A549肺腺癌多细胞球体药敏实验、Mdr1、MRP表达以及99mTc-MIBI摄取研究

目的探讨A549肺腺癌多细胞球体的多药耐药基因(mdr1)和多药耐药相关蛋白(MRP)基因表达,甲氧基异丁基异腈(MIBI)摄取结果能否预测化疗效果.方法①血浆高峰浓度的化疗药物顺铂(DDP)、长春花碱酰胺(VDS)、氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶,5-FU)、羟喜树碱(HCP)、丝裂霉素(MMC)、多柔比星(阿霉素,ADM)分别进行药物敏感性实验.②单层贴壁细胞培养.96孔板1个,每组4孔,2×104细胞/孔.③MTT检测观察疗效.细胞加化疗药后培养48 h,然后加MTT 5 mg/mL,每孔20 μL,4 h后用酶标仪(490 nm)测量吸光度值.④RT-PCR检测A549细胞和MCF-7耐药株的mdr1和MRP表达,β2-MG作内参照.⑤96孔板内每孔一个球体,每孔掺入99mTc-MIBI 9.25×104 Bq(2.5μCi),分别于60和120 min结束掺入并测量γ计数.结果①A549细胞药敏实验对DDP不敏感,对MMC、VDS、ADM、5-FU、HCP敏感.②MCF-7长春新碱耐药株(MCF-7/VCR)对DDP、VDS不敏感,对MMC、ADM、5-FU和HCP较敏感.③A549细胞及球体的Mdr1/β2-MG为0,MRP/β2-MG分别为0.76和0.62;MCF-7耐药细胞的mdr1/β2-MG和MRP/β2-MG分别为35和4.36.④A549多细胞球体对99mTc-MIBI 120 min的摄取值高于60 min摄取值(P＜0.05).结论A549多细胞球体的mdr1和MRP表达水平较低以及MIBI摄取阳性提示无多药耐药性产生,与化疗药物敏感性检测结果基本一致.A549细胞对DDP耐药说明除mdr1和MRP之外,还存在与转运蛋白间接相关的其他耐药机制.     

阿奇霉素对人肺腺癌多药耐药细胞株A549/ADM的耐药逆转研究

目的研究阿奇霉素（AZM）对人肺腺癌多药耐药细胞株A549／阿霉素（ADM）的耐药逆转作用。方法使用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度AZM对细胞株A549／ADM的抑制率，确定其非细胞毒性浓度。用MTT法分别检测ADM、顺铂（DDP）、长春新碱（VCR）、氨甲蝶呤（MTX）对细胞株A549、A549／ADM以及使用AZM处理后的A549／ADM的半数抑制浓度（IC50）。使用流式细胞仪检测A549以及加入AZM前后的A549／ADM内ADM的荧光强度。结果≤10mg／L的AZM对A549／ADM无明显细胞毒作用。A549／ADM对ADM、VCR、DDP、MTX均有不同程度的耐药。使用5mg／LAZM处理后，A549／ADM对上述4种药物的敏感度均有不同程度的提高。AZM的浓度提高至10mg／L时，A549／ADM对上述药物的敏感程度提高更明显。A549／ADM经AZM处理后细胞内ADM荧光强度明显提高。结论AZM可以部分逆转A549／ADM的耐药，其逆转效果与剂量相关。     

注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP耐药逆转作用研究

目的 探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂（DDP）人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法 通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验（MTT）方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果 注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。     

注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP耐药逆转作用研究

目的 探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂（DDP）人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法 通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验（MTT）方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果 注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。     

氧化苦参碱和粉防己碱对鼻咽癌耐药细胞株的耐药逆转作用

目的：研究天然有效成分氧化苦参碱（Oxy）和粉防己碱（TET）对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1（200）的耐药逆转作用．方法：以鼻咽癌耐药细胞株HNE-1（200）为研究对象,用MTT法测定无毒剂量的Oxy和TET作用后HNE-1（200）耐药细胞对常用抗肿瘤药物顺铂（DDP）,5-氟尿嘧啶（5-Fu）,长春新碱（vincristine,VCR）,阿霉素（Adriamycin,ADM）的增殖抑制率和IC50,并进一步计算其逆转指数．结果：无毒剂量的TET和Oxy分别与4种抗肿瘤药物联合应用后,抗肿瘤药物对耐药细胞的增殖抑制率增加．TET逆转HNE-1（200）细胞对DDP,5-Fu,VCR,ADM的耐药指数分别为2．25,2．1,3．19,2．27;Oxy逆转HNE-1（200）细胞对DDP,5-Fu,VCR,ADM的耐药指数分别为1．59,1．26,2．28,1．26．结论：低毒浓度的天然药物Oxy和TET对鼻咽耐药细胞株HNE-1（200）具有一定的耐药逆转作用．     

非离子表面活性剂对肿瘤细胞多药耐药性逆转的实验研究

目的探讨非离子表面活性剂聚氧乙烯醚聚乙二醇300曲拉通X100对肺癌耐药细胞A549／DDP（顺铂）多药耐药性的逆转及其机制。方法用MTT法进行体外耐药逆转实验，荧光分光光度计测定细胞内ADM药物浓度。结果合用非离子型表面活性剂前后，A549／DDP对化疗药物阿霉素、顺铂、丝裂霉素、5-FU、依托泊甙和长春新碱的敏感性均有显著性差异（各组都为P〈0．01）；三种非离子型表面活性剂都能显著增加耐药细胞内ADM浓度，实验组与对照组比较差异有显著性（P〈0.01）。结论三种非离子表面活性剂具有逆转A549／DDP耐药性的作用，逆转机制可能是改变细胞膜的流动性，抑制多药耐药相关膜蛋白的功能。     

槲皮素对人肝癌细胞耐药株SMMC7721／VCR逆转作用的实验研究

目的探讨槲皮素（Que）对人肝癌细胞耐长春新碱（VCR）耐药株（SMMC7721／VCR）逆转作用的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析Que对人肝癌细胞敏感株（SMMC7721／S）、耐药株（SMMC7721／VCR）的抑制作用；Que与VCR联合作用时，SMMC7721／S对VCR的增敏作用及对SMMC7721／VCR耐药性的逆转作用。结果SMMC7721／S、SMMC7721／VCR对VCR的IC50值分别为（1．16±0．06）mg／L和（13．28±0．35）mg／L。SMMC7721／VCR对VCR耐药倍数为11．45倍。Que对两细胞株的生长有明显的抑制作用。25．0～50．0μmol／L终浓度的Que在体外能够明显提高SMMC7721／VCR对VCR的敏感性。结论Que能够部分逆转SMMC7721／VCR细胞的耐药性。它可作为有效的多药耐药逆转剂，与其它化疗药物联合应用于肿瘤的化学治疗。     

芹菜素逆转肺癌A549/DDP细胞耐药及机制

目的：研究芹菜素对肺癌A549/DDP细胞的作用,探讨芹菜素逆转肺癌耐药的作用及机制。方法：体外培养肿瘤细胞,以不同浓度芹菜素作用为实验组,用MTT法检测A549/DDP细胞增殖和分析药物敏感性,用Rhodamine-123潴留实验检测A549/DDP细胞内药物外排情况,用Western blot法检测肿瘤细胞内P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp)和肺耐药蛋白(lung resistance-related protein,LRP)表达情况,用RT-PCR法检测肿瘤细胞内多药耐药基因（multidrug resistance gene l,MDR1）mRNA和LRP mRNA的转录情况。结果：与DDP组相比,20、40、80 μmol/L的芹菜素明显抑制了A549/DDP细胞生长增殖（P＜0.05）。DDP对A549/DDP细胞的IC50为(14.33±0.41) μg/mL,在芹菜素作用下其IC50降为(5.76±0.36) μg/mL,逆转倍数为2.48,两者相比有统计学差异（P＜0.05）。芹菜素作用下,A549/DDP细胞内的Rhodamine-123蓄积增加,细胞内P-gp表达减弱,MDR1 mRNA转录水平下降,对LRP表达及LRP mRNA转录无明显改变。结论：芹菜素对A549/DDP细胞生长有抑制作用;芹菜素还具有逆转A549/DDP细胞肿瘤耐药的功能,其机制与降低MDR1 mRNA转录和下调P-gp介导的药物外转功能有关。     

乙酰阿地咪逆转肿瘤细胞多药耐药及其机制的研究

目的 探讨乙酰阿地咪体外逆转多药耐药细胞株人乳腺癌耐阿霉素细胞（MCF-7/Adr）以及人非小细胞肺癌耐阿霉素细胞（A549/Adr）的耐药作用及其作用机理。方法 采用乳酸脱氢酶释放法检测乙酰阿地咪与阿霉素共处理MCF-7、A549、MCF-7/Adr以及A549/Adr细胞的细胞毒作用,以观察增敏和逆转耐药作用;用全功能酶标仪测定乙酰阿地咪与阿霉素共同处理MCF-7/Adr和A549/Adr细胞后细胞内积累阿霉素的荧光强度,并采用Western blot检测细胞膜上多药耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）表达的变化。结果 乙酰阿地咪能降低MCF-7/Adr和A549/Adr对阿霉素的耐药性,10 μmol/L的乙酰阿地咪对MCF-7/Adr和A549/Adr逆转倍数分别为10.8、20.1,其逆转作用与乙酰阿地咪呈剂量依赖关系,且对MCF-7和A549细胞也具有增敏作用;随着乙酰阿地咪浓度的增加,MCF-7/Adr和A549/Adr细胞内积累阿霉素的荧光强度增加率增加,呈剂量依赖性;经乙酰阿地咪处理的MCF-7/Adr和A549/Adr细胞P-gp蛋白表达水平降低,且降低水平随乙酰阿地咪浓度增加而更明显。结论 乙酰阿地咪可显著逆转肿瘤细胞的多药耐药性,其机理与抑制多药耐药蛋白P-gp的表达有关,提示乙酰阿地咪具有潜在的克服肿瘤化疗中多药耐药现象的应用价值。     

五味子乙素对转染多药耐药1基因的MCF-7细胞的多药耐药逆转作用

目的 探讨五味子乙素(SchB)对转染多药耐药1基因(MDR1)的人乳腺癌细胞MCF-7的多药耐药逆转作用及相关机制。方法 将人MDR1基因导入MCF-7细胞,形成耐药细胞株MCF-7／MDR1;用该细胞株为模型评价SchB的体外逆转多药耐药作用,用MTT法进行化疗药物单独或与SchB联合作用时对耐药细胞的IC50比较,计算逆转倍数。结果 转染细胞MCF-7／MDR表现为P糖蛋白高表达,对阿霉素、长春新碱、紫杉醇、高三尖杉酯的抗药性均增加;SchB(25μmol／L)显著减少阿霉素、长春新碱、紫杉醇和高三尖杉酯对MCF-7／MDR细胞的IC50,逆转倍数达6．03-23．94倍;SchB(25μmol／L)使MCF-7／MDR细胞对若丹明123的胞内积聚增加约5倍。效果与维拉帕米10μmol／L浓度时相当;但SchB(25μmol／L)不影响MCF-7／MDR细胞的P-糖蛋白表达。结论 SchB能有效逆转转染MDR1的MCF-7细胞的多药耐药,其机制可能是抑制了P-糖蛋白的药物外排生物学活性。