血液透析中NADPH氧化酶在氧化应激产生中的作用

长期血液透析(HD),由于透析系统的生物不相容性激活了中性粒细胞,产生呼吸爆发,造成大量氧自由基的产生以及机体抗氧化系统严重破坏,出现了氧化应激.本文综述了中性粒细胞NADPH氧化酶在氧化应激产生中的作用、氧化应激促HD病人动脉粥样硬化形成的机制以及相应防治措施的进展.     

NADPH氧化酶1在胆囊癌组织中的表达及临床意义

[摘 要] 目的 探讨NADPH氧化酶1（NOX1）在胆囊癌组织中的表达及其临床意义。方法 运用实时荧光定量PCR（qPCR）及免疫组化分别检测正常胆囊组织及胆囊癌组织中NOX1 mRNA及蛋白表达量,并分析其表达量与胆囊癌患者临床病理学资料及生存预后之间的关系。结果 （1）qPCR及免疫组化显示,胆囊癌组织中NOX1 mRNA及蛋白表达量较正常胆囊组织显著升高,差异具有统计学意义（均P < 0.05）;（2）胆囊癌组织中NOX1蛋白表达水平与患者有无吸烟、胆囊结石、血清CA19-9水平、淋巴结转移、肿瘤分级及TNM分期相关（均P < 0.05）;（3）淋巴结及远处转移、TNM分期、手术方式及NOX1 蛋白表达水平是影响胆囊癌患者预后的独立危险因素。结论 NOX1在胆囊癌组织中表达显著升高,有望成为胆囊癌恶性生物学行为的重要指标。     

NADPH氧化酶DUOX1在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨NADPH氧化酶DUOX1在肝细胞癌（HCC）中的表达及其与临床病理指标及预后的关系。方法选取7株人HCC细胞系及1株人正常肝细胞系、30例正常肝组织及103例肝癌标本作为研究对象,采用RT-PCR的方法研究DUOX1mRNA的表达情况,结合临床病理指标及预后进行分析。结果DUOX1mRNA在MHCC-97H、MHCC-97L及BEL7402细胞系中表达,在HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Changliver和L02中无表达。30例正常肝组织中均无表达。在肝癌和癌旁肝组织中表达阳性率分别为53．4％（55／103）和14．5％（15／103）,差异有高度统计学意义（P〈0．01）。相关性统计分析提示肝癌组织中DUOXImRNA表达状态与性别、年龄、有无卫星结节及术前AFP水平相关。单因素分析提示影响肝癌术后总体生存率的因素为性别、年龄、肿瘤直径、有无卫星结节、有无门静脉癌栓、TNM分级以及DUOX1mRNA表达状态。多因素分析提示影响肝癌术后总体生存率的因素为肿瘤直径、有无门静脉癌栓及DUOX1mRNA表达状态。结论肝癌组织DUOX1mRNA表达状态是肝癌术后总体生存的独立预后因素,DUOX1基因可能与肝癌的发生发展有关。     

NADPH氧化酶与男性勃起功能障碍

勃起功能障碍是男性的常见病和多发病。目前认为氧化应激是引起阴茎勃起功能障碍的重要机制之一。NADPH氧化酶广泛存在于机体多个系统(包括阴茎组织),发挥重要的生理功能。在多种病理情况下,NADPH氧化酶可以在阴茎组织中催化合成大量活性氧,导致过度氧化应激,从而影响阴茎勃起功能。本文就NADPH氧化酶的组成、同源物、活性调节、生理功能、在勃起功能障碍中的作用以及在勃起功能障碍治疗中的应用作一综述。     

兔髂动脉再狭窄与NADPH氧化酶的关系

目的研究NADPH氧化酶与血管壁活性氧(ROS)生成及再狭窄的关系。方法构建兔髂动脉2次损伤后再狭窄模型,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测2次损伤后不同时段兔髂动脉NADPH氧化酶催化亚基gp91phox和p22phox mRNA表达的变化;原位杂交观察gp91phox和p22phox mRNA表达在血管壁的定位。结果gp91phox mRNA的表达在2次损伤后逐渐上升,在14 d(1．554±0．105)、28 d(1．444±0．360)达到峰值,与术后即刻组(0．572±0．018)比较,差异有统计学意义(P<0．01);p22phox mRNA的表达在2次损伤即刻(1．514±0．036)即处于高水平,术后1 d(0．832±0．059)略有下降后又逐渐升高,并在14 d(1．714±0．249)、28 d(1．564±0．151)达峰值。在2次损伤后,各时段血管壁gp91phox和p22phox mRNA均可见阳性表达,其表达主要位于新生内膜和外膜。结论NADPH氧化酶各个亚基在再狭窄过程中可能行使不同功能;氧化酶主要在新生内膜与外膜发挥作用。     

NADPH氧化酶在转化生长因子β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨NADPH氧化酶在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）转分化中的作用。方法用TGF-β1（10μg/L）刺激NRK-52E细胞不同时间,观察α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI- 1）及Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）的表达。部分实验中细胞在TGF-β1刺激前用NADPH氧化酶抑制剂DPI预处理1 h。用激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧（ROS）的产生。用RT-PCR方法检测NADPH氧化酶p22phox、gp91phox、p47phox和p67phox亚单位mRNA的表达。α-SMA、E-cadherin、PAI-1及Col-ⅠmRNA及蛋白的表达分别采用RT-PCR、Western印迹和细胞免疫化学检测。结果TGF-β1可显著上调NADPH氧化酶p67phox亚单位mRNA的表达,8 h及24 h时分别为对照组的2.43倍及3.59倍（P〈0.01）。TGF-β1可显著促进细胞ROS的产生,5 min时已是对照组的2.5倍（P〈0.05）。DPI预处理同时可显著逆转TGF-β1诱导NRK-52E细胞ROS的产生（P〈0.05）、α-SMA的表达上调、E-cadherin的表达下调以及PAI-1和Col-Ⅰ的表达上调。结论TGF-β1可促进NRK-52E细胞增加ROS的产生。ROS介导了TGF-β1诱导NRK-52E细胞的转分化,促进肾脏纤维化。     

NADPH氧化酶介导的小胶质细胞活化在神经病理性疼痛和抑郁共病中的作用

目的观察神经病理性疼痛和抑郁共病中磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶及小胶质细胞的变化,并探讨其相关机制。方法采用保留性坐骨神经损伤模型(SNI模型)。健康成年雄性SD大鼠44只,随机分为四组:假手术+溶剂组(SV组)、假手术+夹竹桃麻素(APO)组(SA组)、SNI+溶剂组(SNV组)、SNI+APO组(SNA组),每组11只。SA组和SNA组术前24h及术前1h腹腔注射APO 15mg/kg,以后每天注射1次直至SNI术后14d;其余两组在相同时点注射等容量溶剂。术前1d和术后7、14d进行机械缩足反射阈值(MWT)测试,术后14d进行旷场实验、强迫游泳实验和糖水偏好实验等行为学测试。行为学后2h取大鼠前额叶皮层组织,采用Western blot法检测gp91~(phox)的含量,免疫荧光共标法检测Iba1和gp91~(phox)的表达量。结果与SV、SA、SNA组比较,SNV组MWT明显降低,强迫游泳不动时间明显延长,糖水消耗比例明显减少,gp91~(phox)含量明显增多(P0.05)。与SV、SA、SNA组比较,SNV组Iba1和gp91~(~(phox))表达量增多。旷场实验中,四组探索总路程差异无统计学意义;糖水偏好实验中,四组总液体消耗量差异无统计学意义。结论神经病理性疼痛可导致抑郁样行为,并引起前额叶皮层的NADPH氧化酶活化;NADPH氧化酶抑制剂APO可减轻疼痛和抑郁样行为,其机制可能与抑制小胶质细胞活化有关。     

大鼠ETFβ基因过表达对NADPH氧化酶基因表达的影响

目的:构建大鼠ETFβ的重组质粒并检测其在人胚胎肾293T细胞中的表达和对NADPH氧化酶的影响。方法:应用RT-PCR方法从大鼠肾脏组织总RNA中扩增出编码ETFβ的cDNA,克隆至pUM-T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,酶切鉴定后测序,测序正确后用磷酸钙共沉淀法瞬时转染HEK293T细胞,使用RT-PCR方法检测空载体组和重组质粒转染组的NADPH氧化酶各亚基mRNA水平的表达变化。结果:(1)测序结果证实PCR扩增得到编码ETFβ的cDNA序列正确;(2)磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞后,ETFβ融合蛋白成功表达;(3)RT-PCR结果显示重组质粒转染组的NADPH氧化酶5个亚基中的NOX3,NOX4的mRNA表达降低(P<0.05),空载体组和重组质粒转染组之间比较NOX1,NOX2,NOX5的mRNA表达差异无统计学意义。结论:成功构建大鼠ETFβ的重组质粒,该重组质粒可在HEK293T中过表达,并且降低了NADPH氧化酶NOX3,NOX4的mRNA表达水平。     

NADPH氧化酶介导血管紧张素Ⅱ诱导的腹膜间皮细胞转分化及细胞外基质积聚

目的 探讨NADPH氧化酶在血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的腹膜间皮细胞转分化以及细胞外基质积聚中的作用。 方法 体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞，静止24 h后，随机分为以下4组：正常对照组，AngⅡ（10^-7 mol/L）组，AngⅡ+ Los(洛沙坦,10 μmol/L)组及AngⅡ+DPI（NADPH氧化酶活性抑制剂，10 μmol/L）组。应用荧光染料（DCF）及激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧（ROS）的产生。RT-PCR检测NADPH氧化酶亚单位p47phox以及纤溶酶原激活物抑制剂（PAI）1、α平滑肌肌动蛋白（SMA）、E钙黏蛋白（cadherin） mRNA的表达。Western印迹检测p47phox、α-SMA的蛋白表达。 结果 （1）外源性AngⅡ可显著增加大鼠腹膜间皮细胞ROS的产生，刺激15 min后，ROS 的表达较对照组上升了(3.64±0.53)倍。DPI和洛沙坦可显著抑制AngⅡ刺激后ROS的产生（P < 0.05）。（2）AngⅡ刺激腹膜间皮细胞后， NADPH氧化酶亚单位p47phox mRNA和蛋白的表达均呈上升趋势。洛沙坦和DPI可阻断由AngⅡ诱导的p47phox表达上调（P < 0.05）。（3） AngⅡ诱导α-SMA表达的上调以及 E-cadherin mRNA的下调, 洛沙坦和DPI可部分逆转AngⅡ的这种作用。（4）AngⅡ刺激8 h后可明显上调PAI-1的mRNA表达，为正常对照组的（3.06±0.77）倍。 洛沙坦和DPI可明显阻断PAI-1的表达上调（P < 0.05）。 结论 NADPH氧化酶依赖产生的ROS介导了AngⅡ诱导的腹膜间皮细胞转分化及细胞外基质积聚。阻断AngⅡ的作用及抑制NADPH氧化酶的表达和活性可作为防治腹膜纤维化的潜在治疗靶点。     

糖肾方下调NADPH氧化酶表达减轻UUO小鼠肾脏氧化损伤的机制研究

目的:探讨糖肾方对UUO模型小鼠肾脏氧化损伤的影响.方法:选用7周龄的雄性C57BL/6N小鼠,随机分为假手术组、UUO模型组(UUO模型7 d组、UUO模型14 d组)、糖肾方组(UUO+糖肾方7 d组、UUO+糖肾方14 d组)、福辛普利组(UUO+福辛普利7 d组、UUO+福辛普利14 d组).预给药5 d后造模...     

TGF-β1对大鼠腹膜间皮细胞ROS和NADPH氧化酶亚基p67phox表达的影响及黄芪的干预作用

目的:探讨TGF-β1对大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)活性氧(ROS)和NADPH氧化酶亚基p67phox表达的影响及黄芪注射液(AGI)对其的干预作用。方法:体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞至第二代,静止24h后,随机分为:正常对照组(A组),AGI(2g/ml)组(B组),TGF-β1(10ng/ml)组(C组),TGF-β1+AGI(2g/ml)组(D组,AGI预处理1h)。用荧光染料(DCF)及激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ROS)。RT-PCR检测NADPH氧化酶亚基p67phox mRNA的表达;Western印迹检测p67phox的蛋白表达。结果:TGF-β1可显著增加大鼠腹膜间皮细胞ROS产生,刺激20min后,ROS的表达较对照组显著上升(P<0.05)。AGI可显著抑制TGF-β1刺激后ROS的产生(P<0.05);大鼠腹膜间皮细胞经TGF-β1刺激后,NADPH氧化酶亚基p67phox mRNA和蛋白的表达均上升,AGI可抑制TGF-β1诱导的p67phox mRNA和蛋白的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β1可诱导大鼠腹膜间皮细胞产生的ROS增加、NADPH氧化酶亚基p67phox表达上调;AGI可抑制NADPH氧化酶的表达和活性ROS的产生,从而为AGI防治腹膜纤维化提供了理论依据。     

NADPH酶及活性氧与男性勃起功能障碍

男性性功能是一个复杂的生理过程,由一系列条件反射和非条件反射活动来完成.阐明勃起的调节机制可以为治疗提供理论依据,一氧化氮(NO)被认为在勃起生理中起非常重要的作用,研究显示增加其他活性氧可以减少NO产牛和生物利用度,导致内皮功能受损和勃起功能障碍(ED)[1].大量证据表明:活性氧(ROS)在正常生理功能和不同疾病发病机制中起重要作用.ROS通过非酶途径和酶途径产生,例如NADPH酶、黄嘌呤氧化酶、非配对内皮NO合成酶、细胞色素P450和线粒体呼吸链.在正常状态F,通过胞内抗氧化酶,包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化酶和谷胱甘肽还原酶,细胞内抗氧化系统和ROS产生处于动态平衡,细胞通过上调抗氧化酶活性对抗增加的ROS的副作用[2].     

福辛普利对糖尿病大鼠肾脏NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA表达的影响

目的 观察福辛普利对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶p22phox 亚基mRNA表达及细胞外基质（ECM）聚积的影响，并探讨其可能机制。 方法 STZ诱导的糖尿病大鼠模型，随机分为糖尿病非治疗组（DM组）和福辛普利治疗组（DM+Fosin组，福辛普利10 mg·kg-1·d-1），疗程12周。RT-PCR法检测肾脏NADPH氧化酶p22phox mRNA的表达；免疫组织化学方法检测肾脏纤连蛋白（FN）表达；白明胶酶谱法检测肾脏基质金属蛋白酶9（MMP-9）的活性；并检测Scr、尿蛋白排泄量和肾质量指数等指标。 结果 实验第4 周，DM+Fosin组大鼠肾脏NADPH氧化酶p22phox mRNA表达较DM组减少45％（P ＜ 0.05）。第8周时，DM+Fosin组的肾小球和肾小管间质FN表达较DM组分别降低52.5％和42.9％（均P ＜ 0.05）；肾脏MMP-9的活性升高29.6％（P ＜ 0.05）。实验第12周时，DM+Fosin组大鼠Scr水平、尿蛋白量（24 h）和肾质量指数较DM组分别降低35.9％、50.2％和17.2％（均P ＜ 0.05）。DM+Fosin组和DM组血糖的差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 结论 福辛普利可延缓糖尿病肾病的发生和发展，其机制可能与通过抑制NADPH氧化酶p22phox亚基mRNA的表达有关。     

维持性血液透析与氧化应激

本文综述了氧化应激的概念，慢性肾衰竭特别是维持性血液透析与氧化应激的关系，以及氧化应激的意义、预防及治疗。     

血液透析患者氧化应激的临床意义

慢性肾功能衰竭氧化应激及其造成的组织损害普遍存在 ,尿毒症本身代谢紊乱、血液透析相关因素及其一些药物作用进一步加重慢性肾功能衰竭患者的氧化应激 ,以致使透析相关疾病的患病率和死亡率增加 ,因此慢性血液透析患者应实行预防性抗氧化或抗炎治疗 ,可以改善患者的氧化状态     

夹竹桃麻素对高草酸尿症大鼠肾脏氧化应激损伤的保护作用

目的 观察NADPH氧化酶特异抑制剂夹竹桃麻素（apocynin）对高草酸尿症大鼠肾脏氧化应激（OS）损伤的保护作用。 方法 自由饮用含有0.8%乙二醇的水4周建立高草酸尿症SD大鼠模型。大鼠按随机数字表法分为4个组：空白组、高草酸尿症组、apocynin干预组、apocynin对照组。后两组给予apocynin（0.2 g&#8226;kg-1&#8226;d-1）灌胃,对照组给予正常饮水。4周后检测大鼠肾脏OS 指标（尿H2O2和8-异前列腺素）,以及Ccr及肾脏/体质量比值。免疫组化观察NADPH氧化酶亚基p47phox在肾脏中的表达位置。RT-PCR和免疫印迹法分别检测肾组织NADPH氧化酶亚基p47phox、gp91phox、Nox-1 mRNA以及p47phox蛋白的表达水平。 结果 p47phox在各组肾脏中均有广泛的表达,包括肾皮质区、内髓区、外髓区等。与空白组比较,高草酸尿症组大鼠尿H2O2和8-异前列腺素水平显著升高,Ccr降低,肾脏/体质量比值增高（均P < 0.05）;肾脏p47phox、gp91phox和Nox-1 的mRNA表达均显著增加（均P ＜ 0.05）, p47phox蛋白表达也增多（P ＜ 0.01）。apocynin干预治疗可抑制肾脏p47phox、Nox-1 mRNA及p47phox蛋白的表达,但gp91phox mRNA表达未明显减少,而大鼠尿H2O2和8-异前列腺素水平下降,Ccr增加,肾脏/体质量比值减少,但仍高于对照组水平。 结论 NADPH氧化酶是高草酸尿症诱导大鼠肾脏OS损伤过程中活性氧形成的来源之一。使用apocynin抑制NADPH氧化酶活性可部分减轻肾脏的OS损伤程度,保护肾功能。     

血液透析患者氧化应激的临床意义

慢性肾功能衰竭氧化应激及其造成的组织损害普遍存在，尿毒症本身代谢紊乱、血液透析相关因素及其一些药物作用进一步加重慢性肾功能衰竭患者的氧化应激，以致使透析相关疾病的患病率和死亡率增加，因此慢性血液透析患者应实行预防性抗氧化或抗炎治疗，可以改善患者的氧化状态。     

低分子量肝素在血液透析中的作用

低分子量肝素是近30年应用于临床的一种抗栓抗凝剂。与普通肝素比较,低分子量肝素通过与凝血酶Ⅲ的结合抑制Xa因子作用强,抑制Ⅱa因子作用弱;能引起血管内皮细胞的改变而释放内源性组织因子途径抑制物和组织型纤维溶解酶原激活剂;对血小板功能及血管通透性影响小;出血的危险性小;极少引起血脂代谢紊乱及骨代谢异常的发生。低分子量肝素的半衰期长,单一剂量即能完成一次的血液透析治疗,操作简便,不用监测出、凝血时间,因此在血液透析治疗中受到重视。     

环氧化酶在腰痛中的作用

腰痛是临床常见症状，严重影响患者的生活质量。环氧化酶（Cox）途径是机体花生四烯酸代谢的重要过程，在下腰痛的发病机制中具有重要的作用，花生四烯酸南细胞膜磷脂水解而来，在Cox的作用下，转变成前列腺素内过氧化酶（PGG2，PGH2），后者冉转变成血柃素A2、前列腺环素（PG12）及其它前列腺素（PGs）而发挥多种生物学作用。Cox主要有两种亚型，即Cox—1和Cox—2。笔者就脊髓中Cox及其在腰部异常性疼痛、痛觉过敏中的作用作一综述。     

黄嘌呤氧化酶在人病理性瘢痕表皮中的表达

自由基增多存动脉粥样硬化、肝纤维化、慢性间质性肺炎和肺肉芽肿等多种纤维化疾病的发病中具有重要意义。研究表明，病理性瘢痕的发生也与自由基增多有关^[1-3].