PCR检测技术在结核病诊断中的应用

聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）自创建以来已逐步应用于临床疾病的诊治［１］，特别是对临床结核标本的辅助诊断更具有重要意义。近期，我们对临床送检的各种可疑结核病标本，应用ＰＣＲ技术对结核病的感染情况进行了检测，结果报告如下。１ 资料与方法１．１ 标本来源 临床送检标本８２例，其中痰３０例，胸水１６例，腹水１４例，尿７例，脑脊液８例，肺泡灌洗液７例。１．２ 方法 标本采集后存放于经高压灭菌和紫外线照射后的Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中。模板ＤＮＡ提取的主要过程是：取适量组…     

PCR在结核病诊断中的应用

ＰＣＲ在结核病诊断中的应用游纲佳钟玉莲（江西省肺科医院南昌３３０００６）关键词结核病诊断聚合酶链反应基因检测在当今诊断疾病中越来越受到重视，聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术已在很多医院作为诊断结核病的方法之一。本院近１年来也开展此项工作，现将１３３例检测情...     

结核病实验室诊断技术

结核病被列为我国重大传染病之一,早期发现和早期诊断结核病患者是减少传播机会、控制结核病疫情的关键环节。因此结核病实验室诊断技术,在控制和消灭结核病上起着决定性的作用。痰涂片镜检、痰结核菌培养法具有简便、快速、价廉等特点,是结核病早期诊断的金标准。但是对于涂阴、培阴、无痰及L型结核菌的肺结核病人则难以诊断。PPD试验、血清结核抗体检查对结核病的诊断有一定参考价值,但无法区分BCG接种、既往感染和正在感染,而且其灵敏性和特异性不理想。随着分子生物学技术的发展,基因诊断技术因具有较高的敏感性、特异性而日益显示其优越性。目前用于结核分枝杆菌诊断的方法有聚合酶链反应(PCR)、DNA探针技术、基因芯片技术。PCR技术具有快速、特异、灵敏和可无培养依赖性特征。DNA探针技术用于结核病的诊断,及进行菌种鉴定与分类。DNA序列测定不但为结核病的诊断和鉴别诊断提供准确病原学依据而且作为鉴定结核分枝杆菌耐药基因突变的重要手段。基因芯片法(GCT)具有高效率、微型化、自动化、成本低、防污染等特点。总之将这些诊断方法不断进行改进。在临床工作中将各种诊断技术有机的结合,综合分析,合理的为临床服务;从而做出正确的诊断,以使结核病能够得到及时发现、早期治疗,结核病疫情得以控制。     

分子生物学技术在结核病诊治中的应用进展

<正>随着结核分支杆菌原发耐药菌株和获得性耐药菌株传播的增加,以及人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者所伴随的结核内源性复燃和外源性再感染的增多,使结核病再度呈现回升的趋势。据报道,全球每年有800万人被诊断为新结核患者,其中有300万人死亡。因此,对结核杆菌快速而准确的检测方法已成为当前的迫切需要。WHO也强调要充分利用现代分子遗传学技术,发展新的结核病诊治和预防措施。现就分子生物学技术在结核病诊断和防治中的应用研究进展综述如下。     

聚合酶链反应在结核病诊断中的应用

目的：探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）对结核病的诊断价值。方法：应用ＰＣＲ技术检测４７份结核病患者的各种临床标本，并与传统细菌学检测结果比较。结果：ＰＣＲ检测阳性率为５７．４５％（２７／４７），明显高于传统细菌学检测者（１７．０２％，８／４７）（Ｐ〈０．００５）。其中，ＰＣＲ检测胸膜结核性胸水与脑膜结核性脑脊液的阳性率均显著高于传统学检测者（Ｐ〈０．０５）。ＰＣＲ检测的假阳性率为５．１３％（４／７８），     

聚合酶链反应在结核病诊断中的应用

对195例临床可疑结核病经常规培养和涂片抗酸染色阴性的标本行PCR技术检测。结果51例结核杆菌DNA呈阳性（26．2）144例阴性。阳性患者行抗结核治疗有效；阴性患者随访50例．未见假阳性、假阴性。提示应用PCR检测结核杆菌较常规方法具有准确、灵敏的特点，在结核病诊断中有重要意义。     

环介导等温扩增技术在诊断结核病中的研究进展

环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）技术是利用两对特殊设计的引物和链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下对目的片段进行特异、高效扩增的技术。LAMP技术具有简单、快速、特异、灵敏、经济等优点,因此在结核分枝杆菌的现场快速检测和基层应用中具有广阔前景。基于此,本文主要阐述了LAMP 技术的基本原理和特点、诊断结核病的主要分子标志物,以及利用不同的分子标志物和各种类型的新型技术在诊断肺结核、肺外结核、耐药性结核病中的应用。LAMP 技术在诊断结核病中已经得到了广泛的应用,且具有较高的灵敏性和特异性,但该技术仍存在部分缺陷。本文综述了近年来LAMP 技术在结核病中的应用进展,并对其发展前景进行了展望,以期在资源有限的环境中为结核病的快速诊断提供合理的研究方向。     

用聚合酶链反应技术诊断结核病

用聚合酶链反应技术对结核杆菌特异性重复序列IS6110部分基因123bP的片段进行扩增，该法检测人型结核杆菌灵敏度可达到10fgDNA。对149份结核患者临床标本检测结果显示PCR总阳性率(69．1％)明显高于直接涂片荧光镜捡(15．4％)与细菌培养(10.1％)的阳性率(P<0.01)，研究表明PCR是一种特异、敏感、快速诊断结核病的好方法，值得推广。     

斑点免疫结合试验在结核病诊断中的应用

本文用硝酸纤维素膜为固相支持物进行斑点免疫结合试验(DIA),检测50例活动性结核血清中抗结素蛋白多肽IgG水平。结果显示,45例呈阳性反应;而50例健康人血清标本,仅6例为阳性。DIA操作简便、快速、不需特殊仪器设备,作为活动性结核一种新的可靠的辅助检测方法。     

免疫组化法在结核病理诊断中的应用

对60例结核病人的多种组织作了抗-BCG酶联葡萄球菌A蛋白间接免疫组化染色和抗酸染色,结果抗酸染色检出率为34.3%,明显低于BCG抗原的检出率69.34%.在渗出性结核病中两种检出率接近,在结核结节中两种检出率均低,在干酪样坏死灶及纤维化钙化灶中抗酸染色检出率很低,BCG抗原检出率仍高,差异显著.在淋巴结结核比其它组织的两种检出率差别大.在继发性结核比原发性结核的检出率差别大.这两种染色可以互相补充并可结合为一种染色.另外在肺及淋巴结被膜还看到BCG抗原沿淋巴管壁散布的现象,有可能与胸膜炎的发生有关.     

干扰素γ释放试验诊断肺外结核的应用价值

目的：比较干扰素γ释放试验（interferon gamma release assay,IGRA）与结核菌染色涂片、结核菌培养、结核菌素试验（tuberculin skin test,TST）在肺外结核诊断中的敏感性,探讨 IGRA方法在肺外结核中的应用价值。方法采集75例经临床诊断为肺外结核病患者的新鲜外周血,将 IGRA检测结果与传统的检测方法（结核菌染色涂片、结核菌染色涂片培养、TST）的检测结果进行比较。结果75例肺外结核患者中,IGRA检测阳性率为84．0％,结核菌染色涂片（8．0％）,结核菌培养（5．3％）,TST检测（52．0％）,IGRA检测阳性率均明显高于其他临床常用检测方法,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论 IGRA试剂检测法诊断肺外结核,敏感性明显高于传统的检测方法,有很好的临床应用价值。     

钙调素的酶联免疫测定法

钙调素是一种分子量较小、酸性、很保守的蛋白,它的抗原性很弱。实验采用两种方法修饰CaM分子以增强抗原性,并调节修饰分子的构象,免疫动物,找出了动物免疫应答规律,获得了合格的抗血清。CaM一般不易与固相载体结合,实验找到了它与聚苯乙烯载体结合的条件,因而首次建立了标准化、商品化的测试药箱。本法灵敏、专一、重复性好,适于生物学各领域的CaM定量测定。     

目测法酶联免疫吸附试验检测肺吸虫病特异抗体

<正> 酶联免疫吸附试验用于检测肺吸虫病血清特异抗体国内已有多篇报导。该法灵敏性高,操作简便,试剂用量少,适于临床检验及流行病学过筛。试验时将最终产物呈色反应液通过分光光度计测定其吸收值,以判断阳性及阴性的界限。但分光光度计一般实验室及基层目前尚难普及。因此,如能用肉眼观察代替分光光度测定,对该法的推广使用更有普及价值。于是我们试用目视法     

聚合酶链反应在胸部结核诊断中的应用

应用聚合酶链反反(Polgmerase chain reaction,PCR)技术检测胸部结核患者的痰液和胸水,并与抗酸染色方法进行对比。结果两种方法在47例患者中两种标本的阳性率分别为:77.4％、58.83％和11.43％、8.33％,两者差异具有非常显著性,P<0,01显示PCR具有较高的特异性和灵敏性,值得推广应用。     

APPLICATION OF INTERNAL FIXATION IN THE TREATMENT FOR TUBERCULOSIS OF THE SPINE

ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＯＦＩＮＴＥＲＮＡＬＦＩＸＡＴＩＯＮＩＮＴＨＥＴＲＥＡＴＭＥＮＴＦＯＲＴＵＢＥＲＣＵＬＯＳＩＳＯＦＴＨＥＳＰＩＮＥＺｈａｏＨｏｎｇ（赵宏）；ＷｅｎｇＸｉｓｈｅｎｇ（翁习生）；ＳｈｅｎＪｉａｎｘｉｏｎｇ（沈建雄）；ＹｅＱｉｂｉｎ（...     

酶联免疫吸附试验检测人血清弓形体IgG、IgM抗体的研究

对ELISA检测人血清弓形体IgG、IgM抗体进行了研究。450份孕妇血清中,ELISA阳性率显著高于IHA;抗体滴度分析,ELISA一般高于IHA2～10倍。25份ELISA IgG抗体阳性血清,TFA检出19份;3份IgM抗体阳性和2份IgG、IgM抗体均阳性血清,IFA分别检出2份。2份阴性和4份含不同抗体滴度的阳性血清于第一次测定后,第7天和第21天测定的阴、阳性结果一致,OD值变异系数为2.43～16.52%。39份阳性血清抗体滴度与OD值呈直线比例关系(r=0.991,p<0.0005)。结果表明,ELISA用于弓形体感染的血清学诊断具有较好的实用性。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)测定风疹病毒抗体的探讨

本文介绍ELISA测定风疹病毒抗体的方法。用ELISA和HAI两种方法同时测定300份脐血。HAI效价≥1:8的274份阳性脐血中265份ELISA也是阳性。总的不符合率仅4.3％。比较来看,ELISA是一种简便、敏感和有效地检测风疹病毒抗体的方法。     

测定血清抗结核菌素纯蛋白衍生物IgG诊断小儿肺结核的临床意义

用酶联免疫吸附试验检测５０例非结核病儿童及３１例结核病患儿的血中抗结核菌素纯蛋白衍生物ＩｇＧ水平。结果；１．患儿组的抗ＰＰＤＩｇＧ水平显著高于对照组；２．在患儿组中的年龄越大其抗ＰＰＤＩｇＧ水平越高；３Ｘ表示大结节影患儿血中抗ＰＰＤＩｇＧ水平比部分硬结钙化及曾接受治疗的患儿高。