乙型肝炎患者和无症状HBVM携带者血清HBV-DNA与HBVM模式相关性研究

目的探讨乙型肝炎患者和无症状ＨＢＶＭ携带者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ与ＨＢＶＭ模式的相关性。方法应用ＰＣＲＥＢ法对１７８３例乙型肝炎血清学标志（ＨＢＶＭ）模式不同的乙型肝炎患者（包括急性乙型肝炎８７例，慢性乙型肝炎８９１例，乙型肝炎后肝硬化１９３例）和无症状ＨＢＶＭ携带者（６１２例），做了血清乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶ－ＤＮＡ）检测。结果①乙型肝炎患者和无症状ＨＢＶＭ携带者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ与ＨＢＶＭ模式密切相关（Ｐ＜０．０１），不同ＨＢＶＭ模式患者和携带者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率有较大差异（Ｐ＜０．０１）。②患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率（５６．８％）明显高于携带者（４５．６％）（Ｐ＜０．０１）。③相同ＨＢＶＭ模式患者和携带者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率与性别差异无显著性（Ｐ＞０．０５），男性乙型肝炎患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率（６０．７％）明显高于女性（４８．８％）（Ｐ＜０．０１）。结论无论何种ＨＢＶＭ感染者均应检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ，以判断其病毒复制情况和传染性高低     

慢性乙型肝炎合并巨细胞病毒感染93例分析

为探讨慢性乙型肝炎合并巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染对肝功能、ＨＢＶ复制的影响，对９３例慢性乙肝分别检测了抗－ＣＭＶＩｇＭ、ＨＢＶＤＮＡ及生化指标；另２０例健康人检测抗－ＣＭＶＩｇＭ作对照。结果显示，慢性乙肝病例中抗－ＣＭＶＩｇＭ阳性率为１８．３％，阳性病例的生化指标ＧＧＴ、ＴＢｉｌｉ高于阴性者，尤其在慢性重度肝炎和肝炎肝硬变病例中（Ｐ＜０．０５）。且阳性病例中ＨＢＶＤＮＡ阳性率亦高于阴性者（Ｐ＞０．０５）。结果提示，ＣＭＶ感染好发于免疫虚损的宿主，又可抑制宿主免疫功能，有利于ＨＢＶ复制，合并ＣＭＶ感染可加重肝功能障碍     

应用聚合酶链反应检测乙肝患者外周血单个核细胞HBV.DNA的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测６０例乙型肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）及血清ＨＢＶ．ＤＮＡ阳性率分别为７６．７％和４５％，尤其在急性乙肝（ＡＨ）或抗ＨＢｅ阳性或抗ＨＢｓ阳性的患者中，ＨＢＶ．ＤＮＡ在ＰＢＭＣ中检出率显著高血清，提示ＨＢＶ．ＤＮＡ普遍存在乙肝患者甚至ＨＢｓＡｇ转阴的病人ＰＢＭＣ中，可能是肝脏病病变反复活动及病毒重复感染的来源。因此也导致既往有ＨＢＶ感染史的ＨＢｓＡｇ阴性献血员传     

慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞HBV DNA的PCR检测

①目的 探讨慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ和血清ＨＢＶＤＮＡ的感染情况及其临床意义。②方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１２８例慢性乙型肝炎病人和２０例健康人进行了ＰＢＭＣ及血清中ＨＢＶＤＮＡ检测。③结果 慢性乙型肝炎病人ＰＢＭＣ中ＨＢＶ ＤＮＡ的感染率为６４．２％,和血清ＨＢＶＤＮＡ的感染率具有一致性倾向（Ｘ＾２－０．６３,Ｐ〉０．０５）,慢性肝病病     

应用聚合酶链反应检测乙肝患者外周血单个核细胞HBV·DNA的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测６０例乙型肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）及血清ＨＢＶ·ＤＮＡ，阳性率分别为７６．７％与４５％。尤其在急性乙肝（ＡＨ）或抗ＨＢｅ阳生或抗ＨＢｓ阳性的患者中，ＨＢＶ·ＤＮＡ在ＰＢＭＣ中检出率显著高于血清。提示ＨＢＶ·ＤＮＡ普遍存在于乙肝患者甚ＩＨＢｓＡｇ转阴的病人ＰＢＭＣ中，可能是肝脏病变反复活动及病毒重复感染的来源．因而也导致既往有ＨＢＶ感染史的ＨＢｓＡｇ阴性献血员传播ＨＢＶ的可能。     

乙型肝炎病人的抗－HCV检测

采用酶联免疫法检测了８１例乙型肝炎（乙肝）病人的抗丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）。结果表明，在急性乙肝的阳性率为０．００％，慢性乙肝病毒表面抗原携带者（ＡＳＣ）的阳性率为１６．６７％，慢性迁延型肝炎（ＣＰＨ）的阳性率为１９．４４％，慢性活动型肝炎（ＣＡＨ）的阳性率为２０．００％，肝炎后肝硬化（ＬＣ）的阳性率为３３．３３％，慢性重型肝炎（ＣＳＨ）的阳性率为２５．００％，提示乙型肝炎病人中存在较高的ＨＣＶ感染，可能为乙肝慢性化发展的重要因素。ＨＢＶ和ＨＣＶ重叠感染可能是乙肝重型化的主要原因之一，所致慢性重型肝炎的病情重、预后差。     

定量聚合酶链反应检测慢性乙型和丁型肝炎患者血清HBV DNA

本研究应用新型定量ＰＣＲＨＢＶ检测法－ＡｃｕＧｅｎ Ａｍｐｌｉｓｅｎｏｒ＾ＴＭ ＨＢＶ法对７０例慢性乙型与丁型肝炎病例进行血清ＨＢＶ ＤＮＡ水平测定，观察乙肝在丁肝病毒重叠感染时是否对ＨＢＶ ＤＮＡ复制存在抑制作用。实验结果：乙肝组（３４你）及丁肝组（３６例）定量ＰＣＲ测ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率为８８．２％（３０／３４）和９１．７％（３３／３６）（Ｐ〉０．０５）。乙肝组ＨＢｅＡｇ阳性与抗ＨＢｅ阳性病例     

PCR检测乙肝病人肝组织和血中HBVDNA

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛素标记的乙肝病毒ＤＮＡ探针（ＨＢＶＤＮＡ－Ｄｉｇ）杂交技术检测了４９份乙型肝炎患者的肝组织标本和４６份血清标本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果表明：ＰＣＲ检出乙肝病人肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率比斑点杂交高（Ｐ＜０．０５）。在２１例同时检测了肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ的病人中，肝组织ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５７．１％（１２／２１）；血清阳性率为６１．３％（１３／２１）；两者总阳性率为８０．９％（１７／２１），说明用ＰＣＲ同时检测肝组织和血中ＨＢＶＤＮＡ，可明显提高ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

少年儿童肝炎72例血清抗—HCV检测及HCV、HBV重叠感染的临床意义

对７２例少年儿童各型肝炎进行丙型肝炎病毒抗体（抗—ＨＣＶ）和乙型肝炎病毒标志（ＨＢＶＭ）检测，发现抗—ＨＣＶ阳性率为４０．３％，ＨＢＶＭ阳性率为６１．１％，输血后肝炎抗—ＨＣＶ阳性率（６６．６％）高于非输血后肝炎者（３７．８％）。ＨＣＶ、ＨＢＶ重叠感染率分别为：ＡＨ５．８％，ＣＰＨ２７．２％、ＣＡＨ６８．７％，各组差异有高度显著性（Ｐ＜０．０１）。提示本地少年儿童肝炎仍以乙型肝炎为主，但ＨＣＶ感染不容忽视；输血是ＨＣＶ感染的主要途径；ＨＣＶ、ＨＢＶ重叠感染易使病情慢性化和重症化。     

重型乙型肝炎的病毒复制状况

为了解重型乙型肝炎时乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的复制状况，应用酶联免疫吸附实验和聚合酶链反应测定了５６例乙型肝炎病人的ＨＢＶ复制指标。慢性重型肝炎病人的ＨＢｅＡｇ和／或ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ阳性率明显低于非重型慢性肝炎（Ｐ＜０．０１），表明ＨＢＶ复制活跃不一定是重型肝炎发生的因素之一。进一步证明ＨＢＶ本身并无致肝细胞损伤作用     

PCR 法检测 HBV DNA 及其与乙肝病毒标志物关系

目的：了解乙型肝炎患者血清中乙肝病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）的检出情况，探讨其与乙肝病毒标志物的关系。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测２５６例乙型肝炎患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，同时用ＥＬＩＳＡ法检测乙肝病毒五项标志物，即ＨＢｓＡｇ、抗 ＨＢｓ、抗 ＨＢｃ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｅ。结果：ＨＢＶＤＮＡ的检出率在肝炎患者各临床类型之间无明显差异，而在乙肝病毒五项标志物不同组合存在状态之间有差异，以伴有ＨＢｅＡｇ（＋）的组合形式即ＨＢｓＡｇ（＋），抗 ＨＢｃ（＋），ＨＢｅＡｇ（＋）者、ＨＢＶＤＮＡ检出率最高（９４３４％），乙肝病毒五项标志物中出现抗体及其五项全阴者仍有ＨＢＶＤＮＡ检出。结论：ＨＢｅＡｇ确是ＨＢＶ活动性复制的重要标志，但仅靠乙肝病毒五项标志物的检测来判定ＨＢＶ的复制是不够准确的，同时用ＰＣＲ法检测ＨＢＶＤＮＡ能更准确反映体内ＨＢＶ复制情况。     

PCR法检测HBVDNA及其与乙肝病毒标志物关系探讨

采用聚合酶链反应 (PCR)法检测 2 56例乙型肝炎患者血清中乙肝病毒 DNA(HBVDNA) ,同时用 EL ISA法检测乙肝病毒标志物 ,即 HBs Ag,抗 - HBs、抗 - HBc、HBe Ag、抗 -HBe。结果表明 HBVDNA的检出率与肝病临床类型无明显关系 ,而与乙肝病毒标志物的存在状态有关。乙肝五项病毒标志物不同组合状态 ,血清 HBVDNA检出率不同 ,以 HBs Ag(+)、抗 - HBc(+)、HBe Ag(+)的组合形式检出率最高 (94 .34% ) ,乙肝病毒标志物中出现抗体及乙肝病毒标志物全阴者仍有 HBVDNA检出     

环介导等温扩增(LAMP)试剂盒检测石蜡包埋肝组织中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)

 目的  建立一种检测石蜡包埋的肝组织中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的新方法,并探讨其应用价值和临床意义。方法  提取30例慢性HBV感染患者的石蜡包埋肝组织中的DNA,采用质粒安全ATP依赖性DNA酶(plasmid-safe ATP-dependent DNase,PSAD)消化,去除非cccDNA后,加入引物及Bst DNA酶进行环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),将检测结果与临床实验室资料结合并进行分析,以判断其临床应用价值。结果  30例HBV感染患者中,有17例HBV cccDNA阳性,阳性检测率56.67%。其中肝癌5例、肝硬化4例、重型乙型肝炎5例、慢性乙型肝炎(轻-中度)3例。提示肝组织HBV cccDNA阳性可能与疾病进展密切相关,与血清HBV cccDNA阳性有一定的相关性,与乙型肝炎病毒血清免疫标志物以及肝功能状况无明显相关。结论  LAMP法能检测到石蜡包埋肝组织中的HBV cccDNA,结合临床实验室资料,对判断抗病毒药物疗效及研究乙型肝炎致病机制具有一定的意义。     

HBV感染者外周血单个核细胞中HBV DNA的检测

目的；研究乙型肝炎毒（ＨＢＶ）感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中ＨＢＶ ＤＮＡ的存在及其与血清ＨＢＶ ＤＮＡ的关系。方法：用ＰＣＲ法及斑点杂交法对５０例ＨＢｓＡｇ（＋）的感染者ＰＢＭＣｓ ＨＢＶ ＤＮＡ进行检测。同时用ＰＣＲ法检测感染者血清ＨＢＶ ＤＮＡ。结果：ＰＣＲ法和斑点杂交法分别从３５份和３２份ＰＣＭＣｓ检出率均为６０．０％左右。ＰＣＲ法检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率为３６．０％。结论：Ｈ     

输血传播病毒(TTV)重叠感染在慢性乙型肝炎病毒感染患者中的临床意义

目的：研究乙型肝炎病毒感染患者TTV重叠感染情况及初步探讨TTV的致病性。方法：在ORF1区设计特异性引物建立巢式多聚酶链式反应（PCR），检测乙型肝炎病毒感染患者血清中TTV DNA，对PCR产物进行分子克隆和测序。结果：献血员、慢性乙型肝炎病毒携带者、慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者TTV DNA阳性率分别为10％、11％、27％、48％。其中前两者与后两者比较均有显著差异，慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者相比也有显著差异（P＜0．05），乙型肝炎病毒感染者中其HBV感染复制指标的阳性率在TTV DNA阳性与TTV DNA阴性组之间无明显差异（P＞0．05）。慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者的ALT和TBIL在TTV DNA阳性病人组与TTV DNA阴性病人组之间比较有显著性差异（P＜0．05），TTV DNA阳性病人组明显高于TTV DNA阴性病人组。结论：献血员中存在TTV感染，乙型肝炎病毒感染患者重叠感染TTV较常见。慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者TTV DNA阳性率明显高于献血员和慢性乙型肝炎病毒携带者的阳性带，提示TTV的重叠感染可能是HBV感染病情加重因素之一，TTV重叠感染对HBV的复制可能不存在相互作用。     

慢性乙肝患者外周血单个核细胞上TRAIL受体的表达及意义

目的:检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的受体在慢性乙肝患者外周血单个核细胞上的表达,并探讨其意义。方法:通过RT鄄PCR和流式细胞术,分别从RNA水平和蛋白水平检测30例慢性乙肝患者和20例正常人外周血单个核细胞TRAIL各受体的表达。结果:RT鄄PCR和流式细胞术均显示:死亡受体DcR1在慢性乙肝患者的表达显著低于正常对照组穴P<0.05雪熏其余受体的表达在两组间差异无显著性。慢性乙肝患者TRAIL各受体RNA水平的表达在各临床分期差异无显著性穴P>0.05雪;各受体的表达与患者的临床指标(ALT、AST、TBIL等肝功指标及血清HBV鄄DNA等乙肝病毒复制指标)无相关性。结论:HBV感染可引起外周血单个核细胞死亡受体DcR1的表达下调鸦这可能是HBV感染后的外周血单个核细胞凋亡过强并引起HBV感染慢性化的机制之一。     

荧光定量PCR检测HBV DNA及其与Pre-S1和HBeAg关系探讨

目的探讨慢性乙肝患者HBVDNA与血清标志物前S1抗原(Pre-S1)和HBeAg的相互关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应技术(FluorescencequantitativePCR,FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对931份HBV-M不同阳性模式及35份HBV-M全阴模式血清进行HBVDNA及其标志物检测。结果在931例不同阳性模式乙肝患者中,HBeAg阳性总检出率为20.7%,Pre-S1抗原阳性总检出率为30.2%,HBVDNA阳性总检出率为45.3%。在422例HBVDNA(+)乙肝患者中,Pre-S1抗原阳性检出率为57.3%,HBeAg阳性检出率为44.1%。在281例Pre-S1(+)乙肝患者中,HBVDNA阳性符合率达86.1%,在Pre-S1(-)组HBVDNA阳性率仅为27.7%。结论HBVDNA检测是反映HBV复制最直接的分子生物学指标;Pre-S1抗原和HBeAg是反映HBV复制的血清学指标,Pre-S1抗原甚至比HBeAg更灵敏地反映HBV复制。     

不同分子生物学方法检测乙型肝炎病毒DNA的研究

目的：研究不同分子生物学方法检测乙型肝炎病毒（HBV）DNA的敏感性及影响因素。方法：用饱和酚抽提和血清蛋白变性后聚合酶链反应（PCR－1和PCR－2）检测48例慢性肝病患者的HBVDNA，并与分子斑点杂交法（Dot－H）检测结果进行比较。结果：Dot－H、PCR－1和PCR－2法对HBVDNA的检出率分别为70．83％、87．50％和91．67％，PCR－1和PCR－2中有17．02％表现为交叉阳性，慢性肝炎患者的检出率高于肝硬化患者，HBeAg阳性者高于其它HBV血清标志物（HBVm）阳性者。结论：PCR检测HBVDNA的敏感性高于Dot－H，所用PCR包含的多种引物可以提高HBVDNA的检出率。     

全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA

目的 寻找一种有效实用的全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA，HCV RNA和HIV-1 RNA系统MPLC-COBAS。方法笔者采用ACR OMETRIX公司的NAC^TM HBV DNA。HCV RNA及HIV-1 RNA核酸对照品，卫生部临床检验中心的HBV DNA，HCV RNA质控对照品，检测该系统的灵敏度；同时采用我中心酶免法(ELISA)初筛检结果阳性，经中和实验确认HBsAg阳性标本10份，经RIBA确认抗-HCV阳性标本3份。经Western Blot确认抗-HIV阳性标本3份，检测该系统的阳性符合率；检测大量临床ELISA筛检结果为阴性的标本来检测其特异性，并且每次实验设立内对照，阴阳性对照以进行临床标本检测。结果该系统的检测灵敏度(95％可信限)为HBV病毒为24-60IU／mL，HCV病毒为78-125IU／mL，HIV-1 RNA病毒为45-67IU／mL。阳性符合率为100％，假阳性率为0.13％。结论全自动多重检测试剂同时检测HBV DNA。HCV RNA和HIV-1 RNA系统MPLC-COBAS用于检测临床标本是有效实用的，可进一步加大临床标本检测数量，将该系统更好地用于酶联阴性结果的大规模筛查。     

HBV 感染者胃十二指肠粘膜HBV DNA地高辛原位分子杂交研究

目的：探讨HBV在胃十二指肠粘膜的分布,复制,表达及其意义。方法：应用地高辛原位分子杂交法检测62例HBV感染者胃十二指肠粘膜HBVDNA的分布状态,并与血清HBVM,胃十二指肠粘膜HBsAg,HBcAg,肝炎病情程度进行相关分析。结果：62例HBV感染者,27例（43．55％）胃肠粘膜检出HBV DNA,检出率与肝炎病情程度,血清HBsAg,HBeAg无明显相关,与血清HBVDNA,胃肠粘膜HBsAg,HBcAg密切相关,胃肠粘膜HBVDNA的表达表现为4种模式。结论：HBVDNA可在胃肠组织原位复制,其不同的表达模式反映了病毒复制或整合的状态。