老年难治性颞叶癫痫患者颞叶组织中神经细胞凋亡与caspase-3、-4表达的关系

目的探讨老年难治性颞叶癫痫患者颞叶组织中神经细胞凋亡与信号传导通路中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-4表达的关系。方法老年难治性颞叶癫痫患者21例为难治性颞叶癫痫组,术中均切除颞叶组织;选取同期因脑外伤入院行手术入路中必须切除的颞叶组织15例为对照组。免疫组化SP法检测颞叶组织中神经细胞caspase-3、caspase-4阳性表达情况;Western印迹检测颞叶组织中caspase-3、caspase-4蛋白表达情况;TUNEL法检测两组神经细胞凋亡情况。结果免疫组化检测显示,难治性颞叶癫痫组颞叶组织中caspase-3、caspase-4阳性细胞表达水平明显高于对照组(P<0.05)。Western印迹检测显示,难治性颞叶癫痫组颞叶组织中caspase-3、caspase-4蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05)。对照组颞叶组织中仅存在少量TUNEL阳性神经细胞,难治性颞叶癫痫组中TUNEL阳性神经细胞数明显增多。难治性颞叶癫痫组细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.05)。结论老年难治性颞叶癫痫患者颞叶组织中存在caspase-3、caspase-4传导的神经细胞凋亡,同时caspase-3、caspase-4表达水平与神经细胞凋亡呈正相关。     

雷帕霉素减少GK糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及其机制

目的观察糖尿病肾组织肿瘤坏死因子（TNF-α）、核因子（NF-κB）的表达及其与肾组织细胞凋亡关系以及雷帕霉素对其的影响。方法将20只GK大鼠随机分为DM组（n=10）、DMR组（n=10）,10只Wistar大鼠作为NC组。DMR组予以6mg／kg雷帕霉素灌胃,DM与NC组仅给予等量生理盐水灌胃。TUNEL法检测肾组织细胞凋亡。免疫组织化学法（IHC）检测肾组织TNF-α和NF-κB的表达。结果TUNEL法显示,NC组肾组织未见明显的凋亡细胞;4周及8周DM组凋亡数呈进行性增多（P〈0．01）。IHC显示,NC组肾组织TNF-α、NF-κBp65有轻微阳性表达;4周、8周DM组NF-KBp65、TNF-α表达有逐渐上升的趋势,均显著高于正常对照组（P〈0．01）。NF-κBp65、TNF-α阳性表达呈正相关（P〈0．01）;肾组织NF-a和NF-κBp65表达与肾组织细胞凋亡之间均呈正相关（P〈0．01）;与DM组比较,DMR组4周、8周组肾组织TNF-α和NF-κBp65的过度表达均被显著抑制（P〈0．01）,肾组织细胞凋亡数显著减少（P〈0．01）。结论NF-κB及其诱导的TNF-α在糖尿病肾病损伤中发挥重要作用,雷帕霉素可能通过抑制NF-κB和TNF-α的表达减少减轻肾组织细胞凋亡。     

难治性癫痫的病灶定位和手术治疗

目的探讨难治性癫痫的致痫灶定位和手术治疗方法。方法对150例难治性癫痫患者的临床资料作回顾性分析。结果本组术前均行冠矢状位轴位MRI检查、视频脑电图（VEEG）检查,其中20例行脑PET—CT显像;在皮质脑电图（EcoG）监测下切除致痫灶,包括局部癫痫灶切除59例,前颞叶及颞叶加杏仁核、海马切除50例,选择性杏仁核、海马切除3例,额叶病灶切除28例,额叶加颞叶病灶切除7例,大脑半球切除3例。术前MRI、VEEG和PET—CT定侧定位准确率分别为70．6％、83．5％、94．4％。术后随访1．5a,疗效I级（Engel分级）57例、Ⅱ级52例、Ⅲ级33例、Ⅳ级8例。结论综合应用MRI、脑电图以及核素检查可更准确地定位致痫灶,在EcoG监测下行致痫灶切除手术效果较好。     

肿瘤坏死因子受体相关死亡域蛋白在暴发型肝衰竭肝组织中的表达

目的：研究肿瘤坏死因子受体相关死亡域蛋白(TRADD)在暴发性肝衰竭小鼠动物模型肝组织中的表达、分布及在发病机制中的作用。方法：尾静脉注射肿瘤坏死因子α(TNFα)于D-氨基半乳糖(GalN)致敏的BALB／c小鼠,造成暴发性肝衰竭模型,用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记(ISEL)技术、琼脂糖凝胶电泳检测肝组织DNA梯带观察肝细胞凋亡,Envision两步免疫组织化学方法检测TRADD蛋白在肝组织中的表达及分布。结果:对照组、GalN组和TNFα组肝细胞各时点基本没有或有少量TRADD蛋白表达,而DalN TNFα组在3．5h时点就有明显表达,此时肝细胞凋亡不明显,6h时点TRADD蛋白表达最为明显,9h时点,肝细胞凋亡和坏死非常明显,而TRADD蛋白表达虽然很明显,但低于6h时点。TRADD蛋白阳性率分别为1．3％(1．5h)、3．0％(3．5h)、23．4％(6h)和18．6％(9h)。结论：TNFa介导的小鼠暴发性肝衰竭动物模型中,TRADD蛋白表达增加,TRADD蛋白表达先于肝细胞凋亡,TRADD蛋白表达和肝细胞凋亡在一定程度上呈正相关,提示TNFα通过上调TRADD蛋白表达介导肝细胞凋亡和坏死进而诱发暴发性肝衰竭。     

HSF1对氧化应激诱导内皮细胞凋亡的保护作用的机制研究

目的探讨热休克转录因子1（HSF1）对过氧化氢（H2O2）刺激后心脏微血管内皮细胞内活性氧簇（ROS）水平和细胞凋亡的影响。方法体外培养大鼠心脏微血管内皮细胞,分别单独转染HSF1质粒、凋亡信号调节激酶1（ASK1）质粒或共转染HSF1及ASK1质粒。转染48h后用1mmol/LH2O2刺激细胞30min,检测并比较各组细胞凋亡情况和胞内ROS水平。结果 （1）H2O2刺激后,各组细胞凋亡较刺激前明显增加（P〈0.05）;且在相同刺激条件下,HSF1转染组细胞凋亡明显少于对照组（P〈0.05）,ASK1转染组明显多于对照组（P〈0.05）,而共转染组与ASK1转染组相比明显减少（P〈0.05）。（2）H2O2刺激后,各组细胞内ROS水平较刺激前都显著升高（P〈0.05）;且在相同刺激条件下,各组细胞内ROS水平较刺激前ROS水平增高的幅度：HSF1转染组明显低于对照组（P〈0.05）,ASK1转染组和共转染组与对照组无明显差异,而共转染组与HSF1转染组相比有升高趋势,与ASK1转染组相比有降低趋势。结论 HSF1可以通过抑制细胞内ROS产生对抗氧化应激诱导的细胞凋亡,保护心脏微血管内皮细胞。ASK1可能干扰HSF1的保护作用。     

宁痫颗粒联合卡马西平对难治性癫痫模型大鼠炎症反应的影响

目的探讨宁痫颗粒联合卡马西平对难治性癫痫模型大鼠炎症反应的抑制作用。方法 SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、宁痫颗粒组、卡马西平组以及联合组,采用海马CA3局部注射海人酸方法制作大鼠癫痫模型,造模后用苯妥英钠灌胃14 d对模型进行筛选。继续饲养2 w后股动脉取血并分离血清,检测各组大鼠血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6及促炎因子肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量变化。结果模型组中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达均明显高于正常对照组(P0.05);宁痫颗粒组和卡马西平组中三种因子表达显著下降(P0.05),且联合组中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达下降最显著(P0.05)。结论宁痫颗粒联合卡马西平具有明显的免疫抑制作用,比两药单用效果突出。推测两药可能通过协同作用抑制炎症反应进而阻断癫痫发作,达到治疗癫痫的目的。     

内皮微粒和内皮功能不全与原发性高血压的研究进展

1 内皮微粒（endothelial microparticles。EMPs） 1．1 EMPs的形成和结构 内源性或外源性因素可以引起多种细胞因子介导下内皮细胞释放EMPs，如细菌脂多糖类、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1（IL-1）、Csb-9补体复合物以及过氧化氢等。Jimenez等在3种来源的细胞（肾和脑的微血管的内皮细胞以及冠状动脉的内皮细胞）通过抗原标记来比较激活的内皮和凋亡的内皮所释放的不同类型的EMPs。发现在内皮细胞（endothelial cells，EC）凋亡的情况下，     

FTY720对糖尿病大鼠心肌微血管病变的保护作用

目的研究1-磷酸鞘氨醇受体激动剂芬戈莫德(FTY720)对糖尿病大鼠早期心肌微血管病变的作用。方法将Spragure-Dawley大鼠分为正常对照组、糖尿病模型组与FTY720[0.001 g/(kg·d)]治疗组。大剂量链脲佐菌素(65 mg/kg)腹腔注射制备大鼠糖尿病模型,HE、Masson染色观察心肌结构大体形态。CD34免疫组织化学观察心肌微血管密度,TUNEL免疫荧光检测分析心脏微血管内皮细胞凋亡情况。组织转化生长因子β(TGF-β)、免疫组织化学观察心肌纤维化程度。Western blot测定血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达水平。结果糖尿病模型组以多次随机血糖≥16.7 mmol/L作为糖尿病模型成功的标志,本研究中大鼠糖尿病模型构建成功率在85%以上。与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠心肌组织微血管壁增厚,VCAM-1、TNF-α和IL-6的表达升高(P0.05);FTY720治疗组心肌VCAM-1、TNF-α与IL-6的表达明显低于糖尿病模型组(P0.05)。糖尿病模型组心脏组织微血管密度减少,凋亡指数显著增高;而FTY720可以减少凋亡,促进内皮细胞增殖。结论 FTY720可能在糖尿病大鼠心脏微血管损伤中具有一定保护作用。     

阿魏酸钠对TNF-α致血管内皮细胞凋亡的作用

目的 探讨阿魏酸钠（sodium femlate，SF）对TNF-α引起的血管内皮细胞（VEC）凋亡的作用及机制。方法 以培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为实验模型，采用电镜、TUNEL法观察凋亡细胞，用免疫组化技术检测bcl-2和bax的表达。结果 电镜观察TNF-α组可见VEC凋亡典型特征；TUNEL法检测TNF-α组VEC凋亡率为35．2％，显著高于对照组，SF组和TNF-d＋SF组（JD〈0．01）；TNF-α组bcl-2表达聪显减少，同时加入SF后bcl-2表达明显上升，而TNF-α可诱导bax表达增加，加入SF后明显降低。结论 TNF-d能诱导VEC凋亡，SF可抑制细胞凋亡，同时SF可使TNF-α诱导的VEC中bcl-2表达明显恢复，而对bax表达明显降低。     

血管内皮生长因子拮抗内皮细胞凋亡的实验研究

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)对血管内皮细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2与apo-1/Fas mRNA表达的影响。方法:将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分成对照组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理组、TNF-α加VEGF处理组;采用原位末端标记法、流式细胞术观察各组细胞的凋亡发生情况,通过RT-PCR法观察各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2与apo-1/Fas mRNA表达的变化。结果:TNF-α处理组凋亡细胞和apo-1/Fas mRNA的表达明显高于对照组和TNF-α加VEGF处理组,而Bcl-2 mRNA表达情况相反。结论:VEGF能拮抗TNF-α诱导的内皮细胞凋亡,其抗凋亡的机制可能与其上调Bcl-2 mRNA表达与下调apo-1/Fas mRNA表达有关。     

体外循环肺肿瘤坏死因子表达与细胞凋亡的研究

目的：探讨肺组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）在体外循环（cardiopulmonary bypass,CPB）中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法：选取健康新西兰大白兔20只,随机分为CPB组和Sham组（单纯开胸）。测定各组围CPB期左心房、右心房血液中中性粒细胞计数、TNF-α含量;取肺组织样本,动态观察肺组织TNF-αmRNA表达、细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Fasl的表达和Bcl-2/Bax及凋亡指数变化情况。结果：CPB后,中性粒细胞在肺内明显聚集,肺源性TNF-α的表达及释放显著增加。同时,肺组织细胞凋亡指数明显提高,肺泡上皮细胞Fasl、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下降。结论：CPB可引起肺源性TNF-α表达增高并诱发细胞凋亡,从而导致肺损伤。     

P38MAPK在低氧及炎症联合刺激诱导人肺微血管内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨P38MAPK在低氧及炎症联合刺激诱导人肺微血管内皮细胞凋亡中的作用。方法将人肺微血管内皮细胞株进行复苏及传代培养,分为空白对照组、低氧组(低氧6 h、12 h、24 h)、肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激组(用10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml的TNF-α进行刺激)、模型组(低氧24 h+TNF-α100 ng/ml联合刺激)及通路阻断剂组(加入通路阻断剂SB203580进行干预)。Western-blot法分析各组细胞中P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)表达,流式细胞术分析各组细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活力,流式细胞术和TUNEL法联合检测细胞凋亡。结果与空白对照组相比,模型组p-P38MAPK表达升高(P0.05)。与低氧组(24 h)、TNF-α刺激组(100 ng/ml)相比,模型组(低氧24 h+TNF-α100ng/ml联合刺激)细胞活力均下降(P均0.01);与模型组相比,通路阻断剂组细胞Caspase-3活力下降(P0.01)。与模型组相比,通路阻断剂组细胞凋亡率及凋亡指数均下降(P0.01)。结论 P38MAPK在低氧及炎症联合刺激诱导的人肺微血管内皮细胞中具有促凋亡作用,P38MAPK通路阻断剂对低氧及炎症联合刺激损伤的人肺微血管内皮细胞具有保护作用。     

润肺口服液对慢性支气管炎大鼠支气管TNF-α、ICAM-1蛋白及IL-8表达的影响

目的研究中药复方润肺口服液对慢性支气管炎（CB，CB）支气管肿瘤坏死因子（TNF-α）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及白介素-8（IL-8）表达的影响，探讨其治疗CB的疗效机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、慢性支气管炎组、慢性支气管炎氢化可的松治疗组及慢性支气管炎润肺口服液治疗组，每组8只。大鼠慢性支气管炎模型通过熏香烟加气管内注入低剂量脂多糖制成，利用免疫组织化学观察各组大鼠支气管TNF-α、ICAM-1蛋白及IL-8的表达情况。结果熏香烟加气管内低剂量脂多糖注射可复制出较理想的慢性支气管炎模型，假手术组支气管上皮内可见TNF-α、ICAM-1蛋白及IL-8弱阳性表达；慢性支气管炎组支气管TNF-α、ICAM-1蛋白及IL-8在支气管上皮细胞、支气管周围的淋巴滤泡炎性细胞和肺泡间质细胞中可见强阳性表达；半定量图像分析显示，慢性支气管炎组TNF-α、ICAM-1蛋白及IL-8的表达明显强于假手术组（P〈0．05），慢性支气管炎润肺口服液治疗组的表达则明显弱于支气管炎组（P〈0．05）。结论润肺口服液通过下调支气管上皮细胞中TNF-α、ICAM-1蛋白及IL-8的表达，从而减轻气道炎症反应是其治疗慢性支气管炎的机制之一。     

左乙拉西坦与拉莫三嗪对海马细胞保护的对比研究

颞叶癫痫占所有癫痫类型的30%~35%,常为难治性癫痫,其结构特征为海马硬化[1],而细胞凋亡是颞叶癫痫海马神经元丢失导致海马硬化的重要途径[2]。本研究比较新型抗癫痫药物拉莫三嗪和左乙拉西坦对戊四氮致痫大鼠海马细胞凋亡的影响,对比两者对海马细胞的保护作用。     

川芎嗪抗癫痫的免疫学机制

目的 研究川芎嗪抗癫痫作用的免疫学机制.方法 用腹腔注射戊四氮制作大鼠癫痫模型,致痫前后分组分别给予川芎嗪,观察大鼠出现癫痫发作的潜伏期及持续时间,采用放射免疫测定法检测川芎嗪对癫痫大鼠血清中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.结果 与癫痫模型组相比,致痫前给予川芎嗪组大鼠癫痫发作潜伏期延长,持续时间缩短,差异显著(P<0.01);致痫后给予川芎嗪组,上述指标无显著差异(P>0.05).与癫痫模型组相比,致痫前给予川芎嗪组IL-2、IL-6和TNF-α水平明显降低,差异显著(P<0.01);致痫后给予川芎嗪组,上述指标无显著差异(P>0.05).结论 川芎嗪抑制癫痫作用机制与降低IL-2、IL-6和TNF-α对免疫-神经网络的调节有关.     

子痫前期患者胎盘组织中RAGE、TNF-α的表达及临床意义

采用免疫组化SP法检测32例正常足月妊娠妇女(正常妊娠组)与48例子痫前期患者(子痫前期组)胎盘组织中糖基化终末产物受体(RAGE)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达.发现RAGE、TNF-α蛋白在子痫前期组中的阳性表达率明显高于正常妊娠组,RAGE、TNF-α蛋白在子痫前期组中的阳性表达率与病情严重程度呈正相关,RAGE、TNF-α蛋白在子痫前期组中的阳性表达率呈明显的一致性.认为RAGE、TNF-α蛋白在子痫前期病情加重进展中表达逐渐上调,有望成为子痫前期严重程度评估、疾病预测和判断预后的有效指标.     

腰椎突出间盘组织中TNF—α与突出类型及突出大小的相关性研究

目的探讨肿瘤坏死因子仅（TNF-α）在腰椎间盘突出症发病机制中的作用。方法病例组收集32例腰椎间盘突出症患者的髓核组织,对照组收集8例腰椎骨折患者的正常间盘组织,应用免疫组化染色技术进行TNF-α表达水平的检测;CT下测量突出间盘与椎管中矢状径的长度,与TNF-α表达水平进行相关性分析。结果病例组的髓核组织中25例TNF—α表达阳性,对照组中无阳性表达（P〈0．01）;突出间盘组织中TNF-α的表达水平与同一层面突出物与椎管中矢状径的比值无关。结论TNF—α可能参与并促进了腰椎间盘突出症的发生、发展过程,其含量和突出腰椎间盘的大小没有相关性。     

缝隙连接蛋白43表达对难治性颞叶癫痫手术患者预后价值分析

目的探讨缝隙连接蛋白43在难治性颞叶癫痫患者中的表达及与患者手术后效果的关系,分析缝隙连接蛋白43对难治性颞叶癫痫的预后价值。方法根据对45例手术后难治性颞叶癫痫患者进行随访分为手术效果良好组和手术效果不佳组,应用免疫组化的方法比较两组患者缝隙连接蛋白43的表达情况。结果免疫组化结果显示,手术效果不佳组缝隙连接蛋白43表达明显高于手术效果良好组（P〈0．05）。手术效果不佳组颞叶癫痫患者缝隙连接蛋白43表达较手术效果良好组明显增高。结论缝隙连接蛋白43对于颞叶癫痫手术的预后可能具有一定的参考价值。     

p38MAPK介导Ghrelin对TNF-α诱导的人脑微血管内皮细胞MCP-1 mRNA表达的抑制

目的探讨Ghrelin对TNF-α诱导的人脑微血管内皮细胞（HBMEC）单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的影响及p38MAPK的作用。方法培养HBMEC,TNF-α组加入不同浓度TNF-α;Ghrelin预处理组先加入Ghrelin预处理1 h后,加入TNF-α。采用RT-PCR法检测MCP-1 mRNA的水平,免疫印迹法检测磷酸化p38（p-p38）的表达。结果经TNF-α刺激后,MCP-1 mRNA表达明显增强,并呈一定的浓度剂量依赖关系（P〈0.05）,胞质中的p-p38蛋白表达亦明显增加（P〈0.05）。Ghrelin预处理可以减少MCP-1 mRNA及胞质中的p-p38蛋白表达（P均〈0.05）。结论 Ghrelin可能通过抑制p-p38通路抑制TNF-α介导的HBMEC MCP-1 mRNA表达。     

瘦素对血管内皮细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响及阿托伐他汀对其的干预简

目的 探讨瘦素对血管内皮细胞（vascular endothelial cells,VECs）肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）表达的影响及阿托伐他汀对其的干预作用.方法 采用原代细胞培养方法建立大鼠VECs细胞模型;100 ng/mL瘦素刺激内皮细胞0、1、3、6、12 h;10 μmol/L阿托伐他汀干预细胞0、1、3、6、12、24 h,再用100 ng/mL瘦素干预细胞6h.运用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定各组细胞上清液TNF-α表达浓度.结果 瘦素刺激组TNF-α表达高于对照组,且随着瘦素作用时间延长,TNF-α表达也随之增加.阿托伐他汀组TNF-α的表达低于对照组,且随着阿托伐他汀作用时间的延长,TNF-α表达也随之降低,24 h抑制作用最明显.结论 瘦素时间依赖性诱导血管内皮细胞TNF-α的表达,阿托伐他汀可以减弱瘦素诱导的TNF-α的表达.