神经生长因子对兔局灶性脑缺血再灌注损伤的治疗时间窗及MR影像学评价

目的研究神经生长因子(NGF)对脑缺血再灌注损伤保护作用的有效时间窗,同时利用MR成像技术对其进行评价。方法采用兔大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血2 h再灌注72 h模型,分别于缺血再灌注0、1、36、h应用微量进样器将NGF立体定向导入梗死灶周,并于再灌注不同时间点应用MR影像学、TTC染色和流式细胞术评价家兔梗死体积、神经功能缺损和凋亡状态。结果缺血再灌注0、13、h组梗死灶周注射NGF后,经MRI检查所测梗死体积分别为(229.9±17.1)(、260.7±24.2)、(314.6±25.3)mm3,与对照组[(468.6±29.7)mm3]比较差异有统计学意义(均P<0.01);缺血再灌注6 h组梗死体积为(441.1±14.8)mm3,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。采用TTC染色所测梗死体积与MRI检查结果一致。脑缺血再灌注3 h内注射NGF,其神经功能缺损评分明显降低,凋亡率明显下降;再灌注6 h后注射NGF则无明显作用。结论NGF对兔局灶性脑缺血再灌注损伤的有效时间窗为再灌注损伤3 h内,MR影像学检查可作为定量评价基因疗效的可靠指标。     

兔局灶性脑缺血再灌注模型的建立和影像学评价

目的:建立适合影像学评价的稳定可控重复性好的兔局灶性脑缺血再灌注模型。方法:雄性新西兰白兔51只,被随机分为3组,其中A组3只,作为空白对照组;B组8只,为假手术对照组;C组40只,为缺血再灌注组。采用改良颈内动脉线栓法制作模型,用导丝造成大脑中动脉血供阻断(MCAO)2h,缺血再灌注时间点为0h、1h、3h、6h、12h、24h、3d、7d(均n=5),于各时间点对实验动物进行行为评分、磁共振成像及形态学评价。结果:空白对照组、假手术组未见异常信号,缺血再灌注组表现在左侧大脑半球颞顶叶及外侧基底节区域T2WI、DWI出现高信号区,并随缺血再灌注时间延长有逐渐增大趋势,3天后T2WI、DWI高信号范围有所减小。结论:采用该方法和技术指标能够建立稳定、可控、长期存活并适合影像学研究的局灶性脑缺血再灌注模型,为进一步开展缺血再灌注的病理生理变化的研究和MR影像学研究奠定了基础。     

EGb761对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

本实验用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型 ,观察银杏叶提取物的标准制剂 EGb76 1(含 2 4 %黄酮甙和 6 %萜烯 )对细胞凋亡以及脑缺血后脑组织病理变化的影响。1　材料与方法1.1　实验动物分组　健康 Wistar大鼠 2 0只 ,体重 2 5 0～ 30 0 g,随机分为假手术组 (A组 ) ,脑缺血再灌注组 (B组 ) ,生理盐水组治疗组 (C组 ) ,EGb76 1治疗组 (D组 ) ,每组 5只。1.2　实验方法　线栓法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型 ,假手术组仅分离血管 ,不插尼龙线。 D组于实验前 3d开始灌胃给 EGb76 1(Ginaton) ,15 0 mg/ kg,每日 2次 ,术前 1h灌…     

兔局灶性脑缺血模型研究

在局灶性脑缺血模型研究中，人们相继制作了灵长类、狗、猫、鼠等多种动物的局灶性脑缺血模型，但这些动物有的价格昂贵，有的太小，使研究工作受到一定限制。兔作为实验动物日渐受到重视，因其具有如下优点：（１）兔性情温驯，易于饲养，便于操作。其体重相对较大，复杂...     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后CAD表达与细胞凋亡的关系

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血半暗带 Caspase-3激活的 DNA酶 (CAD)基因的表达变化与细胞凋亡的关系。方法　线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞 (MCAO)及再通模型。应用 RT-PCR技术检测MCAO再通后不同时相缺血半暗带皮质 CAD基因的表达 ,同时利用 TU NEL法观察对应区域细胞凋亡的动态变化规律。结果　脑缺血再灌注 6h,半暗带皮质 CAD m RNA显著升高 ,密度比值为 0 .74± 0 .0 4,再灌注 2 4h达到高峰 (1.13± 0 .11)。对应各时相均可见神经细胞凋亡 ,凋亡细胞以再灌注 48h组为最高 (113 .10± 13 .88)。结论　脑缺血再灌注可致 CAD基因表达上调 ,可能参与了缺血后神经细胞凋亡过程     

神经生长因子对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经生长因子 (NGF)对细胞凋亡的影响。方法　应用原位缺口末端标记 (TUNEL)法检测大鼠大脑中动脉线栓法阻断 2h ,再灌注 2 2h ,细胞凋亡情况及静脉注射NGF对细胞凋亡的影响。结果　缺血 2h ,再灌注 2 2h ,梗死区可见大量凋亡细胞 (2 4 8.4 2± 2 4 .37) ,静脉注射NGF后梗死区凋亡细胞明显减少 (190 .2 5± 2 5 .4 7) (P <0 0 1)。结论　局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡增加 ,静脉给予NGF可减少脑细胞凋亡     

MRI评价改进的大鼠可逆性局灶性脑缺血模型

目的：通过ＭＲＩ来评价改进的线栓法大鼠可逆性大脑中动脉闭塞的局灶性脑缺血模型。方法：对栓线的制备及手术的操作进行改变,头端涂有石蜡的尼龙线作为栓线,从颈总动脉插入颈内动脉,阻塞ＭＣＡ,造成避灶性脑缺血。ＭＲＩ对缺血后的大鼠作间歇扫描,再灌注后作增强ＭＲＩ。     

实验性局灶性脑缺血再灌注动物模型的改进及评价

参照Ｋｏｉｚｕｍｉ和Ｌｏｎｇａ腔内线栓法制作大鼠大脑中动脉阻断（ＭＣＡＯ）模型，并予以改进：（１）根据大鼠头颈部血管铸型标本测得颈内动脉（ＩＣＡ）、大脑前动脉（ＡＣＡ）、大脑中动脉（ＭＣＡ）的内径和颈总动脉（ＣＣＡ）分叉部至ＭＣＡ起始部的距离，选择３－０单尼龙线（直径０．２０～０．２４９ｍｍ）代替Ｋｏｉｚｕｍｉ法覆以硅胶的４－０单尼龙线（直径０．１５～０．１９ｍｍ）及Ｌｏｎｇａ法单４－０尼龙线，插入深度１８．５±０．５ｍｍ。（２）仅在线栓进入时暂时夹闭翼腭动脉（ＰＰＡ），并不结扎，以防止ＩＣＡ内血栓形成，致再灌注时血流受阻。该模型成功率高达９２％，稳定性强，是较理想的实验性局灶性脑缺血模型。本文阐述了制作方法及应用评价。     

人尿激肽原酶对急性局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的 研究人尿激肽原酶(HUK)对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注(FCIR)损伤后细胞凋亡数量及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2联合X蛋白(Bax)蛋白表达的影响.方法 84只雄性SD大鼠分为假手术组(12只)、脑缺血再灌注(IR)组(36只)、HUK处理组(36只),IR组和HUK处理组剩余大鼠又按照再灌注时间6 h、12 h、24 h、72 h、168 h分为5个亚组(均为6只).建立大鼠大脑中动脉FCIR模型.假手术组、IR组及HUK处理组中各取6只SD大鼠用于测定梗死体积,其余大鼠用于观察神经功能缺陷评分、TIJNEL法及免疫组化检测凋亡细胞数量及凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 HUK处理组神经功能缺陷评分、梗死灶体积、除168 h亚组外的各时 间点的凋亡细胞数及Bax蛋白表达均显著少于IR组(P＜0.05),除168 h亚组外的各时间点的Bcl-2蛋白表达均显著高于IR组(P＜0.05).结论 HUK对FCIR后的脑组织起保护作用,其机制可能为损伤后3 d内通过上调Bcl-2、下调Bax蛋白表达来抑制细胞凋亡.     

局灶缺血诱导大鼠脑肝细胞生长因子表达的动态观察

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)在局灶脑缺血边缘区表达的动态变化及其意义。方法:采取线栓法建立局灶脑缺血模型,根据缺血时间分为1h、3h、12h、24h组,RT-PCR法检测HGF的表达及其动态变化。结果:缺血1h脑缺血边缘区即有HGF的表达,且随着缺血时间的延长其表达逐渐增强,24h尤为明显。结论:HGF在局灶脑缺血诱导的高表达可能在脑缺血损伤组织的保护及修复过程中起重要作用。     

Production of platelet-activating factor during focal cerebral ischemia and reperfusion in the rat

Platelet-activating factor (PAF) is a phospholipid mediator implicated in a diverse range of pathological processes. Beneficial effects of PAF antagonists have been shown in various models of central nervous system ischemia. In this study, we evaluated the production of PAF during focal cerebral ischemia and reperfusion in the rat. Ischemia was induced by occlusion of the middle cerebral artery with a thread. Quantification of PAF was performed with the radioimmunoassay technique. PAF was detected in the brain under normal conditions. Tissue PAF level in the ischemic cerebral hemisphere significantly decreased by prolonged ischemia (P<.05). Conversely, the decreased tissue PAF level during ischemia was significantly increased again by reperfusion (P<.05), but was still low compared with the control. This study indicates that the production of PAF in the brain tissue decreased by prolonged ischemia, and suggests the role of PAF in the reperfusion phase rather than during ischemia in the pathophysiology of ischemic brain injury.     

Dose-dependent effects of procyanidin on nerve growth factor expression following cerebral ischemia/ reperfusion injury in rats★

BACKGROUND： Recently, grape seed procyanidin （GSP） has been shown to be exhibit antioxidant effects, effectively reducing ischemia/reperfusion injury and inhibiting brain cell apoptosis. OBJECTIVE： To study the effects of GSP on nerve growth factor （NGF） expression and neurological function following cerebral ischemia/reperfusion injury in rats. DESIGN： Randomized controlled study based on SD rats. SETTING： Weifang Municipal People＇s Hospital. MATERIALS： Forty-eight healthy adult SD rats weighing 280-330 g and irrespective of gender were provided by the Experimental Animal Center of Shandong University. GSP derived from grape seed was a new high-effective antioxidant provided by Tianjin Jianfeng Natural Product Researching Company （batch number： 20060107）. Rabbit-anti-rat NGF monoclonal antibody was provided by Beijing Zhongshan Biotechnology Co., Ltd., and SABC immunohistochemical staining kit by Wuhan Boster Bioengineering Co., Ltd. METHODS： The present study was performed in the Functional Laboratory of Weifang Medical College from April 2006 to January 2007. Forty-eight SD rats were randomly divided into the sham operation group, ischemia/reperfusion group, high-dose GSP （40 mg/kg） group, or low-dose GSP （10 mg/kg） group （n = 12 per group）. Ischemia/reperfusion injury was established using the threading embolism method of the middle cerebral artery. Rats in the ischemia/reperfusion model group were given saline injection （2 mL/kg i.p.） once daily for seven days pre-ischemia/reperfusion, and once more at 15 minutes before reperfusion. Rats in the high-dose and low-dose GSP groups were injected with GSP （20 or 5 mg/mL i.p., respectively, 2 mL/kg） with the same regime as the ischemia/reperfusion model group. The surgical procedures in the sham operation group were as the same as those in the ischemia/reperfusion model group, but the thread was approximately 10 mm long, thus, the middle cerebral artery was not blocked. MAIN OUTCOME MEASURES： NGF expression in the     

流式细胞仪检测大鼠局灶性脑缺血再灌流后细胞凋亡的研究

本研究采用流式细胞仪（ＦＣＭ）检测大鼠局灶性脑缺血再灌流后凋亡细胞ＤＮＡ断裂百分率。结果表明：随再灌流时间的增加，ＤＮＡ断裂百分率逐渐增加，再灌流１ｄ时达高峰，再灌流３～７ｄ逐渐下降。结果提示：细胞凋亡在局灶性脑缺血再灌流损伤中呈动态过程且系神经细胞死亡的重要形式。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注TTC染色与MRI弥散加权成像的相关性研究

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注MRI弥散加权成像(DWI)的变化,探讨其与TIC染色变化的关系. 方法 44只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组和脑缺血2h、脑缺血6h再灌注不同时间组(0 h、0.5h、2h、6h、24 h),每组各4只.脑缺血2h组、脑缺血6h组采用线栓法制作成大脑中动脉栓塞模型.各组大鼠于不同再灌注时间点行MRI DWI扫描,结束后立即处死,取相应部位脑组织行TTC染色,观察分析其与DWI成像的关系. 结果 脑缺血2h组、脑缺血6h组再灌注0h均可见部分右侧大脑半球DWI呈高信号,表观扩散系数(ADC)值降低,TTC染色可见部分右侧大脑半球失染呈白色.缺血2h组再灌注24 h后DWI异常信号区相对面积明显变小,ADC值增大,TTC失染相对面积变小,较再灌注0h差异有统计学意义(P＜0.05),而脑缺血6h组则差异无统计学意义(P＞0.05).脑缺血6h组再灌注不同时间点较脑缺血2h组再灌注相应时间点DWI异常信号区相对面积大,ADC值低,TTC失染相对面积大,差异有统计学意义(P＜0.05).脑缺血2h组、脑缺血6h组再灌注相对应时间点DWI异常信号区面积与TTC染色失染区面积比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 脑缺血再灌注后可用MRI DWI成像评价脑缺血面积.     

不同注射VEGF途径对局灶性脑缺血再灌注大鼠侧支循环形成的影响

目的 探讨鞘内注射、静脉注射与颅内注射3种不同的血管内皮生长因子(VEGF)给药途径对局灶性脑缺血再灌注大鼠侧支循环形成的影响. 方法 健康雄性SD大鼠60只采用随机数字表法分为鞘内注射组、颅内注射组、静脉注射组、手术组和假手术组,每组12只.前4组大鼠采用改进的线栓法制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型,其中前3组大鼠造模后即刻、24 h、48 h分别于鞘内、颅内、静脉注射10 ng VEGF.造模后12h、3d对大鼠进行神经功能评分,模型后3、7、14d免疫组化染色检测各组大鼠脑梗死半影区血管内皮细胞VEGF及F8因子的表达. 结果 免疫组化染色显示鞘内注射组、颅内注射组、静脉注射组、手术组大鼠脑梗死半影区VEGF在再灌注后3d、7d、14d依次增多,差异有统计学意义(P＜0.05);造模后3、7、14d鞘内注射组、颅内注射组大鼠血管内皮细胞VEGF表达水平高于静脉注射组、手术组,而静脉注射组高于手术组,差异均有统计学意义(P＜0.05).鞘内注射组、颅内注射组、静脉注射、手术组大鼠梗死半影区F8因子在再灌注后3d、7d、14d依次增多,差异有统计学意义(P＜0.05);造模后3d、7d鞘内注射、颅内注射组、静脉注射组、手术组大鼠脑梗死半影区F8因子的表达差异无统计学意义(P＞0.05);造模后14d鞘内注射组、颅内注射组大鼠F8因子的表达高于静脉注射组、手术组,而静脉注射组高于手术组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 3种不同VEGF给药途径都可以促进局灶性脑缺血再灌注大鼠侧支循环形成,但鞘内注射与颅内注射这两种途径的干预效果优于静脉注射.     

高血压对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤组织病理结构的影响

目的研究高血压对脑缺血性损伤的病理及其超微结构的影响。方法用线栓法将肾性高血压大鼠和正常大鼠制成局灶性脑缺血再灌注模型；TTC染色及图像分析系统测定局部脑缺血后不同时间的梗死灶体积．同时HE染色及透射电镜观察大鼠局灶脑缺血再灌注后及假手术组的组织病理及超微结构的变化。结果高血压大鼠与正常血压大鼠相比局部缺血再灌注在同等时间内梗死灶的面积较大，超微结构改变也较明显。结论高血压引起脑内微小动脉的改变．侧支循环减少．加重脑缺血损伤。     

亚低温对局灶脑缺血再灌注后脑血流、血脑屏障、神经细胞损伤作用的研究

目的对比研究不同时期亚低温（ＭＨＴ３２℃±０．２℃）对局灶脑缺血再灌注损伤的作用。方法６４只雄性ＳＤ鼠被随机分成常温（ＮＴ）、缺血期亚低温（ＭＨＴｉ）、再灌注期亚低温（ＭＨＴｒ）、缺血期加再灌注期亚低温（ＭＨＴｉ＋ｒ）四组,并用改良Ｋｏｉｚｕｍｉ＇ｓ局灶脑缺血模型,分别观察了动物缺血３小时再灌注３小时过程中,缺血周边和核心区局部脑血流（ｒＣＢＦ）改变,再灌注３小时后血脑屏障（ＢＢＢ）破坏及再灌注７２小时后缺血梗塞灶体积。结果ＭＨＴｉ＋ｒ及ＭＨＴｉ均有改善缺血周边区再灌注后急性高灌注和继发低灌流及核心区持续低灌流、减轻血脑屏障破坏、减少缺血梗塞灶体积的作用。该作用尤以ＭＨＴｉ＋ｒ为明显。ＭＨＴｒ作用有限。结论ＭＨＴｉ＋ｒ对皮层的保护作用较ＭＨＴｉ好。由此可推知,局灶脑缺血再灌注损伤是个持续的过程,亚低温治疗不但要考虑开始时间,其持续时间对疗效具有同样重要价值