表达的影响,以及ETS2调控CXCR4转录的分子机制。方法：在MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌细胞株中,本研究通过瞬时转染技术,以及RNAi技术,检测过表达ETS2或抑制ETS2的表达。然后分别应用RT-PCR以及ELISA检测CXCR4 mRNA的表达和蛋白水平,荧光酶素报告基因实验检测启动子活性,ChIP实验检测结合到CXCR4启动子上的ETS2的量。并且对CXCR4启动子上的2个ETS结合位点进行突变,通过荧光报告基因实验,检测突变对CXCR4启动子活性的影响。结果：转染了ETS2过表达质粒的MDA-MB-231和MCF-7人乳腺癌细胞中,CXCR4的表达在mRNA和蛋白水平都升高;报告基因实验结果提示,ETS2通过激活CXCR4启动子的活性提高CXCR4的表达;通过ChIP实验发现,在转染了ETS2表达质粒的MDA-MB-231和MCF-7人乳腺癌细胞中,结合到CXCR4启动子上的ETS2的蛋白量増高,提示ETS2通过直接结合到CXCR4启动子上,从而提高CXCR4启动子的活性;利用RNA干扰技术,抑制ETS2的表达,可以显著减弱CXCR4启动子的活性,降低CXCR4的表达和结合到CXCR4启动子上的ETS2的量;荧光酶素报告基因的结果显示,任意一个位点的突变都降低了CXCR4启动子的活性,2个位点的同时突变使CXCR4启动子的活性进一步降低。结论：在人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231细胞中,ETS2通过直接结合到CXCR4启动子上的2个结合位点(-540到-535和-240到-235),活化CXCR4启动子活性,从而对CXCR4发挥转录调控的作用。     

4-氨基吡啶与多西紫杉醇抗人乳腺癌细胞MCF-7 作用及相互关系探讨*

目的:通过研究钾离子通道阻断剂4- 氨基吡啶（4-AP ）对肿瘤化疗药物多西紫杉醇（docetaxel ,DOC ）的抗人乳腺癌细胞MCF-7 作用的影响,探讨4-AP 能否增强DOC 的作用。方法:用MTT 比色法分析DOC 、4-AP 以及两药联合应用对人乳腺癌细胞MCF-7 增殖的影响;用流式细胞术PI 单染法及Annexin V-FITC/PI双染法检测上述两种药物对人乳腺癌细胞MCF-7 的细胞周期及早期凋亡的影响。结果:DOC 能明显抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖,并呈剂量和时间依赖性。4-AP 对MCF-7 细胞增殖亦具有一定的抑制作用,在用药后24h、48h 及72h 的抑制率分别为11.9%±1.7% 、42.1%±3.2% 、44.2%±1.6% 。且5mmol/L 4-AP 可使DOC 的作用增强,使25μ mol/L DOC 对人乳腺癌细胞株MCF-7 最大杀伤作用时间从72h 提前至24h。5 μ mol/L DOC 能够使MCF-7 G2/M期细胞比率明显增加（53.58%±1.44% 与对照组8.83%±0.44% 相比,P<0.01）,使G0/G1 期细胞减少（11.48%±0.14% 与对照组63.89%±0.98% 相比,P<0.01）,说明DOC 主要在G2/M期阻滞MCF-7 细胞的增殖。5mmol/L 4-AP 作用于MCF-7 使其G0/G1 期细胞比率增加,G2/M期细胞明显减少,甚至消失（0.42%±0.17% 与对照组8.83%±0.44% 相比,P<0.05）。 而两药联用可见4-AP 使MCF-7 G2/M期细胞比率有所减少,而G0/G1 期细胞比率有所增加。DOC 单独作用于人乳腺癌细胞株MCF-7 细胞24h 后,能明显增加晚期凋亡和死亡率（由6.97%±0.75% 增加到20.77%±0.75% ,P<0.05）;而两药联合时,与对照组相比,早期凋亡比例由4.60%±0.91% 增加到12.20%±0.82%（P<0.05）,晚期凋亡和死亡细胞比例由6.97%±0.75% 增加到58.42%±0.31%（P<0.05）,提示4-AP（5mmol/L ）能明显增加DOC 诱导的MCF-7 早期凋亡。结论:DOC 和4-AP 分别在G2/M期和G0/G1 期抑制MCF-7 细胞增殖,4-AP 通过促进DOC 诱导细胞凋亡发挥抑制MCF-7 细胞增殖的作用。      

vMIP-Ⅱ通过 CXCR4拮抗乳腺癌转移作用的初步研究

背景与目的: CXCR4-SDF-1α体系在乳腺癌靶向转移中具有重要作用,已证明多种 CXCR4拮抗剂对乳腺癌转移有抑制作用.本研究拟探讨作为 CXCR4封闭因子的病毒巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ( viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ , vMIP-Ⅱ)对乳腺癌细胞株 MCF 7转移相关因素的影响.方法: MTT法检测不同浓度 vMIP-Ⅱ刺激下 MCF-7的增殖效应;软琼脂集落形成实验评价克隆形成率;粘附和趋化实验观察 vMIP-Ⅱ对不同转移阶段 MCF-7细胞的作用.结果:(1)系列浓度的 vMIP-Ⅱ处理细胞 72h后,细胞没有表现出增殖效应( P >0.05). (2)vMIP-Ⅱ以浓度依赖的方式抑制细胞集落的形成, 50、 100、 500和 1 000 ng /ml vMIP-Ⅱ作用后,细胞的琼脂集落抑制率在 18.2%～ 54.6%之间. (3)经 300 ng/ml 的 vMIP-Ⅱ处理不同时间( 0 min、 30 min、 2 h 和 6 h)后,细胞在 2 h对纤维连接素( FN)和 Matrigel的粘附都达到了抑制高峰. (4)在趋化实验中, 500 ng/ml vMIP-Ⅱ组穿膜细胞数( 24± 10)比对照组( 60± 9)要低( P< 0.05).结论: MCF 7的克隆形成率与 vMIP-Ⅱ的刺激浓度呈负相关. vMIP-Ⅱ能降低 MCF-7对 FN和 Matrigel的粘附和有效抑制 MCF-7 对人肺蛋白粗提物的靶向性趋化作用.     

shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞增殖活性的影响

背景与目的：CXCR4足趋化细胞因子SDF—l（基质细胞衍生因子-1）的受体：CXCR4／SDF-1轴在肿瘤侵袭，转移中具有重要作用．阻断CXCR4／SDF-1轴，有可能成为一个新的肿瘤治疗标靶，本研究拟探讨shR-NA—CXCR4对人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA—MB-231，MDA．MB435s细胞增殖活性的影响。方法：通过质粒shRNA—CXCR4沉默CXCR4基因后．RT—PCR，Weslernblot检测3株人乳腺癌细胞的CXCR4mRNA及其蛋白的表达；MTT．流式细胞仪检洲它们的增殖结果：质粒shRNA—CXCR4作用于3株人乳腺癌细胞后能明显抑制其CXCR4基因的tuRNA（MDA—MB-23l：实验组CXCR4／GAPDH为0．152．空白组和阴性对照组分圳为0．40及0．45．MDA-MB-435s：实验组为0．198，空白对照组和阴性对朋组分别为0．690及0．775，MCF-7：实验组为0．089，空白对照组和阴性对照组分别为0．327及0．313）及蛋白表达水平（MDA—MB-231：实验组CXCR4／β-actin为0．153，空白组和阴性对照组分圳为0．829及0．878，MDA—MB-435s：实验组为0．173，空白对照组和阴性对照组分别为0．877及0．906，MCF-7：实验组为0．177，空白对照组和阴性对照组分别为0．911及0．874）（P〈0．05）；MTT显示能明显抑制3株人乳腺癌细胞的增殖（P〈0．05）；流式细胞仪显示3株人乳腺癌细胞S期细胞数量明显减少（P〈0．05），将更多的细胞阻滞在G0／G1朗（P〈0．05）结论：shRNA—CXCR4作用于CXCR4基因后能明显抑制人乳腺癌细咆生长和增殖一可能是治疗乳腺癌的一个潜在治疗耙点。     

RNA干扰CXCR4和CXCR7对子宫内膜癌HEC-1-A细胞生物学行为的影响

目的:探讨siRNA(small interference RNA)干扰趋化因子受体CXCR4和CXCR7对子宫内膜癌HEC-1-A细胞生物学行为的影响。方法:以LipofectamineTM2000脂质体为载体将siRNA转染至人子宫内膜癌HEC-1-A细胞株,以半定量RTPCR和Western blotting验证siRNA对CXCR4和CXCR7的干扰效果,以CCK-8法、流式细胞术和Transwell法分别检测CXCR4和CXCR7基因沉默对HEC-1-A细胞周期、增殖和侵袭能力的影响;结果:HEC-1-A细胞高表达CXCR4和CXCR7,合成的CXCR4-siRNA、CXCR7-siRNA、CXCR4/CXCR7-siRNA均可分别干扰HEC-1-A细胞内CXCR4、CXCR7、CXCR4/CXCR7基因或蛋白的表达;CXCR4和CXCR7基因的单独沉默或联合沉默均可导致HEC-1-A细胞增殖和侵袭能力的显著下降(P<0.05),同时引发HEC-1-A细胞周期出现S期阻滞。结论:趋化因子受体CXCR4和CXCR7在HEC-1-A细胞的增殖和侵袭行为中发挥重要作用,CXCR4和CXCR7途径的抑制有望成为子宫内膜癌治疗的新靶点。     

RNAi沉默DLL4基因对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖与凋亡的影响

目的:探讨利用RNA干扰沉默Delta样配体4(Delta-like ligand 4,DLL4)对MCF-7细胞生长、凋亡的影响,为乳腺癌的基因治疗提供一个可选择的靶点和方法。方法:针对DLL4基因的DNA设计具有特异性的SiRNA,经脂质体转染MCF-7,采用免疫组化方法检测空脂质体组和转染组DLL4基因表达有否阻断。用MTT法测定MCF-7细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期改变。结果:构建DLL4-SiR-NA表达载体能够有效抑制MCF-7中DLL4的表达(P<0.05)。RNA干扰沉默DLL4基因可抑制MCF-7细胞增殖,促进细胞凋亡,G2/M期细胞比例明显增加(P<0.05)。结论:RNAi技术能够有效抑制DLL4基因的表达,抑制DLL4基因的表达可抑制MCF-7细胞增殖,促进MCF-7细胞凋亡。     

基质细胞衍生因子-1α促进乳腺癌细胞侵袭和转移

背景与目的:根据基质细胞衍生因子1 α(SDF-1 α)/CXCR4生物学轴的多种生物学功能,本实验在研究CXCR4内化及其调变的基础上,进一步探讨SDF-1 α对乳腺癌细胞体外侵袭转移能力的影响.方法:应用细胞黏附实验、细胞迁徙实验及失巢凋亡实验对比分析SDF-1 α对乳腺癌MCF-7细胞形态、体外黏附能力、迁徙能力及抗失巢凋亡能力的影响.结果:与SDF-1 α共培养的乳腺癌MCF-7细胞形态变为长梭形,伪足更长而伸展,其黏附能力高于MCF-7细胞株[(0.90±0.18)VS(0.68±0.08),P<0.01];侵袭小室实验发现,与SDF-1α共培养的MCF-7细胞侵袭转移能力增强,培养6 h迁徙进入微孔膜的细胞数比MCF-7细胞株明显增多[(151±11)比(135±13),P<0.01].悬浮培养的SDF-1α加MCF-7细胞比MCF-7细胞更容易聚集,形成相对较致密的细胞团块,24 h检测流式细胞凋亡指数下降[(9.1±1.1)%VS(18.4±1.7)%,P<0.01].结论:SDF-1α可明显增强乳腺癌细胞MCF-7体外侵袭及转移能力.     

CXCR4在VEGF-C介导的乳腺癌腋淋巴结转移中的作用

目的探索趋化因子受体CXCR4和VEGF-C与乳腺癌淋巴转移的关系,为研究干预乳腺癌淋巴转移的新方法提供理论依据。方法采用RT-PCR方法检测45例原发性乳腺癌组织中趋化因子受体CXCR4mRNA的表达及VEGF-CmRNA的表达,探索其与乳腺癌腋淋巴结转移的关系;Boyden趋化小室法检测CX-CR4不同表达状态乳腺癌细胞的趋化活性和趋化抑制性。结果45例原发性乳腺癌组织均有不同程度的CXCR4mRNA和VEGF-CmRNA的表达。37例CXCR4mRNA呈高表达,表达率为82.22%,73.33%的VEGF-CmRNA高表达(33/45);VEGF-CmRNA高表达组的CXCR4mRNA的高表达率大(P<0.05);CX-CR4mRNA的表达与乳腺癌腋淋巴结转移呈正相关(P<0.05);CXCR4的配体SDF-1对乳腺癌细胞的平均趋化率为75%,经抗CXCR4单克隆抗体处理后癌细胞的平均趋化率下降至34%,CXCR4被特异性抗体封闭前后的癌细胞趋化活性有显著性差异(P<0.05)。结论原发性乳腺癌CXCR4的表达和VEGF-C的表达与肿瘤腋淋巴结转移呈正相关;CXCR4的功能状态影响乳腺癌细胞的迁移活性。由此提示,通过干预趋化因子受体CXCR4和VEGF-C的活性可能成为阻断乳腺癌淋巴转移的新靶点。     

CXCR4 单克隆抗体对新生血管形成的影响

目的：探讨CXC趋化因子受体4（CXCchemokinereceptor4，CXCR4）单克隆抗体（CXCR4mAb）对新生血管形成的影响及其作用机制。方法：以鸡胚绒毛尿囊膜（chorioallantoicmembrane，CAM）血管抑制实验检测CXCR4单克隆抗体对新生血管形成的影响，WesternBlot免疫印迹法检测血管内皮细胞SDF-1蛋白的表达。结果：CXCR4单克隆抗体可明显抑制新生血管的形成，并且使培养的血管内皮细胞SDF-1蛋白表达明显降低：结论：CXCR4mAb可通过SDF-1／CXCR4生物轴抑制新生血管的形成。     

C‐X‐C chemokine receptor 7

BACKGROUND:

C‐X‐C chemokine receptor 4 (CXCR4) and CXCR7 are 7‐transmembrane chemokine receptors of the stroma‐derived factor (SDF‐1). CXCR4, but not CXCR7, has been examined in bladder cancer (BCa). This study examined the functional and clinical significance of CXCR7 in BCa.

METHODS:

CXCR4 and CXCR7 levels were measured in BCa cell lines, tissues (normal = 25; BCa = 44), and urine specimens (n = 186) by quantitative polymerase chain reaction and/or immunohistochemistry. CXCR7 function in BCa cells were examined by transient transfections using a CXCR7 expression vector or small interfering RNA.

RESULTS:

In BCa cell lines, CXCR7 messenger RNA levels were 5‐ to 37‐fold higher than those for CXCR4. Transient overexpression of CXCR7 in BCa cell lines promoted growth and chemotactic motility. CXCR7 colocalized and formed a functional complex with epidermal growth factor receptor, phosphoinositide 3‐kinase/Akt, Erk, and src and induced their phosphorylation. CXCR7 also induced up‐regulation of cyclin‐D1 and bcl‐2. Suppression of CXCR7 expression reversed these effects and induced apoptosis. CXCR7 messenger RNA levels and CXCR7 staining scores were significantly (5‐ to 10‐fold) higher in BCa tissues than in normal tissues (P < .001). CXCR7 expression independently associated with metastasis (P = .019) and disease‐specific mortality (P = .03). CXCR7 was highly expressed in endothelial cells in high‐grade BCa tissues when compared to low‐grade BCa and normal bladder. CXCR7 levels were elevated in exfoliated urothelial cells from high‐grade BCa patients (P = .0001; 90% sensitivity; 75% specificity); CXCR4 levels were unaltered.

CONCLUSIONS:

CXCR7 promotes BCa cell proliferation and motility plausibly through epidermal growth factor receptor receptor and Akt signaling. CXCR7 expression is elevated in BCa tissues and exfoliated cells and is associated with high‐grade and metastasis. Cancer 2013. © 2012 American Cancer Society.     

CXCR4/SDF-1α对宫颈癌HeLa细胞定向迁移及增殖的影响

 目的了解CXCR4在HeLa细胞的表达情况,并借助细胞培养评价CXCR4/SDF-1α对HeLa细胞定向迁移及增殖的影响。方法CXCR4 mAb免疫染色HeLa细胞。用Transwell侵袭转移模型评价HeLa细胞的迁移情况,其中,上室中加入预先用(或不用)CXCR4单抗预孵育的HeLa细胞,下室中加入含0~100ng/mlSDF-1α的培养基。为评价CXCR4、SDF-1α对HeLa细胞增殖的影响,将HeLa细胞接种于有(无)SDF-1α和(或)CXCR4的低血清环境72h。结果CXCR4在所有HeLa细胞上均有表达。HeLa细胞能顺SDF-1α浓度差定向迁移,且这一作用可被CXCR4 mAb拮抗。SDF-1α能促进He-La细胞在低血清环境中增殖。结论CXCR4/SDF-1α参与了HeLa细胞定向迁移的过程并影响其增殖。