人原发性肝癌血管内皮细胞的分离培养及鉴定

目的建立人原发性肝癌血管内皮细胞体外分离培养体系并研究其体外特性.方法利用酶消化法分离出肝癌组织微血管片段,采用植块培养法培养原代内皮细胞,依次以局部消化法和差速黏附法进行纯化;应用光镜、透射电镜和免疫细胞化学等技术对所获得的人原发性肝癌血管内皮细胞进行鉴定.结果所获人肝癌血管内皮细胞呈FⅧ-RAg阳性;CD34,CD105阳性;电镜下可见Weibel-Palade小体;生长状态良好、可传代培养.结论本研究摸索并建立了人肝癌血管内皮细胞的分离培养方法,所获人肝癌血管内皮细胞对肿瘤血管生成及抗肿瘤药物的研究具有重要价值.     

猪血管内皮细胞的培养与表型鉴定

目的: 原代培养猪血管内皮细胞并纯化和成功传代.方法:自乳猪活体状态下获取腹主动脉,以胶原酶消化、培养PAEC,观察细胞形态、贴壁率,以DiI-Ac-LDL吸收试验进行细胞类型的鉴定.结果:原代PAEC贴壁率约90%,培养至第2代即可获得纯化的PAEC,第5代至第12代细胞增殖较快,形态正常,呈圆形、短梭形和三角形,DiI-Ac-LDL吸收试验阳性.结论:通过活体状态下获取血管、控制杂细胞污染的途径以及合理选择酶消化法可以有效快捷地获得纯化的PAEC并稳定传代.     

人脐静脉血管内皮细胞的培养和鉴定

目的: 建立血管内皮细胞体外培养的模型,为研究内皮细胞提供重要的实验方法.方法: 采用0.1%I型胶原酶消化灌注脐静脉,在37 ℃水浴箱内孵育18～20 min,离心后向沉淀内加入L-DMEM培养液(含10 mg/L内皮细胞生长因子),吹打成单细胞悬液,放入预铺1.5%明胶的培养瓶内,在CO2培养箱中培养,48 h后换液1次,以后每2～3 d换液1次,每天在倒置相差显微镜下观察细胞,免疫组织化学法进行Ⅷ因子相关抗原鉴定.结果: 经胶原酶消化法获得的细胞经过镜下观察和Ⅷ因子相关抗原鉴定证明是脐静脉内皮细胞.结论: 用胶原酶消化法是获得血管内皮细胞的一种好方法,获得的细胞数量多、成活率高.     

小鼠动脉血管内皮细胞的原代培养和鉴定

目的探讨小鼠动脉血管内皮细胞分离、培养的方法,为进一步实验研究提供相应的技术手段。方法手术显微镜辅助下取小鼠主动脉,去除外膜及脂肪组织,将血管剪成1 mm×1 mm大小的组织块,用植块法在含20%胎牛血清的DMEM培养液中培养。倒置相差显微镜观察细胞形态和生长特征,免疫细胞化学方法进行血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原(von Willebrand factor,vWF)鉴定。结果60 h后,相差显微镜下可观察到内皮细胞从组织块边缘游出,12天左右细胞开始融合成片,免疫染色相关抗原检测呈阳性。结论用组织块培养方法可以获取较为满意的小鼠血管内皮细胞。     

个体特异性豚鼠动脉血管内皮细胞的分离,培养及鉴定

鉴于国内获得近交系豚鼠较为困难，比介绍一种新的获取个体特异性及鼠血管内皮细胞的方法并对其有关生长条件进行探讨。发现切取豚鼠一侧颈动脉经Ⅱ型胶原酶消化可以有效地获取血管内皮细胞闪保证供血管豚鼠的存活，生长因子为其稳定生长的重要条件，个体特异性豚鼠血管内皮细胞的成功分离和培养为相关的活体实验提供了良好的条件。     

人非小细胞肺癌血管内皮细胞的分离培养及鉴定

目的:建立人非小细胞肺癌血管内皮细胞体外分离培养体系,研究其体外生长特性。方法:利用酶消化法分离出肺癌组织微血管片段,采用植块培养法培养原代内皮细胞,先后以局部消化法和差速黏附法进行纯化;应用光镜、免疫细胞化学及免疫荧光技术对所获得的人肺癌血管内皮细胞进行鉴定。结果:所获人非小细胞肺癌血管内皮细胞呈FⅧ-RAg、CD34阳性;电镜下生长状态良好、可传代培养。结论:本研究摸索并建立了人非小细胞肺癌血管内皮细胞的分离培养方法,所获人非小细胞肺癌血管内皮细胞对肿瘤血管生成及抗肿瘤药物的研究具有重要价值。     

IKKε基因敲除小鼠血管内皮细胞的原代培养及鉴定

目的:建立简单有效地获取I?资B激酶复合物?着(inhibitor-?资B kinase ?着,IKK?着)基因敲除小鼠血管内皮细胞的培养方法?方法:在超净台中取小鼠主动脉,撕去其外膜和脂肪组织,纵行剖开血管,切成1 mm × 1 mm的血管块,内面朝下贴于培养皿底部,加入含内皮细胞生长辅助因子(ECGS)的DMEM培养液,贴壁培养;用倒置显微镜观察细胞形态并用Ⅷ因子相关抗原免疫荧光的方法进行鉴定?结果:72 h后在倒置显微镜下可见内皮细胞从血管块边缘游出,12~14 d血管内皮细胞融合成片,Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检测呈阳性?结论:本方法可获取纯度高?结构和功能良好的IKKε基因敲除小鼠血管内皮细胞?     

小鼠肺微血管内皮细胞培养及鉴定

目的:建立小鼠肺微血管内皮细胞体外分离培养方法及对微血管内皮细胞的鉴定.方法:取小鼠肺组织边缘剪成小块,用含有20%新生牛血清、肝素90μg/mL、L-谷胺酰胺4 mmoL/L、青霉素200 U/mL和链霉素200μg/mL的RPMI-1640培养基进行培养.纯化细胞进行Ⅷ因子相关抗原间接免疫组化染色和透射电镜观察Weilel-palade小体.结果:获得的内皮细胞具有规律的鹅卵石样形态,Ⅷ因子相关抗原间接免疫组化染色阳性而且在透射电镜观察到Weilel-palade小体.结论:成功建立了小鼠肺微血管内皮细胞体外培养方法,并为体外研究肺微血管内皮细胞提供实验模型.     

大鼠乳鼠腹主动脉血管内皮细胞的培养与鉴定

目的：研究大鼠乳鼠腹主动脉血管内皮细胞的培养与鉴定方法。方法：取出生5~7d左右的大鼠乳鼠的腹主动脉血管,用组织块法在含20%胎牛血清及内皮细胞生长添加剂和肝素的DMEM培养基中培养,倒置相差显微镜观察内皮细胞形态和生长特征,免疫荧光方法进行血管内皮细胞Tie2相关抗原的鉴定。结果：来自于大鼠乳鼠腹主动脉的血管内皮细胞在改良的培养基中进行体外培养,能够保持增殖和传代的能力,且Tie2抗原鉴定呈阳性。结论：成功分离大鼠乳鼠腹主动脉组织并且获得体外原代培养大鼠乳鼠腹主动脉内皮细胞。用组织培养方法可以获得较满意的血管内皮细胞。     

人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定

目的:摸索人脐静脉内皮细胞体外培养的方法和注意事项。方法:采用0.25%胰蛋白酶分离人脐静脉内皮细胞,用含20%FBS的DMEM培养基培养,待细胞80%融合后,以0.25%胰蛋白酶消化传代,并以倒置显微镜观察内皮细胞的生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果:原代培养的细胞在接种4h后开始贴壁生长,3～5天后融合成单层,倒置显微镜下观察细胞呈铺路石状排列,免疫组化显示人第Ⅷ因子相关抗原阳性。结论:用胰蛋白酶消化脐静脉可获得内皮细胞且成活率较高,是一种可靠的方法。     

兔脑微血管内皮细胞的培养及鉴定

目的：建立简便、有效的兔脑微血管内皮细胞体外原代培养方法。方法：兔脑皮质通过匀浆、过筛分离处理后接种，原代培养兔脑微血管内皮细胞，并通过Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色和透射电镜观察鉴定。结果：培养的细胞呈典型的“铺路石”状生长，Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色为阳性。结论：该方法可方便获取较纯净的脑微血管内皮细胞。     

兔血管内皮细胞的培养及生物学特性

目的 为构建组织工程血管提供种子细胞.方法 兔麻醉取主动脉,采用酶消化法培养血管内皮细胞并传代,倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜观察和免疫组织化学鉴定.结果 培养出血管内皮细胞并传代,倒置显微镜下血管内皮细胞呈“鹅卵石”形态,扫描电镜显示“铺路石”样生长,透射电镜可见内皮细胞特征性W-P小体,免疫组织化学鉴定Ⅷ因子（＋）.结论 兔血管内皮细胞培养成功,本法可为组织工程血管的研究提供细胞来源.     

人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定

目的　探讨新生儿脐静脉内皮细胞的培养及鉴定方法 ,建立血管内皮细胞培养模型 ,为体外研究血管内皮细胞提供实验手段。方法　采用胶原酶Ⅱ灌流消化法培养人脐静脉内皮细胞 ,当原代培养细胞 80 %以上汇合后 ,用胰蛋白酶消化传代 ;根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和分泌蛋白流式细胞术 (FM术 )免疫荧光检查对细胞进行鉴定。结果　种植在培养瓶中的内皮细胞 12小时贴壁生长 ,48～ 72小时生长最快 ,7～ 10天汇合。内皮细胞呈接触抑制生长、呈鹅卵石样外观 ,FM术检测CD3 1和VⅢ -R -Ag均为阳性表达。 结论　消化酶灌注脐静脉消化内皮细胞是获取血管内皮细胞的一种好方法 ,可靠性大 ,成功率高 ,可以构建体外研究血管内皮细胞的模型     

人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定

目的：摸索人脐静脉内皮细胞体外培养的方法和注意事项。方法：采用0．25％胰蛋白酶分离人脐静脉内皮细胞,含20％FBSDMEM养基培养,待细胞80％融合后,以O．25％胰蛋白酶消化传代,并以倒置显微镜观察内皮细胞的生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果：原代培养的细胞在接种4h后开始贴壁生长,3－5天后融合成单层,倒置显微镜下观察细胞呈铺路石状排列,免疫组化显示人第Ⅷ因子相关抗原阳性。结论：用胰蛋白酶消化脐静脉可获得内皮细胞且成活率较高,是一种可靠的方法。     

肿瘤源性血管内皮细胞的培养及其细胞生物学特性鉴定

目的 探讨肿瘤来源血管内皮细胞的诱导和体外培养方法,并对其进行细胞生物学特性鉴定.方法 胰蛋白酶灌流消化法收集人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用肿瘤细胞的培养上清液诱导HUVEC增殖,制备肿瘤衍生的血管内皮细胞( Td-EC).采用形态学观察和荧光染色Ⅷ因子相关抗原,鉴定血管内皮细胞,用RT-PCR检测肿瘤血管内皮细胞标志物(TEM)的表达,采用迁徙试验、透射电镜、流式细胞仪细胞周期分析等方法检测、比较HUVEC和Td-EC的生物学特性.结果原代培养的HUVEC约于24h完全贴壁,4～5d 后融合成单层铺路石样结构.Ⅷ因子荧光染色证实培养的细胞是HUVEC.经肿瘤细胞上清液诱导后,用RT-PCR检测到TEM1和TEM8 mRNA在Td-EC中的表达;Td-EC细胞迁徙能力较HUVEC显著增强;Td-EC细胞增生活跃,G0～S期细胞比例明显增高,具有肿瘤血管内皮细胞特性.结论胰蛋白酶灌流消化法可获得大量连续传代扩增的HUVEC,并可诱导生成肿瘤源性的血管内皮细胞.     

抗血管内皮细胞生长因子受体单抗的制备及鉴定

目的：制备血管内皮细胞生长因子受体（ｋｉｎａｓｅｉｎｓｅｒｔｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＫＤＲ）的单克隆抗体并鉴定其特异性。方法：在大肠杆菌中表达重组ＫＤＲ融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞，用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ＥＬＩＳＡ双筛和ＳＰ免疫组化筛选并鉴定其亚类。结果：经ＥＬＩＳＡ双筛和组化筛选获得了一株能稳定分泌人ＫＤＲ单克隆抗体的杂交瘤细胞株（命名为ＳＳＷ２），其分泌抗体亚类为ＩｇＧ１，产生的腹水效价可达１×１０－６。结论：ＳＳＷ２同血管内皮细胞尤其是肿瘤组织的血管内皮细胞有较强的阳性反应。     

血管内皮细胞的滤膜培养方法

建立，稳定内皮细胞滤膜培养的模型。方法；分组比较不同明胶浓度处理滤膜，不同种植密度及孵育时间，不同孔径滤膜对内皮细胞生长的影响，从而确定滤膜培养的各实验条件。．结果：不同明胶浓度处理滤膜，不同种植密度不同育时间对内皮细胞生长的影响差异显著不同孔径滤膜对内皮细胞的影响差异不显著。结论：用１‰明胶处理滤膜，１０＾５／ｃｍ２的种植密度及孵育２ｄ即可获得较好结果。     

兔颈静脉血管内皮细胞的培养

目的建立稳定的兔颈静脉血管内皮细胞的体外培养方法,为自体的细胞移植提供种子细胞.方法取单侧兔颈静脉,保留对侧;用0.25%胰蛋白酶液进行灌注消化;M199培养基进行培养;Ⅷ因子相关抗原免疫组化进行血管内皮细胞鉴定.结果培养后1-3 d可见细胞贴壁,3 d后细胞变形,7-10 d细胞融合成片,14 d后可进行传代培养;Ⅷ因子相关抗原免疫组化阳性,证实所培养的细胞为血管内皮细胞;取材后实验兔一直存活,未出现死亡.结论本实验方法可以稳定地获取体外培养的兔颈静脉血管内皮细胞,并保证了实验兔的存活,为后续自体细胞移植的开展创造了条件.     

增生期血管瘤血管内皮细胞培养

血管内皮细胞（ＶＥＣ）体外培养是研究血管形成的重要手段,通常采用大血管内膜或组织中微血管进行ＶＥＣ培养,但技术要求高,培养不易存活或传代。为提供更理想的血管生成的体外模型,我们选择增生期血管瘤按组织块法培养ＶＥＣ,并改良培养液配方。材料和方法标本来源...