新型维甲酸衍生物ATPR体外诱导消化系统肿瘤细胞分化的研究

目的观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（ATPR）对胃癌细胞株SGC-7901、肝癌细胞株BEL-7402、结肠癌细胞株HT-29的生长和分化的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法,检测细胞的生长抑制率;分光光度法检测胃癌细胞分化标志酶碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶（LDH）活性和肝癌细胞分化标志酶LDH、谷酰转肽酶（γ-GT）活性;酶联免疫法检测肝癌细胞标志物甲胎蛋白（AFP）和结肠癌细胞标志物癌胚抗原(CEA)水平;流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果ATPR呈浓度依赖性抑制肿瘤细胞增殖;并使SGC-7901中ALP、LDH活性下降,BEL-7402中AFP、LDH、γ-GT水平下降,HT-29中CEA水平升高;G0/G1期细胞表达量增加,细胞周期进程受影响,细胞阻滞在G0/G1期。结论ATPR对上述三种实体瘤细胞株具有诱导分化的作用。     

羟基磷灰石纳米粒子抑制胃癌细胞生长的体内外实验研究

目的:观察羟基磷灰石纳米粒子(Hydroxyapatite nanoparticles,Nano-HAP)对胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823、MKN-28体外生长的影响及其对SGC-7901细胞皮下移植瘤裸鼠的抗瘤作用和药物毒性.方法:以不同浓度的Nano-HAP分别作用三种胃癌细胞48小时,MTT法检测其对胃癌细胞增殖的影响;以细胞划痕实验、黏附测定观察Nano-HAP对胃癌细胞侵袭力的影响;建立SGC-7901细胞皮下移植瘤裸鼠模型30只,随机分为对照组、Nano-HAP组和5-Fu组,观察每组移植瘤生长情况.结果:Nano-HAP可明显抑制胃癌细胞的增殖和生长,且呈剂量效应关系,并能降低胃癌细胞的体外侵袭和运动能力 (P＜0.05);同时可显著抑制SGC-7901细胞皮下移植瘤的生长,Nano-HAP组肿瘤体积明显小于对照组(P＜0.05),肿瘤生长抑制率达47.96%;5-Fu组抑瘤率达54.30%,但表现出明显不良反应.结论:Nano-HAP在体外和体内均可显著抑制胃癌细胞生长,并降低胃癌细胞体外侵袭和运动能力.     

全反式维甲酸对结肠癌细胞XIAP相关因子1表达的影响

目的了解全反式维甲酸对结肠癌lovo细胞XIAP相关因子1(XAF1)表达及细胞增殖的影响。方法以不同浓度的ATRA刺激lovo细胞,RT-PCR检测XAF1的mR-NA水平变化,Westernblot分析XAF1蛋白水平的表达;MTT法检测ATRA对lovo细胞生长抑制率。构建含有XAF1启动子序列荧火虫荧光素酶报告质粒,分析ATRA作用对XAF1启动子活性的影响。结果经ATRA作用,lovo细胞mRNA和蛋白的表达水平上调,细胞生长受到抑制。上述效应均具有药物浓度依赖性。报告基因分析结果显示,ATRA使含有XAF1启动子序列荧火虫荧光素酶报告质粒的虫荧光素酶的活性增加。结论ATRA通过促进启动子转录活性上调XAF1的mRNA和蛋白表达水平,并抑制结肠癌细胞的生长。     

全反式维甲酸对人肺癌细胞诱导凋亡的作用

目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对肺癌细胞生长的影响及其凋亡作用.方法:应用MTT法检测ATRA对体外培养人肺癌细胞株细胞A549的抑制率,光镜及透射电镜、流式细胞仪等检测ATRA对A549细胞诱导凋亡的作用.结果: 不同浓度的ATRA对A549细胞的增殖均有抑制作用,且量效关系明显.但大剂量主要导致细胞死亡,以10-5mol*L-1的ATRA作用效果最好,经10-5mol*L-1 ATRA作用7d后,A549细胞增殖抑制率达到60%.光镜及透射电镜下可见细胞恶性表型向正常表型发生逆转,并可观察到凋亡小体.流式细胞仪分析结果显示,ATRA处理组细胞周期延迟,G1期比例明显升高,S、G2期比例下降.结论:ATRA可抑制肺癌细胞的增殖,并诱导癌细胞凋亡.     

ATPR对ECA-109、PANC-1、HeLa细胞增殖及分化的影响

背景与目的:由于全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)存在一些不良反应,使得其进一步的临床应用受到了限制。目前,寻找具有更好疗效的维甲酸衍生物已成为研究热点。该研究旨在观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对食管癌细胞株ECA-109、胰腺癌细胞株PANC-1、宫颈癌细胞株HeLa生长和分化的影响。方法:采用MTT法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪测定细胞周期的变化;酶联免疫吸符实验(ELISA)检测食管癌细胞分化指标鳞状上皮癌相关抗原SCC-Ag活性、胰腺癌细胞标志物CA199和宫颈癌细胞标志物CA125水平。结果:ATPR能够抑制肿瘤细胞增殖;并使G0/G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,细胞阻滞在G0/G1期;ECA-109中SCC-Ag活性下降,PANC-1中CA199和HeLa中CA125水平下降。结论:ATPR对上述3种实体瘤细胞株具有不同程度的诱导分化作用。     

维生素E琥珀酸酯对人胃癌细胞增殖分化和热休克蛋白70表达的影响

背景与目的 :研究维生素E琥珀酸酯(VitaminESucciaate,VES)对人胃癌SGC_7901细胞增殖和分化作用及其可能机制。材料与方法 :采用噻唑蓝(3_[4,5_dimethylthiazol_2_yl]_2,5diphenyltetrazoliumbroide,MTT)法检测细胞的生长 ;流式细胞术检测细胞周期的分布 ;分光光度法检测分化标志酶的活性 ;WesternBlot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC_7901细胞热休克蛋白70(HSP70)的影响。 结果 :VES可抑制SGC_7901细胞的生长 ;VES作用48h可使细胞出现G0/G1期停滞 ,分化标志酶AKP、LDH活性降低 ,并使HSP70蛋白表达降低。结论 :VES可抑制SGC_7901细胞的生长并诱导分化 ,其机制可能是通过抑制HSP70的表达而使细胞发生G0/G1 期阻滞 ,从而抑制肿瘤细胞的增殖 ,诱导SGC_7901细胞发生分化。     

奥曲肽抑制胃癌细胞系SGC-7901生长的实验研究

目的　研究奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1生长的抑制作用。方法　将奥曲肽注入胃癌细胞 ,采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT )法测定细胞生长抑制效应 ,将3 H -胸腺嘧啶核苷 (3 H -TdR )掺入试验测定奥曲肽对胃癌细胞DNA合成的影响 ,显微镜下观察胃癌细胞形态变化 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期 ,并采用TRAPPCR -ELISA法对胃癌细胞端粒酶活性进行检测。结果　奥曲肽对胃癌细胞系SGC -790 1的生长及DNA合成均有抑制作用 ,显微镜下可见细胞变圆、变小、脱落 ,FCM检测结果显示奥曲肽作用后 ,G0 /G1期细胞比例增高 ,S期、G2 /M期细胞比例下降 ,端粒酶活性显著受抑制。结论　奥曲肽能明显抑制胃癌细胞系SGC -790 1的生长 ,形成G0 /G1期阻滞 ,并抑制端粒酶活性     

ATRA对甲状腺鳞癌细胞生长及RARβ和p21mRNA表达的影响

目的：观察全反式维甲酸（ATRA）对甲状腺鳞癌SW579细胞株生长增殖及维甲酸受体β（RARβ）和p21表达的影响,进而探讨维甲酸的抗癌作用机制。方法：甲状腺鳞癌SW579细胞株经不同浓度ATRA作用48h后,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;MTT法测定细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR方法检测细胞RARβ及p21 mRNA的表达。结果：随着ATRA的升高,SW579细胞的生长呈显著抑制状态,细胞生长滞留在G1期,RARβ和p21 mRNA表达水平均显著上调,呈剂量依赖性。结论：ATRA在一定浓度范围内对甲状腺鳞癌SW579细胞株有剂量依赖性的增殖抑制作用,其机制可能与提高细胞RARβ基因的表达、进而再上调p21的表达有关。     

羟基磷灰石纳米粒子抑制胃癌细胞生长的体内外实验研究

目的：观察羟基磷灰石纳米粒子（Hydroxyapatite nanoparticles,Nano—HAP）对胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823、MKN-28体外生长的影响及其对SGC-7901细胞皮下移植瘤裸鼠的抗瘤作用和药物毒性。方法：以不同浓度的Nano—HAP分别作用三种胃癌细胞48小时,MTT法检测其对胃癌细胞增殖的影响;以细胞划痕实验、黏附测定观察Nano—HAP对胃癌细胞侵袭力的影响;建立SGC-7901细胞皮下移植瘤裸鼠模型30只,随机分为对照组、Nano—HAP组和5-Fu组,观察每组移植瘤生长情况。结果：Nano—HAP可明显抑制胃癌细胞的增殖和生长,且呈剂量效应关系,并能降低胃癌细胞的体外侵袭和运动能力（P〈0．05）;同时可显著抑制SGC-7901细胞皮下移植瘤的生长,Nano—HAP组肿瘤体积明显小于对照组（P〈0．05）,肿瘤生长抑制率达47．96％;5-Fu组抑瘤率达54．30％,但表现出明显不良反应。结论：Nano—HAP在体外和体内均可显著抑制胃癌细胞生长,并降低胃癌细胞体外侵袭和运动能力。     

磷酸化JNK介导全反式维甲酸诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)抑制视网膜母细胞瘤(Rb)细胞生长并诱导其凋亡的作用及信号转导机制。方法 应用^3H—胸腺嘧啶掺人分析法观察ATRA对细胞生长的抑制作用;用流式细胞仪分析ATRA对Y79细胞周期的影响;以DNA片段凝胶电泳分析细胞凋亡;用Western blot分析c—jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化。结果 ATRA可明显抑制Y79细胞的生长,1μmol/L处理36h时,^3H—胸腺嘧啶掺人率下降达40％,Y79细胞被阻滞于G0／G1期,并出现Sub—G1峰。ATRA可诱导Y79细胞凋亡,此凋亡过程可被JNK的阻断剂Curcumin阻断;在此过程中,JNK被激活并磷酸化。结论 ATRA可抑制Y79细胞生长并诱导其凋亡,其过程是由磷酸化的JNK介导,提示ATRA可能是一种潜在的抗Rb化疗药物。     

全反式维甲酸对结肠癌Lovo细胞VEGF及其受体表达的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对结肠癌Lovo细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体的影响,为其临床应用提供理论依据.方法 MTT法观察不同浓度ATRA对结肠癌Lovo细胞株生长的抑制作用以及对外源性VEGF刺激Lovo细胞生长的抑制作用.流式细胞仪分析ATRA作用后Lovo细胞周期变化以及细胞凋亡情况.ELISA法检测ATRA作用前后细胞培养上清液中VEGF含量变化.流式细胞仪测定Lovo细胞VEGF受体表达.结果 ATRA对Lovo细胞的生长具有抑制作用,呈时间与剂量依赖性.外源性VEGF165能刺激Lovo细胞生长,ATRA能够抑制VEGF165对细胞生长的刺激作用.随ATRA作用浓度增加,细胞周期G0/G1期细胞比例从(60.10±1.27)%增加至(84.80±1.40)%;细胞凋亡率增加至(39.79±3.96)%.ATRA能抑制Lovo细胞表达VEGF及VEGF受体,呈时间与剂量依赖性.结论 ATRA具有抑制结肠癌Lovo细胞株VEGF及其受体表达的作用,抑制肿瘤细胞的生长,可能机制为阻断VEGF自分泌及旁分泌,与促进肿瘤细胞凋亡及阻滞细胞周期有关.     

携TGFβ1正、反义基因载体对膀胱癌细胞体外生长的作用

目的 :探讨表达TGFβ1正、反义基因的复制缺陷型逆转录病毒载体 ,对人膀胱癌细胞生长及细胞周期调控的作用。方法 :以逆转录病毒 pRevTRE为载体 ,构建表达TGFβ1正、反义基因的复制缺陷型逆转录病毒载体 pRevTβ和 pRevTβ AS ;分别转染膀胱癌细胞株EJ ,观察不同载体对膀胱癌细胞体外增殖、克隆形成和细胞周期时相的影响。结果 :pRevTβ、pRevTβ AS载体病毒滴度分别为 0 84、0 88× 10 5CFU/ml,对EJ细胞的整合率为10 0 % ,并有效表达 ;抑制TGFβ1表达可以降低靶细胞的生长速度和克隆形成率 ,同时出现G0 /G1期细胞比例增高和S期细胞比例降低。结论 :携TGFβ1反义基因的复制缺陷型逆转录病毒载体可以下调EJ细胞内源性TGFβ1表达 ,诱导肿瘤细胞G1期阻滞 ,抑制肿瘤细胞体外生长增殖。     

cyclin D1反义寡核苷酸对胃癌细胞生长和G1期调控的影响

目的：研究cyclin D1反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌细胞SGC7901和HS746T的生长、细胞周期和G1期调控的影响。方法：采用脂质体Lipofect AMINE2000包裹硫代修饰的cyclin D1 ASODN转染细胞，观察量效曲线和生长曲线，应用RT-PCR检测cyclin D1 mRNA的表达，流式细胞仪检测细胞周期，并用免疫组织化学技术检测胃癌细胞中cyclin D1、p21、p27、pRb蛋白的表达。结果：cyclln D1 ASODN对胃癌细胞产生剂量依赖性的抑制效应，0．2μmol/L cyclin D1 ASODN转染24h能显著抑制胃癌细胞生长，cyclin D1 mRNA表达分别是对照组的26．3％(SGC7901)和17．3％(HS746T)，G0／G1期比例明显增加，并使2种细胞中cyclin D1、pRb表达降低，p21表达升高，在HS746T中p27表达下降，但在SGC7901中p27表达无改变。结论：cyclin D1反义寡核苷酸能有效抑制胃癌细胞的生长，降低cyclin D1 mRNA表达水平，并能影响细胞周期及其调控的表达。     

RhoA亚家族与胃癌细胞恶性表型的关系

目的:研究RhoA亚家族成员RhoA、RhoB和RhoC对胃癌细胞恶性表型的影响。方法:系用脂质体介导法分别将编码正显性RhoA突变体(V14RhoA)与野生型RhoB(wt-RhoB)和RhoC(wt-RhoC)的真核表达载体转染入胃癌SGC7901细胞中,筛选出稳定抗性克隆,并检测转染细胞的生物学行为的变化。结果:RhoA活性增强可促进胃癌细胞的增殖,而降低对化疗药物的敏感性;上调RhoB表达抑制胃癌细胞的增殖,增强对化疗药物的敏感性;上调表达RhoC则对胃癌细胞的增殖及对化疗药物的敏感性无明显的影响,但可明显促进胃癌细胞的迁移。结论:RhoA亚家族分子参与了胃癌生长、耐药及转移等多个方面,其家族中不同分子作用不同。     

蚯蚓纤溶酶增加胃癌细胞对放射线敏感性的实验研究

目的探讨蚯蚓纤溶酶对胃癌细胞株MGC803的放射增敏作用及机制。方法采用克隆形成实验观察蚯蚓纤溶酶的放射增敏作用;流式细胞术观察药物对胃癌细胞株MGC803周期分布的影响;RT-PCR法检测药物对细胞内硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGPx)基因表达的影响。结果蚯蚓纤溶酶对胃癌细胞有放射增敏效应,100uku/L、300uku/L蚯蚓纤溶酶的放射增敏比分别为1.06和1.14。射线照射后MGC803细胞发生G1期阻滞,蚯蚓纤溶酶对细胞G1期阻滞无明显影响;PCR检测发现射线可诱导的SeGPxmRNA表达下调,蚯蚓纤溶酶能够增强射线诱导的SeGPxmRNA表达下调作用。结论蚯蚓纤溶酶能够增加胃癌细胞对放射线的敏感性,增敏机理可能与药物下调细胞内抗氧化酶SeGPx基因表达有关。     

bcl-xs基因对卵巢癌的作用及其凋亡机制的研究

目的 :研究全反式维甲酸 (ATRA)抑制视网膜母细胞瘤 (Rb)细胞生长的作用及信号转导机制。方法 :应用3 H 胸腺嘧啶掺入分析法观察ATRA对细胞生长的抑制作用 ,用流式细胞仪分析ATRA对Y79细胞周期的影响 ,用Westernblot分析c jun氨基末端激酶 (JNK)的磷酸化。 结果 :ATRA可明显地抑制Y79细胞的生长 ,10 -6mol·L-1ATRA处理 36h时 ,3 H 胸腺嘧啶掺入率下降达 4 0 % ,此条件下 ,Y79细胞被阻滞于G0 /G1期 ,并出现Sub G1峰 ;此生长抑制过程可被JNK的阻断剂Curcumin阻断 ;在此过程中 ,JNK被激活 ,磷酸化。结论 :ATRA可抑制Y79细胞生长 ,其过程是由磷酸化的JNK介导。提示 ,ATRA可能是一种潜在的抗视网膜母细胞瘤治疗药物     

全反式维甲酸联合射线对食管癌细胞TE13增殖及凋亡的影响

目的:研究全反式维甲酸( all-trans-retinoicacid,ATRA)联合放射线照射对食管癌TE13细胞增殖、凋亡的影响及可能的作用机制.方法:采用MTT法检测ATRA对人食管癌细胞TE13增殖的影响;以其对TE 13细胞生长抑制率(inhibitory rate,IR)达25％、50％和75％时的ATRA的浓度分别联合γ-射线进行分组处理细胞;FCM法分析ATRA单药及联合放射治疗对TE13细胞周期及凋亡的影响;采用克隆形成实验分析对克隆形成率和细胞存活率的影响;采用FCM法检测cyclinD1蛋白的表达.结果:ATRA对TE13细胞有增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;ATRA浓度为0.78、6.25和12.5 μmol/L作用48 h后,其对TE13细胞的IR分别达到22.0％、55.1％和71.1％.ATRA联合γ-射线(4 Gy)与ATRA单药组比较,可明显降低TE13细胞的存活率和克隆形成率;ATRA联合γ-射线(4 Gy)处理TE13细胞24和48 h后,细胞增殖能力明显下降,更多的细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率明显增加,与ATRA单药组比较,联合放射治疗可明显增强对TE13细胞周期和凋亡的影响;ATRA浓度为0.78 μmol/L时和γ -射线联合作用对细胞周期cyclinD1蛋白表达量影响不大,但ATRA浓度为6.25和12.5 μmol/L时则能明显下调cyclinD1的表达.结论:ATRA对TE 13细胞具有明显的增殖抑制作用,其可能通过下调cyclinD1蛋白的表达,将TE13细胞阻断于G0/G1期并诱导细胞凋亡.在ATRA浓度较高时联合放疗,能显著下调cyclinD1蛋白表达,加强细胞G0/G1期阻滞及促进凋亡,抑制细胞克隆的形成能力;在ATRA浓度较低时联合放疗对原代细胞cyclinD1蛋白表达量的影响较小,但对促进细胞凋亡、抑制细胞克隆仍有一定的效果,其损伤效应可能需要一定时间.     

视黄酸对胃癌细胞的诱导分化及其相关酶活性的影响

研究视黄酸对胃癌细胞的诱导分化及其相关酶活性的影响。方法１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ的反式视黄酸处理胃癌细胞株ＢＧＣ－８２３和ＭＫＮ－４５,用流式细胞术检测细胞周期的分布以酶标仪测定相关分化标志酶的活性,用＾Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定ＤＮＡ合成速度和ＭＴＴ法检测细胞的生长。结果ＡＴＲＡ使用ＢＧＣ－８２３细胞出现,Ｇ０／Ｇ１期停滞,分化标志酶ＬＤＨ、ＡＬＰ和β－Ｇ的活性下降,抑制率分别为２２．４％,３２．９４％和     

红景天苷对胃癌细胞NU-GC-3凋亡及TGFβ1蛋白表达的影响

[目的]研究红景天苷对胃癌细胞NU-GC-3增殖的影响。[方法]细胞计数法、MTT法、流式细胞术检测分析不同浓度红景天苷对胃癌细胞NU-GC-3增殖的抑制作用,相差显微镜下观察形态学改变。RT-PCR、WesternBlot法分别检测加药组(20μg/ml红景天苷)和不加药组TGFβ1mRNA以及蛋白的表达水平。[结果]加药组细胞S期、G2/M期细胞数、增殖指数PI显著低于对照组,而细胞凋亡百分比、G0/G1期细胞数则显著高于不加药组。加药组TGFβ1mRNA以及TGFβ1蛋白的表达水平均高于不加药组。[结论]红景天苷对胃癌细胞NU-GC-3具有抑制其增殖并诱导其凋亡的作用。红景天苷作用于NU-GC-3细胞后明显促进了TGFβ1mRNA以及TGFβ1蛋白的表达。     

全反式维甲酸体外诱导神经母细胞瘤细胞分化研究

[目的]观察全反式维甲酸（all trans retinoic acid,ATRA)体外对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长的影响并对其作用机制进行初步探讨。[方法]SK-N-SH细胞经ATRA处理后，采用相关显微镜，神经纤维银染法，透射电镜观察，逆转录PCRmRNA检测等手段，观察ATRA对SK-N-SH细胞生长的影响。[结果]ATRA作用SK-N-SH细胞12天后，细胞形态发生显著变化。表现为明显分化；出现神经原性表型，多个细胞形成神经节，节间形成粗而长的类神经纤维；尼氏小体和银染法亦证明SK-N-SH细胞产生显著分化，透射电镜观察结果表明，ATRA对该细胞无明显凋亡诱导作用，ATRA对SH细胞的维甲酸受体-β（RARβ）表达水平有上调作用。[结论]ATRA对神经母细胞瘤细胞体外能产生明显诱导分化作用，此作用与ATRA上调细胞的RARβmRNA水平有关。