儿茶素通过蛋白激酶B抑制兔晶状体上皮细胞增殖

目的:探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抑制兔晶状体上皮细胞增殖时,磷脂酰肌醇-3(羟基)激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号转导通路所起的作用。方法: 用组织块培养法获取新西兰白兔晶状体上皮细胞,用噻唑蓝比色法(MTT比色法)研究晶状体上皮细胞增殖作用;用Western blot法研究PKB的磷酸化和非磷酸化水平。结果: (1)预先分别加入25,50 μmol/L的PI3K的特异性抑制剂LY294002孵育1 h后,100、200 μmol/L EGCG对晶状体上皮细胞的抑制率明显大于对照组(P＜0.05),而50 μmol/L EGCG无抑制作用(P＞0.05)。(2)在晶状体上皮细胞,磷酸化的PKB 基础水平很高;加入200 μmol/L EGCG时PKB磷酸化水平轻度增加,但随EGCG浓度的下降而逐渐减弱;加入EGCG后早期,PKB的磷酸化水平最高,随时间的延长而逐渐下降。各组的非磷酸化PKB水平始终保持不变。结论: EGCG可能通过调控PKB的磷酸化水平而抑制晶状体上皮细胞的增殖,并不影响总蛋白含量。     

没食子儿茶素没食子酸酯对脂多糖激活小鼠巨噬细胞系p38MAPK信号通路的作用研究

目的:探讨没食子儿茶素没食子酸酯对巨噬细胞中由脂多糖(LPS)激活的p38MAPK的作用特性及对肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响。方法:在体外培养的小鼠巨噬细胞系中用Westernblotting检测p38MAPK磷酸化水平,应用酶联免疫吸附法检测巨噬细胞表达TNF-α的水平,利用电镜观察EGCG对LPS结构的影响。结果:LPS刺激巨噬细胞引起p38MAPK磷酸化程度和TNF-α表达明显增高,EGCG对LPS激活的p38MAPK磷酸化和TNFα的表达有明显的抑制作用,EGCG对LPS的结构无显著影响。结论:EGCG对LPS无直接的拮抗作用,而是通过干预体内信号通路发挥其抑制作用,p38MAPK可能是EGCG抑制LPS诱导巨噬细胞表达TNF-α的重要通路之一。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对心血管疾病防治作用的研究进展

中国在公元前3 000年以前就有饮用绿茶的记载。现代技术发现绿茶含有大量的茶多酚,儿茶素是茶多酚的主要成分,包括4种单体物质,即表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin gallate, EGCG]、表儿茶素没食子酸酯(epicatechin gallate,ECG)、表没食子儿茶素(epigallocatechin,EGC)和表儿茶素(epicatechin,EC),其中最主要的活性成分EGCG被认为具有抗癌、减肥、抗糖尿病、抗菌、抗病毒、预防龋齿等作用^[1]。大量研究发现饮茶也会减少心血管疾病的发生风险,对心脏具有明确的保护作用,本文就EGCG对心血管疾病的预防作用研究进展进行综述。     

不同年龄高血压大鼠心肌中MKP-1的表达及对心肌肥厚的影响

目的：研究不同年龄的自发性高血压大鼠（SHR）和Wistar Kyoto大鼠（WKY）心室肌组织中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及其磷酸酶（MKP-1）的表达以及与心肌肥厚的关系。方法： 用左心室重量与体重的比值作为心肌肥大指数并以此指标反映心肌肥厚；分别用Western blotting方法和RT-PCR法半定量测定心室肌组织中磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）的蛋白表达和MKP-1 mRNA的含量。结果： （1）SHR的血压自8周龄起明显高于WKY（P<0.01），心肌肥大指数明显大于WKY（P<0.05），ERK和MKP-1的表达均比WKY高（P<0.05）；（2）SHR的血压随年龄增长而升高（P<0.05），至14周趋于稳定，心肌肥大指数则在24周时出现激增（P<0.01）；（3）p-ERK随年龄增长呈递增趋势，而MKP-1呈递减趋势，且与心肌肥大指数和ERK的表达呈负相关（P<0.01）。结论： MKP-1在高血压大鼠随年龄和血压增加的心肌肥厚过程中起重要作用，其表达逐渐下降可能是导致ERK激活增加，进而引起心肌细胞肥大的重要原因。     

没食子儿茶素没食子酸酯对中波紫外线辐射后树突状细胞功能的影响

目的 观察没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）对中波紫外线（UVB）辐射后树突状细胞（DC）功能的影响并探讨其可能的机制。方法 分离外周血单核细胞，经细胞因子诱导DC成熟后，再使用不同剂量的UVB照射DC，将经EGCG处理或未处理的DC与淋巴细胞进行混合培养，72h后用MTF法检测DC刺激淋巴细胞增殖能力；用流式细胞术分析DC表面CDS0、CD86、HLA-DR、CD40分子表达的变化；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测DC培养24h后上清液中IL-10及IL-12分泌水平。结果UVB以剂量依赖的方式抑制DC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力，并以剂量依赖的方式抑制DC表面共刺激分子的表达；使用浓度为200μg／ml的EGCG处理DC后，各剂量组UVB所致的免疫抑制作用均可得到部分改善，与单纯照光组相比，UVB＋EGCG组的抑制率分别比同剂量UVB组减少了60．0％、60．4％、59．2％、40．8％及12．2％，当EGCG浓度大于100μg／ml时，EGCG对DC表面共刺激分子的表达有促进作用；UVB照射对DCIL-12及IL-10因子的分泌未有显著影响，经EGCG处理并照射UVB的DCIL-12分泌水平显著降低，但IL-10分泌水平显著提高（P〈0．05）。结论 EGCG具有调节中波紫外线辐射后DC细胞免疫功能的作用，其作用与促进DC表面共刺激分子表达及影响其IL-12及IL-10分泌有关。     

ERK1/2信号传导通路介导碱性成纤维细胞生长因子诱导人晶状体上皮细胞中环氧合酶2的表达

背景：碱性成纤维细胞生长因子在各种白内障形成中都起着重要的作用,可促进晶状体上皮细胞的增殖并化生为纤维细胞,但其信号通路尚不清楚。 目的：探讨ERK1/2信号转导通路在碱性成纤维细胞生长因子诱导的人晶状体上皮细胞环氧合酶2表达中的作用。 方法：使用10 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子干预培养的人晶状体上皮细胞0,1,3,6,12,24 h,RT-PCR检测刺激不同时间人晶状体上皮细胞环氧合酶2 mRNA的表达,Western blot检测细胞中环氧合酶2及磷酸化ERK1/2的表达。在阻断实验中应用特异性ERK1/2的阻断剂PD98059 阻断ERK信号转导通路1 h,再用10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子刺激细胞6 h,Western blot检测细胞中环氧合酶2的表达。 结果与结论：碱性成纤维细胞生长因子刺激后的人晶状体上皮细胞中环氧合酶2 mRNA及其蛋白的表达显著增加(P < 0.01),同时碱性成纤维细胞生长因子诱导人晶状体上皮细胞磷酸化ERK1/2活性增强,表达水平随作用时间而增加,30 min时达到最高峰(P < 0.01),6 h后恢复至基线水平;PD98059可抑制人晶状体上皮细胞环氧合酶2的表达 (P < 0.01)。说明ERK1/2信号转导通路参与了碱性成纤维细胞生长因子诱导的人晶状体上皮细胞中环氧合酶2的表达,在后发性白内障的形成过程中起着重要作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人乳腺癌MCF-7细胞及其血管内皮细胞生长因子-C表达的影响

目的:探讨体外应用表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭及其对血管内皮细胞生长因子-C (VEGF-C)表达的影响.方法:体外培养MCF-7细胞,设立对照组及EGCG实验组,应用MTT法及Transwell侵袭实验观察不同浓度EGCG对MCF-7细胞增殖及侵袭的影响;应用免疫细胞化学显色...     

表没食子儿茶素没食子酸酯对小鼠耐缺氧及抗疲劳作用的实验研究

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对小鼠的缺氧耐受及抗疲劳作用并初步探讨其机制与抗氧化作用的关系.方法:将小鼠随机分成对照组、低浓度组(EGCG1)和高剂量组(EGCG2),低剂量EGCG每天灌胃10 g?kg-1,高剂量EGCG每天灌胃50 g?kg-...     

磷酸化ERK1/2对大鼠体外血小板聚集的可能作用

目的：观察两种激动剂诱导下，MEK1/2抑制剂PD098059对大鼠体外血小板聚集及磷酸化ERK1/2的影响。方法： 采用比浊法测定血小板最大聚集率，并观察最大聚集率发生时间，以及PD098059对血小板聚集的抑制率；采用Westernblot测定ERK1/2磷酸化表达。结果： 凝血酶和ADP均可诱导血小板聚集及 ERK1/2磷酸化的表达；PD098059ADP降低血小板最大聚集率及ERK1/2磷酸化表达；凝血酶与ADP诱导的血小板最大聚集率、最大聚集率发生时间及对PDO98059的反应均有差异。结论： ERK1/2为血小板聚集的信号转导途径之一；但在不同激活剂引起的血小板聚集中所起的作用不尽相同。     

绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯对酒精诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用研究

目的：体外观察绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对酒精诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用,初步探讨EGCG治疗酒精性痴呆(alcohol-associated dementia,AAD)的可行性。方法：以SH-SY5Y神经元细胞为实验对象,酒精组给予100 mol/L酒精37℃培养24 h, EGCG+酒精组在其培养液中同时加入不同浓度的EGCG(1~100μmol/L)及100 mol/L酒精,37℃培养24 h;另设相同浓度的EGCG对照组(EGCG组)及空白对照组(对照组)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,以Annexin-V APC/7-AAD双染法检测细胞凋亡及光镜下观察细胞形态。结果：MTT结果证实EGCG(25~100μmol/L)作用24 h后可明显促进SH-SY5Y细胞存活,并呈浓度依赖关系(P<0.001)。流式检测及细胞形态观察结果证实酒精组细胞凋亡率(21.82%±1.27%),明显高于对照组(4.90%±0.80%)(P<0.001)及EGCG组(7.82%±0.68%)(P<0.001);EGCG(100μmol/L)+酒精组细胞凋亡率(10.81%±0.31%),明显低于酒精组(P<0.001)。结论：EGCG可抑制酒精诱导SH-SY5Y细胞凋亡发生并促进细胞存活,提示EGCG对于AAD治疗具有潜在价值。     

奥曲肽抑制骨桥蛋白刺激的肝星状细胞增殖

目的:探讨奥曲肽对骨桥蛋白(OPN)刺激的肝星状细胞(HSCs)增殖的影响。方法:体外培养HSCs,MTT法测定HSCs增殖,Westernblotting测定细胞外信号调节激酶1(ERK1)蛋白表达。结果:①干预24h,奥曲肽2.5、5.0和10.0mg/L组吸光度(A)值均显著低于OPN组,抑制率分别是18.75%、37.50%和40.63%,P<0.05;10.0mg/L组作用12、24和48h的抑制率分别是34.38%、40.63%和53.13%,P<0.05。②对照组有ERK1蛋白表达,OPN刺激24h后,ERK1蛋白含量较对照组高95.62%;3个剂量奥曲肽组ERK1蛋白含量则分别降低16.74%、34.30%和65.72%。结论:奥曲肽对OPN刺激的HSCs增殖有明显的抑制作用,在一定范围内,呈剂量依赖性和时间依赖性;该作用与其抑制ERK1蛋白表达有关。     

维甲酸通过MAPKs信号通路减轻早产大鼠AECⅡ高氧性损伤

 目的： 探讨高氧暴露对原代培养的早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）增殖和凋亡的影响以及维甲酸（RA）的保护作用机制。方法：建立原代培养的早产大鼠高氧暴露AECⅡ模型，采用流式细胞术（Annexin V-PI双标记）检测AECⅡ凋亡，Western blotting检测其磷酸化和总的ERK1/2、JNK1/2和p38表达以及增殖细胞核抗原（PCNA）和caspase-3表达。结果：高氧暴露12 h，Annexin Ⅴ（+）PI（-）和Annexin Ⅴ（+）PI（+）标记的AECⅡ数均显著高于空气组（P<0.01），RA具有明显下调作用；同时，高氧暴露显著提高AECⅡ 磷酸化ERK1/2、JNK1/2和p38表达以及caspase-3活性片段表达（P<0.01），明显降低其PCNA表达（P<0.01）；RA则显著下调高氧暴露下AECⅡ磷酸化JNK1/2和p38表达以及caspase-3活化片段表达（P<0.01），明显提高磷酸化ERK1/2和PCNA表达（P<0.01）。结论：高氧暴露，导致AECⅡ大量凋亡、坏死，增殖受到抑制；RA通过下调JNK1/2和p38磷酸化水平、上调ERK1/2磷酸化水平，降低AECⅡ坏死、凋亡，促进其增殖，从而发挥拮抗高氧肺损伤的作用。     

复方SZ滴眼液对晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用及其信号转导机制

目的： 探讨复方SZ滴眼液（Co-SZ）抑制H₂O₂诱导的晶状体上皮细胞（LEC）凋亡的作用及信号转导机制。为将Co-SZ作为防治白内障的有效药物提供实验依据。 方法： (1)将H₂O₂与Co-SZ和SD大鼠晶状体共同孵育后：TUNEL法检测LEC凋亡率。透射电镜观察LEC超微结构改变及凋亡形成。(2)H₂O₂与Co-SZ和体外培养的牛LEC共同孵育后,四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测不同浓度的Co-SZ抑制LEC凋亡率。流式细胞仪（FCM）检测LEC细胞核内DNA含量。荧光分光光度法检测LEC内游离Ca2+浓度。放射免疫分析法检测LEC内环化腺苷酸（cAMP）和环化鸟苷酸（cGMP）浓度。 结果： TUNEL法检测Co-SZ组LEC凋亡率显著低于H₂O₂组。Co-SZ组LEC超微结构变化也显著轻于H₂O₂组。MTT检测Co-SZ组细胞活性明显高于H₂O₂并具有剂量依赖关系。Co-SZ组LEC核内DNA含量增加。Co-SZ使LEC内游离Ca2+、cAMP降低、cGMP升高。结论：Co-SZ能有效抑制H₂O₂诱导的LEC发生的凋亡 。Co-SZ抑制LEC凋亡的机制可能是通过抑制LEC核内DNA降解，并通过抑制细胞内游离钙离子浓度升高、阻断Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶途径和Ca2+-蛋白激酶C信号转导途径。     

LPS对晶状体上皮细胞TLR4和CD14 mRNA表达的影响

目的:探讨脂多糖(LPS)对晶状体上皮细胞(LECs)Toll样受体4(TLR4)和CD14表达的影响。方法:采用不同浓度的LPS与体外培养的牛LECs共同孵育不同时间,再用一步法反转录多聚酶链反应(PCR)检测LECs中TLR4mRNA和CD14mRNA的表达。结果:50μg/LLPS组、100μg/LLPS组、200μg/LLPS组、500μg/LLPS组、1000μg/LLPS组的LECs中TLR4mRNA的表达均分别显著高于对照组(P0.01);100μg/LLPS作用24h、48h、72h后LECs的TLR4mRNA表达均显著高于对照组(P0.01);100μg/LLPS作用24h后LECs的CD14mRNA表达亦显著高于对照组(P0.05)。结论:LPS可促进LECs中TLR4mRNA和CD14mRNA的表达,提示白内障手术后眼内细胞反应和后发性白内障的发生发展可能与TLR4和CD14表达增加有关。     

EGCG与Andro对胶原诱导的关节炎的联合治疗作用

采用Ⅱ型胶原诱导小鼠关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型,观察(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)- epigallocatechin-3-gallate.EGCG]与穿心莲内酯(andrographolide,Andro)联合治疗作用并初步探讨其作用机制。研究发现EGCG和Andro联合用药能显著减轻疾病严重程度。体内、体外实验证实联合用药在基因水平及蛋白水平上协同抑制炎性细胞因子IFN-γ、TNF-α的产生;另外,EGCG和Andro联合用药也可明显降低血清中抗Ⅱ型胶原抗体含量。结果表明,EGCG和Andro联合治疗CIA具有明显的疗效,为研发治疗RA的药物提供一条思路。     

碱性成纤维细胞生长因子对兔晶体上皮细胞的增殖作用

观察碱性纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF)对兔晶体上皮细胞（rabbit lens epithelial cells,RLECs)的促增殖作用,以及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,用第2－3代培养细胞,用MTT法测定细胞增殖,用免疫组织化学法观察PCNA的表达,流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果显示bFGF可促进兔晶体上皮细胞的增殖,尤其是浓度为10μg/L作用最明显;正常细胞组PCNA表达呈阴性,添加bFGF组PCNA表达呈强阳性;并显示进入S期的细胞明显增加,提示bFGF是促进兔晶体上皮细胞增殖的重要因素。     

狼疮肾炎PBMC高表达抗ds-DNA抗体和IL-6由MAPKERK1/2通路介导

目的：探讨有丝分裂原激活的蛋白激酶-细胞外调节激酶1/2（MAPKERK1/2）信号通路在系统性红斑狼疮合并肾炎（LN）患者外周血单个核细胞（PBMC）中自发高水平表达白细胞介素6（IL-6）和抗双链DNA抗体（抗ds-DNA抗体）中的作用。 方法： 分离培养患者PBMC，利用蛋白免疫印迹法、逆转录PCR 法和酶联免疫吸附法分别检测MAPKERK1/2磷酸化活化程度、IL-6表达和抗ds-DNA抗体水平，并与正常对照组比较。 结果： 26例LN患者与21例健康对照者比较，体外培养LN患者PBMC MAPKERK1/2信号通路呈高度活化状态，并自发表达高水平IL-6和抗ds-DNA抗体，组间有显著差异(P<0.05)。应用特异性阻断剂PD98059阻断LN患者PBMC MAPKERK1/2信号通路活化可显著抑制IL-6 和抗ds-DNA抗体的自发高表达。 结论： LN患者PBMC中MAPKERK1/2信号通路异常活化，并介导PBMC自发高水平表达IL-6 和抗ds-DNA抗体。     

Lithium stabilizes the polarized lens epithelial phenotype and inhibits proliferation, migration, and epithelial mesenchymal transition

Posterior capsule opacification (PCO) is a common complication of cataract surgery caused by epithelial mesenchymal transition (EMT) and aberrant lens cell growth. One path to prevention depends on maintaining the quiescent lens epithelial phenotype. Here we report that lithium chloride (LiCl) is a potent stabilizer of the lens epithelial phenotype. In lens epithelial explants (controls), at low cell density, cells readily depolarized, spread out, and proliferated. By contrast, in the presence of LiCl, cells did not spread out or exhibit migratory behaviour. Using concentrations of 1-30 mM LiCl we also showed that cell proliferation is inhibited in a dose-dependent manner. Confocal microscopy and immunohistochemistry for ZO-1 and E-cadherin showed that LiCl treatment maintained tight junctions at the apical margins of cells. Taken together with measurements of cell heights, this showed that the cells in LiCl-treated explants maintained the apical baso-lateral polarity and cobblestone-like packing that is characteristic of lens epithelial cells in vivo. Significantly, the effects of LiCl also extended to blocking the potent EMT/cataract-promoting effects of transforming growth factor beta (TGFbeta) on lens epithelial cells. In TGFbeta-treated explants, cells progressively dissociated from one another, taking on various elongated spindle shapes and strongly expressing alpha-smooth muscle actin (alpha-SMA). These features are characteristic of PCO. In both rat and human capsulorhexis explants, LiCl treatment effectively blocked the accumulation of alpha-SMA and maintained the cells in a polarized, adherent, cobblestone-packed monolayer. These findings highlight the feasibility of applying molecular strategies to stabilize lens epithelial cells and prevent aberrant differentiation and growth that leads to cataract.     

Human renal tubular epithelial cells suppress alloreactive T cell proliferation

Renal tubular epithelial cells (TECs) are one of the main targets of alloreactive T cells during acute rejection. We hypothesize that TECs modulate the outcome of alloimmunity by executing immunosuppressive effects in order to dampen the local inflammation. We studied whether TECs possess immunosuppressive capacities and if indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) might play a role in suppressing T cell alloreactivity. Next, we studied the role of programmed death ligand 1 (PD-L1) and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1 with regard to TEC-related immunomodulatory effects. CD3/CD28 and alloactivated peripheral blood mononuclear cells were co-cultured with activated TECs. We analysed CD4⁺ and CD8⁺ T cell proliferation and apoptosis in the absence or presence of IDO inhibitor 1-methyl-L-tryptophan (1-L-MT), anti-PD-L1 and anti-ICAM-1. Further, we examined whether inhibition of T cell proliferation was cell–cell contact-dependent. We found that TECs dose-dependently inhibited CD4⁺ and CD8⁺ T cell proliferation (P < 0·05). Activated TECs showed significantly increased IDO activity and up-regulated PD-L1 and ICAM-1 expression. Suppressed CD4⁺ and CD8⁺ T cell proliferation was only partially restored or failed to restore using 1-L-MT. Activated TECs increased early and late apoptosis of proliferating CD4⁺ and CD8⁺ T cells; only CD4⁺ T cell apoptosis was statistically affected by 1-L-MT. Transwell experiments revealed that TEC-mediated immunosuppression is cell–cell contact-dependent. We found that anti-ICAM-1 affected only CD4⁺ T cell apoptosis and not T cell proliferation. Our data show that TECs suppress both CD4⁺ and CD8⁺ T cell proliferation contact dependently. Interestingly, inhibition of proliferation and enhancement of apoptosis of T cell subsets is differentially regulated by indoleamine 2,3-dioxygenase and ICAM-1, with no evidence for the involvement of PD-L1 in our system.