筑巢式RT—PCR对急性早幼粒细胞白血病融合基因的初步检测与分析

应用筑巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测了３０例急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）中因染色体易位ｔ（１５：１７）所形成的早幼粒白血病维甲酸受体α（ＰＭＬ－ＲＡＲα）融合基因转录本,结果发现：１００％的Ｍ患者均有ＰＭＬ／ＲＡＲα;两种亚型Ｍ３ａ和Ｍ３ｂ其ＰＭＬ／ＲＡＲα的转录本不同,Ｍ３ａ９４％为Ｌ型,Ｍ３ｂ８４％为Ｓ型。结论：ＲＴ－ＰＣＲ检测融合基因是一种特异性强、灵敏度高的新诊断手段,还可用于预后判断和病情随访。     

用逆转录酶／聚合链反应方法检测急性粒细胞白血病AML1—ETO副合基因

用筑巢式逆转录／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）方法检测伴ｔ（８；２１）染色体易位的Ｍ２ｂ型白血病ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因转录本，该方法具有高度敏感性，可以从１０＾４－１０＾５个正常细胞ＲＮＡ中检出１个白血病细胞，对于Ｍ２ｂ型白血病的诊断及监测是一种快速，灵敏，特异的方法。我们研究的１１例Ｍ２ｂ型白血病中有１例未检测到的ＰＣＲ产物，可能与该型患中基因重组的分子异质性有关。     

用逆转录酶／聚合酶链反应方法检测急性粒细胞白血病（M_（2b））AML_1－E

用筑巢式逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）方法检测伴ｔ（８：２１）染色体易位的Ｍ＿（２ｂ）型白血病ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合基因转录本，该方法具有高度敏感性，可以从１０￣４～１０￣５个正常细胞ＲＮＡ中检出１个白血病细胞，对于Ｍ＿（２ｂ）型白血病的诊断及监测是一种快速、灵敏、特异的方法。我们研究的１１例Ｍ＿（２ｂ）型白血病中有１例未检测到ＰＣＲ产物，可能与该型患者中基因重组的分子异质性有关。     

用逆转录－多聚酶链反应监测急性髓系白血病M_（2b）微量残留白血病

急性髓系白血病（ＡＭＬ）Ｍ＿（２ｂ）常伴有ｔ（８：２１）染色体易位，两个染色体重排导致形成ＡＭＬＩ／ＭＴＧ８融合基因，并持续产生融合基因转录本。作者利用逆转录。多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增ＡＭＬ１／ＭＴＧ８融合基因转录本进行ＡＭＬ－Ｍ＿（２ｂ）微量残留白血病的监测，在１３例完全缓解的患者中，１２例可检出残留白血病细胞。经随诊这１２例中，２例已复发，１例死于强化治疗骨髓抑制期，９例仍持续完全缓解。     

RT—PCR检测慢性粒细胞性白血病不同病期bcr—abl基因及临床意义

ｂｃｒ ａｂｌ基因是ｔ( 9;2 2 )染色体易位产物 ,见于 90 %以上慢性粒细胞性白血病 (ＣＭＬ)及 1 0 %～ 2 5 %的成人急性淋巴细胞性白血病 (以下称急淋 )。ｂｃｒ ａｂｌ基因重排是ＣＭＬ最重要的分子生物学特征。检测该基因对ＣＭＬ的诊断、鉴别诊断及预后判断具有重要意义。我们应用逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)检测ＣＭＬ患者骨髓及 (或 )外周血ｂｃｒ ａｂｌ基因 ,为临床诊断、鉴别诊断、预后判断提供依据。1　材料与方法1 .1　病例　ＣＭＬ患者 2 6例 ,男 1 6例 ,女 1 0例 ,按文献 [1 ]标准诊断。其中慢性期 2 0例 ,急变期 6例…     

中期荧光原位杂交技术在t(8；21)白血病随访中的应用

ｔ(8 ;2 1) (ｑ2 2 ;ｑ2 2 )是Ｍ2 型急性髓系白血病 (ＡＭＬ)的特异性染色体重排 ,在分子水平上它导致ＡＭＬ1 ＥＴＯ融合基因形成 ,后者在ｔ(8;2 1)白血病发病中起重要作用且可用逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)进行检测。ｔ(8;2 1)白血病经治疗获完全缓解 (ＣＲ)后患者骨髓细胞核型通常转为正常 ,而ＲＴ ＰＣＲ检测部分患者仍为阳性 ,最长可至 8年。因此 ,ｔ(8;2 1)白血病患者ＡＭＬ1 ＥＴＯ阳性并不一定意味着有白血病复发的风险[1 ] 。中期荧光原位杂交 (ＦＩＳＨ)是利用非同位素物质如生物素、地高辛或异硫氰酸荧光素 (ＦＩＴＣ)…     

儿童B系急性淋巴细胞白血病TEL-AML1融合基因的研究

目的了解ＴＥＬＡＭＬ１融合基因在儿童Ｂ系急性淋巴细胞白血病（急淋）中的发生率及其与临床诊断和预后的关系,并比较巢式逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和双标记荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）两种方法。方法采用巢式ＲＴＰＣＲ和双标记ＦＩＳＨ技术检测ＴＥＬＡＭＬ１融合基因。结果和结论ＲＴＰＣＲ检测发现儿童Ｂ系急淋中２２．５％（４０例中９例）的患者有ＴＥＬＡＭＬ１融合基因转录本,这类患者预后较好,完全缓解率达１００％。ＲＴＰＣＲ和ＦＩＳＨ技术是检测ＴＥＬＡＭＬ１的有效方法,并为临床诊断和预后估计提供了有一定价值的手段。     

急性髓细胞白血病M2b型AML1—ETO融合基因转录本的检测

急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）－Ｍ２ｂ患者约９０％有ｔ（８；２１）。已经证明它导致ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因。我们应用逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）检测了２２例ＡＭＬ－Ｍ２ｂ，其中ｔ（８；２１）阳性１６例，阴性２例，不能确定有无ｔ（８；２１）的４例，发现全部２２例患者均可检出ＡＭＬ１－ＥＴＯ融合基因转录本。同时在５例ｔ（８；２１）阴性的ＡＭＬ中，包括Ｍ２ａ例，Ｍ3 １例，均未检出上述融合基因转录本     

RT—PCR一步法检测慢性粒细胞白血病bcr／abl融合基因

应用ＲＴ－ＰＣＲ一步法检测了４２例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因，均显示ｂｃｒ／ａｂｌ基因阳性，其中２１例为１６８ｂｐ扩增带，１８例为９３ｂｐ扩增带，３例同时具有１６８ｂｐ和９３ｂｐ二条扩增带。ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因检测，对ＣＭＬ的诊断、治疗及预后判断均有重要意义。ＲＴ－ＰＣＲ一步法特异性好，敏感性高，简单快速，可节省试剂，值得推广应用。     

急性白血病bcl-2表达及其临床意义

我们用逆转录聚合酶链反应(ＲＴＰＣＲ)方法对50例急性白血病(ＡＬ)患者中ｂｃｌ2的表达水平进行了检测,并分析它与ＡＬ临床特征、化疗反应及ｍｄｒ1基因间的关系。病例和方法1　病例与对照　50例ＡＬ患者均为我院住院病例,其中急性髓系白血病(ＡＭＬ)31例(初发22例,复发9例),急性淋巴细胞白血病(ＡＬＬ)10例,慢性髓细胞白血病(ＣＭＬ)急变5例,非霍奇金淋巴瘤白血病(ＮＨＬ→ＡＬＬ)4例。对照组8例,其白细胞系统均无异常。初发性ＡＭＬ采用ＤＡ、ＨＡ或ＭＡ方案化疗,其中Ｍ3型加用维甲酸;ＡＬＬ用ＤＯＬＰ方案化疗;复发难治性ＡＬ用Ｖｍ26 …     

RT／PCR检测CMLbcr／abl mRNA及α—干扰素治疗后残留病灶观察

应用逆转录／多聚酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）及双扩增ＰＣＲ方法检测了４４例慢性期，缓解期及加速（或）急变期慢性粒细胞白血病患者的ｂｃｒ／ａｂｌ ｍＲＡＮ，所有患者均为阳性。各期患者均以表达ｂ３ａ２融合方式为主。１４例患者单用α－２ｂ干扰素或合用小剂量羟基脲治疗后，１３例患者ｂｃｒ／ａｂｌ ｍＲＮＡ仍阳性，有３例单次扩增结果阴性，提示白血病细胞负荷较低，１例孤立性骨髓外粒细胞白肉瘤患者治疗后复查ｂｃｒ／     

两种bcr／abl mRNA类型的慢性粒细胞白血病临床过程的比较

两种ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ类型的慢性粒细胞白血病临床过程的比较季延红刘陕西通过逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ进行检测，从分子水平将慢性粒细胞白血病（慢粒）分为两种亚型，即ｂ２ａ２和ｂ３ａ２，并比较两型患者的临床过程，报告...     

切割bcr/abl核酶的逆转录病毒载体构建及其对K562细胞的影响

目的：研究ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因在慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中的作用以及探索ＣＭＬ基因治疗的可能性。方法：合成针对ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因转录本ｂ３ａ２断裂点“锤头状”核酶的ｃＤＮＡ序列，定向克隆于逆转录病毒载体内，通过脂质体介导的ＤＮＡ转染法，将核酶基因导入Ｋ５６２细胞，并通过克隆分析法、流式细胞术（ＦＣＭ）、逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）、ＤＮＡ电泳及电镜观察等方法检测核酶对Ｋ５６２细胞的影响。结果：①核酶转染Ｋ５６２细胞后４８小时克隆形成抑制率达８５％；②细胞内Ｐ２１０蛋白合成受到明显抑制；③ＲＴＰＣＲ半定量检测ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ表达水平明显下降；④核酶处理组Ｋ５６２细胞发生凋亡，表现为：在ＦＣＭ图谱上可见明显的凋亡峰；ＤＮＡ电泳分析出现典型的梯状ＤＮＡ带；电镜观察呈现凋亡早期形态学改变。结论：核酶基因通过逆转录病毒载体导入Ｋ５６２细胞后可成功表达，使Ｋ５６２细胞ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ及Ｐ２１０蛋白表达水平下降，抑制Ｋ５６２细胞增殖，同时诱导Ｋ５６２细胞发生凋亡。     

RARa／MYL融合mRNA是诊断和监测急性早幼粒细胞白血病的特异标志

应用四条引物（Ｒ５，Ｒ６，Ｄ３，Ｄ４）通过逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了２０例初治急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）患的ＲＡＲａ／ＭＹＬ融合ｍＲＮＡ。建立的方法可在０．１ｎｇ细胞总ＲＮＡ中检出ＲＡＲａ／ＭＹＬ融合ｍＲＮＡ，相当于在１０＾４～１０＾５个正常细胞中检出一个ＡＰＬ细胞，扩增产物的特异性经Ｋｐｎ Ｉ酶切法确认。１８例患表达Ｂ型融合ｍＲＮＡ（２９０ｂｐ片段），２例表达Ａ型（３１１ｂ     

供者淋巴细胞输注治疗慢性髓系白血病中移植物抗白血病效应相关的克隆性增殖T细胞的研究

供者淋巴细胞输注 (ＤＬＩ)治疗异基因骨髓移植 (ａｌｌｏ ＢＭＴ)后复发的慢性髓系白血病 (ＣＭＬ)已取得肯定的疗效。6 0 %～ 80 %的ＣＭＬ患者经ＤＬＩ后又可以达到血液学完全缓解 (ＣＲ)。其作用是新输入的供者Ｔ细胞某些亚群具有抗ＣＭＬ细胞的作用[1 ] 。有研究提示这些产生移植物抗白血病(ＧＶＬ)作用的可能是某些Ｔ细胞受体 (ＴＣＲ)Ｖβ亚家族克隆性增殖的Ｔ细胞[2 ] 。利用ＴＣＲＶβ 2 4个亚家族的特异性引物进行ＲＴ ＰＣＲ和基因扫描分析患者外周血中ＴＣＲＶβ亚家族Ｔ细胞的技术 ,已成功地应用于肿瘤免疫等检测中[3 ] 。我们…     

急性粒-单核细胞白血病CBFβ-MYH11融合基因转录本和inv(16)的检测

目的：探讨ｉｎｖ（１６）和ＣＢＦβ－ＭＹＨ１１融合基因在急性髓系白血病Ｍ４ＥＯ型的临床诊断、预后判断中的意义。方法：用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术分别检测急性粒－单核细胞白血病（Ｍ４）患者的ＣＢＦβ－ＭＹＨ１１融合基因转录本和ｉｎｖ（１６）。结果：在１５例中国人Ｍ４中，１０例患者用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＣＢＦβ－ＭＹＨ１１融合基因转录本，其中９例不伴异常嗜酸粒细胞的Ｍ４中有１例阳性；１例伴异常嗜酸粒细胞增多（Ｍ４ＥＯ）为阳性。随访该例完全缓解２个月后，其ＰＣＲ仍持续阳性。用ＦＩＳＨ技术检测的９例Ｍ４中得到的２例阳性病例，与ＰＣＲ方法测得的结果完全一致。结论：对Ｍ４患者无论其经典的染色体核型分析有无１６号染色体异常的提示，都应用ＲＴ－ＰＣＲ和ＦＩＳＨ方法检测ＣＢＦβ－ＭＹＨ１１融合基因进行筛选，这对Ｍ４的临床诊断、预后判断等具有重要临床价值。     

慢性髓系白血病Ph染色体分析与bcr/abl mRNA检测

目的 为进一步明确慢性髓系白血病（ＣＭＬ）患者中Ｐｈ染色体阳性细胞与ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因表达之间的关系和比较细胞遗传学分的与聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法在ＣＭＬ应用中的优缺点,方法 用热变性姬姆萨Ｒ显带（ＲＨＧ）技术和逆转录筑巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔ－ＰＣＲ）对３３例ＣＭＬ患者的骨髓或外周血进行了分析,对其中１１例异基因骨髓移植（Ａｌｌｏ－ＢＭＴ）或α干扰素（ＩＦＮ－α）＋小剂量羟基脲（Ｈ     

WT1基因在急性髓系白血病的表达及临床意义

ＷＴ1基因 (Ｗｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒｇｅｎｅ)是最早发现的与Ｗｉｌｍｓ’肿瘤发生、发展有关的基因。近年来文献报道在部分白血病细胞系及白血病细胞 ,尤其是急性髓系白血病 (ＡＭＬ)中 ,ＷＴ1表达增高[1 4 ] 。我们应用逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)方法测定了 30例ＡＭＬ患者化疗前后ＷＴ1ｍＲＮＡ的表达并对部分ＷＴ1 者进行了随访观察 ,探讨ＷＴ1基因在ＡＭＬ发病中的作用及其在检测微小残留病 (ＭＲＤ)方面的意义。对象和方法1　研究对象1.1　白血病细胞系 :Ｋ5 6 2细胞系 (慢性粒细胞白血病红白血病变细胞系 )作为阳性对照。1.…     

白血病患者nm23-H_1mRNA表达及其临床意义

ｎｍ2 3基因在人类肿瘤发生、发展中的作用日益受到重视 ,其在某些肿瘤中表达与高转移潜力有关已有较多报道 ,近年来发现在白血病中它与细胞的分化与增殖有关 ,参与白血病的发生、发展过程。我们用ＲＴ ＰＣＲ技术 ,检测白血病患者骨髓细胞ｎｍ2 3 Ｈ1基因表达 ,并探讨其与临床的关系。对象和方法1　研究对象　急性白血病 (ＡＬ)患者 47例 ,其中急性髓系白血病 (ＡＭＬ) 36例 (Ｍ2 10例 ,Ｍ39例 ,Ｍ4 9例 ,Ｍ58例 ) ,急性淋巴细胞白血病 (ＡＬＬ) 11例 ;男 2 6例 ,女 2 1例 ;年龄 14～ 71岁 ,平均 31岁 ;初治 42例 ,复发 5例。慢性髓细胞白…     

急性髓细胞白血病M_（2b）型AML_1－ETO融合基因转录本的检测

急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）－Ｍ＿（２ｂ）患者约９０％有ｔ（８；２１）。已经证明它导致ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合基因。我们应用逆转录酶／聚合酶链反应（ＲＴ／ＰＣＲ）检测了２２例ＡＭＬ＿１－Ｍ＿（２ｂ）其中ｔ（８；２１）阳性１６例，阴性２例，不能确定有无ｔ（８；２１）的４例，发现全部２２例患者均可检出ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合基因转录本。同时在５例ｔ（８；２１）阴性的ＡＭＬ中，包括Ｍ＿（２ａ）２例，Ｍ＿４２例，Ｍ＿３１例，均未检出上述融合基因转录本。我们的初步结果提示ＡＭＬ＿１－ＥＴＯ融合基因可以作为ＡＭＬ－Ｍ＿（２ｂ）的基因标志。