髓磷脂碱性蛋白的提取、纯化及鉴定实验性变态反应性脑脊髓炎动物模型的建立

本实验用Deibler方法通过脱脂、抽滤、酸化及低温高速离心从羊脑中提取出髓磷脂碱性蛋白(Myelin Basic Protein MBp),并进行了纯化及鉴定。用纯化的MBP致敏动物,成功地造成了家兔和豚鼠实验性变态反应性脑脊髓炎。     

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立

目的 研究用牛的髓鞘碱性蛋白(MBP)诱导Wistar大鼠发生实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。方法 一次性给Wistar大鼠双后腿足垫皮内注射牛MBP-福氏完全佐剂(CFA)混合乳剂，同时辅以百日咳杆菌。结果 实验组大鼠全部发病，对照组无一发病。结论 用牛脊髓MBP的粗提品可成功地诱导Wistar大鼠发生EAE。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠模型的建立

目的 为深入研究人类多发性硬化症建立EAE大鼠模型。方法 采用双后退足垫皮内注射豚鼠全脊髓匀浆（GPSPH）-福氏完全佐剂（CFA）混合乳剂，辅以注射百日咳疫苗，诱导Wistar大鼠EAE模型。取对照及发病高峰期大鼠脑、脊髓组织，常规病理切片，HE染色。ELISA法检测血清MBP抗体。结果 一次性双后腿足垫皮内注射GPSPH-CFA混合乳剂可诱导Wistar大鼠EAE模型，临床症状约在造病后10-15d出现。同时注射百日咳疫苗能提高发病率和发病程度。EAE大鼠脑、脊髓组织HE染色见大量淋巴细胞浸润，在血管周围形成淋巴鞘，但未见脱髓鞘改变。与对照组相比，EAE大鼠血清中抗MBP抗体明显增高。结论 非敏感品系Wistar大鼠可用于制备EAE动物模型。发病大鼠除有EAE临床症状外，还伴有中枢神经系统炎性改变和血清MBP抗体的增高。     

Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的建立

目的：利用豚鼠脊髓匀浆建立Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（ EAE）的动物模型,为中枢神经系统脱髓鞘性疾病的研究提供实验依据。方法：以豚鼠全脊髓匀浆（ GPSCH）与完全弗氏佐剂（ CFA）的混合乳剂一次性给予大鼠足垫皮下注射,同时大鼠足背注射百日咳杆菌原液,建立EAE模型。结果：在免疫后12天开始出现肢体瘫痪,双后肢拖动等EAE临床症状。光镜下可见脑和脊髓组织中有大量炎性细胞浸润,炎性细胞聚集在血管周围呈典型的“袖套”样改变。结论：利用豚鼠脊髓匀浆制备Wistar大鼠EAE模型方法简单,稳定、可靠、发病率高。     

实验性变态反应性脑脊髓炎模型

实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）是一种以特异性致敏的CD4＋T细胞介导为主的,以中枢神经系统内小血管周围出现单个核细胞浸润及髓鞘脱失为特征的自身免疫性疾病,是人类多发性硬化（MS）的理想动物模型[1],在临床神经免疫学的研究中具有重要意义[2,3] .国内外学者试用多种易感动物建立EAE模型,以期阐明MS及EAE的发病机制,并为其病情的监测、复发的预防、治疗方案的选择以及新疗法或新药物的筛选等提供可靠依据.本文就近年来EAE模型方面的研究综述如下.     

全脊髓匀浆建立豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型

目的:用全脊髓匀浆(粗制髓鞘碱性蛋白)建立豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型.方法:Wistar大鼠全脊髓匀浆 完全福氏完全佐剂(CFA)免疫豚鼠,观察豚鼠的临床症状和中枢神经系统(CNS)的病理改变.结果:实验豚鼠均表现典型的EAE症状;光镜观察见CNS血管周围炎性细胞浸润和白质脱髓鞘改变.结论:全脊髓匀浆加完全福氏完全佐剂成功的诱导了豚鼠的EAE模型,具有模型稳定、发病率高、动物廉价易得的优点,是研究多发性硬化理想的动物模型.     

3种大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的差异

目的 比较3种大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的差异.方法 采用皮下注射豚鼠脊髓匀浆+完全福氏佐剂,并辅以注射百日咳疫苗,诱导制备SD大鼠、Wistar大鼠和Lewis大鼠EAE模型,比较3组大鼠EAE的神经症状及中枢神经不同部位病理学变化.结果 与Lewis大鼠相比,SD大鼠和Wistar大鼠潜伏期均延长(P＜0.05),达峰时间相应推迟(P＜0.05),神经症状以Lewis大鼠最严重,其次为SD大鼠(P＜0.05);病理结果显示,3组大鼠CNS均以脑干病理改变最为严重,其次颈髓,而大脑病变最轻;CNS各部位的炎症改变,以Lewis大鼠最明显,而Wistar大鼠最轻.结论 SD大鼠与Lewis大鼠EAE比较,疾病发生率接近,中枢炎症病理改变相似,两者均以脑干炎症变化最严重,故SD大鼠是国内适合制备EAE模型的实验动物.     

SD大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎模型的建立

目的探索SD大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）模型制作的试验方法与技术。方法采用完全福氏佐剂-脑脊髓匀浆，并辅以注射百日咳疫苗诱导SD大鼠EAE模型，比较不同的免疫原（同种或异种），注射方法（一次或多次注射）以及性别差异对模型制作的影响。观察和比较动物的神经症状和病理改变。结果使用同种脑脊髓匀浆，多次注射雌性SD大鼠诱导的模型，其发病持续时间分别为16～20天，10～14天；发病率为85％；复发率为46．67％，而致死率仅有5．88％；明显优于其他组别。病理学证实发病大鼠具有典型的脱髓鞘改变和胶质结节形成。结论使用同种脑脊髓匀浆，多次注射雌性SD大鼠诱导的动物模型其临床表现、病理特征、病程特点与人类的多发性硬化（MS）具有很大的相似性，适用于MS的研究。     

SD大鼠和Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎发病情况比较

目的 比较Wistar大鼠和Sprague-Dawley(SD)大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病情况.方法 注射以豚鼠脊髓匀浆-完全福氏佐剂制备的完全抗原,辅以百日咳疫苗加强诱导,复制Wistar大鼠和SD大鼠EAE模型,比较两组大鼠EAE的神经症状及中枢神经不同部位病理学改变.结果 Wistar大鼠组发病数、潜伏期、发病达峰时间以及神经症状最高评分分别为9/12、12.33±1.37、15.17±3.19、1.33±0.41;SD大鼠组分别为11/12、15.88±0.64、18.63±1.52、3.13±1.89;两组大鼠相比,SD大鼠EAE潜伏期延长(P<0.01),达峰时间相应推迟(P<0.05),但神经症状较Wistar大鼠严重(P<0.05);病理结果显示,两组大鼠CNS均以脑干病理改变最为严重,而大脑病变最轻,SD大鼠总体中枢系统炎症改变较Wistar大鼠严重(标准评分P<0.01,血管套计数P<0.05).结论 SD大鼠EAE与Wistar大鼠EAE比较,发病过程很相似:发病率接近,中枢炎症病理改变相仿,两者均以脑干炎症变化最严重;略有不同点是:SD大鼠EAE发病潜伏期较长(P<0.01),神经症状较严重(P<0.05),总体中枢炎症改变较为严重.故SD大鼠也是制备EAE模型的理想实验动物.     

二次免疫诱导大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的建立

目的　建立一种新的可靠的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型制备方法,为人类多发性硬化实验研究提供理想模型。方法　用豚鼠全脊髓生理盐水匀浆 完全福氏佐剂制成免疫抗原,主动免疫Wistar大鼠,14 d后用豚鼠全脊髓生理盐水匀浆 不完全福氏佐剂再次免疫。结果第1次免疫后7 d左右,所有大鼠出现食量、活动减少;在第2次免疫后6-15 d,部分大鼠出现肢体无力、瘫痪,脑组织切片HE染色可见炎性细胞浸润和白质丰富区广泛肿胀变性。结论二次免疫诱导Wistar大鼠EAE病情严重,发病率高,病情及病理更接近人类多发性硬化症。本方法操作简单,对非敏感动物制备EAE模型也有较满意的效果。     

二黄胶囊对实验性变态反应性脑脊髓炎模型大鼠急性期炎性反应和髓鞘修复的影响

目的观察二黄胶囊对实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic encephalomyelitis,EAE)模型大鼠的保护和治疗作用。方法 通过用豚鼠脊髓匀浆和完全福氏佐剂1∶1混合,制成乳剂作为免疫抗原,给Lewis大鼠4足垫内注射,建立大鼠EAE模型。观察二黄胶囊对EAE大鼠发病情况、神经组织病理变化及其血清髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)水平的影响。结果 二黄胶囊可显著改善EAE的发病程度,降低血清MBP的含量,与模型对照组比较其差异有统计学意义(P<0.05);二黄各剂量组大鼠大脑的2个取材部位、小脑、脑干炎性反应细胞浸润灶计数均明显少于模型对照组,差异具有统计学意义(P<0.01);二黄各剂量组大脑和小脑、脑干的髓鞘病变灶计数均明显少于模型对照组,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。二黄中剂量组脊髓纵切标本、二黄大、中剂量组脊髓横切标本的髓鞘病变灶计数明显少于模型对照组,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 二黄胶囊对EAE大鼠的体质量、动物发病情况和脑、脊髓病理改变具有明显改善作用。     

实验性变应性脑脊髓炎小鼠模型的构建

目的 建立实验性变应性脑脊髓炎(EAE)动物模型,为进一步研究其发病机制提供依据.方法 用髓鞘碱性蛋白(MBP)加福氏完全佐剂免疫诱导BALB/c小鼠,观察和比较动物的神经系统症状和病理变化,ELISA方法检测脾细胞培养上清中干扰素-γ(IFN-γ)的水平.结果 实验小鼠出现EAE的临床症状,光镜下见血管周围炎性细胞浸润,呈袖套样改变;EAE组的IFN-γ的水平明显高于对照组(P＜0.05).结论 本实验所构建的EAE模型稳定、方法可靠.     

口服髓鞘素对实验性变态反应性脑脊髓炎的抑制作用

目的 探讨口服髓鞘素诱导免疫耐受对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）发病及组织病理变化的影响。方法 以Wistar大鼠为EAE动物模型,观察口服耐受与直接免疫组发情况及病变组织炎症细胞浸润的差别。结果 口服耐受组发病率明显降低,起病时间相对延迟,症状较轻,病理组织中炎性细胞浸润数明显减少。结论 口服抗原可有效地抑制实验性变态反应性脑脊髓炎的发病。     

慢性实验性变应性脑脊髓炎猴脊髓非病灶部位轴突损伤的机制

【目的】探讨多发性硬化非病灶部位轴突损伤及其机制。【方法】以8只慢性实验性变应性脑脊髓炎猴为研究对象，先对其进行磁共振扫描，然后对颈髓3-4节段进行苏木素-伊红染色观察炎症细胞浸润、银染色及神经丝免疫组化染色观察轴突损伤、双重染色标记凋亡的少突胶质细胞，同时观察轴突密度以及少突胶质细胞的凋亡情况。【结果】在颈髓3—4节段未发现有实验性变应性脑脊髓炎病灶、炎症细胞浸润及髓鞘脱失．但是存在轴突损伤以及少突胶质细胞的凋亡，轴突密度波动于1900～3232／单位面积，高倍视野下平均凋亡少突胶质细胞数为1．5～5．167。【结论】造成多发性硬化或实验性变应性脑脊髓炎非病灶部位轴突损伤的机制．可能与少突胶质细胞凋亡有关，而炎症细胞可能不参与非病灶部位的轴突损伤，髓鞘脱失并不是轴突损伤的必要条件。     

慢性实验性变应性脑脊髓炎猴脊髓非病灶部位轴突损伤的机制

【目的】探讨多发性硬化非病灶部位轴突损伤及其机制。【方法】以8只慢性实验性变应性脑脊髓炎猴为研究对象,先对其进行磁共振扫描,然后对颈髓3-4节段进行苏木素-伊红染色观察炎症细胞浸润、银染色及神经丝免疫组化染色观察轴突损伤、双重染色标记凋亡的少突胶质细胞,同时观察轴突密度以及少突胶质细胞的凋亡情况。【结果】在颈髓3-4节段未发现有实验性变应性脑脊髓炎病灶、炎症细胞浸润及髓鞘脱失,但是存在轴突损伤以及少突胶质细胞的凋亡,轴突密度波动于1900～3232/单位面积,高倍视野下平均凋亡少突胶质细胞数为1.5～5.167。【结论】造成多发性硬化或实验性变应性脑脊髓炎非病灶部位轴突损伤的机制,可能与少突胶质细胞凋亡有关,而炎症细胞可能不参与非病灶部位的轴突损伤,髓鞘脱失并不是轴突损伤的必要条件。     

变应性鼻炎动物模型的研究进展

变应性鼻炎的患病率逐年上升,已成为全球关注的疾病。动物模型是人类研究疾病的重要工具。本文主要综述变应性鼻炎造模方面的相关问题。     

补肾对脑脊髓炎大鼠生长相关蛋白-43及微管相关蛋白-2的影响

目的观察补肾对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠生长相关蛋白-43(GAP-3)及微管相关蛋白-2(MAP-2)的影响,探讨其对轴突损伤的保护作用。方法应用髓鞘碱性蛋白(MBP)与完全福氏佐剂按1∶1(体积比)制成抗原并注射于大鼠双后足皮下,建立大鼠EAE模型。以醋酸泼尼松作对照,用苏木素-伊红染色(HE)观察各组大鼠造模后14 d、28 d脑和脊髓的组织病理变化,用轴突染色及免疫组织化学染色法观察脑和脊髓轴突损伤及再生情况。结果EAE模型组大鼠脑和脊髓组织中可见大量炎性细胞浸润,轴突存在明显损伤。脑和脊髓GAP-43及MAP-2表达显著降低,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或0.01),分别用补肾方剂(左归丸和右归丸)干预后,大鼠炎症反应及轴突损伤较EAE模型组明显减轻,GAP-43及MAP-2表达明显高于模型组(P<0.05或0.01),以左归丸更为明显。结论补肾方剂能够上调GAP-43及MAP-2的表达,具有促进和增强轴突再生的作用。     

Th1/Th2细胞与实验性自身免疫性脑脊髓炎

实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是一种免疫细胞介导的以中枢神经系统白质损坏为特征的自身免疫性疾病。发病机制及病情变化过程中,CD4+T细胞起着重要的作用,以分泌INF-γ和IL-2为主的Th1细胞能够促使EAE的发生或病情的加重,以分泌IL-4和IL-10为主的Th2细胞可以抑制或逆转EAE的病情。就近几年对Th1/Th2细胞与EAE关系的研究进行综述。