人胚神经干细胞的分离培养和鉴定

目的：从流产人胚前脑中分离培养人胚神经干细胞。方法：神经干细胞具有自我复制和多向分化潜能。本实验利用神经干细胞特定的培养增殖培养体系分离纯化人胚神经干细胞,并对分离得到的神经干细胞的分子标记及分化潜能进行鉴定。结果：从8~10周龄流产人胚胎分离得到了神经干细胞,它能表达神经干细胞特异性抗原nestin,并能在体外诱导分化为神经元细胞和神经胶质细胞。结论：在人胚中枢神经系统中存在神经干细胞,并能够在体外扩增,为神经干细胞的基础研究和临床应用奠定了基础。     

人神经干细胞的研究进展及应用前景

人神经干细胞具有自我更新和多分化潜能,可从人胚胎和中枢神经系统成功分离并培养,经体外诱导或植入体内后均能分化为成熟神经元和神经胶质细胞,为多种中枢神经系统疾病的功能重建和神经再生提供了新的途径。人神经干细胞是近年来的研究热点,但其生物学性状和分化调控机制尚不完全明了,现就神经干细胞的特性、表现、分化、迁移、临床应用及存在的问题等进行综述。     

12例神经干细胞移植围手术期的护理

神经干细胞属于多能干细胞，是一组原始的、具有多种分化潜能并能自我更新的细胞，能够分化成神经系统各种成熟细胞。神经干细胞移植术是将体外培养和诱导分化的神经干细胞通过手术方式移植到体内达到修复和重建功能的过程。我科从2007年7月至今采取自体骨髓诱导分化和培养成神经干细胞，并将成熟的神经干细胞应用于临床，为12例脑损伤功能障碍的患者成功的施行了手术治疗，     

体外培养神经干细胞分化为类胰岛样组织的研究

目的：观察体外培养的神经干细胞是否可以被诱导分化为类胰岛样组织。方法：体外培养神经干细胞，在胰岛素等外源性复合成分（ITS）诱导分化后，分别进行胰腺上皮干细胞特异性标志物CK－19、胰腺β细胞特异性成分胰岛素和胰腺α细胞特异性成分胰高糖素等的免疫细胞化学染色鉴定。结果：体外培养的神经干细胞经诱导分化3d后，在神经干细胞集落附近可见散在或成群分布的上皮样细胞，并呈CK－19免疫阳性反应。继续培养2－4周后，上皮样细胞增多，细胞圆形或呈鹅卵石样排列，进一步增生形成类胰岛样组织，其中大多数细胞呈胰岛素免疫反应阳性，少数细胞呈胰高糖素免疫反应阳性。结论：体外培养的神经干细胞具有向类胰岛样组织分化的潜能，它能分化为胰岛的α细胞和β细胞。     

SD胎鼠脊髓神经干细胞分离、培养及鉴定

目的 分离、培养和鉴定胎鼠脊髓神经干细胞,为建立稳定的脊髓神经干细胞系提供基础.方法 应用无血清培养技术从胎鼠脊髓分离、培养神经干细胞,用免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞.结果 分离培养的细胞具有不断增殖的能力,表达神经巢蛋白,并能经过诱导分化为神经元和神经胶质细胞.结论 分离到的细胞具有自我复制能力和多向分化潜能,是中枢神经系统的干细胞,为应用于中枢神经系统损伤治疗提供了基础.     

成鼠骨髓间充质干细胞体外分化为神经前体细胞的研究

目的:探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化为神经前体细胞的可能性.方法:MSC原代培养、传代后在细胞因子和氧化剂作用下进行诱导.形态学观察,免疫细胞化学、流式细胞分析和细胞电生理检查.结果:MSC体外可诱导为神经前体细胞,诱导后有表面抗原nestin表达,5 h分化率49.8%,同时具有早期神经干细胞电流特性.结论:骨髓来源的神经前体细胞治疗中枢神经系统疾病成为可能.     

胚胎大鼠纹状体区神经干细胞的体外培养

目的探讨胚胎大鼠纹状体区神经干细胞的培养、分化和鉴定技术。方法从胚胎大鼠纹状体区分离神经干细胞,用无血清培养技术进行体外原代培养、传代,加血清进行诱导分化。荧光免疫染色技术进行鉴定。结果从胚胎大鼠纹状体区分离出神经干细胞,并可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论采用该体外培养技术分离的纹状体区神经干细胞可在体外大量增殖,并有多向分化潜能。     

诱导兔骨髓基质细胞向神经干细胞分化的初步实验研究

目的：观察兔骨髓基质细胞体外培养的生长行为及增殖、分化情况，探讨由骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性。方法：无菌条件下行骨穿术，密度梯度离心分离获取骨髓基质细胞，利用多种增殖、分化诱导因子和神经干细胞培养液进行培养、分化诱导，用免疫细胞化学方法进行鉴定。结朵：骨髓基质细胞在体外培养中能形成NESTIN抗原阳性的细胞克隆团，进一步分化，部分细胞胞体增大并出芽，逐渐发育成为较成熟的长突起细胞，长突起相互连接、交织成网并建立纤维联系。结论：骨髓基质细胞具有较强的自我更新能力和多向分化潜能，易于取材、体外培养和增殖，在一定诱导条件下可以生成神经干细胞。     

骨髓间充质干细胞向神经样细胞诱导分化的影响因素

骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有干细胞的一般特性,主要存在于骨髓基质中,具有横向分化潜能,可以向3个胚层细胞进行分化。近年来,许多学者通过实验研究BMSCs在体外诱导分化为神经样细胞的机制。体外培养、扩增BMSCs分别采用化学诱导剂或生物诱导剂可诱导BMSCs分化神经样细胞,并表达神经元标志物。本文就对BMSCs向神经样细胞诱导分化的影响因素予以综述。     

组织块法体外培养人胚胎神经干细胞

目的：探讨体外分离、培养人胚胎脑组织神经干细胞的实用方法。方法：从人胚胎脑额叶皮层分离组织块，采用DMEM／F12＋N2无血清培养基，进行体外培养、传代。采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和分化后的其他细胞表型。结果：从人胚胎脑额叶皮层分离的细胞具有增殖和多向分化潜能，可进行传代培养，获得的细胞中大部分为Nestin表达阳性的细胞。诱导分化后可以出现NSE、GFAP表达阳性的细胞。结论：用上述方法分离培养的细胞具有神经干细胞的特性，并表达Nestin蛋白，认为是神经干细胞。此方法是一种具有实用价值的体外培养人胚胎脑神经干细胞的技术。     

神经干细胞移植对帕金森病鼠旋转行为的影响

目的 :观察神经干细胞定向移植后对帕金森病 (Parkinsondisease,PD)鼠的旋转行为的影响。方法 :建立PD模型大鼠以及体外培养神经干细胞 ,然后将神经干细胞悬液立体定向移植到PD模型鼠黑质纹状体区 ,测定PD模型鼠旋转行为的变化 ,并与对照组相比。结果 :神经干细胞移植后PD模型鼠旋转行为比对照组明显减少。结论 :神经干细胞移植能减轻 6 羟基多巴胺对黑质纹状体多巴胺能神经元的损伤。     

不同胎龄人胎脑皮质颞叶神经干细胞变化特征观察

目的：探讨不同胎龄胎脑皮质颞叶神经干细胞（NSC）的发育规律。方法：收集胎龄为16～36周的水囊引产胎儿90例，采朋免疫组化及光镜技术对人胎脑皮质颞叶NSC的分布、彤态、生长方式以及数量进行检测。结果：NSC主要分布在锥体细胞层及内颗粒细胞层，呈圆形、椭圆形及多角形，尤以小圆形细胞为甚，0～2个突起，核相对较大，1～2个核仁不等，染色质疏松。NSC呈区域性分布，其中有大量由数个细胞形成的NSC集落，少部分NSC以单个彤式存在于其他神经细胞间。各胎龄组间NSC在分布、形态、种类、生长方式等方面无明显差异；随着胎龄的增加，皮质颞叶NSC逐渐减少。结论：不同胎龄人胎脑皮质颞叶NSC在分布、形态、种类和生长方式等方面无明显差异，其数量随着胎龄的增加而减少。     

Isolation, Culture and Identification of Neural Stem Cells in New-born Rats

The cortexes were obtained from new-born rats and dissociated to single cells by triturating. The ceils were cultured in neural stem cell (NSC) culture medium (DMEM supplemented with bFGF, EGF and B27) and formed primary neurospheres after 7 days. Single ceils dissociated from neurosphere were cultured in 96-well plates and formed single-cell cloning neurosphere 7 days later.The primary and single-cell cloning neurospheres were both positive for the immunofluorescent staining of nestin and were identified as NSC. It was proved that NSC can be expanded in vitro and orovide seed cells for neural tissue engineering.     

黄芩苷对体外培养神经干细胞分化的影响

[目的]探索黄芩苷对体外神经干细胞分化的影响。[方法]培养胎鼠脑皮质神经干细胞,应用细胞免疫化学方法,以神经元特异性的微管相关蛋白-2(MAP-2)和星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)为标记,对分化后的神经干细胞进行区分,评价黄芩苷对神经干细胞分化的影响。[结果]黄芩苷可以促进神经干细胞向神经元分化,其中高剂量组明显优于对照组。[结论]黄芩苷具有促进神经干细胞分化为神经元的作用。     

黄芩苷对体外培养神经干细胞分化的影响*

【目的】探索黄芩苷对体外神经干细胞分化的影响。【方法】培养胎鼠脑皮质神经干细胞，应用细胞免疫化学方法，以神经元特异性的微管相关蛋白-2（MAP-2）和星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白（GFAP）为标记，对分化后的神经干细胞进行区分，评价黄芩苷对神经干细胞分化的影响。【结果】黄芩苷可以促进神经干细胞向神经元分化，其中高剂量组明显优于对照组。【结论】黄芩苷具有促进神经干细胞分化为神经元的作用。     

Nogo受体慢病毒干扰载体在大鼠神经干细胞中的表达及其干扰效率鉴定

目的 在体外分离培养的大鼠神经干细胞内,通过慢病毒介导的shRNA实现持续稳定的NgR沉默。方法 设计并合成表达NgR shRNA的慢病毒载体,通过转染293T细胞系收集包装好的病毒颗粒。分离培养初生大鼠脊髓神经干细胞,以不同MOI值感染慢病毒,流式细胞术确定感染所需的最佳MOI值。感染慢病毒的神经干细胞经潮霉素筛选后进行单克隆培养,Western blot法检测NgR的沉默效率。取感染后不同天数的神经干细胞,实时定量PCR检测NgR沉默的稳定性。结果 神经干细胞分离培养6天后可见神经球形成;流式细胞术测定慢病毒感染的最佳MOI=10;慢病毒感染后NgR的沉默效率可达80%,并可在7~28天内维持在70%~80%。结论 慢病毒介导的shRNA可以在体外分离培养的大鼠神经干细胞内实现较为稳定的NgR基因沉默,为开展神经干细胞移植治疗脊髓损伤奠定了基础。     

高压氧促进缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞增殖的时间窗研究

目的：探讨高压氧（HBO）治疗是否可以促进缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠内源性神经干细胞（NSC）的增殖及HBO治疗HIBD的时间窗。方法：采用Rice法制成HIBD模型,分别于HIBD后第3、6、12、24和72h开始给予HBO治疗,1次/d,连续7 d。HIBD后10 d,BrdU/Nestin免疫荧光双标法检测不同时间窗HBO治疗对内源性NSC的影响,Western blot法检测Nestin蛋白的表达;HIBD后28 d尼氏染色法检测海马CA1区锥体细胞密度。结果：HIBD后3、6、12和24 h给予HBO治疗,侧脑室室管膜下（SVZ）区BrdU＋Nestin＋细胞显著增加（P〈0.05）,损伤侧大脑Nestin蛋白表达显著高于HIBD组（P〈0.05）;尼氏染色结果显示HIBD后3、6、和12h给予HBO治疗,海马CA1区神经元丢失较HIBD组显著减少（P〈0.05）。结论：HBO治疗可以促进HIBD新生大鼠内源性NSC的增殖,治疗时间窗拓宽至HIBD后24 h可促进NSC增殖,HIBD后72 h进行HBO治疗则疗效不显著。     

脑溢安对大鼠缺氧神经干细胞丝氨酸/苏氨酸激酶磷酸化的影响

目的： 观察脑溢安（NYA）对大鼠神经干细胞（neural stem cell, NSC）缺氧损伤后磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(phosphorylated serine/threonine kinase, phosph-Akt)表达的影响,探讨该药对缺氧神经干细胞的保护作用机制。方法：用分离、培养的神经干细胞造成缺氧模型,以正常大鼠血清和含脑溢安的大鼠血清对缺氧后的神经干细胞进行干预,用含NYA血清、正常血清、无血清的培养液干预缺氧的神经干细胞,Western blotting检测神经干细胞缺氧损伤后Akt的磷酸化情况并用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法［terminal(TdT)-mediated dUTP-biotin nick end labeling, TUNEL］检测细胞凋亡情况。结果：NYA血清缺氧神经干细胞组Akt磷酸化较无血清、正常血清缺氧神经干细胞组明显增加(P<0.05), TUNEL阳性细胞数明显减少(P<0.05)。结论：用脑溢安血清干预缺氧损伤的神经干细胞,可上调Akt的磷酸化,减少缺氧的神经干细胞凋亡,发挥保护作用。     

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后GDNF基因表达的影响及意义

目的:探讨神经干细胞(NSC)移植对大鼠脊髓损伤后胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响及其意义。方法:NSC提取自新生Wistar大鼠的海马区,经培养、鉴定。制作大鼠脊髓损伤(SCI)模型,于伤后第7d移植NSC。实验分为3组:NSC移植组(A组)、DMEM填充组(B组)、正常对照组(C组)。应用RT-PCR法和免疫组化法观察细胞移植后不同时间点GDNF基因的表达变化。结果:RT-PCR结果分析,移植术后第1,3,5d,A组GDNF mRNA的表达量明显高于B组,差别有显著性意义(P<0.05)。组化结果分析,移植术后第7,14,28d GDNF的表达量明显高于B组,差别有显著性意义(P<0.05)。结论:NSC在移植后可上调神经营养因子GDNF基因的表达,是修复脊髓损伤的机制之一。     

大鼠脊髓损伤亚急性期NSCs脊髓内移植对脊髓神经电生理的影响

目的 研究神经脊髓损伤的亚急性期(第7天)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)脊髓内移植对大鼠受损伤脊髓神经电生理的影响.方法 正常成年SD雌性大鼠15只,分为3组:单纯全横断组、假手术组和神经干细胞移植组.测定3组大鼠的皮层体感诱发电位(cortical somatosensory evoked potential,CSEP)、运动诱发电位(motion evoked potential,MEP)和电针刺激大脑皮质运动区.结果 神经干细胞移植组的诱发电位CSEP、MEP的潜伏期短于单纯脊髓全横断组大鼠,电针刺激大脑皮质运动区发现NSC移植组大鼠双后肢出现明显收缩,且以对侧更为明显.结论 神经干细胞脊髓内移植后能部分促进损伤脊髓的感觉和运动传导功能的恢复.