水苏糖对模拟异种心脏移植超急性排斥反应的抑制作用

目的观察水苏糖对猪到人异种心脏移植超急性排斥反应的抑制作用。方法以人血液体外灌注猪游离心脏为基础，模拟猪到人异种心脏移植的超急性排斥反应模型。实验分为A、B两组：即分别用人血液灌注及人血液加水苏糖灌注猪离体心脏。观察灌注后两组心脏的跳动时间；体外灌注1h后，对两组灌注心脏进行免疫组织化学（测定IgG及IgM的沉积）及病理学分析。结果A组灌注心脏平均跳动时间为（9．5±2．5）min；B组灌注心脏平均跳动时间为（46．8±8．1）min，其中有1个心脏在灌注的1h内一直跳动；两组心脏跳动时间比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。A组心肌间质呈弥漫性出血、水肿，血管扩张，内皮细胞肿胀、坏死；免疫组织化学检查显示心肌血管内皮组织中有IgG及IgM沉积。B组心肌间质未见出、凝血和坏死，血管内皮细胞未见肿胀；免疫组织化学检测未见IgG及IgM沉积。结论水苏糖对异种心脏移植超急性排斥反应具有抑制作用。     

延迟性异种移植排斥反应的病理特征及IgG的作用

目的利用小鼠→大鼠心脏移植模型，探讨延迟性异种移植排斥反应(DXR)的病理特征及IgG的作用。方法将移植大鼠随机分成4组对照组(A组，n＝6)；环孢素A(CsA)组(B组，n＝6)，CsA每2日用药1次，每次20mg/kg，自移植当日(day0)起使用；环磷酰胺(CyP)组(C组，n＝6)，移植前1d给予CyP40mg/kg，自移植后第1天起每2日用药1次，每次20mg/kg；CsA加CyP组(D组，n=5)。血清IgG水平用ELISA法测定；C     

猪供人异种移植超急性排斥反应体外实验模型的初步研究

目的 研究通过转基因方法在猪主动脉内皮细胞上表达人ＣＤ５９蛋白,抑制猪供人移植超急性排斥反应。方法 体我２的猪主动脉和人脐静脉内皮细胞,用免疫荧光和免疫组化的方法得到鉴定。构建含入ＣＤ５９ＣＤＮＡ的真核细胞表达载体ＬＸＳＮ－ＣＤ５９,限制性内切酶酶切,琼脂糖凝胶电泳和多聚酶链反应（ＰＣＲ）法鉴定。脂质体转染法将ＬＸＳＮ－ＣＤ５９转化进猪血管内皮细胞,Ｇ４１８筛选得到稳定转化子流式细胞仪筛选得到表达     

建立猪心脏移植至猕猴腹腔内的异位心脏移植模型

目的 评价改进后的猪心脏移植至猕猴腹腔内的异位心脏移植模型的效果。方法 建立21例猪心脏移植至猕猴腹腔内的异位心脏移植模型，其中采用传统手术方法11例，改进方法10例。改进方法为缩短供心缺血时间，调整了手术顺序，先游离受者供吻合的腹主动脉及下腔静脉段后，再行供心切取，并且改进了切取供心的方法。比较2种手术方法的热缺血时间、移植心功能恢复情况及术后并发症。结果 采用传统手术方法时，移植心准备时间为20～30min，热缺血时间为3～5min，总缺血时间为80～90min，再灌注后均未恢复正常的全心搏动，仅见右心收缩，移植后发生并发症较多（包括出血、吻合口血栓形成、肠道并发症及静脉回流不畅等）。改进手术方法后，移植心准备时间为5～10min，热缺血时间〈1min，总缺血时间为35～40min，再灌注后有6例恢复全心搏动，发生并发症较少。结论 改进后的猪心脏移植到猕猴腹腔内的异位心脏移植模型，其手术方法明显优于传统方法。     

眼镜蛇毒因子清除补体对大鼠异种心脏移植超急性排斥反应的影响

目的　探讨眼睛蛇毒因子 (CVF)对血清总补体活性及对豚鼠到大鼠异种心脏移植超急性排斥反应的影响。方法　 1 5只正常大鼠随机分成 3组 ,按组分别一次性静脉给予 2 0、50、1 0 0 μg/kg的CVF ,检测不同时间点的补体活性 ;在豚鼠到大鼠异位心脏移植前 2 4h静脉给予CVF50 μg/kg,观察CVF对异种心脏移植超急性排斥反应的影响。结果　在给予CVF后 6h ,3个剂量组的血清总补体活性均显著降低 ,3个组用药后均未见明显毒副反应。使用CVF的实验组 ,移植的异种心脏存活时间显著延长 ,平均达 56 .1 3h ,对照组仅为 0 .1 9h(P <0 .0 0 1 ) ,病理检查结果证实实验组均未发生超急性排斥反应 ,仅见延迟性异种排斥反应 (DXR)的病理特征 ,对照组均见超急性排斥反应的病理特征 ,且总补体活性较术前有明显下降。结论　眼镜蛇毒因子有良好的降低大鼠补体活性的作用 ,且副作用不明显 ;使用眼镜蛇毒因子可克服豚鼠到大鼠的异种心脏移植超急性排斥反应的发生。     

豚鼠对大鼠异种心脏移植超急性排斥时氧自由基变化

采用豚鼠对大鼠异种心脏移植模型，应用化学发光法和比色法分别测定了移植心切取时、林格氏液（４℃）保存１小时和移植后１小时移植心整体超氧阴离子（Ｏ２＾－）发光峰值和心肌脂质过氧化物（ＭＤＡ）含量，结合光镜和电镜检查，探讨移植心超急性排斥（超排）时组织损伤和氧自由基的关系。结果显示异种移植超排时可产生大量氧自由基，参与超排和多种组织损伤。前列腺素Ｅ１具有一定的抗自由基损伤作用，可稍延迟超排。     

清除补体避免猪到猕猴异种心脏移植超急性排斥反应的实验研究

目的 观察纯化的眼镜蛇毒因子(CVF)对猪到狱猴异种心脏移植超急性排斥反应的影响。方法 以幼猪为供者，施行猪到狱猴腹腔内异位心脏移植，实验组(n＝4)使用CVF完全清除受者体内补体，对照组(n＝5)不使用CVF，两个组术后均采用环抱素A、甲泼尼龙和环磷酰胺抑制排斥反应，通过检测血清C3、C4水平及总补体活性验证CVF的效果，移植心停跳时切取移植心进行病理检查。结果 在使用CVF后，实验组血清C3降为0，总补体活性CH50值也几乎为0，末发现明显毒副反应，移植猪心存活时间平均为lld，最长达13d，病理学提示均发生了延迟性异种排斥反应；对照组3个移植心在移植后60min内发生超急性排斥反应，另2个分别存活22h及6d。结论 纯化的CVF有良好的清除补体的作用，且末见明显副作用；使用CVF可克服猪到狱猴异种心脏移植超急性排斥反应的发生。     

补体在猪到猴异种心脏移植中的作用及机理

目的 探讨补体在异种大动物猪到猴心脏移植排斥反应中的作用及机理.方法 以梅山猪为供者,中国猕猴为受者,行异种腹腔异位心脏移植.随机将受者分为3组.A组(5只):为空白对照组,受者心脏移植后不作任何处理.B组(5只):为照射预处理组,受者于心脏移植前28 d、即1.5个月龄时接受60Coγ3 Gy全身剂量照射,其余同A组.C组(8只):为照射+胸腺注射预处理组,心脏移植前21 d,将供者的脾细胞(按照5×107个/只的数量)注入受者的两侧胸腺内,其余同B组.观察心脏移植术后各组移植心的存活时间;猪对猴单向混合淋巴细胞培养的刺激效应;采用双抗体夹心法检测补体C3和CD46的血清浓度;通过流式细胞术检测受者外周血细胞表面IgM、IgG阳性细胞百分比水平.结果 A、B、C三组移植心的存活时间分别为:(36.6±5.8)h、(65.6±6.5)h和(91.1±22.8)h,C组移植心的存活时间明显延长,与A组比较,P＜0.01,与B组比较,P＜0.05.C组在猪对猴单向混合淋巴细胞反应中的刺激效应较A、B组明显下降(P＜0.01).B、C组移植前补体水平(C3)无明显变化,但随着IgM、IgG水平的上升,发生排斥反应时C3和CD46水平显著降低.C组猕猴特异性抗猪抗体IgM及IgG的上升速度均较A、B组明显延缓.结论 对受者进行异种胸腺注射联合全身照射预处理在抑制T淋巴细胞免疫及体液免疫方面有重要作用,但无法抑制异种排斥反应中补体的激活,补体通过经典途径参与了延迟性异种排斥反应的发生.     

异种肝移植急性排斥反应中细胞凋亡的研究

目的 观察肝移植急性排斥反应中移植肝细胞凋亡，并初步探讨其分子机制。方法 三袖套法建立肝移植急性排斥应模型，普通组织及原位末端标记法检测移植中细胞凋亡，免疫组织化学方法检测移植肝中Fas-L，TGF-β1的表达。结果 在肝移植急性排斥反应中，移植肝出现细胞凋亡，并表达Fas-L、TGF-β1，随着肝移植急性排斥反应的加重，其细胞凋亡增多，Fas-L,TGF-β1表达增高。结论的细胞凋亡作为细胞死亡的一种机制，存在于肝移植急性排斥反应中，其机制与Fas-L,TGF-β1有关，可作为判断肝移植免疫排斥反应的指标。     

水苏糖在猪到猴异种心脏移植超急性排斥反应中的作用（附视频）

目的观察水苏糖在猪到猕猴异位心脏移植超急性排斥反应中的作用。方法采用猪到猕猴腹腔内心脏异位移植模型。根据是否经水苏糖处理分为实验组及对照组,每组3只猕猴,观察移植心脏移植后24h内持续搏动时间和组织形态学变化。结果对照组移植心脏持续搏动时间分别为5、15、20min;心肌间质弥漫性出血、水肿,血管扩张,内皮细胞肿胀、坏死。实验组移植心脏持续搏动时间分别为50min、97min和24h;心肌间质未见出血、坏死,血管内皮细胞未见肿胀。结论水苏糖可能对猪到猕猴异位心脏移植的超急性排斥反应有抑制作用。     

异种心脏移植急性血管性排斥反应期组织因子与凝血的关系

目的探讨异种心脏移植后急性血管性排斥反应期移植心心肌中供、受者的组织因子与凝血的关系。方法供者为清洁级豚鼠,受者为清洁级SD大鼠。随机配对平均分为6组。建立异种心脏移植急性血管性排斥反应期动物模型。分别于移植术后0(未行心脏移植)、4、8、12、16和24h切取移植心脏,使用免疫组织化学染色法观察移植心的心肌凝血程度;同时采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)监测移植心心肌中组织因子的表达。结果移植后8h,移植心心肌凝血程度明显,并随移植时间延长逐渐加重。供者组织因子mRNA表达在移植后4h最强,随后逐渐减弱,至移植后16h消失;受者组织因子mRNA表达在移植后16h出现,随后逐渐增强。结论移植心心肌中的组织因子在异种心脏移植后急性血管性排斥反应期凝血中起重要作用,其中供者的组织因子可能与凝血的激发有关,受者的组织因子可能与凝血的加重有关。     

补体抑制治疗与心脏移植超急性排斥反应

心脏移植超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)与补体系统激活有关,迅速导致移植心脏功能丧失.动物实验中使用眼睛蛇毒因子、可溶性补体受体1、补体调节蛋白以及C5单克隆抗体等补体抑制剂,可以从补体级联反应的不同水平抑制同种或异种心脏移植HAR的发生.抑制补体激活将在临床心脏移植HAR的预防及治疗中显示出重要的作用.     

巴利昔单抗联合三联免疫抑制方案预防心脏移植后急性排斥反应

目的 评价巴利昔单抗联合常规三联免疫抑制方案预防心脏移植后排斥反应的临床效果及安全性.方法 2004年6月至2011年1月接受心脏移植的受者共214例.所有受者均在术前1h和术后4d时各应用1次巴利昔单抗,剂量为20 mg/次,三联免疫抑制方案为环孢素A(CsA)+吗替麦考酚酯(MMF)+皮质激素.术后采用心内膜活检诊断排斥反应,并按照国际心肺移植协会(ISHLT)的分级标准评价急性排斥反应的严重程度.术后对受者随访1年,收集心内膜活检及发生排斥反应的资料,观察术后并发症的发生情况及死亡情况.结果 受者接受心内膜活检的时间为术后(20.1±7.3) d(1～60 d),结果显示,Ⅰa 级63例(29.4％),Ⅰb 级8例(3.7％),Ⅱ级12例(5.6％);术后1年,143例受者接受心内膜活检,结果显示,Ⅰa 级29例(20.3％),Ⅰb 级1例(0.7％)及Ⅱ级11例(7.7％).住院期间,共有5例受者死亡,死亡原因包括移植心脏功能衰竭3例,多器官功能衰竭1例及猝死1例;出院后至术后1年内,有2例受者死亡,死亡原因包括严重排斥反应1例和多器官功能衰竭1例.术后1个月内,发生感染7例(3.3％),发生急性肾功能不全11例(5.1％),无受者发生肝功能衰竭.结论 应用巴利昔单抗联合常规三联免疫抑制方案是预防心脏移植术后早期急性排斥反应安全、有效的方式.     

受体血清“封闭”供肝预防异种肝移植超急性排斥反应

目的 探讨受体血清“封闭”供肝对异种肝移植超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)的预防作用.方法 取豚鼠和SD大鼠各20只,分别作为供体和受体,供受体随机配对;移植前采集受体大鼠近交系其他个体血清,45℃水浴灭活补体备用;实验组(n=10)术前用0.1％受体血清(recipient serum,RS)的Ringer液“封闭”供肝,对照组(n=10)仅用Ringer液灌洗供肝;采用改良“双套管法”行豚鼠、SD大鼠原位肝移植,观察供肝植入后形态学改变、受体存活时间、术后1h存活率,HE染色法检测移植肝微血栓、出血和肝细胞水肿等病理损害积分;检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)评价肝功能.结果 两组大鼠供体异种肝移植时间和无肝期比较,差异无统计学意义(P＞0.05);对照组受体大鼠供肝充盈缓慢,灌注不均,实验组供肝充盈迅速,灌注较均匀;实验组受体大鼠术后存活时间和术后1h存活率较对照组均明显增加(P＜0.01),移植肝微血栓、间质出血(积分)较对照组明显减轻(P＜0.01),肝细胞水肿无明显差异(P＞0.05);血清丙氨酸转氨酶(ALT)较对照组明显下降(P＜0.05).结论 受体血清“封闭”供肝对异种肝移植HAR具有一定的抑制作用,是预防器官移植HAR的潜在方法之一.