严重创伤患者早期凝血功能变化及与血浆血栓调节蛋白、蛋白C的关系

目的 探讨严重创伤患者早期凝血功能变化及与血浆血栓调节蛋白(thrombomodu1in,TM)、蛋白C水平的关系及其临床意义. 方法 选择早期多发伤患者64例,按严重创伤程度评分( ISS)分为重伤组(ISS≥16分)和轻伤组(ISS＜ 16分),比较分析各组凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)变化,同时检测血浆TM和蛋白C水平,分析与凝血功能变化的相关性.另选择30例健康人为正常对照组.比较分析死亡和生存患者血浆TM和蛋白C水平的变化. 结果 重伤组PT和APTT较轻伤组及正常对照组明显延长(P＜0.05),与血浆TM和蛋白C的水平变化均有明显的相关性(P＜0.05).死亡患者血浆TM水平明显高于生存患者,蛋白C明显低于生存患者. 结论 严重创伤患者早期出现凝血功能异常,与血浆TM和蛋白C的活化相关,血浆TM和蛋白C水平对预后有重要的预测价值.     

致病性耶尔森菌毒力因子YopM的研究进展

YopM蛋白是致病性耶尔森菌的毒力因子之一，本文介绍了其结构、定位及功能等方面的研究进展。YopM蛋白是一个亮氨酸丰富区(LRR)蛋白质家族的成员，其晶体结构提示它可作为蛋白质骨架与其他蛋白质相互作用。早期研究认为YopM可结合α-凝血酶，抑制凝血酶引起的血小板聚集。后来发现YopM—CyaA融合蛋白可通过Ⅲ型分泌系统定向进入真核细胞。免疫荧光定位显示YopM不但可进入宿主细胞质，而且通过小泡相关通路进入细胞核。在哺乳动物细胞内，YopM与2种靶物质PRK2和RSK1形成一种新的蛋白复合体，并激活PRK2和RSK1的激酶活性。YopM在耶尔森菌感染中的功能和致病机制有待进一步研究。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂诱发的纤溶反应及其调节因子

目的 研究一些凝血和纤溶因子对尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA)诱发纤溶反应的调节作用及机制。方法 采用凝块溶解测定和纤维蛋白检测板测定观察了一些凝血和纤溶因子对uPA诱导的纤溶反应的影响及相互作用。结果 凝血酶激活的纤溶抑制因子（TAFI）对uPA或单链uPA（scuPA）诱发的纤溶反应具有明显的拮抗作用，凝血酶调节因子（TM）可明显增强其抑制作用，凝血酶对uPA诱导的纤溶反应没有明显的影响，但可抑制scuPA诱导的纤溶反应，该作用亦可被TM所增强或被水蛭素所消除。结论 凝血酶／TM可通过激活TAFI对uPA或scuPA诱导的纤溶反应产生抑制作用，凝血酶对scuPA诱发的纤溶反应的抑制作用亦可通过其对scuPA的裂解失活而实现。     

体外循环期间血小板活化状态检测的临床意义

为探讨心肺转流 (CPB)体外循环期间血小板活化状态的临床意义 ,用流式细胞术检测 40例先天性心脏病房、室间隔缺损患者在CPB下行心内修补术的血小板表面活化分子P 选择素和凝血酶敏感蛋白的变化 ,并与试管内试验结果相比较。结果显示 ,转流中和手术结束时血小板P 选择素和凝血酶敏感蛋白较术前明显增加 (P <0 .0 5 ) ,血小板总数较术前明显减少 (P <0 .0 5 ) ,而试管内试验结果与之不符。结果表明 ,体外循环期间由于血小板破坏增加 ,总数减少 ,血小板表面活化分子P 选择素和凝血酶敏感蛋白代偿性增加 ,但由于血小板总数减少 ,出血倾向仍然明显     

PAR1与PAR4在肿瘤转移中作用的研究进展

以往研究表明,凝血酶通过其细胞表面的受体--蛋白酶活化受体(protease-activated receptors,PARs)影响肿瘤的转移.PAR1是介导凝血酶促肿瘤转移的主要受体,表达于血管内皮细胞上的PAR1通过影响肿瘤血管新生而促进肿瘤转移.近年来研究发现,PAR1表达于多数肿瘤细胞表面,其表达水平往往预示着该细胞侵袭能力的强弱.PAR4在肿瘤转移中的作用报道较少,仅有的几篇报道提示,PAR4在血管内皮细胞中有表达且在血管发育中起作用,但其是否通过影响肿瘤血管新生而参与肿瘤转移还未见报道.同时,PAR4在肿瘤细胞上的表达仅见于肺癌组织,且其表达水平与肺癌患者的生存直接相关,提示PAR4可能是介导凝血酶影响肿瘤转移的另一重要受体.     

补体受体1型的结构功能及sCR1基因克隆表达的策略

补体受体1型（Complement receptor type 1,CR1）具有外源性及内源性活性,既可灭活组装于非自身细胞膜上的C3/C5转化酶,也可灭活自身细胞膜上形成的C3/C5转化酶。CR1是唯一既对经典,替代及植物凝集素（MBL）3个补体激活途径的,对C3/C5转化酶拥有衰变加速活性,又有辅助1因子裂解C3b和C4b作用的补体调节蛋白。对补体分子的过度活化具有抑制和调节作用,在防治补体介导的缺血再灌注损伤以及异种器官移植超急性排斥反应等疾病具有广阔的应用前景。本文主要综述CR1的结构功能及生物学活性,sCR1基因的克隆与表达及在创伤、缺血再灌注损伤中的应用研究现状。     

人前列腺癌cDNA文库的构建和筛选

目的:PC1基因是与前列腺癌相关的新基因,在雄激素非依赖和转移的前列腺癌晚期细胞系C42中高表达。为了进一步研究PC1基因的功能及作用机制,构建C42细胞的cDNA文库,寻找与前列腺癌相关基因PC1相互作用的蛋白。方法:从前列腺癌细胞系C42中提取总RNA,进而分离poly(A)+RNA,用poly(A)+RNA进行反转录并以SMARTⅢTM和CDSⅢoligo(dT)为引物进行PCR扩增,得到两端具有同源臂的PCR片段,以此同源臂为基础在酵母中实现同源重组。通过文库片段、线性化的pGADT7Rec和诱饵质粒pGBKT7PC1C共转化酵母AH109菌株,在文库构建的同时进行与PC1相互作用蛋白的筛选;或先将文库片段,线性化的pGADT7Rec转化AH109,再利用AH109和Y187两种酵母菌株的接合生殖进行筛选。最后用Far Western印迹方法进一步从体外论证了PC1蛋白可与自身相互作用形成二聚体。结果:构建了具有基因多样性和库容量足够大的人前列腺癌cDNA文库,双链cDNA片段的长度大小范围为250～5000bp。共转化的效率为4.3×105,重组效率为1.9×106,筛选的克隆数为4.3×105。接合法筛选时的接合效率为32%,筛选的克隆数为1.0×106。筛选到4个与PC1蛋白相互作用的阳性克隆。从体外证明了PC1蛋白可形成二聚体。结论:此文库的多样性和库容量均符合筛选需求。可用于前列腺癌相关基因     

γ射线诱导人单核细胞系THP-1细胞结合珠蛋白的表达

目的 探讨γ射线诱导THP-1细胞中结合珠蛋白的表达及调控的机制.方法 RT-PCR和Western blot检测结合珠蛋白mRNA和蛋白的变化.EMSA检测γ射线照射后THP-1细胞核提取物中与结合珠蛋白启动子区域寡聚核苷酸探针复合物的形成,抗体阻滞实验检测可能参与复合物形成的转录因子.结果 γ射线能够诱导THP-1细胞中结合珠蛋白的表达,而且有时间和剂量依赖效应,分别包含结合珠蛋白启动子区域的3个不同顺式作用元件的寡聚核苷酸探针均能与核提取物形成复合物,其中B和C区域的复合物形成受γ射线影响明显,stat-3在γ射线照射后表达升高,C/EBPβ-LIP出现先升高而后下降的过程.抗体阻滞实验中Anti-C/EBPα和Anti-C/EBPβ抗体能够形成明显的超迁移条带,Anti-stat3能够影响细胞核提取物与寡聚核苷酸探针复合物的形成.结论 γ射线能够诱导THP-1细胞中结合珠蛋白的表达,C/EBPβ-LIP和stat-3参与了其中的调控过程.     

C型凝集素样受体-2在血栓形成中的作用研究进展

C型凝集素样受体-2(CLEC-2)是细胞表面受体C型凝集素超家族的一员.表达于血小板表面的CLEC-2是一种基于免疫受体酪氨酸活化基序的血小板活化受体,可通过与其配体结合参与血小板的活化及聚集.这一生理过程可以避免机体过度失血,但同时也是多种血栓栓塞性疾病的病理基础.在动脉粥样硬化、炎症血栓状态、血管壁完整性的维持、...     

凝血酶受体在衰老大鼠肾组织中的表达变化特点

目的检测衰老大鼠肾小球凝血酶受体与纤维蛋白的表达变化,明确凝血酶受体活化的意义。方法选用3月、12月与24月龄Wistar大鼠,采用改良的Lendrum纤维蛋白染色法与免疫荧光法检测纤维蛋白的沉积,免疫组化方法检测肾小球凝血酶受体PAR-1与转化生长因子13（TGF-β）在肾组织中的表达。半定量PCR法检测PAR-1 mRNA的表达。结果3月、12月与24月龄大鼠肾小球内均未检测到纤维蛋白的表达。PAR1在3月龄鼠肾小球内皮、系膜与上皮细胞中广泛表达;24月龄鼠肾小球内PAR-1的表达明显减少。PAR-1 mRNA和肾小球TGF13的表达随增龄明显增加。结论衰老大鼠肾小球凝血酶的活化不伴有纤维蛋白的形成,活化的凝血酶受体可能在衰老相关肾脏结构变化中发挥重要作用。     

脑损伤后凝血功能改变的研究进展

颅脑损伤能激活凝血系统造成所谓的“凝血病”(ｃｏａｇｕｌｏｐａｔｈｙ) [1 - 5] ,包括高凝状态和伴发的纤溶亢进 ,可严重影响颅脑损伤的预后。在脑外伤患者中有3 %～ 13%发生凝血病[4] 。研究脑损伤后的凝血改变有助于指导临床脑外伤的救治 ,提高患者的生存率。一、发生机制在止血过程中外源性凝血途径是血液凝固启动的主要因素 :活化的Ⅶ因子和组织因子直接激活因子Ⅹ ,在钙存在的情况下 ,活化的Ⅹ和Ⅴ因子促使凝血酶原向凝血酶转化。在凝血酶的作用下纤维蛋白原向纤维蛋白转化。目前认为脑外伤后形成高凝状态的主要原因是外源性凝血途…     

大鼠颅脑外伤后早期脑微血管内皮细胞功能和结构的改变

目的 通过对大鼠脑损伤后早期脑血管内皮细胞的功能和结构的观察,探讨脑外伤早期微循环障碍形成的发生机制.方法 用改良Marmarous法建立大鼠闭合性脑损伤动物模型,伤后1 h、4 h、8 h、12 h、24 h、3 d及7 d分别自损伤组和假手术对照组取10只大鼠取脑,5只行免疫组化、5只行荧光定量PCR测定脑血管内皮细胞活化标志物假性血管性血友病因子(vWF)和血栓调节蛋白(TM)的表达变化.结果 大鼠脑损伤后TM和vWF在4 h开始表达,24 h达到峰值,7 d恢复正常.假手术对照组各时段TM和vWF的表达水平与损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 脑损伤早期脑微血管内皮细胞的活化是早期继发性脑损伤形成的重要机制.     

纯化后海藻硫酸多糖-蛋白复合物诱导人肝癌细胞SMMC- 7721 凋亡作用的研究

目的 研究海藻硫酸多糖蛋白复合物(Sulfated Polysaccharide-Protein Complex,SPPC)诱导肿瘤细胞凋亡的效率和机制.方法 选用人肝癌细胞株SMMC-7721为实验对象,用MTT法,流式细胞术,DNA凝胶电泳法,细胞形态学检测方法对纯化后不同剂量SPPC处理的SMMC-7721细胞凋亡情况进行观察分析;并用Western blot 法检测凋亡相关蛋白 procaspase-3的表达量变化.结果 纯化后SPPC中、高剂量组(2.0、10.0mg · ml-1)可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡, SMMC-7721细胞内凋亡相关蛋白procaspase-3有不同程度的表达降低,DNA凝胶电泳法检测到DNA ladder现象,流式细胞检测显示纯化后SPPC在10.0mg · ml-1浓度下出现了典型的二倍体峰.结论 一定浓度的海藻硫酸多糖蛋白复合物有诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用,其生化机制可能是通过caspase-3 的活化来实现的.     

生吃食品十忌

一忌吃生蕃茄未成熟的蕃茄含有毒性物质龙葵素,吃后口感苦涩,会出现呕吐、头晕、流涎等中毒症状。二忌吃生鸡蛋蛋清中含有抗生物蛋白,它在肠道内与生物素结合成为一种极稳定的复合物,阻碍人体对生物素的吸收。另外生鸡蛋中还常含有沙门杆菌,食后可能使人特别是胃肠道...     

咯血的内科治疗

一、药物治疗1．立止血（Reptilase）：立止血是目前治疗出血最有效的药物之一，尤其是对大咯血合并心血管疾病及老年患者慎用或忌用脑垂体后叶素时为首选。吴云林报道（2）立止血的止血作用与凝血酶类似，它可促进出血部位的血小板聚集、血浆凝固形成血块、纤维蛋白原裂解为纤维蛋白而产生止血作用，并可直接作用于激活组织和血液的凝血酶达止血作用卜’。在正常人血管系统内无血小板聚集作用，亦无血栓形成的危险，因此其仅在出血部位产生止血作用。用法：成人1～2U，儿童O．3～1．OU，静脉或肌肉注射，每日l～2次。静脉注射后5～10min…     

一个高效表达且纯化简单的重组蛋白载体系统

目前已发展了几种快速、有效地纯化细菌表达重组蛋白的方法。谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合表达系统是通过非变性条件下亲和吸附到谷胱甘肽－琼脂糖上，从细菌粗提物中纯化融合蛋白的。为便于从融合蛋白中解离出目的多肽，这个载体中含有特异的蛋白酶裂解位点。本研究比较了这个系统中的两个不同的载体。结果表明，它们都能高效表达谷胱甘肽转硫酶－白介素１受体拮抗剂（ＧＳＴ－ＩＬ－１ｒａ）融合蛋白，但凝血酶对融合蛋白的裂解效率有很大区别，ｐＧＥＸ－ＫＧ载体不仅大大提高了凝血酶的裂解效率，而且简化了纯化过程。因此，它为大批量用细菌表达真核蛋白的制备纯化提供了一种简便、廉价而有效、可行的方法     

生长激素－受体复合物的结构和受体信号转导

生长激素受体是一种单通道受体，具有一个细胞外蛋白区，一个跨膜区和一个细胞内蛋白区。晶体学结构资料表明，生长激素－受体复合物由三个分子组成，实际上是两个生长激素受体包裹着一个被结合的激素。虽然激素的局部结构是不对称的，但是通过改变构象，受体能够利用它们的相同残基序列与不同的结构模式相结合。这种聚集作用控制着信号转导。这些信息可用来设计分子核医学研究生长激素受体的浓度或占有率所用的放射性标记配体     

辐射损伤诱导HR24L多种修复蛋白复合物的形成

目的 探讨辐射损伤后HR24L修复蛋白复合物的形成，为HR24L参与切除修复和重组修复提供生化证据。方法 利用质粒共转染和免疫共沉淀技术检测HR24L复合物中关键修复蛋白的存在及其在辐射损伤后的变化。结果 20J／m^2紫外线照射损伤后2h，可检测到HR24L，复合物中存在有XPA。20Gyγ射线照射后2h，检测到Ku70参与HR24L复合物的形成，照射后8h可见Rad52存在。结论 辐射损伤后，切除修复蛋白和重组修复蛋白参与HR24L复合物形成的生化证据，进一步支持HR24L参与多种修复途径的论点。     

重组合异种骨在脊柱外科的应用

重组台异种骨，即骨形成蛋白（BMP）与去除抗原特性后的异种松质骨的复合物，它既有BMP的高度诱导成骨作用，又有松质骨的支架作用。我们对      

胃癌细胞中Rab25相互作用蛋白的鉴定及功能学研究

目的 通过串联亲和纯化联合质谱技术(TAP-MS)筛选胃癌细胞中Rab25相互作用蛋白.方法 利用慢病毒转染技术构建稳定表达StrepⅡ-6His-EGFP-Rab25融合蛋白的SGC7901细胞系;通过StrepⅡ-6His标签进行串联亲和纯化获得与Rab25相互作用的蛋白复合物,并通过质谱检测蛋白复合物的组成;随后构建了Rab25蛋白质相互作用网络,并通过免疫共沉淀技术验证其在胃癌细胞中相互作用的真实性.结果 通过TAP-MS技术共鉴定出26个Rab25的相互作用蛋白,主要参与癌症通路、微管运动、细胞凋亡、NOTCH通路等过程;运用免疫共沉淀方法验证了Itgb1与Rab25相互作用的真实性,并通过Transwell试验证实Rab25和Itgb1协同促进SGC7901细胞的侵袭.结论 通过鉴定胃癌细胞中Rab25的相互作用蛋白网络,为胃癌的治疗提供一个新的线索.