血管内皮抑制素对Calu-6裸鼠移植瘤的生物学效应

目的 探讨血管内皮抑制素对Calu-6裸鼠移植瘤生长及新生血管形成的影响.方法 在荷瘤裸鼠皮下注射不同剂量的血管内皮抑制素,观察注射后肿瘤体积的变化;应用免疫组化SABC法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、生存素(survivin)和环氧化酶-2(COX-2)蛋白的表达以及微血管密度(MVD)的变化;流式细胞术检测循环血管内皮细胞(CECs)的含量;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时定量PCR检测外周血中CD146和CD105 mRNA的表达.结果经血管内皮抑制素治疗后,荷瘤鼠肿瘤体积明显减小;肿瘤组织中VEGF、survivin和COX-2蛋白的表达以及MVD均下降,且各治疗组与阳性对照组间的差异均有统计学意义(均P＜0.05);外周血中CECs、CD146和CD105 mRNA的含量均明显下降;活化CECs的含量与肿瘤组织中survivin和VEGF的表达以及MVD的变化均呈正相关.结论 血管内皮抑制素可通过下调移植瘤中VEGF、survivin和COX.2蛋白的表达以及减少MVD抑制肿瘤生长;活化CECs将可能作为理想的预测抗血管形成治疗预后的标记物应用于临床.     

大鼠皮层C6脑胶质瘤模型的建立

目的：为脑胶质瘤的研究提供实验基础，建立稳定可靠的动物模型。方法：借助于脑立体定位技术，在25只雄性Wistar大鼠脑S1区接种含有10g／L琼脂糖的C6细胞悬液。随机分成4个周组和1个自然死亡组后观察大鼠的生存期，并采用MRI、病理解剖、HE染色及GFAP免疫组织化学方法，动态观察各周组肿瘤生长情况。结果：在不同周组中，所有检查均显示颅内肿瘤形成，GFAP阳性。4周内无死亡，自然死亡组在第5周死亡2只、余3只于第6周死亡。结论：该方法建立的S1区脑胶质瘤模型具备与人脑胶质瘤生长相似的特性，肿瘤形成时间短，生存期稳定，且无脑外转移和颅外扩散，适合各种脑胶质瘤实验治疗研究。     

大鼠C6胶质瘤模型建立研究进展

本文是综述国内外诸多学者建立大鼠C6胶质瘤模型的经验,总结建立C6胶质瘤模型的可靠方法。以往经验表明,采用立体定向技术在大鼠脑内接种C6胶质瘤细胞来建立动物模型的成功率较高,影像学检查提示接种后肿瘤的生长随时间变化而呈规律性,中线结构逐渐移位,占位效应愈来愈明显。其病理组织学检查特征符合胶质瘤的形态学特性,免疫组织化学提示肿瘤属胶质源性,接近人脑胶质瘤。其平均生存期为3周,这为胶质瘤的相关研究提供了可靠的实验基础。     

重组人血管内皮抑制素对裸鼠骨肉瘤的抑瘤作用

目的 研究Rh-Endostatin对人骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用.方法 建立人骨肉瘤细胞OS-732皮下移植瘤裸鼠动物模型,分为4组,分别给予(a)生理盐水;(b、c、d) Rh-Endostatin低、中和高剂量,分别为2.5、5.0和10mg/kg;为腹腔注射给药,1次/天,4周后裸鼠全部处死,称量肿瘤重量计算抑瘤率,用药疗效.对肿瘤标本进行微血管密度计数和细胞凋亡指数检测.结果 Rh-Endostatin单药2.5、5和10mg/kg治疗抑瘤率分别为25.3%、34.1%和35.7%;微血管密度:所有治疗组与对照组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.01).凋亡指数:治疗组与对照组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论 Rh-Endostatin单药对骨肉瘤具有明显的抑瘤作用,抗血管生成治疗骨肉瘤具有潜在的临床应用价值,值得进一步临床试验评估其疗效.     

血管生成抑制素Endostatin研究新进展

１９９７年Ｏ‘Ｒｅｉｌｌ从小鼠血管内皮细胞瘤中分离到一种新的２０ｋＤ具有特异抑制血管内皮细胞生长的抑制因子－－Ｅｎｄｏｓｉａｔｉｎ,它对牛它细血管内皮细胞、牛肺主动脉内皮细胞有特异的抑制增殖作用,而对非血管内皮细胞系细胞如ＮＩＨ３Ｔ３,Ａ１０平滑肌细胞等则无增殖抑制作用,实验证实大肠杆菌生产的复性及未复性的Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ及杆状病毒生产的重组Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ均有抑制鸡胚血管生成的作用,而且     

胶质瘤促血管生存素2基因表达与血管生成的关系

背景与目的：血管生成与肿瘤的生物学行为密切相关，本研究探讨胶质瘤促血管生存素2（angiopoietin2，Ang2）表达与血管生成的关系。方法：采用RT-PCR检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织中Ang2基因表达；CD34单克隆抗体组织化学染色显示微血管，用微血管计数micro-vessel-counting，MVC）测定肿瘤血管生成。结果：50例脑胶质瘤和8例正常脑组织均可表达Ang2 mRNA片段。Ang2 mRNA表达与脑胶质瘤的血管生成呈显著正相关（r=0．821，P〈0．01）；高度恶性胶质瘤Ang2 mRNA表达、MVC分别显著高于低度恶性胶质瘤（P〈0．01）；低度恶性胶质瘤Ang2 mRNA表达、MVC均显著高于正常脑组织（P〈0．05）。结论：Ang2可能通过参与胶质瘤血管生成，对胶质瘤的恶性演进起促进作用。     

腺相关病毒介导重组血管抑素联合雷公藤红素对大鼠颅内C6胶质瘤的抗血管生成作用

目的:腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的重组血管抑素(angiostatin,AS)联合应用雷公藤红素(celastrol)治疗大鼠颅内C6胶质瘤,观察其对肿瘤体积、新生血管密度及肿瘤细胞凋亡的影响,探讨抗血管生成重组基因联合雷公藤红素对胶质瘤治疗的前景。方法:建立颅内原位荷C6脑胶质瘤大鼠模型,7d后随机分为4组,分别给予0.9%氯化钠溶液(作为对照)、AAV-AS、雷公藤红素及两者联合用药。每隔7d行头部强化MRI检查,计算肿瘤体积。于22d后处死动物,检测AS蛋白表达、血管密度及肿瘤细胞凋亡情况。结果:联合治疗组及AAV-AS治疗组均检测到AS蛋白表达,证实基因转导成功。联合治疗组第22天时肿瘤体积、血管密度和凋亡指数均与对照组、雷公藤红素组及AAV-AS治疗组相比差异有统计学意义(P<0.05),联合治疗可以抑制肿瘤生长,降低新生血管密度,促进肿瘤细胞凋亡。结论:基因治疗联合雷公藤红素可通过抑制胶质瘤血管生成而抑制肿瘤生长;两者联合应用具有协同作用,可弥补两者单独应用的不足之处。     

RNasin对脑胶质瘤细胞生长的抑制作用

目的：探讨核糖核酸酶抑制因子（ＲＮａｓｉｎ）对脑胶质瘤生长的抑制作用及可能机理。方法：从人胎盘组织中提取制备ＲＮａｓｉｎ,体内外观察其对人ＳＨＧ４４和大鼠Ｃ６胶质瘤细胞生长的抑制作用。结果：（１）体外不同浓度的ＲＮａｓｉｎ对培养的Ｃ６及ＳＨＧ４４胶质瘤细胞存活率无明显影响,与对照组比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）;（２）加入ＲＮａｓｉｎ后裸鼠体内Ｃ６胶质瘤平均重量为１．７２ ｇ±０．１８４ ｇ,平均大小（直径）为１２．８４ ｍｍ±１.１５ ｍｍ;ＳＨＧ４４胶质瘤平均重量为１．０１２ ｇ±０．１７４ ｇ,平均大小为１１．２０ ｍｍ±１．２１ｍｍ,均与对照组有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论：ＲＮａｓｉｎ体外对培养的胶质瘤细胞生长无抑制作用,而体内对胶质瘤瘤体的生长有明显抑制作用。     

血管生成抑制素抑制胃癌浸润转移的研究

从人血浆中分离出血管生成抑制素(Angiostatin),并以此进行胃癌转移模型治疗试验,以探讨血管生成抑制素抑制胃癌浸润转移的作用.以Sepharose亲和层析柱从血浆成分中分离出纤溶酶原,再用弹性蛋白酶酶切,经Sepharos 4B-Lysine亲和层析柱分离出血管生成抑制素.以完整组织块裸鼠胃壁内原位种植建立胃癌转移模型,肿瘤种植当天给实验动物24μg(1.2mg/kg)血管生成抑制素腹腔内注射,以后每天给以12μg(0.6mg/kg);以相同剂量的纤溶酶原腹腔内注射作为对照,相同体积的生理盐水腹腔内注射作为空白对照;治疗共进行3周,肿瘤种植后10周处死实验动物,测量肿瘤体积,观察转移情况,免疫组化法检测肿瘤微血管密度.结果:     

鲜壁虎提取物抑制C6胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的研究

 目的　研究鲜壁虎提取液对C6胶质瘤细胞的致凋亡作用及其方式。方法　用不同浓度的鲜壁虎液处理处理C6胶质瘤细胞 ,用MTT法观察增殖抑制 ,用透射电镜观察用药后细胞形态的变化 ,用琼脂糖凝胶电泳观察用药后细胞DNA断裂情况 ,用流式细胞术定量观察C6细胞凋亡情况。结果　经5 0mg/L鲜壁虎液处理的C6胶质瘤细胞 ,增殖能力降低 ;5mg/L ,30mg/L ,5 0mg/L鲜壁虎液均可以使C6细胞显示明显凋亡征象 ,有DNA断裂现象 ,并有浓度和时间依赖性。结论　鲜壁虎液在体外能诱导C6胶质瘤细胞凋亡 ,抑制细胞增殖 ,是一种具有抗肿瘤作用的天然药物。     

肿瘤抗原致敏树突状细胞治疗胶质瘤的实验研究

 目的　研究肿瘤冻融抗原致敏树突状细胞 (DC)治疗胶质瘤的疗效。方法　从大鼠骨髓中分离出单核细胞后 ,加入添加rGM CSF和rIL 4的IMDM培养基中培养后鉴定。制备大鼠C6胶质瘤冻融抗原以及DC疫苗 ,同时肿瘤冻融抗原致敏DC体外细胞毒试验 ;建立动物模型 ,体内应用DC疫苗并观察疗效。结果　单核细胞培养 8天后可获得大量的树突状细胞 ;体外细胞毒试验发现对相应的C6肿瘤细胞有明显的杀伤作用 ;动物实验发现治疗组肿瘤生长明显抑制 ,而对照组肿瘤明显生长 ,两组肿瘤体积有显著性差异P <0 .0 1。结论　建立了体外扩增大鼠骨髓DC以及制备DC疫苗的方法 ,采用冻融抗原致敏DC疫苗治疗荷瘤动物生存时间明显延长 ,肿瘤生长明显抑制 ,为研究其在脑胶质瘤临床免疫治疗打下基础     

缓激肽对C6胶质瘤细胞分泌白细胞介素-6的影响

目的:白细胞介素-6(IL-6)与脑胶质瘤的恶性增殖密切相关,本文探讨缓激肽作用大鼠C6胶质瘤细胞后对IL-6表达的影响。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和放射免疫法分别检测1μmol·L^-1 缓激肽作用下,C6胶质瘤细胞内及细胞培养液中IL-6的表达水平。结果:RT-PCR结果显示缓激肽作用于C6胶质瘤细胞,在不同时相点(0,5,10,15,30,60min)均有IL-6mRNA的表达,各组间比较无显著性差异(P>0.05);放射免疫法结果显示,细胞培养液中未检测到IL-6的表达。结论:缓激肽作用C6胶质瘤细胞60min以内不引起IL-6的表达增强,这为缓激肽临床应用的安全性提供了有利的实验依据。     

表皮生长因子受体反义RNA抑制胶质瘤细胞生长增殖的体外试验

目的：研究表皮生长因子受体基因对于胶质瘤发生发展的作用，探索以ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ进行反义基因治疗胶质瘤的可行性。方法：将含ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ的质粒通过脂质体介导转入Ｃ６恶性胶质瘤细胞，通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交鉴定外源基因整合情况，ＭＴＴ法测定细胞存活率，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交、细胞原位ｍＲＮＡ杂交及ＥＧＦＲ免疫组化染色检测ＥＧＦＲｍＲＮＡ及蛋白表达，核仁组成区相关嗜银蛋白染色（ＡｇＮＯＲ计数）检测细胞增殖活性。结果：Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交表明外源性反义ＥＧＦＲ基因（互补于ＥＧＦＲ基因全长及３端部分序列）分别在Ｃ６细胞中整合（分别命名为Ｃ－ｐＲ１和Ｃ－ｐＲ３），通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交、原位杂交及细胞免疫组织化学检测均显示转染ＥＧＦＲ反义ＲＮＡ的Ｃ６细胞比转染前ＥＧＦＲｍＲＮＡ水平及ＥＧＦＲ蛋白水平有不同程度的降低。表达高水平反义ＲＮＡ的克隆在培养状态下细胞增殖活性较对照组有明显下降。结论：ＥＧＦＲ在恶性胶质瘤细胞的发生发展过程中起十分关键的作用，ＥＧＦＲ有可能成为基因治疗恶性胶质瘤的优选靶的之一。     

Tamoxifen体内外抑制胶质瘤细胞生长研究

目的：探讨Tamoxifen在体内外对胶质瘤细胞的抑制作用及其机制；方法：Tamoxifen在体内外作用于C6大鼠胶质瘤细胞系，并用MTT法、TUNEL法、免疫组化及动态MRI来检测效果；结果：Tamoxifen能在体外明显抑制胶质瘤细胞生长，在体内抑制作用尚不确定；Tamoxifen可抑制PKC及IGF-1表达；结论：Tamoxifen抑制胶质瘤细胞生长的机制之一可能是抑制PKC及IGF-1活性。     

人脑胶质瘤干细胞SHG-44s的克隆及初步鉴定

目的:探讨人脑胶质瘤体外细胞系中存在肿瘤干细胞的可能性.方法:将SHG44细胞系和SHG44-9细胞株,分别应用含血清培养基(DMEM 10?S)和无血清培养基(DMEM/F12,添加bFGF、LIF和EGF)培养.用CD133免疫磁珠分离干细胞、Hoechst33342和NESTIN流式细胞仪、Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色检测肿瘤干细胞及其分化细胞.结果:CD133磁珠分离得到的干细胞的比例:在血清组SHG44和SHG44-9分别为0.021%和0.035%:无血清组分别为1.2%和2.3%.而Hoechst33342和CD133标记后流式细胞仪检测干细胞比例:血清组中SHG44、SHG44-9分别为1.5%、0.37%;无血清组分别为16.4%和29.1%.并且这些细胞能够增殖和分化成神经元和胶质细胞.而Nestin标记后SHG44、SHG44-9中分别有51.05%、77.53%阳性细胞.结论:体外长期传代培养的人脑胶质瘤细胞系中存在肿瘤干细胞SHG44s,CD133磁珠和Hoechst33342流式细胞仪分离和检测胶质瘤干细胞是行之有效的方法,而Nestin 细胞是干细胞分化后的祖细胞或前体细胞,不能作为分离和检测干细胞特异性标记物使用.     

鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞作用的实验研究

背景与目的:鸦胆子油乳注射液在临床上用于许多肿瘤的治疗,然而其确切的分子机制目前尚不完全清楚。本研究探讨鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞增殖作用的影响。方法:体外培养大鼠C6胶质瘤细胞,用MTT比色法检测鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞的抑制作用。用免疫组化检测鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞caspase-3表达的影响。结果:MTT比色法显示鸦胆子油乳注射液对C6胶质瘤细胞的抑制率呈剂量依赖性。免疫组化显示随鸦胆子油乳注射液浓度增加,caspase-3表达明显增多。结论:体外鸦胆子油乳注射液能增加C6胶质瘤细胞凋亡基因caspase-3表达,抑制细胞增殖。     

鼠脑胶质瘤模型制作方法的改良

 目的　建立简单易行、稳定的鼠C6脑胶质瘤模型。方法　SD鼠 2 0只 ,脑立体定向仪定向注射C6细胞至鼠脑尾状核 ,接种后 1、2、3、4周MRI测量肿瘤大小 ,每日观察鼠体重变化 ,处死后大体解剖和病理组织学检查。结果　MRI平扫见脑组织水肿明显 ,MRI增强可见肿瘤组织明显强化 ,中线移位 ,侧脑室受压或消失。颅内接种后星形细胞胶质瘤呈Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级不等。结论　静脉注射套管针接种C6细胞 ,取材方便 ,简单易行 ,腹腔注射造影剂可获得较好的增强效果。     

人参皂甙Rh2诱导C6胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的:观察不同浓度人参皂甙Rh2(G-Rh2)对C6胶质瘤细胞的诱导凋亡作用,并在分子水平探讨其作用机理。方法:细胞计数法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞的DNA组织含量变化,电镜下观察细胞的超微结构改变。结果:1)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L对C6胶质瘤细胞有增殖抑制作用,且呈明显量效关系;2)流式细胞术分析经G-Rh2作用72h的C6胶质瘤细胞的DNA组织直方图提示有凋亡发生;3)不同浓度G-Rh22、4、8μmol/L可使G0/G1期细胞比率下降(P<0.05,P<0.01),S期细胞比率明显升高(P<0.05,P<0.01),而G2/M期细胞相对稳定(P>0.05);4)电镜结果提示经4μmol/LG-Rh2作用72h的C6细胞呈典型的凋亡形态学改变。结论:G-Rh2对C6胶质瘤细胞有诱导凋亡作用,呈剂量依赖性抑制C6胶质瘤细胞增殖,对脑胶质瘤的治疗有重要意义。     

维生素C对神经胶质瘤的影响作用

神经胶质瘤是中枢神经系统(CNS)最常见的一类肿瘤,占了颅内原发肿瘤的35%～60%。2007年世界卫生组织(WHO)中枢神经系统肿瘤分类中将胶质瘤分为I～Ⅳ级,其中Ⅲ、Ⅳ级为恶性胶质瘤,大约占所有胶质瘤的77.5%。目前对神经胶质瘤的临床治疗采取以手术治疗为主,结合放疗、化疗等疗法的综合治疗,虽然能延长患者生存时间,但存在高复发率、高致残率、高病死率等问题,总体预后仍然较差。自20世纪70年代以来,维生素C(VC)抗肿瘤作用的研究日益进展,国外的医疗工作者已将其作为肿瘤治疗的补充和替代疗法之一,并报道了静脉注射维生素C治疗神经胶质瘤、卵巢癌、肾细胞癌、乳腺癌、大肠癌、非霍奇金淋巴瘤、前列腺癌、膀胱癌等肿瘤的临床病例,认为其能改善患者的临床症状、提高生存质量、延长生存期。本文就维生素C对神经胶质瘤的治疗作用做一综述。     

COX-2选择性抑制剂Celecoxib治疗胶质瘤的体内实验研究1231

目的　探讨选择性环氧化酶-2抑制剂 Celecoxib(塞来昔布)对 C6 胶质瘤生长抑制的体内实验研究。方法　将成瘤小鼠分为对照组和治疗组,应用肿瘤 HE 染色法、肿瘤生长曲线、前列腺素 E2(PGE2)检测及电镜检查方法观察Celecoxib对小鼠移植瘤的作用。结果　HE染色和电镜可见治疗组血管破坏、细胞坏死和凋亡,PGE2检测及肿瘤生长曲线分析有统计学意义,P <0.05。结论　Celecoxib能够抑制COX-2活性,降低PGE2合成,Celecoxib对 C6 胶质瘤生长具有抑制作用,对胶质瘤的治疗有重要意义。