慢病毒介导YCD/5-FC自杀基因系统对白血病Jurkat细胞杀伤和旁观者效应

目的:探讨慢病毒介导的酵母菌胞嘧啶脱氨酶(yeast cytosine deaminase,YCD)自杀基因对人白血病Jurkat细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法:制备YCD-GFP慢病毒上清,转染Jurkat细胞(即Jurkat/YCD-GFP细胞),流式细胞术检测YCD-GFP基因的表达。体外观察前体药物5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)对Jurkat/YCD-GFP细胞的杀伤情况和旁观者效应;建立Jurkat/YCD-GFP荷瘤小鼠模型,体内观察5-FC对移植瘤细胞的杀伤作用和旁观者效应。以上实验均以Jukut/GFP细胞为对照。结果:成功制备YCD-GFP慢病毒和感染YCD-GFP慢病毒的Jurkat/YCD-GFP细胞,YCD-GFP慢病毒对Jurkat细胞的感染率达96.93%。232μmol/L的5-FC作用72h可使(95.61±2.07)%的Jurkat/YCD-GFP细胞死亡,且上清中5-FC含量下降80%左右。体外实验显示,Jurkat/YCD-GFP和Jurkat细胞效靶比1∶10混合培养[(68.69±4.97)%vs(97.87±1.11)%,P<0.05)]和Transwell1∶25分层培养[(1.46±0.27)×105vs(3.00±0.16)×105,P<0.01]均存在旁观者效应。体内实验显示,YCD/5-FC自杀基因系统对Jurkat/YCD-GFP荷瘤小鼠亦具有较强的杀伤作用和旁观者效应(P<0.05)。结论:慢病毒介导的YCD/5-FC自杀基因系统对人Jurkat白血病细胞具有显著的杀伤作用和旁观者效应。     

慢病毒携带的双自杀基因对淋巴瘤细胞杀伤作用的实验研究

背景与目的:慢病毒载体具有可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长期表达、免疫原性低等优点,适于体内基因治疗。本研究探讨慢病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用。方法:将表达慢病毒的3种质粒,即包装结构基因质粒pCMVΔ8.2、包膜基因质粒pCMV.VSVG、目的基因质粒pHR'CS.GFP或pHR'CS.CDglytk分两组(pHR'CS.Cdglytk为实验组、pHR'CS.GFP为对照组),经脂质体导入病毒包装细胞293T,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩后转染Raji细胞,用荧光显微镜及RT-PCR检测基因的表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或无环鸟苷(GCV),用MTT法测定Raji细胞的生长抑制率,检测CD和HSV-tk双自杀基因对Raji细胞的作用。结果:表达慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞。荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光,透射电镜下观察可见富集的病毒颗粒。慢病毒介导的双自杀基因在Raji细胞中高效、稳定表达。单独使用GCV或5-FC对细胞的生长抑制率分别为51%、50%,与未转染组Raji细胞比较,差异有显著性(P<0.01);联合使用5-FC和GCV对细胞的生长抑制率为73%,明显高于单独使用5-FC或GCV(P<0.01)。结论:慢病毒介导的双自杀基因可高效稳定转染淋巴瘤细胞;双自杀基因系统较单一自杀基因系统(CD/5-FC或HSVtk/GCV)对淋巴瘤细     

超声辐照联合双自杀基因慢病毒载体微泡对宫颈癌细胞的杀伤效应

目的： 探讨超声辐照联合双自杀基因慢病毒载体微泡对宫颈癌细胞的体外杀伤效应,为宫颈癌的靶向基因治疗奠定基础。方法：构建双自杀基因慢病毒载体pLenti6-KDRP-CD/TK-EGFP,转染293T细胞并计算病毒滴度,与声诺维微泡混悬液混匀孵育,测定其包封率和载药量。运用载药微泡对宫颈癌HeLa细胞进行干预,试验设空白对照组、慢病毒组、慢病毒载体微泡组、慢病毒载体微泡联合超声辐照组,分别使用4种超声声强 (0.25、0.5、1.0、2.0 W/cm2) 300 kHz,辐照30 s。应用四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色实验和流式细胞仪检测各组干预方法对癌细胞增殖和凋亡率的影响。结果：荧光显微镜下可观察到EGFP的表达,说明载体构建成功,转染后获得病毒滴度为3.5×1012 pfu/L,包封率为90.6％±3.1％,载药量为29.2％±0.9％。MTT检测发现与空白对照组比较,慢病毒组、慢病毒载体微泡组、不同超声声强+慢病毒载体微泡组对细胞增殖均有明显抑制作用 (P<0.05或P<0.01),随着超声辐照声强的增加,癌细胞的抑制率逐步增高 (P<0.05),但2.0 W/cm2组与1.0W/cm2组相比抑制率无明显差异 (P>0.05);各组抑制作用于24 h后均有所下降 (P均<0.05),48 h组与24 h组比较抑制作用无明显变化 (P>0.05)。通过流式细胞术检测发现与空白对照组比较,各干预处理组对HeLa细胞的凋亡作用均显著升高 (P均<0.05);运用超声辐照后,其凋亡率升高趋势更为显著 (P<0.01)。结论：双自杀基因慢病毒载体对宫颈癌HeLa细胞具有显著的杀伤效应;联合超声辐照其载药微泡的杀伤效应可明显增强,具有协同作用。     

慢病毒介导双自杀基因对乳腺癌细胞的体内杀伤作用

目的：研究慢病毒介导的KDR启动子驱动的胞嘧啶脱氨酶（CD）/胸苷激酶（TK）融合基因系统 （FGW-KDRP-CD/TK）对乳腺癌细胞的体内杀伤作用。方法：培养乳腺癌MCF-7细胞,建立裸鼠荷瘤模型。荷瘤后将裸鼠随机分为4组。Ⅰ组：空白对照,荷瘤但不施加任何处理;Ⅱ组：注射慢病毒与前药（5-FC+GCV）;Ⅲ组：仅注射慢病毒;Ⅳ组：仅注射前药。观察肿瘤生长速度,测量瘤体大小及重量;用RT-PCR法鉴定双自杀基因在转基因瘤组织中的表达;取肿瘤组织进行HE及PCNA免疫组化染色;流式细胞技术进行细胞周期检测。结果：第Ⅱ组裸鼠移植瘤的生长显著受到抑制,第Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤生长情况无明显差异。经RT-PCR检测发现转基因瘤组织有目的基因的表达。与第Ⅰ组（空白对照组）相比,第Ⅱ组瘤组织的PCNA表达明显下调。流式细胞仪检测细胞周期分析显示治疗后G1期细胞比率增多,G2/M期细胞减少。结论：FGW-KDRP-CD/TK联合前药5-FC及GCV在体内可明显抑制移植瘤的生长,细胞周期阻滞,该作用可能与抑制PCNA表达有关。     

腺相关病毒载体及其介导的自杀基因疗法

自杀基因疗法是肿瘤治疗的方法之一。腺相关病毒（AAV）载体介导的自杀基因疗法尤其备受关注。通过对AAV载体的选择改建，调控外源基因的有效表达，提高基因转染的效率，充分发挥自杀基因的杀伤作用及旁观者效应来达到治疗肿瘤的目的。本文就AAV载体及其介导的自杀基因疗法方面的进展作一综述。     

RFP标记的 YCD 基因在 HeLa 细胞中的表达及其介导的细胞毒性

背景与目的 :探讨红色荧光蛋白标记的酿酒酵母菌胞嘧啶脱氨酶(YCD)基因在人宫颈癌细胞(HeLa细胞)中的表达及其功能。材料与方法 :采用基因重组技术构建含有CMV启动子和RFP、YCD基因开放阅读框(ORF)的真核表达载体pIRES_YCD ,脂质体法转染HeLa细胞。荧光显微镜下观察转染细胞中红色荧光蛋白的表达 ,流式细胞术分析转染效率及荧光强度并筛选荧光阳性细胞 ,命名为HeLa_Y。以不同浓度的前药5_FC处理HeLa_Y细胞 ,MTT法检测细胞存活率。 结果 :荧光显微镜下可见红色荧光蛋白在HeLa_Y细胞中表达 ,流式细胞术成功筛选出HeLa_Y细胞。前药5_FC能明显杀伤HeLa_Y细胞 ,5_FC浓度与HeLa_Y之间存在对数曲线关系。结论 :RFP可作为报告基因快速筛选YCD表达载体转染的细胞 ,YCD/5_FC自杀基因系统可以进一步用于肿瘤的基因治疗研究     

腺相关病毒载体及其介导的自杀基因疗法

自杀基因疗法是肿瘤治疗的方法之一.腺相关病毒(AAV)载体介导的自杀基因疗法尤其备受关注.通过对AAV栽体的选择改建,调控外源基因的有效表达,提高基因转染的效率,充分发挥自杀基因的杀伤作用及旁观者效应来达到治疗肿瘤的目的.本文就AAV栽体及其介导的自杀基因疗法方面的进展作一综述.     

CD/5-FC系统对小鼠胃癌细胞杀伤作用的研究

目的：探讨CD5／5－FC自杀基因系统对小鼠胃癌细胞的体外杀伤作用及其机制。方法：以逆转录病毒载体介导CD基因转导小鼠胃癌细胞株MFC,采用MTT法测定CD／5－FC系统的体外杀伤作用及其“旁观者”效应;利用Hoechst 33258荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡细胞,同时采用半定量RT－PCR技术检测凋亡相关基因的表达。结果：转导CD基因可使MFC对5－FC高度敏感,并且显示出强大的“旁观者”效应。经5－FC作用后,荧光染色可见到典型的凋亡细胞核形态学改变,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯度,同时发现凋亡相关基因bcl-2基因表达下调,而bax与caspase-3基因表达上调。结论：CD／5－FC自杀基因系统对小鼠胃癌细胞MFC具有强大的杀伤作用,体外杀伤作用是通过诱导MFC的凋亡来完成。     

大肠杆菌CD自杀基因转染诱导肿细胞凋亡及旁观者效应的研究

以重组腺病毒AdCD为载体将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因体外传染小鼠红白血病细胞FBL3,结果显示,转染了CD基因的FBL3细胞对5-氟胞嘧啶(5-FC)的敏感性显著提高,进一步研究发现,AdCD/5-FC系统可以诱导肿瘤细胞发生凋亡;将经AdCD/5-FC处理过的FBL3细胞上清倍比稀释后,加入到野生型FBL3细胞中,发现当上清仅占6.25％时,即对野生型FBL3细胞发挥明显的杀伤作用,提示旁观者效应在AdCD介导的细胞毒作用中起着重要的作用。本实验还观察了CD基因体内转染后的杀伤效果,荷瘤小鼠局部注射AdCD并连续10天给予5-FC(300mg/kg)治疗后,小鼠皮下肿瘤结节的生长受到明显抑制。     

逆转录病毒介导的CD/5-FC对胰腺癌细胞的杀伤作用

目的 :探讨大肠埃希菌胞嘧啶脱氨基酶 (CD) /5 -氟胞嘧啶 ( 5 FC)系统对胰腺癌细胞的体外生长抑制作用。方法 :将含CD基因的重组逆转录病毒载体导入胰腺癌细胞形成转化细胞系 ,对转化细胞进行体外药物敏感实验 ,包括 :1)转化细胞在前体药物 5 FC作用下的细胞生长抑制率 ;2 )MTT法检测旁观者效应。结果 :体外实验 5 FC的有效浓度 >2mmol/L时 ,就表现出杀伤作用 ,当 5 FC的有效浓度 >6mmol/L时 ,几乎未见细胞生长 ,PA3 17/CD与TD2混育比例在 90 %时 ,杀伤作用最大 ,相同药物浓度下 ,混育 96h杀伤作用明显高于 2 4h。结论 :CD/5 FC系统对胰腺癌细胞系细胞具有实验性基因治疗作用     

细胞之间介质传导的pCEAcd-tk/前药体系的旁观者效应

目的 :探讨融合自杀基因 pCEAcd tk/前药体系的旁观者效应的机理。 方法 :质粒 pCEAcd tk提取后 ,脂质体介导的方法转染到SPCA 1细胞中 ,与未转染的SPCA 1细胞混合 (2∶8)后接种到 96孔培养板中 (每孔 3× 10 3 ) ,加前体药物 5 氟胞嘧啶 [5 Fluorocytesine ,5 FC(5 μmol/L) ]和 [丙氧鸟苷 (Ganciclovir ,GCV(10 μmol/L) ],培养 5天 ,MTT法测定细胞存活率而观察旁观者效应。利用细胞种植密度的稀密和取转导了 pCEAcd tk融合基因的SPCA 1细胞 (处理细胞 )加前体药物的培养液和细胞裂解液对未转染细胞SPCA 1的毒性探讨旁观者效应的传递方式。结果 :融合基因pCEAcd tk/前药体系的旁观者效应在细胞密度较低时更明显 ,处理细胞的细胞培养液具有细胞毒性。结论 :融合自杀基因 pCEAcd tk/前药体系的旁观者效应的传递方式之一是通过细胞之间的某些介质传递。     

阳离子脂质体介导pE-CEA-cd-tk对CEA阳性肺癌的杀伤作用

目的：增强E.coli cd/HSV-1 tk自杀基因的细胞毒性，实现阳离子脂质体介导pE-CEA-cd-tk/5-FC GCV体系靶向杀伤CEA阳性肺癌，方法：PCR法分别扩增出CMV增强子，CWA启动子，cd-tk，构建真核表达载体pE-CEA-cd-tk;MTT法检测pE-CEA-cd-tk/5-FC GCV体系的体外细胞毒性，体内实验采用肺腺癌细胞SPC－A－1裸鼠皮下移植瘤模型，通过肿瘤局部或鼠尾静脉注射脂质体／pE-CEA-cd-tk复合物，腹腔注射GCV＋5－FC前体药物进行治疗。结果：阳离子脂质体介导pE-CEA-cd-tk/5-FC GCV体系体外可靶向杀伤CEA阳性肺癌细胞，这种杀伤作用存在显著的细胞差异；体内可抑制小鼠皮下肺肿瘤结节的生长，荷瘤鼠存活期延长。结论：阳离子脂质体介导pE-CEA-cd-tk/5-FC GCV体系体内外对CEA阳性肺癌均具有较强的杀伤作用，有望用于CEA阳性肺癌的治疗。     

慢病毒载体介导SPROUTY2基因过表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖作用的影响

目的 探讨慢病毒表达载体介导的人SPROUTY2基因过表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖、克隆性生长和细胞外调节蛋白激酶（ERK）抑制剂敏感性等生物学特性的影响.方法 克隆人SPROUTY2基因,构建SPROUTY2基因与绿色荧光蛋白（GFP）的重组慢病毒表达载体LV-S-GFP及对照载体LV-GFP.脂质体法包装病毒;优化慢病毒感染RPMI8226细胞的条件;荧光显微镜观察GFP表达;反转录聚合酶链反应（PCR）、蛋白质印迹法（Western blot）方法分别检测目的基因及其蛋白的表达,CCK-8法检测RPMI8226细胞增殖及其对ERK 1 /2抑制剂AS703026敏感性的影响,软琼脂克隆形成实验检测细胞的克隆性生长能力.结果 成功地构建了共表达SPROUTY2基因和报告GFP的高滴度慢病毒颗粒.LV-S-GFP实验组RPMI8226细胞中SPROUTY2的表达明显高于LV-GFP对照组,灰度值分别为（230.85±32.12）％和（140.35±36.62）％（P＜ 0.05）.过表达SPROUTY2基因对骨髓瘤细胞增殖具有抑制作用,并可以增强ERK1/2抑制剂AS703026对RPMI8226细胞的杀伤作用.过表达SPROUTY2基因可明显抑制RPMI8226细胞的克隆性生长.结论 慢病毒载体系统可高效介导SPROUTY2基因在RPMI8226细胞中的表达,抑制骨髓瘤细胞增殖及克隆性生长,并能够提高其对ERK抑制剂的敏感性.     

前药5-FC联合胃泌素拮抗剂CI-988对转CD基因大肠癌SW480细胞的杀伤作用

目的：探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶（5-iluorocytosine，5-FC）和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶（cytosinedeaminase，CD）基因的大肠癌SW480细胞生长的影响。方法：将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中，依次分为实验组1、2、3及对照组，分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养。每天胰酶消化法计数各组4孔，共6d，绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率。按上述分组方法另接种培养4组细胞，于培养72h行M1Tr法检测490nm处吸光度A值，计算细胞杀伤率。结果：应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97％；于培养72h时，实验组1、3细胞杀伤率较对照组有显著性差异（P〈0．01）；实验组2与对照组无显著性差异（P〉0．05）；实验组3较实验组1、2有显著性差异（P〈0．01）。结论：CD／5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用，联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD／5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应。     

前药 5-FC 联合胃泌素拮抗剂 CI-988 对转 CD 基因大肠癌 SW480细胞的杀伤作用

目的：探讨联合应用前药5-氟胞嘧啶（5-iluorocytosine，5-FC）和胃泌素拮抗剂CI-988对转组织特异性胞嘧啶脱氨基酶（cytosinedeaminase，CD）基因的大肠癌SW480细胞生长的影响。方法：将转CD基因大肠癌SW480细胞接种至4块24孔细胞培养板中，依次分为实验组1、2、3及对照组，分别以含有前药5-FC、胃泌素拮抗剂CI-988、5-FC联合CI-988及正常培养液进行培养。每天胰酶消化法计数各组4孔，共6d，绘制细胞生长曲线并计算生长抑制率。按上述分组方法另接种培养4组细胞，于培养72h行M1Tr法检测490nm处吸光度A值，计算细胞杀伤率。结果：应用5-FC联合CI-988处理的转CD基因大肠癌SW480细胞在6d后生长抑制率达97％；于培养72h时，实验组1、3细胞杀伤率较对照组有显著性差异（P〈0．01）；实验组2与对照组无显著性差异（P〉0．05）；实验组3较实验组1、2有显著性差异（P〈0．01）。结论：CD／5-FC系统和胃泌素拮抗剂CI-988对转基因大肠癌SW480细胞具有杀伤或抑制作用，联合应用胃泌素拮抗剂可以提高CD／5-FC自杀基因系统对大肠癌细胞的杀伤效应。     

Expression of the bifunctional suicide gene CDUPRT increases radiosensitization and bystander effect of 5-FC in prostate cancer cells

Purpose

To test the hypothesis that, with 5-fluorocytosine (5-FC) treatment, the co-expression of cytosine deaminase (CD) and uracil phosphoribosyltransferase (UPRT) can lead to greater radiosensitization and bystander effect than CD-expression alone.

Methods and materials

R3327-AT cell lines stably expressing CD or CDUPRT were generated. The 5-FC and 5-FU cytotoxicity, and the radiosensitivity with/without 5-FC treatment, of these cells were evaluated under both aerobic and hypoxic conditions. The bystander effect was assessed by apoptosis staining and clonogenic survival. The pharmacokinetics of 5-FU and 5-FC metabolism was monitored in mice bearing CD- or CDUPRT-expressing tumors using ¹⁹F MR spectroscopy (MRS).

Results

CDUPRT-expressing cells were more sensitive to 5-FC and 5-FU than CD-expressing cells. CDUPRT-expression further enhanced the radiosensitizing effect of 5-FC, relative to that achieved by CD-expression alone. A 25-fold lower dose of 5-FC resulted in the same magnitude of radiosensitization in CDUPRT-expressing cells, relative to that in CD-expressing cells. The 5-FC cytotoxicity in co-cultures of parental cells mixed with 10-20% CDUPRT cells was similar to that in 100% CDUPRT cells. ¹⁹F MRS measurements showed that expression of CDUPRT leads to enhanced accumulation of fluorine nucleotide (FNuc), relative to that associated with CD-expression alone.

Conclusion

Our study suggests that CDUPRT/5-FC strategy may be more effective than CD/5-FC, especially when used in combination with radiation.     

硝基还原酶／CB1954自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞杀伤效应的实验研究

目的：体外观察大肠杆菌硝基还原酶／[5-（1-氮丙啶）-2,4-二硝基苯甲酰胺]（以下简称NTR／CB1954）自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞的杀伤效应,探索一种新的宫颈癌基因治疗方法。方法：利用PCR技术从Escherichia coli K12的基因组中扩增出编码NTR的基因nfsB,酶切后,连接到真核表达载体pcDNA3上,获得重组载体pcDNA3-nfsB,lipofectamine^TM2000脂质体转染法将pcDNA3-nfsB转染Hela细胞,筛选稳定表达细胞株,应用RT—PCR以及SDS—PAGE检测NTR在Hela细胞中的表达,Mrrr法检测NTR／CB1954对Hela细胞活力的影响,流式细胞术检测亚二倍体细胞率改变,PI／Hoechest33258双染荧光显微镜下观察Hela细胞凋亡率。结果：成功构建了真核表达载体pcDNA3-nfsB,获得稳定表达NTR的Hela细胞株,在mRNA水平以及蛋白水平检测到NTR在Hela细胞中的表达,NTR／CB1954自杀基因系统明显影响Hela细胞的活力,增加了Hela细胞的凋亡率。结论：NTR／CB1954自杀基因系统对Hela细胞在体外通过凋亡产生明显的杀伤效应。     

硝基还原酶/CB1954自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞杀伤效应的实验研究

目的:体外观察大肠杆菌硝基还原酶/[5-(1-氮丙啶)-2,4-二硝基苯甲酰胺](以下简称NTR/CB1954)自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞的杀伤效应,探索一种新的宫颈癌基因治疗方法.方法: 利用PCR技术从Escherichia coli K12的基因组中扩增出编码NTR的基因nfsB,酶切后,连接到真核表达载体pcDNA3上,获得重组载体pcDNA3-nfsB,lipofectamineTM2000脂质体转染法将pcDNA3-nfsB转染Hela细胞,筛选稳定表达细胞株,应用RT-PCR以及SDS-PAGE检测NTR在Hela细胞中的表达,MTT法检测NTR/CB1954对Hela细胞活力的影响,流式细胞术检测亚二倍体细胞率改变,PI/Hoechest33258双染荧光显微镜下观察Hela细胞凋亡率.结果: 成功构建了真核表达载体pcDNA3-nfsB,获得稳定表达NTR的Hela细胞株,在mRNA水平以及蛋白水平检测到NTR在Hela细胞中的表达,NTR/CB1954自杀基因系统明显影响Hela细胞的活力,增加了Hela细胞的凋亡率.结论: NTR/CB1954自杀基因系统对Hela细胞在体外通过凋亡产生明显的杀伤效应.     

氟胞嘧啶/胞嘧啶脱氨酶自杀基因疗法结合热休克蛋白-多肽复合物治疗小鼠胃癌

目的；研究氟胞嘧啶／胞嘧啶脱氨酶（5－FC／CD）基因疗法与热休克蛋白－多肽复合物（FSP70－PC）免疫疗法联合抗肿瘤效果。方法；将携带CD基因的重组腺病毒注射到小鼠MFC瘤体内，腹腔注射5－FC，同时皮下接种HSP70－PC。结果；经联合治疗后，70％荷瘤小鼠肿瘤体答缩小，消退，小鼠存活期延长，细胞毒T淋巴细胞（CTL）杀伤活性增高，CD4^ 及CD^8 T细胞浸润明显。结论：5－FC／CD基因疗法结合HSP－PC免疫疗法抗小鼠MFC瘤作用显著，具有临床应用前景。