华支睾吸虫乳酸脱氢酶(CsLDH)亚细胞及虫体组织定位

目的真核表达华支睾吸虫乳酸脱氢酶基因并研究CsLDH的亚细胞及虫体组织定位。方法构建pEGFP-N1-CsLDH真核表达质粒,转染HeLa细胞,通过绿色荧光蛋白标签GFP的示踪来揭示CsLDH在HeLa细胞中的亚细胞定位;免疫组织化学方法进行CsLDH的虫体组织定位。结果双酶切和测序均表明真核表达重组质粒pEGFP-N1-CsLDH构建成功,经RT-PCR鉴定转染正确的HeLa细胞能稳定表达,部分HeLa细胞的细胞膜出现强烈的绿色荧光;免疫组织化学的结果显示CsLDH主要定位成虫的表膜,口、腹吸盘,咽及肠支处。结论华支睾吸虫乳酸脱氢酶为定位于虫体皮层和消化道界面的膜蛋白。     

广东省三水市华支睾吸虫病的防治研究

１９８６－１９８８年和１９９０－１９９２年分别在本市董永区和官元区，以反复查治病原方法防治华支睾吸虫病，并对中间宿主及保虫宿主进行调查。经两次查治后，人群华支睾感染率董永区从４３．６％降为１３．２％，官元区从７８．５％降为３６．３％。当地第一中间宿主是长角涵螺，第二中间宿主是鲸鱼和鳊鱼。在猫粪便中发现华支睾吸虫虫卵，在狗和猪胆管内均发现华支睾吸虫卵及成虫。     

重组华支睾吸虫诊断抗原研究进展

华支睾吸虫多种诊断抗原的基因已被克隆和重组表达，一些重组抗原已初步应用于华支睾吸虫病的免疫学诊断，显示出较高的诊断价值。     

不同化疗方案防治华支睾吸虫病的比较研究

据“全国人体寄生虫分布调查”( 1988～ 1992 )结果显示 ,黑龙江省华支睾吸虫病感染率位居全国第二 ,防治任务十分艰巨。本研究选择感染率较高的肇源县、海林市和宁安县 ,于2 0 0 1～ 2 0 0 3年进行了不同化疗方案防治华支睾吸虫病的比较研究 ,以便为本省制定切实可行的防治对策提供科学依据。1　材料与方法1.1　研究对象　采用Kato Katz厚涂片法 ,在肇源县、海林市及宁安县进行了基线调查 ,肇源 6村为重度流行地区 (虫卵阳性率为 40 %以上 ) ,海林 2村、宁安 1村为中度流行地区 (虫卵阳性率为 2 0 %左右 )。计划每个试点村每年跟踪调查 2 …     

亲和层析法纯化华支睾吸虫抗原的研究

目的探索华支睾吸虫特异性抗原的纯化方法。方法从华支睾吸虫病流行区的淡水鱼中分离华支睾吸虫囊蚴,接种动物,收集成虫,制备匀浆液(粗抗原),借助偶联华支睾吸虫病人血清抗体的Sepharose4B亲和层析柱,提取特异性抗原,用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(CG-PAGE)和免疫印迹方法鉴定纯化抗原的纯度和特异性。结果亲和层析法纯化抗原经CG-PAGE显示5条蛋白带,免疫印迹试验鉴定均有抗原性,强阳性带蛋白分子质量单位为31ku,各区带蛋白与并殖吸虫、血吸虫血清抗体无交叉反应。粗抗原有16条蛋白带。结论经亲和层析法纯化的华支睾吸虫抗原特异性高。亲合层析是获取华支睾吸虫诊断用抗原的较佳方法。     

4096例华支睾吸虫感染病例分析报告

华支睾吸虫又称肝吸虫，人误食生的或未熟透的含有华支睾吸虫囊蚴的淡水鱼或被含囊蚴的鱼肉污染的食物而感染。我院2001-2004年粪检查出华支睾吸虫感染4906例，现报道如下。     

吡喹酮治疗门诊华支睾吸虫病患者的疗效观察

目的 探讨使用吡喹酮治疗门诊华支睾吸虫病患者临床疗效,为门诊常规驱虫治疗提供依据.方法 选取2018年1月—2020年12月在南宁市武鸣区寄生虫病防治门诊就诊的2241例华支睾吸虫病患者为观察对象,给予吡喹酮总剂量7200 mg分3日9剂次服用驱虫治疗,同时服用消炎利胆片、护肝片、维生素B6等辅助药物,观察并分析治疗效...     

广西梧州市人群华支睾吸虫感染情况调查

目的 了解梧州市华支睾吸虫感染情况,探讨华支睾吸虫病感染方式、途径等流行病学特征,为开展华支睾吸虫病防控提供科学依据.方法 根据梧州市地理方位、居民生活习惯选择万秀、长洲和蝶山三个城区作为调查点,用改良加藤氏厚涂片法粪检华支睾吸虫虫卵,阳性者计算克粪虫卵数( eggs per garm of faces,EPG).结果 共调查3 078人,华支睾吸虫平均感染率为4.48％.其中万秀区感染率为6.45％;长洲区感染率为4.23％;蝶山区感染率为2.79％.男性和女性的感染率分别是6.13％和2.74％.所有年龄组均有感染,以20～岁组至60～岁组较高,EPG1～999占90.57％.结论 梧州市是华支睾吸虫病轻度流行区,食鱼生是感染华支睾吸虫主要途径,应积极开展综合性防治工作.     

江门市蓬江区华支睾吸虫病防治试点效果观察

2008年6月～12月在江门市蓬江区华支睾吸虫病综合防治示范区随机抽取5个村,每个村检查500人左右。采用改良加藤厚涂片法(一送三检)检测华支睾吸虫感染率,同时对感染者进行驱虫治疗。治疗后1个月,每个村再随机选取50人,粪检华支睾吸虫卵。治疗后1年,从大林村和三丫村治疗者中再次随机各选取50人,粪检虫卵。在开展宣传教育前后,问卷调查华支睾吸虫病防治知识知晓率,调查无害化卫生户厕普及和使用情况。结果 5个村华支睾吸虫平均感染率为21.5%(537/2 501),感染者自愿治疗率为86.6%(465/537)。治疗后1个月,除富岗村外,其他4个村华支睾吸虫感染率明显下降(P<0.05)。治疗后1年,大林和三丫村华支睾吸虫阳性率与治疗后1个月相近(P>0.05)。问卷调查分析结果显示,华支睾吸虫感染者经常食鱼生者占41.2%(170/413),明显高于未感染者4.2%(8/192)(P<0.05);开展防治知识宣传后,村民华支睾吸虫病防治知识知晓率从23.1%(135/584)上升到84.5%(349/413)(P<0.05)。卫生户厕普及率93.2%(38 068/40 848),使用率100%。     

华支睾吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的功能鉴定

目的克隆肝吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因并在大肠杆菌内表达,同时对表达的重组蛋白进行初步的功能分析,为进一步的研究和药物筛选打下基础。方法通过大规模测序从肝吸虫cDNA文库中确定肝吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因,采用PCR方法扩增出目的片段,与表达质粒pGEX-4T-1连接构建重组质粒,IPTG诱导表达;研究重组蛋白的理化性质及酶动力学特征,并寻找可能的抑制剂。结果成功表达出约64 kDa的重组蛋白,凝血酶切后为36 kDa蛋白,其酶活性为63.6U/mg。1.14 mM 4,4′-二甲氨基联苯甲醇处理30 min酶活性下降了60%;吡喹酮、灭滴灵和阿苯哒唑对酶活性无抑制作用;而5’-单磷酸腺苷对重组酶有竞争性抑制作用,其Ki为0.49。结论成功地表达了目的蛋白,为药物筛选提供了一个易于获得的候选蛋白分子。     

华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶活性位点氨基酸点突变对酶活性和热稳定性影响

目的为了研究华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸的点突变对酶活性和热稳定性的影响,进一步了解蛋白分子结构与功能的关系。方法利用PCR技术,对胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸基因进行点突变,与pQE30质粒连接构建重组质粒,转染大肠杆菌后表达蛋白,测定酶活性和圆二色性,测定不同温度时222nm圆二色性改变,确定不同点突变蛋白的热稳定性。结果H195被异亮氨酸、半胱氨酸和酪氨酸置换后,酶活性下降了100倍以上,但随着H195被不同氨基酸置换和H195周围氨基酸被置换情况的不同,不同突变株表达的蛋白酶活性差别很大,H195/I195和H195/Y195突变株表达的蛋白酶活性明显高于H195N197/I195Y197和H195T198/C195M198突变株表达的蛋白酶活性;H195/Y195突变株表达的蛋白与未突变蛋白的二级结构差异明显;H195/Y195和H195T198/C195M198突变株表达的蛋白热稳定性明显降低,tm值分别为63.5℃和64℃,比Cs cMDH的tm值分别下降了4℃和3.5℃。结论活性中心H195的点突变可导致华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶活性的明显下降,而且H195被不同的氨基酸置换后可导致酶活性下降程度的不同,H195周围氨基酸被替换成具有形成氢键或二硫键的氨基酸后,导致酶活性下降更为明显;H195及其周围氨基酸的突变可导致蛋白质二级结构的改变和热稳定性的不同程度下降。     

三苯双脒、青蒿琥酯和吡喹酮治疗感染华支睾吸虫金色仓鼠的疗效观察

目的 观察三苯双脒、青蒿琥酯和吡喹酮对感染华支睾吸虫金色仓鼠的疗效。 方法 93只仓鼠各感染30个华支睾吸虫囊蚴, 分组后灌胃顿服给药治疗, 观察各组疗效。① 31只感染仓鼠中, 20只于感染后14 d随机均分为4组, 分别为青蒿琥酯300 mg/kg组、三苯双脒100 mg/kg和200 mg/kg组、吡喹酮200 mg/kg组, 观察药物对华支睾吸虫童虫的作用;另6只于感染后24 d随机均分为2组, 分别为三苯双脒200 mg/kg组和青蒿琥酯300 mg/kg组;余5只作对照组。② 22只仓鼠于感染后28 d随机分成5组（每组4～5只）, 分别为三苯双脒25 mg/kg和50 mg/kg组、青蒿琥酯25 mg/kg组、吡喹酮50 mg/kg组, 以及对照组。③ 40只仓鼠于感染后28 d随机分成8组（每组4～6只）, 分别为三苯双脒50 mg/kg、100 mg/kg和200 mg/kg组, 青蒿琥酯100 mg/kg和200 mg/kg组, 吡喹酮100 mg/kg和200 mg/kg组, 以及对照组。各组受治鼠于治疗后2周剖杀, 收集胆道系统内的残留华支睾吸虫, 计算各组的平均虫数和减虫率。 结果 仓鼠感染华支睾吸虫囊蚴后14 d, 三苯双脒100 mg/kg和200 mg/kg组, 以及吡喹酮200 mg/kg组的平均虫数均显著低于对照组（P<0.05）, 减虫率分别为90.6%、85.9%和71.9%;青蒿琥酯300 mg/kg组平均虫数与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。感染后24 d, 童虫已发育为成虫, 三苯双脒200 mg/kg组平均虫数显著低于对照组（P<0.01）, 减虫率为89.8%;青蒿琥酯300 mg/kg组的减虫率为100%。感染后28 d, 三苯双脒25 mg/kg组平均虫数显著低于对照组（P<0.05）, 减虫率为71.8%, 剂量增至100 mg/kg时, 减虫率为100%;青蒿琥酯25 mg/kg和100 mg/kg组的减虫率分别为20.0%和56.4%, 剂量增至200 mg/kg时, 减虫率为98.5%, 其平均虫数显著低于对照组（P<0.01）。吡喹酮100 mg/kg和200 mg/kg组的减虫率分别为78.9%和83.5%, 其平均虫数均与对照组的差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 三苯双脒和吡喹酮对感染华支睾吸虫童虫和成虫的仓鼠均有较好的疗效, 青蒿琥酯仅对成虫有效。     

华支睾吸虫cDNA文库的构建

目的　构建华支睾吸虫cDNA文库。方法　采集华支睾吸虫阳性鱼 ,分离囊蚴 ,感染实验动物兔 ,解剖兔收集华支睾吸虫成虫虫体。应用“一步法”提取华支睾吸虫总RNA ;经过mRNA纯化、cDNA合成 ,以PcDNA3(Amp +)质粒为载体构建文库。挑取 2 0个克隆进行扩增 ,选择 9个克隆进行DNA序列测定。序列结果与GenBank中相关基因进行比对。结果　获得含有 9 7× 10 5个重组子库容量的华支睾吸虫cDNA文库。其中PC6号克隆基因序列与华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶序列具有 93%的同源性。结论　已构建成华支睾吸虫cDNA文库。     

华支睾吸虫分泌蛋白基因（CsCrSP）的克隆和生物信息学分析

目的 筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因，克隆并构建重组表达载体。 方法 对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选，通过BLASTn程序进行序列比对，识别华支睾吸虫新基因，并应用Motifscan，NCBI Conserved Domain Search等程序对其进行结构域及进化树分析。 结果 筛选出华支睾吸虫未知基因Pcs004f03序列，含689 bp；应用Vecter NTI分析，理论相对分子质量（Mr）为21 000，完整的ORF含561 bp，编码187aa。该基因有潜在的糖激化位点、3个N肉豆蔻酰化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、蛋白激酶Ｃ磷酸化位点、cAMP-and cGMP依赖蛋白激酶磷酸化位点。利用软件在线搜索发现在第1～50aa内有一明显的信号肽，初步推断CsCrSP为一种分泌蛋白。结论 CsCrSP基因为华支睾吸虫富含半胱氨酸分泌蛋白基因。     

华支睾吸虫致胆管癌的研究进展

华支睾吸虫是胆管癌的一个重要的生物性致癌因素,其成虫寄生在宿主的肝胆管内,成虫的机械性刺激、分泌排泄产物的化学刺激和成虫定居所致的慢性炎症等导致了寄生部位胆管的增生、癌变.该文从流行病学、动物实验及分子机制等方面对华支睾吸虫致胆管癌的研究进行了综述.     

华支睾吸虫的组织化学研究

用组织化学方法观察华支睾吸虫成虫各种物质的分布和定位。结果其糖原、蛋白质、脂肪、核酸ACP、酚酶的分布与文献记载基本一致,但ACP的分布较为局限,活性低下。虫体的SDH,MDH、MAO、G-6-P、G-ATP等五种酶系首次记载,前三者的分布以皮层、皮下,睾丸、卵巢与吸盘为主,SDH和MDH的活性较MAO强,G-6-P与糖原的分布颇为一致,主要在虫体的实质组织和皮下肌层,在皮层与皮下肌层的Ca-ATP活性较强。     

华支睾吸虫卵与灵芝孢子的鉴别

在近几年的粪便常规检验中,常发现有一种酷似华支睾吸虫卵样物质,给实验室诊断带来不便。该文通过对患者服药后粪便涂片、灵芝类药物研碎后的生理盐水涂片及寄生虫学教研室保存的华支睾吸虫卵标本涂片的对比研究,总结出华支睾吸虫卵与灵芝孢子的鉴别要点。