大鼠附睾精子成熟过程中膜流动性变化的研究

精子在附睾内的运行过程中，结构和功能发生变化，最终达到成熟，并贮存于附睾尾部。本文用５－Ｄｏｘｙｌ－ｓｔｅａｒｉｃ ａｃｉｄ和１６－Ｄｏｘｙｌ－ｓｔｅａｒｉｃ ａｃｉｄ为标记，在电子自旋共振波谱仪上研究成年ＳＤ雄鼠附睾头，体，尾各段的精子膜流动性的变化，并用低渗膨胀试验测定精子膜对渗透压的反应能力。     

大鼠精子在附睾成熟中精子膜变化的研究

我们运用Ｐｅｒｃｏｌｌ离心技术对ＳＤ大鼠附睾头、体、尾各段的精子分离纯化后，再用硫代巴比妥酸法、酶法、ＳＤＳ－ＰＡＧＬ电泳技术等对精手膜依次进行唾液酸、甘油－３－磷酸胆碱（ＧＰＣ）及蛋白质含量变化的检测。结果显示：精子膜唾液酸、ＧＰＣ量不断降低且有显著统计学意义（Ｐ＜０．０１）。附睾头、体、尾各段精子膜唾液酸和ＧＰＣ量分别为１０．１８±２．８２、８．４２±３．０７、７．８３±２．７９μｇ／１０８精子；１１２．３１±２８．１４、１０９．３３±３７．１６、７４．５０±２５．１３ｎｍｏｌ／１０８精子（－ｘ±ｓ）。膜蛋白变化主要是由大分子蛋白转变成较小分工的蛋白。大鼠精子附睾转运中精子膜的变化与精子成熟具有十分密切的关系。     

应用自旋标记—顺磁共振研究严重烧伤大鼠早期心肌细胞膜变化

目的利用自旋标记—顺磁共振技术研究严重烧伤大鼠早期心肌细胞膜的变化。方法用５氮氧自由基硬脂酸（５ｄｏｘｙｌｓｔｅａｒｉｃａｃｉｄ,５ＮＳ）和１６氮氧自由基硬酯酸（（１６ｄｏｘｙｌｓｔｅａｒｉｃａｃｉｄ,１６ＮＳ）分别掺入到不同深度的膜类脂区,观察严重烧伤对大鼠心肌细胞不同深度的膜类脂区流动性的影响,同时用３甲基马来酰亚胺氮氧自由基（３ｍａｌｅｉｄｏｐｒｏｘｙ１,３ＭＰ）标记膜蛋白巯基,观察膜蛋白旋转相关时间（τｃ）及强固定化与弱固定化组分谱线高度比值（ｈｓ／ｈｗ）的变化。结果严重烧伤大鼠早期心肌细胞膜脂浅层的序参数（Ｓ）值无明显变化,而膜脂深层Ｓ值增大,膜蛋白ｈｓ／ｈｗ显著增大,膜蛋白旋转相关时间τｃ也显著增大。结论严重烧伤后早期即出现心肌细胞膜的损伤,表现为膜脂质深层流动性下降,膜蛋白构象改变,膜蛋白运动受限。这些变化可以直接影响细胞膜蛋白的功能,从而导致心肌细胞功能的变化。     

精索静脉曲张不育患者精子核成熟性研究

利用苯胺兰细胞化学染色法和ＳＤＳ、ＳＤＳ一ＥＤＴＡ处理精子研究精子核的成熟性。结果发现，２１例精索静脉曲张不育患者精子核蛋白存在明显的转型缺陷（不育组２７．８２±９．７３，对照组４０．６２±１１．７３，Ｐ＜０．０１）；其精子核抗解聚能力明显下降，Ｐ＜０．０１（ＳＤＳ）和＜０．０５（ＳＤＳ一ＥＤＴＡ）；α一糖苷酶活性越低，核蓝染精子百分数越高（ｒ＝－０．８１，Ｐ＜０．０１），而核稳定精子百分数越低（ＳＤＳ组ｒ＝０．７５；ＳＤＳ一ＥＤＴＡ组ｒ＝０．７２，Ｐ＜０．０１）．结果说明，精子核的成熟性异常与精索静脉曲张不育有密切的联系。附睾功能的异常可能是精索静脉曲张导致不育的机制之一。     

精核蛋白与男性不育

目的：探讨精子中精核蛋白含量与男性不育的关系。方法：从９２例不育男性和１６例正常生育男性的精子中提取精核蛋白，在醋酸－尿素聚丙烯酰胺凝胶（ａｃｉｄ－ｕｒｅａ ＰＡＧＥ，ｐＨ４．７）中电泳，经薄层扫描，测得各蛋白区带（组蛋白和精核蛋白）的相对含量，分析并计算各蛋白区带的相对比值。结果：９例病人的精核蛋白完全缺乏。２７例妻子流产男性精子畸形率升高明显（Ｐ〈０．０１）、ＨＰ１￣３／ＴＢＰ降低（Ｐ〈０．０     

精索静脉曲张不育患者精子核蛋白、精子膜麦芽凝集素受体的检测和意义

用苯胺蓝细胞化学染色法和精子膜麦芽凝集素（ＷＧＡ）从细胞和分子水平分别检测精索静脉曲张不育患者精子核蛋白以及精子膜与ＷＧＡ结合的糖复合物的变化。结果正常对照组（１２例）核蓝染精子数为２７．８２％±９．７３％，不育组（２１例）为４０．６２％±１１．７３％，Ｐ＜０．０１；ＯＤ变化值对照组（９例）为０．０８３±０．０７３，不育组（１７例）为０．０２８±０．０２５，Ｐ＜０．０１；ＯＤ变化值与附睾功能的特异性标记酶α－糖苷酶活性的相关系数ｒ＝０．５６，Ｐ＜０．０５。结果表明，精索静脉曲张不育与精子核蛋白转型异常以及与ＷＧＡ受体数目下降有密切的关系。ＷＧＡ受体数目的降低可能与附睾功能异常进而引起与ＷＧＡ结合的糖复合物合成受阻有关。     

大鼠、金黄地鼠附睾中精子及管腔液唾液酸含量变化

应用改良硫代巴比妥酸比色法测定了ＳＤ大鼠和金黄地鼠附睾不同节段精子及管腔液的唾液酸（ＳＡ）含量。发现附睾的头、体、尾三个不同节段，精子结合唾液酸含量逐渐降低，差异显著（Ｐ＜０．０ｌ）；而管腔液唾液酸含量则有增高趋势。这两种动物相对应的附睾不同节段之间唾液酸含量存在显著差异（Ｐ＜０．０１），但二者的变化规律是一致的。对附睾中唾液酸含量变化过程的干扰，可以影响精子的成熟。     

溶脲脲原体与精子膜蛋白共同抗原分析

本文通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和应用抗Ｕｕ血清作免疫印迹技术证明，人精子膜蛋白有６条蛋白带，Ｕｕ与人精子膜蛋白间有２条带为共同抗原，分子量约为６９ｋＤａ和６４ｋＤａ。进一步应用兔抗Ｕｕ血清对正常人精子涂片作ＡＢＣ免疫酶染色，显示精子膜及尾部呈棕黄色ＡＢＣ阳性反应。实验证明，人精子膜蛋白与Ｕｕ间确有共同抗原存在。     

腺苷脱氨酶在人睾丸及附睾的分布

应用本实验室前期制备的特异性的抗人精子膜结合腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）同功酶的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和免疫组化技术，我们分析了该同功酶在正常人睾丸和附睾中的分布。实验结果显示：（１）ＡＤＡ在正常人睾丸中无分布，而在附睾头部，附睾管腔上皮细胞中开始分布；（２）ＡＤＡ在正常人附睾管腔上皮细胞中的分布，由附睾头部至尾部，其密度递增。这一研究结果提示：（１）ＡＤＡ分布具有附睾特异性；（２）人精子膜结合ＡＤＡ可能来自附睾管腔上皮细胞。     

5α-还原酶活性在人与大鼠附睾不同部位的分布

为进一步了解５α－还原酶对附睾功能和精子成熟过程的作用，将大鼠及人附睾按头、体、尾分段分别制备匀浆，用已建立的５α－还原酶（５α－Ｒ）活性测定方法，测定胞浆、微粒体及核内５α－Ｒ．Ｉ、Ｉ型同功酶的活性分布。结果：（１）大鼠附睾５α－Ｒ活性分布与人附睾细胞核中５α－Ｒ活性分布一致，呈头高、尾低梯度递减（Ｐ＜０．０１），而微粒体及胞浆中不完全一致，体部较高、尾部最低（Ｐ＜０．０５）。（２）人与大鼠附睾５α－Ｒ活性在核及微粒体中高于胞浆，且微粒体与胞浆之间有相关性（ｒ＝０．８７５９）。（３）大鼠Ｉ、Ｉ型同功酶之间活性无明显差异（Ｐ＞０．０５），而人微粒体中５α－Ｒ．Ｉ型同功酶占优势。５α－Ｒ活性的这种分布特点与精子在附睾中逐步成熟过程相一致，提示５α－Ｒ可能是调节附睾精子成熟的重要核因子之一。     

溶脲脲原体与精子膜蛋白共同抗原分析

本文通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ｕ血清作免疫印迹技术证明，人精子膜蛋白有６条蛋白带，Ｕｕ与人精膜蛋白间有２条带为共同抗原，分子量约变６９ｋＤａ和６４ｋＤａ。进一步应用兔抗Ｕｕ血清对正常人精子涂片作ＡＢＣ免疫酶染色，显示精子膜及尾部呈棕黄色ＡＢＣ阳性反应。实验证明，人精子膜蛋白与Ｕｕ间确有共同抗原存在。     

弱精症男子与正常人精子膜尿激酶型纤溶酶原激活因子含量的研究

按ＷＨＯ精液参数标准，分别选择精子活力低下的男性不育症患者和正常生育力男子精液标本各２０例，将洗涤后的精子用含１％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的０．１ＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液处理，提取精子膜结合尿激酶型纤溶酶原激活因子（ｕＰＡ），然后采用抗人尿激酶多克隆抗体，进行各样品ｕＰＡ含量的测定（夹心法ＥＬＩＳＡ）。结果显示：弱精症男子精子膜结合ｕＰＡ（２３．１０±７．３５ｍｕ／１０６ｃｅｌｓ）显著性低于正常人精子膜ｕＰＡ（２９．８９±９．４８ｍｕ／１０６ｃｅｌｓ），Ｐ＜０．０２５。且精子膜ｕＰＡ含量与精子活率呈直线正相关（ｒ＝０．６４，Ｐ＜０．０００１），与精子活力（直线前向运动精子百分率）亦呈线性相关（ｒ＝０．４８，Ｐ＜０．００５）。说明精子膜结合ｕＰＡ可能与精子活力及生育力之间有一定关联。     

213例不育男性抗精子抗体与精液有关参数的分析

我们检测了９００多例男性不育症患者的血清、精浆抗精子抗体（ＡｓＡｂ）和精液各项指标，对其中２１３例ＡｓＡｂ阳性患者的精液有关参数与ＡｓＡｂ的关系进行了分析，并与生育男性组作了比较。结果表明，ＡｓＡｂ阳性患者的精子密度、精子活率、精子顶体完整率、精浆免疫抑制物（ＳＰＩＭ）及α－糖苷酶均明显低于生育组（Ｐ＜０．０１），不育男性ＡｓＡｂ阳性组ＳＰＩＭ阳性率也明显高于ＡｓＡｂ阴性组（Ｐ＜０．０１）。此外，血清与精浆ＡｓＡｂ同为阳性组的精子活率明显低于单纯血清或精浆ＡｓＡｂ阳性组（Ｐ＜０．０１）。     

少精子症患者精液沉淀物乳酸脱氢酶同工酶凝胶电泳分析

本文运用乳酸脱氢酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳分析法，分析比较了少精子症、弱精子症、精液正常者的精液沉淀物乳酸脱氢酶同工酶百分比活性。结果显示：少精子症患者的ＬＤＨ－Ｃ４同工酶百分比活性４６％显著低于精液正常者的７１％（Ｐ＜０．０１）及弱精子症患者的６７％（Ｐ＜０．０１）；相对的，少精子症的ＬＤＨ５同工酶百分比活性１６％显著高于精液正常者的４．８％（Ｐ＜０．０１）和弱精子症的６．３％（Ｐ＜０．０１）。本文认为少精子症者精液沉淀物ＬＤＨＣ４活性降低与其精液中的各类细胞诸如未成熟的精子细胞、白细胞及一些微生物的相对增加有关     

胫骨定量超声测量及临床应用探讨

用ＳｏｕｎｄＳｃａｎ２０００骨定量超声（ＱＵＳ）仪测量胫骨超声速度（ＳＯＳ），同时与单光子吸收法（ＳＰＡ）测量前臂１／３处骨矿密度（ＢＭＤ）比较。两方法测得２０８例患者和健康志愿者结果相关（ｒ＝０．６７８，Ｐ＜０．００１）。４２例健康绝经妇女ＳＯＳ和ＢＭＤ与绝经时间呈负相关（ｒ＝－０．４１７和－０．４７９，Ｐ＜０．０１），７３例＞４０岁的健康志愿者ＳＯＳ和ＢＭＤ与年龄呈负相关（ｒ＝－０．２９３和－０．３７３，Ｐ＜０．０５）。与性别和年龄相匹配的正常参考值比较，结果＜ｘ－２ｓ者ＱＵＳ检出３４例，占１６．３％；ＳＰＡ２３例，占１１．０％，ＱＵＳ的诊断敏感度约是ＳＰＡ的１．５倍。     

尿毒症患者红细胞变形能力与膜磷脂和收缩蛋白变化的关系

探讨尿毒症患者红细胞变形能力（ＥＤ）与红细胞膜磷脂成分和收缩蛋白的关系。方法检测了４８例尿毒症患者和４０例健康人红细胞滤过指数（ＩＦ）、红细胞膜磷脂成分和收缩蛋白二聚体（ＳＰ－Ｄ）和四聚体（ＳＰ－Ｔ）相对含量的变化。结果尿毒症患者红细胞ＩＦ明显高于对照组（Ｐ＜０．００１），膜磷脂成分中神经磷脂（ＳＭ）、磷脂酰胆碱（ＰＣ）、磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）和磷脂酰乙醇胺（ＰＥ）明显低于对照组（Ｐ＜０．０１），而ＳＭ／ＰＣ高于对照组（Ｐ＜０．０５）；尿毒症患者红细胞ＳＰ－Ｄ和ＳＰ－Ｄ／ＳＰ－Ｔ明显增高，而ＳＰ－Ｔ明显减低，与对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。尿毒症患者红细胞ＩＦ与ＳＭ、ＰＣ、ＰＳ、ＰＥ和ＳＰ－Ｔ呈负相关（Ｐ＜０．０５，０．０１），与ＳＭ／ＰＣ、ＳＰ－Ｄ和ＳＰ－Ｄ／ＳＰ－Ｔ呈正相关（Ｐ＜０．０１）。结论尿毒症患者ＥＤ降低与红细胞膜磷脂和收缩蛋白异常有关     

头部重点低温脱水综合疗法对脑细胞膜功能的影响

作者采用“四血管”式兔脑缺血模型，观察了脑缺血３０分钟后再灌注３０、１８０和３６０分钟时脑细胞膜上Ｎａ￣＋，Ｋ￣＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ￣（２＋），Ｍｇ￣（２＋）－ＡＴＰａｓｅ、磷脂酶Ａ＿２和总磷脂的变化，比较了头部重点低温、甘露醇脱水和头部重点低温脱水综合疗法对这些指标变化的影响。与正常动物比较，缺血再灌注后Ｎａ￣＋，Ｋ￣＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ￣（２＋），Ｍｇ￣（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力进行性下降（Ｐ＜０．００１），磷脂酶Ａ＿２活力汁高（Ｐ＜０．００１），总磷脂在再灌注１８０和３６０分钟时减少（Ｐ＜０．０１）。头部重点低温和头部重点低温脱水综合疗法可抑制上述改变（Ｐ＜０．００１），而甘露醇脱水则几无效应。提示在再灌注开始后及早应用头部重点低温脱水综合疗法确能促进或有利于脑细胞膜功能的恢复，防止再灌注对脑细胞膜功能的进一步损害。     

PSP94-TNFα D11a融合基因直接注射的抗肿瘤作用

目的：探讨人ＰＳＰ９４和肿瘤坏死因子α衍生物１１ａ（ＴＮＦαＤ１１ａ）融合基因（ＰＳＰ９４－ＴＮＦαＤ１１ａ）直接注射的抗肿瘤作用。方法：人前列腺癌裸鼠模型肌肉注射含ＰＳＰ９４－ＴＮＦαＤ１１ａ融合基因的ｐｃＤＮＡ－ＰＳＰ９４－ＴＮＦαＤ１１ａ质粒ＤＮＡ,剂量为５０μｇ／只,同时设ｐｃＤＮＡ－ＰＳＰ９４、ｐｃＤＮＡ３．０空载体、生理盐水和环磷酰胺对照组。注射后第２０ｄ处死动物,称瘤重计算抑瘤率。结     

超氧化物歧化酶灌注对断肢血管平滑肌和骨骼肌的保护作用

目的：探讨超氧化物歧化酶对缺血骨骼肌和血管平滑肌的保护作用。方法：应用大鼠离体肢体分别用超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和生理盐水溶液灌注，保存于０～４℃，经２、４、８、１６、２４、４８、７２小时取小腿三头肌进行Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性检测，并对此骨骼肌和平滑肌进行超微结构观察。结果：ＳＯＤ灌注对缺血骨骼肌、股动脉平滑肌的酶活性及细胞形态都优于生理盐水组（Ｐ＜０．０１）。结论：ＳＯＤ灌注对离断肢体的存活有保护作用     

缺血对兔股动脉平滑肌Ca2+-ATP酶、SDH活性和线粒体形态的影响

目的：研究兔股动脉平滑肌组织中Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶、琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）活性和线粒体形态在缺血期间的变化及其与缺血性血管痉挛的关系。方法：在新西兰大白兔的断肢缺血动物模型中，使用组化技术检测股动脉平滑肌组织中Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶、ＳＤＨ活性的变化，用图象分析系统测定其光密度代表酶活性，用透射电镜观察股动脉平滑肌中线粒体的形态变化，并用图像分析系统对其进行定量分析。结果：缺血８小时，Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶、ＳＤＨ活性下降显著（Ｐ＜０．０５），缺血１６小时后，Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶、ＳＤＨ活性下降非常显著（Ｐ＜０．０１），缺血８小时后，线粒体有明显的形态学受损。结论：血管平滑肌组织中Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶、ＳＤＨ活性下降及线粒体受损是缺血性血管痉挛的重要原因。