大鼠脑出血后血肿周围脑组织p75NTR的表达及其与细胞凋亡的关系

目的研究大鼠脑出血后不同时期血肿周围组织中p75NTR的表达规律及与其细胞凋亡的相关性。方法采用自体动脉血注入右侧尾状核制备大鼠脑出血动物模型,分别于脑出血后6h、24h、72h和10d处死大鼠获取血肿周围脑组织标本,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法及实时荧光定量PCR检测p75NTR蛋白及mRNA的表达。结果脑出血后6hpp75NTR蛋白和nRNA表达水平即上升,24h继续升高,72h到达高峰,至10d仍维持在较高水平,与对照组相比均差异显著（P〈0．05）。脑出血后细胞凋亡率的动态变化趋势与p75NTR蛋白及mRNA表达变化一致,两者之间呈显著正相关（P〈0．05）。结论脑出血后p75NTR可能参与介导脑细胞凋亡。     

脑出血患者血肿周围脑组织中P75NTR、TrkA的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 通过对人脑出血后血肿周围不同区域组织中的P75NTR、TrkA表达的检测,探讨其在脑出血后血肿周围组织细胞凋亡中的作用. 方法采集脑出血血肿清除术患者的脑组织标本,分别运用DNA断裂原位末端标记(TUNEL)法及免疫组化技术检测血肿周围及远隔部位组织中细胞凋亡率与P75NTR、TrkA的表达. 结果相对于远隔部位组织,脑出血后血肿周围组织中的细胞凋亡率与P75NTR的表达水平明显增加(P<0.05),而TrkA的表达水平并没有明显变化(P>0.05).P75NTR的阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率呈正相关(r=0.628,p=0.000). 结论脑出血后血肿周围组织中凋亡细胞明显增多,P75NTR介导的细胞凋亡通路可能发挥了重要的作用;TrkA在脑出血发生后并没有增量表达以增加细胞存活,未起到拮抗P75NTR介导的细胞凋亡作用.     

大鼠脑出血后不同时期神经营养因子受体p75、神经生长因子前体、酪氨酸激酶A的表达及其与细胞凋亡的相关性

目的研究脑出血后血肿周围组织中神经营养因子受体p75(p75NTR)、神经生长因子前体(pro NGF)、酪氨酸激酶A(TrkA)的表达及细胞凋亡率,进一步探讨其在脑出血后的细胞凋亡中所发挥的作用。方法制作大鼠脑出血模型,于术后6 h、24 h、72 h、10 d处死各组大鼠获取所需脑组织标本,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化SP法检测p75 NTR、TrkA、pro NGF的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测p75 NTR、TrkA的基因表达水平。结果脑出血后p75 NTR、proNGF表达水平及p75 NTR/TrkA值与对照组比较显著升高(P 0. 01),且动态变化规律与脑细胞凋亡率相似;72 h后TrkA的动态变化规律与细胞凋亡率相反。结论脑出血后pro NGF与p75 NTR的结合可能参与介导脑细胞凋亡,p75 NTR/TrkA值增高时,pro NGF及p75 NTR以介导细胞凋亡为主; TrkA在脑出血后72 h内神经营养作用被抑制,72 h后可能发挥神经营养作用。     

脑出血患者血肿周围脑组织中P75NTR、TrkA的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 通过对人脑出血后血肿周围不同区域组织中的P75NTR、TrkA表达的检测,探讨其在脑出血后血肿周围组织细胞凋亡中的作用. 方法采集脑出血血肿清除术患者的脑组织标本,分别运用DNA断裂原位末端标记(TUNEL)法及免疫组化技术检测血肿周围及远隔部位组织中细胞凋亡率与P75NTR、TrkA的表达. 结果相对于远隔部位组织,脑出血后血肿周围组织中的细胞凋亡率与P75NTR的表达水平明显增加(P<0.05),而TrkA的表达水平并没有明显变化(P>0.05).P75NTR的阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率呈正相关(r=0.628,p=0.000). 结论脑出血后血肿周围组织中凋亡细胞明显增多,P75NTR介导的细胞凋亡通路可能发挥了重要的作用;TrkA在脑出血发生后并没有增量表达以增加细胞存活,未起到拮抗P75NTR介导的细胞凋亡作用.     

早期脑出血后细胞凋亡与p75NTR、TrkA的相关性研究

目的 探讨p75NTR、TrkA在高血压脑出血(hypertensive intracerebral hemorrhage,HICH)早期的表达情况,初步阐明其与细胞凋亡的关系.方法 收集20例HICH病人脑出血后早期血肿周围不同部位组织标本,分为血肿表面组、半暗带组、脑皮质下区组;并在三组中将标本按出血时间(＞7h、≤7 h)、出血量(＞60 ml、≤60 ml)分组.采用免疫组化检测三组中p75NTR、TrkA的表达,TUNEL方法检测凋亡细胞率,统计分析p75NTR、TrkA及凋亡细胞的相关性.结果 TUNEL法检测结果:脑出血后越靠近血肿凋亡细胞越多(P＜0.01).HICH早期越靠近血肿表面p75NTR表达增加(P＜0.01),并与凋亡细胞率成正比(P＜0.05);TrkA在脑出血后有表达,不同部位TrkA表达无差异(P＞0.05),与细胞凋亡无明显关系(P＞0.05).血肿表面组p75NTR/TrkA比率较其余两组上升(F=4.851,P=0.011).随着出血时间延长、出血量增加,p75NTR表达增加(P＜0.05),而TrkA表达无变化(P＞0.05).结论 HICH早期病人p75NTR在TrkA低表达或者无活性环境中促进细胞凋亡,TrkA与细胞凋亡无相关,p75NTR/TrkA比率变化影响出血后细胞凋亡.     

大鼠脑出血后血肿周围凝血酶与脑细胞凋亡和脑水肿的关系

目的 研究大鼠脑出血后血肿周围脑组织中凝血酶的变化及其与脑细胞凋亡和脑水肿的关系.方法 105只成年雄性SD大鼠随机均分为脑出血组、生理盐水组和正常对照组.每组再随机均分为7个时相,分别为6 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d;用立体定向脑内注射法制备脑出血模型;用ELISA法检测脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量;用流式细胞仪检测脑细胞的凋亡率;用干-湿重法检测脑组织的含水量;用透射电镜观察脑组织的形态学变化.结果 制备动物模型后,脑出血组各时相血肿周围脑组织中凝血酶含量、脑细胞凋亡率、脑组织含水量均明显高于生理盐水组和正常对照组;血肿周围脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量之间均呈正相关;电镜下,在脑出血组各时相脑组织切片中均可见大量的脑细胞凋亡和毛细血管周围大片组织间隙水肿,以及神经纤维脱髓鞘改变.结论 脑出血后,血肿周围脑组织中凝血酶含量明显升高,可导致脑细胞凋亡和脑水肿,凝血酶的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量呈正相关;尽早清除血肿有望改善凝血酶引起的继发性脑损伤.     

大鼠脑出血后血肿周围凝血酶与脑细胞凋亡和脑水肿的关系

目的 研究大鼠脑出血后血肿周围脑组织中凝血酶的变化及其与脑细胞凋亡和脑水肿的关系.方法 105只成年雄性SD大鼠随机均分为脑出血组、生理盐水组和正常对照组.每组再随机均分为7个时相,分别为6 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d;用立体定向脑内注射法制备脑出血模型;用ELISA法检测脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量;用流式细胞仪检测脑细胞的凋亡率;用干-湿重法检测脑组织的含水量;用透射电镜观察脑组织的形态学变化.结果 制备动物模型后,脑出血组各时相血肿周围脑组织中凝血酶含量、脑细胞凋亡率、脑组织含水量均明显高于生理盐水组和正常对照组;血肿周围脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量之间均呈正相关;电镜下,在脑出血组各时相脑组织切片中均可见大量的脑细胞凋亡和毛细血管周围大片组织间隙水肿,以及神经纤维脱髓鞘改变.结论 脑出血后,血肿周围脑组织中凝血酶含量明显升高,可导致脑细胞凋亡和脑水肿,凝血酶的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量呈正相关;尽早清除血肿有望改善凝血酶引起的继发性脑损伤.     

大鼠脑出血后血肿周围凝血酶与脑细胞凋亡和脑水肿的关系

目的 研究大鼠脑出血后血肿周围脑组织中凝血酶的变化及其与脑细胞凋亡和脑水肿的关系.方法 105只成年雄性SD大鼠随机均分为脑出血组、生理盐水组和正常对照组.每组再随机均分为7个时相,分别为6 h、12 h、24 h、48 h、3 d、5 d、7 d;用立体定向脑内注射法制备脑出血模型;用ELISA法检测脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量;用流式细胞仪检测脑细胞的凋亡率;用干-湿重法检测脑组织的含水量;用透射电镜观察脑组织的形态学变化.结果 制备动物模型后,脑出血组各时相血肿周围脑组织中凝血酶含量、脑细胞凋亡率、脑组织含水量均明显高于生理盐水组和正常对照组;血肿周围脑组织中凝血酶-抗凝血酶复合物的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量之间均呈正相关;电镜下,在脑出血组各时相脑组织切片中均可见大量的脑细胞凋亡和毛细血管周围大片组织间隙水肿,以及神经纤维脱髓鞘改变.结论 脑出血后,血肿周围脑组织中凝血酶含量明显升高,可导致脑细胞凋亡和脑水肿,凝血酶的含量与脑细胞凋亡率和脑组织含水量呈正相关;尽早清除血肿有望改善凝血酶引起的继发性脑损伤.     

实验性脑出血后大鼠行为学和血肿周围组织病理学的研究

目的观察大鼠脑出血后不同时间点神经行为学和血肿周围脑组织病理学的特点。方法将成年SD大鼠随机分为假手术组和脑出血组;脑出血组大鼠通过立体定向术向脑内注入VII型胶原酶制成脑尾状核出血模型,并按不同时间点（1、3、7、14、28d）分为5个亚组。采用神经功能评分和HE染色分别观察脑出血大鼠神经行为学和脑组织形态学的改变。结果与假手术组相比,脑出血组大鼠的神经行为学评分3d时最明显[3d与1、7d无明显差异（P〉0.05）;与14d和28d有显著差异（P〈0.05）]。脑出血后1d在尾壳核区域可见血肿形成,呈椭圆形或不规则形;3d时脑水肿明显;7d时血肿周围脑组织有胶质细胞增生;14d时血肿区逐渐形成不规则囊腔;28d时囊腔仍然存在,出血周边区见胶质细胞进一步增多。结论脑出血后神经行为学的改变、血肿及囊腔的形成与出血时间有关。     

大鼠脑出血后血肿周围脑组织含水量、细胞凋亡及行为变化的研究

目的通过观察大鼠脑出血模型血肿周围脑组织含水量、神经细胞凋亡及大鼠神经行为的动态变化,为临床有效治疗脑出血提供实验依据。方法制作胶原酶大鼠脑出血模型,检测大鼠脑出血后不同时间点血肿周围脑组织含水量、神经细胞调亡及神经功能缺损程度的动态变化。结果脑组织含水量在建模后2h尚未出现,9h开始出现,1～3d达到高峰,3d后逐渐消退,7d趋于正常;TUNEL阳性细胞在建模后2h只有少量,9h已明显增加,并持续增多,3d达到高峰,7d数量下降;建模后2h出现神经功能缺损症状,9～24h最明显,3d后开始减轻,7d明显减轻。结论出血后9h是临床治疗的重要时间窗。     

胞磷胆碱钠对实验性大鼠脑内血肿周围区细胞凋亡影响的研究

目的研究脑出血(ICH)后血肿周围区细胞凋亡的时间规律及胞磷胆碱钠治疗对血肿大小、细胞凋亡的影响.方法自体非抗凝动脉血注入大鼠右侧尾壳核制作脑内出血模型;腹腔注射胞磷胆碱钠或生理盐水;按多田公式估算血肿体积;流式细胞仪检测血肿周围区细胞凋亡率.结果大鼠脑内出血后6 h 血肿周围区出现细胞凋亡,72 h达高峰,4周时有少量凋亡细胞存在;对应的相同时间点给药组与对照组大鼠脑内血肿体积比较无显著差异(P>0.05);除6 h外余各时间点均显示给药组细胞凋亡率低于对照组,尤以72 h组为甚(P<0.01).结论脑内出血后血肿周围脑组织发生细胞凋亡且有时间规律性;胞磷胆碱钠早期治疗实验性大鼠脑内出血不引起血肿扩大,且可减少血肿周围区细胞凋亡.     

大鼠脑出血后血肿周围区神经元胀亡及3-AB对其胀亡、凋亡的影响

目的 通过建立大鼠脑出血动物模型,观察大鼠脑出血后血肿周围区神经元胀亡时程、分布变化规律及3.氨基苯甲酰胺(3-AB)对神经元胀亡、凋亡的影响.方法 成年健康Wistar大鼠84只随机分为脑出血+3-AB组(A组)、脑出血组(B组)、对照组(C组).A、B组脑尾壳核注入自体血50μl,A组3-AB腹腔注射干预.分别于术后6h、1d、2d、3d、5d、7d处死.根据Rosenberg法对各组大鼠进行神经功能评分;在光、电镜下观察神经元胀亡随时间、空间的变化规律;Caspase-3免疫组化,探讨3-AB对其胀亡和凋亡的影响.结果 脑出血大鼠神经功能评分在24h最高;血肿周围神经元出现胀亡和凋亡;胀亡指数在24h达高峰,此后逐渐下降,3组比较有统计学差异.凋亡亦在24h达高峰,Caspase-3阳性神经元数目3组相比有统计学意义.结论 脑出血后血肿周围神经元胀亡和凋亡共存;胀亡随时间、空间变化而呈规律性改变;3-AB能抑制其胀亡,促进凋亡.     

地塞米松对大鼠脑出血后血肿周围细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶mRNA表达的影响

目的 探讨地塞米松对大鼠脑出血(ICH)后血肿周围细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)mRNA表达的影响.方法 采用自体血注入法制作大鼠ICH模型;将制模成功的大鼠分为ICH组和地塞米松治疗组(治疗组),另设假手术组,每组40只;各组大鼠分别在造模后6 h、12 h、24 h、72 h断头取脑组织行TUNEL染色及RT-PCR法检测caspase-3 mRNA的表达.结果 与假手术组相比, ICH组和治疗组从6 h开始出现凋亡细胞,12～72 h逐渐增加(均P<0.01);与ICH组比较,治疗组12～72 h细胞凋亡数明显增多(均P<0.01),各时间点caspase-3 mRNA的表达均明显高于ICH组(均P<0.01). 结论 地塞米松可加重ICH后血肿周围细胞凋亡,应用地塞米松治疗ICH应慎重.     

The function of p75NTR in glia

The p75 neurotrophin receptor (p75(NTR)) is expressed on many cell types and can influence a variety of cellular functions. This receptor can mediate cell survival or cell death, can promote or inhibit axonal growth and can facilitate or attenuate proliferation, depending on the cell context. The emerging picture regarding p75(NTR) indicates that it can partner with different coreceptors to dictate specific responses. It then signals by recruiting intracellular binding proteins to activate different signaling pathways. The function of p75(NTR) has mainly been studied in neurons; however, it is also expressed in a variety of glial populations, especially during development and after injury, where its roles have been poorly defined. In this review, we will examine the potential roles for p75(NTR) in glial function.     

p75(NTR) expression and nuclear localization of p75(NTR) intracellular domain in spiral ganglion Schwann cells following deafness correlate with cell proliferation

Spiral ganglion Schwann cells (SGSCs) myelinate spiral ganglion neurons (SGNs) and represent a potential source of neurotrophic support for SGNs. Deafening due to loss of hair cells results in gradual degeneration and death of SGNs. Successful efforts to maintain or regenerate a functional auditory nerve may depend on a healthy population of SGSCs, yet the responses of SGSCs to neural injury remain largely unknown. Here we investigate the role of p75(NTR) in SGSC responses to gradual denervation. Following deafening, SGSCs in the osseous spiral lamina (OSL) and, subsequently, in Rosenthal's canal (RC) expressed elevated p75(NTR) compared to hearing controls. p75(NTR)-positive cells co-labeled with S100 and RIP antibodies (Schwann cell markers), but not with anti-neurofilament. The pattern of p75(NTR) expression mirrored the pattern of neural degeneration, beginning in the OSL of the cochlea base and later extending into the apex. SGSCs expressed sortilin, a p75(NTR) co-receptor for pro-neurotrophins. Both pro-nerve growth factor (pro-NGF) and pro-brain derived neurotrophic factor (proBDNF) induced apoptosis in cultured SGSCs. Deafened animals exhibited significantly higher levels of SGSC proliferation (as measured by BrdU uptake) compared to hearing animals while total Schwann cell density remained stable, suggesting a tight regulation of SGSC proliferation and cell death. SGSCs undergoing cell division lose p75(NTR) expression from the cell surface and demonstrate nuclear localization of the intracellular domain (ICD), raising the possibility that p75(NTR) cleavage and ICD nuclear localization regulate SGSC proliferation. These results suggest that p75(NTR) contributes to SGSC responses to deafening and neural degeneration.     

Gamma-secretase-independent role for cadherin-11 in neurotrophin receptor p75 (p75NTR) mediated glioblastoma cell migration

The p75 neurotrophin receptor (p75^NTR) undergoes γ-secretase-mediated regulated intramembrane proteolysis and is involved in glioblastoma cell migration and invasion. Consistent with previous reports, in this study we show that p75NTR increases U87-MG glioblastoma cell migration, which is reversed by inhibition of γ-secretase activity. However, we show that expression or stabilization of the γ-secretase-generated p75^NTR intracellular domain (ICD) is not sufficient to induce U87-MG glioblastoma cell migration, and that exogenous expression of p75^NTR ICD inhibits p75^NTR-mediated glioblastoma cell (U87-MG and U373-MG) migration. To identify pathways and to determine how p75^NTR mediates glioblastoma migration we utilized a microarray approach to assess differential gene expression profiles between parental U87-MG and cells stably expressing wild-type p75^NTR, a γ-secretase cleavage-resistant chimeric p75^NTR mutant (p75FasTM) and the γ-secretase-generated p75^NTR-ICD, which mimics constitutively cleaved p75^NTR receptor. In our microarray data analysis we identified a subset of genes that were constitutively up-regulated in wild-type p75^NTR cells, which were also repressed in p75^NTR ICD expressing cells. Furthermore, our data revealed among the many differentially expressed genes, cadherin-11 (Cdh-11), matrix metalloproteinase 12 and relaxin/insulin-like family peptide receptor 2 as constitutively up-regulated in wild-type p75^NTR cells, independent of γ-secretase activity. Consistent with a role in glioblastoma migration, we found that U87-p75^NTR cells express higher levels of Cdh-11 protein and that siRNA-mediated knockdown of Cdh-11 resulted in a significant decrease in p75^NTR-mediated glioblastoma cell migration. Therefore, we hypothesize that p75^NTR can impact U87-MG glioblastoma cell migration in a γ-secretase-independent manner through modulation of specific genes, including Cdh-11, and that both γ-secretase-independent and -dependent mechanisms are involved in p75^NTR-mediated U87-MG glioblastoma cell migration.