鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用

目的研究鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用。方法MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;罗丹明123单染法观察线粒体膜电位变化;蛋白免疫印迹法检测细胞质中Cytc的表达;分光光度法检测caspase-3蛋白活性;Fluo-3/AM荧光指示剂检测细胞内钙离子浓度变化;RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白表达。结果鱼藤素对MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时效和量效依赖关系(P0.05);鱼藤素处理细胞后,细胞线粒体膜电位降低,细胞质内Cytc蛋白表达水平升高,caspase-3活性明显提高,与未处理组相比差异具有统计学意义(P0.01)。流式细胞术检测显示细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度随鱼藤素浓度的增加而增多;RT-PCR和蛋白印迹检测结果发现鱼藤素能使Bcl-2 mRNA和蛋白表达减少,而Bax表达增加。结论鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用可能与细胞内钙超载,Bcl-2和Bax表达改变影响线粒体通透性转换孔开放,诱导线粒体膜电位降低及Cytc释放有关。     

姜黄素对HL60细胞PI3K/AKT信号传导通路的影响

目的研究姜黄素诱导白血病HL-60细胞凋亡与PI3K/AKT信号传导通路的相关性,为AML的靶向治疗提供新思路。方法 MTT实验检测姜黄素对HL-60细胞增殖的抑制作用;经姜黄素处理后,用倒置显微镜进行细胞形态学观察,并用Western blot检测CAV-1、AKT、p-AKT蛋白水平。结果 MTT实验证明了姜黄素对HL60细胞增殖具有抑制作用,且随作用浓度的增强而增强;姜黄素作用HL-60细胞,用倒置显微镜观察细胞出现了凋亡形态学改变;并且Western blot检测显示CAV-1蛋白水平增高,而AKT、p-AKT蛋白水平降低。结论姜黄素可通过上调HL-60细胞中CAV-1的表达,而抑制PI3K/AKT信号通路,进而抑制HL-60细胞增殖并促进其凋亡。     

Effects of curcumin on PI3K/AKT signaling pathway in HL60 Cells.

目的 研究姜黄素诱导白血病HL-60细胞凋亡与PI3K/AKT信号传导通路的相关性,为AML的靶向治疗提供新思路.方法 MTT实验检测姜黄素对HL-60细胞增殖的抑制作用;经姜黄素处理后,用倒置显微镜进行细胞形态学观察,并用Western blot检测CAV-1、AKT、p-AKT蛋白水平.结果 MTT实验证明了姜黄素对HL60细胞增殖具有抑制作用,且随作用浓度的增强而增强;姜黄素作用HL-60细胞,用倒置显微镜观察细胞出现了凋亡形态学改变;并且Western blot检测显示CAV-1蛋白水平增高,而AKT、p-AKT蛋白水平降低.结论 姜黄素可通过上调HL-60细胞中CAV-1的表达,而抑制PI3K/AKT信号通路,进而抑制HL-60细胞增殖并促进其凋亡.     

冬凌草甲素对HL-60细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的 探讨冬凌草甲素对人白血病细胞株 HL-60 细胞生长抑制作用及其机制.方法 收集经不同浓度冬凌草甲素干预的HL-60细胞,制成细胞涂片,光学显微镜下观察细胞形态.采用MTT比色法观察不同浓度冬凌草甲素对HL-60细胞增殖的抑制作用,通过凋亡试剂盒Annexin V-FITC标记,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并以RT-PCR检测凋亡抑制基因 Survivin的表达.结果 冬凌草甲素在10～25 μmol/L范围内可抑制HL-60细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性.并可诱导HL-60细胞发生凋亡,表现出特异性的凋亡形态学改变.流式细胞仪分析显示,冬凌草甲素处理后凋亡细胞比例增多,且随着药物浓度的增加而逐渐增加.RT-PCR检测结果显示, 20 μmol/L冬凌草甲素作用后,与对照组相比, HL-60细胞Survivin mRNA水平下降,且随时间延长表现得更为明显.结论 冬凌草甲素能抑制人白血病细胞株HL-60细胞的生长增殖,并可诱导其发生凋亡, 其作用机制可能与凋亡抑制基因Survivin的下调有关.     

死亡相关蛋白激酶对人白血病HL-60细胞凋亡及生存素基因表达的影响

目的：探讨死亡相关蛋白激酶（DAPK）对人白血病HL-60细胞凋亡及生存素（Survivin）基因表达的影响。方法：利用真核表达载体pReceiver-M29-DAPK,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染HL-60细胞,荧光染色法观察细胞凋亡;RT-PCR方法检测SurvivinmRNA表达水平的变化。结果：pReceiver-M29-DAPK转染组的凋亡细胞比例高于pReceiver-M29组和空白组。pReceiver-M29-DAPK转染组Survivin mRNA表达水平低于pReceiver-M29组和空白组。结论：pReceiver-M29-DAPK转染诱导HL-60细胞发生凋亡,生存素基因表达显著下调。     

PUVA诱导HL-60细胞凋亡时对Fas、FasL表达的影响

[目的]探讨补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病细胞HL-60凋亡时对Fas、FasL表达的影响。[方法]以HL-60细胞为研究对象。以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察中药补骨脂中提取的PSO加波长为360nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。[结果]（1）PSO、UVA照射及PUVA均可诱导HL～60细胞发生凋亡,对照组、80μg／mL PSO组、5min UVA组及PUVA（80μg／mL PSO＋5min UVA）组凋亡率分别为（10．60±0．31）％、（26。94±0．26）％、（28．53±0．05）％、（37．72±0．09）％,各组间P〈0．01,PUVA的作用明显强于前两者。（2）电镜下观察经PUVA处理后的HL-60细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。（3）PSO、UVA照射及PUVA均可上调HL-60细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达。上述四组FasmRNA的表达量分别为（8．40±0．59）×10^3、（1．62±0.36）×10^5、（1.50±0.26）×10^5、（7．88±0．38）×10^6拷贝数／μg;Fas蛋白的表达量分别为（3．29±0．39）％、（18．73±1．22）％、（18．17±1．07）％、（47．03±1．36）％;FasL mRNA的表达量分别为（8．69±0．44）×10^7、（2．71±0．29）×10^7、（2.64±0．31）×10^7、（2．61±0.33）×10^5拷贝数/μg;FasL蛋白的表达量分别为（58．67±1．75）％、（37．40±1.73）％、（33．90±1．90）％、（15．60±1．42）％,各组间P〈0．01,PUVA的作用明显强于前两者。[结论]（1）PUVA可诱导白血病细胞HL-60发生凋亡,作用强于PS0及UVA照射。（2）PUVA诱导HL-60凋亡的途径之一为上调HL-60细胞FasmRNA表达水平,下调FasL mRNA表达水平。     

鱼藤素对小细胞肺癌的体外抗肿瘤效果评价及相关机制分析

目的:研究鱼藤素对小细胞肺癌体外抗肿瘤效果?方法:0?5?10?20?50 μmol/L鱼藤素作用于NCI-H446细胞24 h,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK8)分析鱼藤素对细胞活力的影响?据CCK8结果,以0?5?10?20 μmol/L鱼藤素作用于NCI-H446细胞,EdU掺入法检测细胞增殖,DAPI染色及流式细胞术测定细胞凋亡?据流式结果,20 μmol/L鱼藤素作用NCI-H446细胞0?0.5?2.0?4.0 h,蛋白质印迹法检测细胞内凋亡相关蛋白的表达?结果:鱼藤素呈剂量依赖性地抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖?诱导其凋亡,作用不同时间后可上调促凋亡蛋白Bax?下调抗凋亡蛋白Bcl-2水平?结论:鱼藤素体外抗小细胞肺癌效应可能通过上调促凋亡蛋白Bax?下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,诱导细胞凋亡实现?     

过表达miR-186对白血病HL-60细胞增殖和凋亡作用机制的研究

目的 探究过表达miR-186对白血病细胞增殖、凋亡及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B (AKT)信号通路的调控作用。方法 选取人白血病HL-60细胞,通过实时荧光定量PCR (RT-qPCR)、细胞计数试剂-8 (CCK-8)、Hoechst33258染色、酶联免疫吸附试验（ELISA）及蛋白质印迹法（WB）法分析细胞形态、miR-186相对表达量、增殖能力、凋亡情况、相关因子表达水平。结果 转染24 h后,与mimic NC组相比,miR-186组细胞生长受到抑制,miR-186相对表达量、凋亡细胞数、超氧化物歧化酶（SOD）、caspase-3蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,而细胞增殖活力、丙二醛（MDA）、p-PI3K和p-AKT、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。PI3K/AKT信号通路抑制剂的加入使各项指标差异更加显著（P<0.05）。结论 过表达miR-186能够通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制人白血病HL-60细胞的增殖并改善氧化应激水平,促进细胞凋亡。     

鱼藤素对人骨髓瘤细胞 RPMI-8226 增殖和凋亡的影响

目的 观察鱼藤素对人多发性骨髓瘤细胞株 RPMI-8226 细胞增殖和凋亡的影响及其对核受体共激活因子-3 (SRC-3) 的调控作用,研究鱼藤素诱导凋亡作用与其调节 SRC-3 的相互关系。方法 采用 MTT 法检测细胞增殖活性,Annexin-V FITC/PI 双标法及 Hoechst 33258 染色法分析细胞凋亡的改变,RT-PCR 法检测鱼藤素对 RPMI-8226 细胞内 SRC-3 基因表达的影响;免疫组化法检测鱼藤素对 RPMI-8226 细胞 SRC-3 蛋白的影响和分布情况。结果 鱼藤素能明显抑制 RPMI-8226 细胞的增殖,其抑制作用呈时间、 剂量依赖性,其作用 24 h 的 IC５０为 (54.55±0.40) nmol/L。此外,鱼藤素具有较强的诱导 RPMI-8226 细胞凋亡的效应,25 nmol/L即能诱导(17.04±0.73)% 的 RPMI-8226 细胞发生凋亡;当药物浓度达到 100 nmol/L 时,总凋亡率达 (63.57±1.36)%。在 RPMI-8226 细胞中 SRC-3 高表达,且主要分布于细胞核,经鱼藤素干预后,SRC-3 的 mRNA 和蛋白表达水平明显下降。结论 鱼藤素能明显抑制 RPMI-8226 细胞的增殖,并诱导其凋亡。而鱼藤素诱导的 SRC-3 表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用。     

死亡相关蛋白激酶对人白血病HL-60细胞凋亡及

目的:探讨死亡相关蛋白激酶(DAPK)对人白血病HL-60细胞凋亡及生存素(Survivin)基因表达的影响.方法:利用真核表达载体pReceiver-M29-DAPK,用脂质体Lipofectamine TM2000介导转染HL-60细胞,荧光染色法观察细胞凋亡;RT-PCR方法检测Survivin mRNA表达水平的变化.结果:pReceiver-M29-DAPK转染组的凋亡细胞比例高于pReceiver-M29组和空白组.pReceiver-M29-DAPK转染组Survivin mRNA表达水平低于pReceiver-M29组和空白组.结论:pReceiver-M29-DAPK转染诱导HL-60细胞发生凋亡,生存素基因表达显著下调.     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞株HL60凋亡的机制研究

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导髓系白血病细胞HL60凋亡的机制。方法 四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Hoechst33342染色形态学观察及流式细胞仪证实细胞凋亡,Western印迹检测B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）、Caspase-9、Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）蛋白表达。结果 硼替佐米对HL60细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖关系,30nmol/L的硼替佐米作用24h能明显抑制HL60细胞增殖,抑制率为76％,形态学观察可见明显的胞核凝聚、固缩及碎裂;流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰凋亡率为62．6％;Western印迹检测显示Bcl-2表达下降,Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白均裂解激活。结论 硼替佐米能诱导髓系白血病细胞HL60凋亡,其机制与Bcl-2蛋白的抑制及Caspase凋亡信号途径的激活有关。     

雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡研究

目的：了解雷公藤甲素诱导大鼠肾上腺皮质细胞凋亡的发生。方法：体外分离培养大鼠肾上腺皮质细胞,以蛋白因子添加素V和碘化丙啶（PI）联合标记,流式细胞仪检测,观察雷公藤甲素诱导细胞凋亡的特征。结果：雷公藤甲素以时间和剂量依赖的方式诱导细胞凋亡,0、12．5、25、50、100和200μg／L雷公藤甲素处理细胞2h,凋亡率分别为1．67％、16．54％、32．53％、47．62％、57．12％72．77．45％;100μg／L雷公藤甲素染毒0、0．5、1、2、3和4h,细胞凋亡率分别为1．12％、14．37％、35．26％、4975％、62．65％及78．46％。结论：雷公藤甲素可诱导肾上腺皮质细胞凋亡。     

氧化苏木素抑制ABCB1介导肿瘤多药耐药活性的研究

目的探讨氧化苏木素对ABCBl介导的肿瘤多药耐药活性的影响抑制。方法MTT试验检测氧化苏木素对人白血病K562及其耐药K562／ADR（ABCBl高表达）细胞的细胞毒作用;AnnexinV／PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡的发生。结果氧化苏木素对耐药的K562／ADR细胞具有高效的细胞毒作用,氧化苏木素对K562和K562／ADR细胞的IC50值分别为（5．45±0．36）和（5．62±0．43）μmol／L,二者无显著性差异。流式细胞仪检测凋亡的结果显示：0、5、10、20Ixmol／L的氧化苏木素分别处理K62和K562／ADR细胞后。K562细胞的凋亡率从（3．41±0．55）％依次升高到（24．67±2．08）％、（40．33±3．51）％和（66．67±3．64）％,K562／ADR细胞的凋亡率从（2．82±0．57）％依次升高到（23．01±3．60）％、（38．23±4．06）％和（65．77±5．51）％。结论氢化苏木素克服了ABCBl介导的肿瘤多药耐药活性．诱导耐药细胞凋亡是茸作用的机制．     

冬凌草甲素抗T细胞急性淋巴细胞白血病效应的实验研究

目的 探讨冬凌草甲素对T细胞急性淋巴细胞白血病的抗白血病效应及其机制。方法 以T细胞急性淋巴细胞白血病细胞株CEM为研究对象,应用改良MTT法测定不同浓度及不同时间冬凌草甲素对CEM细胞增殖和生存率的影响,计算72 h的半数抑制浓度（IC50）;显微镜下观察5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素处理24 h后CEM细胞的形态学变化;流式细胞术检测0.5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后CEM细胞的凋亡百分率;应用Western blot法检测7.5 μmol/L冬凌草甲素作用后细胞mTOR、P70、4EBP1、RAF、ERK、STAT5信号蛋白水平,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果 ①冬凌草甲素呈浓度及时间依赖性抑制CEM细胞增殖,作用72 h的IC50值为（7.37±1.99）μmol/L ;② 5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后CEM细胞边界不清晰,部分细胞崩解,且浓度越高,细胞形态改变越明显;③ 0、5、7.5、10 μmol/L冬凌草甲素作用24 h后,细胞凋亡百分率分别为（4.8±2.11）%、（19.03±2.54）%、（40.27±3.31）%;（57.23±6.69）%;④冬凌草甲素明显抑制CEM细胞mTOR、P70、4EBP1、RAF、ERK、STAT5信号蛋白的活化;下调CEM细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白Bax的表达。结论 冬凌草甲素可能通过抑制mTOR/P70(4EBP1)、RAF/ERK、STAT5信号蛋白的活化,以及上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2而发挥抗白血病作用。     

芹菜素对人肺癌NCI-H460细胞增殖及凋亡的影响

目的研究芹菜素对人肺癌NCI-H460 细胞增殖及凋亡的影响。方法应用10~80 μmol/L 芹菜素处理NCI-H460 细胞,
MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色
法检测细胞凋亡率;Western blotting检测凋亡相关信号分子Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达水平。结果芹菜素对NCI-H460
细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;
NCI-H460细胞凋亡率随着芹菜素浓度增加逐渐增高;芹菜素处理组细胞Bax和caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。
结论芹菜素能够抑制人肺癌NCI-H460细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与上调Bax和下调Bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax
比值下降,caspase-3活化有关。
     

SeO2诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和p53表达调控的影响

目的：研究SeO2对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响。方法:采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达。结果:10和30mmol／L SeO2能抑制3种细胞增生。30mmol／L SeO2作用48h能使54．0％的NB4细胞、46．5％的K562细胞和49．6％的HL-60细胞发生凋亡；能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达。结论:SeO2对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用，在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控。     

大肠癌中AKT1及Survivin的表达与细胞增殖、凋亡的关系

AKT／PKB信号通路是细胞内信号传导的重要环节,参与细胞代谢、生存／凋亡、分化和增殖等过程。Survivin是一种凋亡抑制蛋白。AKT1、Survivin在大肠腺癌的发生、发展的过程中发挥了重要的作用。     

鱼藤素对乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

目的：观察鱼藤素对MCF-7细胞株细胞增殖和凋亡及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt）信号通路的影响,旨在研究其抗肿瘤机制。方法：细胞计数试剂盒8（cell counting kit-8,CCK8）检测0、1、5、10、15和20μmol/L鱼藤素作用6、24、48和72h后对MCF-7细胞增殖的影响,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡率,透射电子显微镜观察细胞凋亡形态,蛋白质印迹法检测细胞内PI3K/Akt通路相关分子的蛋白表达。结果：5、10、15和20μmol/L鱼藤素作用6、24、48和72h后能明显抑制MCF-7细胞增殖（P〈0.01）,抑制率随着浓度升高和时间延长而增加,各组间两两比较差异有统计学意义（P〈0.05）;而1μmol/L鱼藤素作用6、24、48和72h后对MCF-7细胞的增殖无明显影响（P〉0.05）。5、10、15和20μmol/L鱼藤素作用6h后能诱导MCF-7细胞凋亡,透射电子显微镜下可观察到典型的凋亡细胞形态,而相同条件下1μmol/L鱼藤素对MCF-7细胞的凋亡诱导作用不明显。5μmol/L鱼藤素作用6h后,MCF-7细胞内磷酸化Akt（p-Akt）（Thr308）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（phosphorylated glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β）（Ser9）、磷酸化磷酸肌醇依赖性激酶1（phosphorylated 3-phosphoinositide-dependent protein kinase1,p-PDK1）（Ser241）和磷酸化人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因编码的蛋白（phosphorylated phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10,p-PTEN）（Ser380）的表达量明显减少,而总Akt蛋白的表达量则无明显变化;1μmol/L鱼藤素作用6h后,细胞内上述所有蛋白的表达量均无明显变化。结论：鱼藤素可能通过抑制PTEN（Ser380）和PDK1（Ser241）蛋白的磷酸化,进而抑制Akt（Thr308）的磷酸化,间接抑制其下游GSK-3β（Ser9）的磷酸化,最终诱导MCF-7细胞凋亡和抑制其增殖。     

鼻咽癌组织中COX-2与Survivin表达的关系及临床意义

目的探讨COX-2蛋白在鼻咽癌组织中的表达情况及其与生存素（Survivin）表达的关系和临床意义。方法采用免疫组织化学二步法检测43例鼻咽癌组织中COX-2和Survivin的表达。结果COX-2和Survivin在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为79．1％（33／43）和76．7％（32／43），COX-2在Ⅳ期病例中的阳性表达率为100％（14／14），并与Survivin的表达存在着显著的正相关性。结论COX-2的过度表达在鼻咽癌的发生进展过程中起着重要的作用，与抑制细胞的凋亡过程密切相关。     

胃癌组织中survivin与p53基因表达的相关性研究

目的：探讨凋亡抑制基因生存素蛋白（survivin）在胃癌组织中表达的临床意义，及其与p53蛋白表达的相关性分析。方法：采用二步法免疫组化技术（Envision），检测60例术前未经化疗的胃癌组织中survivin和p53蛋白的表达情况。结果：60例胃癌组织中Survivin阳性表达37例，阳性率61．7％；而p53阳性率51．7％（31／60）；Survivin表达与胃癌组织学类型、临床分期和淋巴结转移有明显相关性（P〈0.05）；Survivin在p53阳性和阴性患者中阳性率分别为80．6％（25／31）和41.4％（12／29），两者间有显著差异（P〈0.05）。结论：胃癌组织中Survivin高表达导致凋亡抑制在胃癌的发生发展中可能起重要作用，而突变型p53基因因丧失了对Survivin负反馈调节，在这一过程中起协同作用；Survivin与p53一样可作为判断胃癌预后的重要指标。