Celecoxib对非小细胞肺癌细胞株A549增殖与凋亡的研究

目的探讨选择性COX-2抑制剂Celecoxib对非小细胞肺癌细胞株A549增殖与凋亡方面的作用。方法对非小细胞肺癌细胞株A549使用MTT法测定细胞生长抑制率;Hoechest33258荧光染色观察细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期分布。结果Celecoxib对抑制A549细胞增殖的IC50值为14.7μmol/l;Celecoxib对A549细胞的毒性较大程度上是通过诱导NSCLC细胞的凋亡,Celecoxib5-40μmol/l作用12-48hr的凋亡比率为2.1￣44.3%。结论COX-2抑制剂Celecoxib在体外能诱导非小细胞肺癌细胞发生凋亡,抑制细胞增殖。     

MicroRNA 122促进吉西他滨对体外非小细胞肺癌细胞系A549的杀伤作用

目的 探讨microRNA 122（miRNA122）对细胞毒性化疗药吉西他滨对体外杀伤非小细胞肺癌细胞株的影响.方法 利用脂质体转染miRNA122的表达载体;CCK-8测定系列浓度梯度吉西他滨检测对非小细胞肺癌细胞株A549的抑制率,计算IC50值;平板克隆实验检测吉西他滨对A549细胞杀伤的影响;流式细胞仪-Annexin/PI双染实验检测吉西他滨诱导A549细胞凋亡率.结果 吉西他滨对A549细胞具有明显地体外杀伤作用,其IC50值为（78.65±5.25）nmol/L,转染miRNA122能够上调吉西他滨的活性,其IC50值为（10.26±1.18）nmol/L;流式细胞术结果显示：A549细胞凋亡率诱导转染空载体组为26.24％±1.94％,诱导转染miRNA122组为63.30％±3.96％.miRNA122能够显著上调吉西他滨诱导A549细胞凋亡率.RT-PCR和蛋白印迹实验表明,转染miRNA122能够显著上调A549细胞内miRNA122的表达水平,降低miRNA122靶基因和调控基因的表达水平.结论 miRNA122能够上调吉西他滨对非小细胞肺癌细胞系A549的体外杀伤作用.     

羟基喜树碱抑制肺癌A549细胞的体外增殖并下调Bcl-2基因的表达

摘要：目的研究羟基喜树碱对肺癌A549细胞生长抑制、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法羟基喜树碱处理A549细胞后用吖
啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶检测DNA片段化,用流式细胞仪测定其对细胞周期影响。利用
Annexin V-FITC/PI 检测细胞凋亡,RT-PCR 检测凋亡相关基因Bcl-2 的表达变化。结果A549 细胞经羟基喜树碱作用,提取
DNA进行琼脂糖凝胶电泳可见梯状条带。经AO/EB染色,荧光显微镜下观察到早期凋亡细胞细胞核被染成绿色,呈碎片状,晚
期凋亡细胞核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状,细胞周期S期由20%升高到60%。经1 μmol/L 羟基喜树碱处理24 h后,流
式细胞术显示A549细胞的凋亡率为18.11%,明显高于对照组细胞凋亡率（0.09%,P<0.05）。经羟基喜树碱作用后,A549细胞
Bcl-2基因表达下调70%（P<0.05)。结论羟基喜树碱可以明显抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,并下调Bcl-2基因表达,提示
Bcl-2下调参与了羟基喜树碱对A549细胞的抑制作用。
     

Smac在顺铂促非小细胞肺癌细胞株凋亡中的作用

目的 探讨Smac在顺铂诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株凋亡中的作用.方法 不同浓度顺铂刺激NSCLC细胞株A549,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,Annexin V/P双染流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR、Western blotting检测Smac mRNA及蛋白表达.结果 顺铂对A549细胞株具有增殖抑制作用,且呈浓度依赖性.顺铂对A549细胞株具有促凋亡作用,且呈浓度依赖性.顺铂作用后,Smac的mRNA及蛋白表达增加,且呈浓度依赖性.结论 smac在顺铂诱导NSCLC细胞株A549凋亡过程中,可能起到促凋亡的作用.     

5-烯丙基-7-二氟甲基白杨素诱导肺癌A549细胞生长抑制和凋亡

目的:研究5-烯丙基-7-二氟甲基白杨素(ADFMChR)诱导人肺癌细胞(A549)细胞生长抑制和凋亡的作用。方法:体外培养人肺癌A549细胞,平皿集落形成法测定细胞锚定依赖性生长能力,软琼脂集落形成法测定细胞非锚定依赖性生长能力,流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞凋亡率;凝胶电泳观察凋亡细胞的基因DNA梯形条带。结果:平皿集落形成法和软琼脂集落形成法结果显示ADFMChR呈剂量依赖性抑制A549细胞生长,FCM分析发现ADFMChR呈剂量依赖性诱导A549细胞凋亡;ADFMChR(10μg/mL)孵育A549细胞48h后,DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型梯形条带。结论:ADFMChR具有抑制人肺癌A549细胞生长和诱导凋亡作用。     

川陈皮素诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡的研究

目的：探讨川陈皮素（5，6，7，8，3′4′-hexamethoxyflavone）促非小细胞肺癌A549细胞凋亡的作用。方法：以不同浓度的川陈皮素作用于A549细胞，分别用细胞生长曲线、集落形成抑制实验研究川陈皮素对A549的增殖抑制作用，Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态变化，DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡，流式细胞术观察细胞周期改变。结果：生长曲线提示川陈皮素对A549细胞的抑制作用呈明显的时效和量效关系；集落形成抑制实验表明：药物浓度10μg/mL～40μg/mL对A549集落形成抑制率为10％～50％。Hoechst33258染色后细胞、细胞核出现明显的凋亡形态学变化；DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型DNA梯状务带。流式细胞仪检测到细胞周期阻滞于G2／M期，G0／G1期细胞明显减少；随着刑量的增加凋亡率明显增高。结论：川陈皮素可以诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡。     

鸦胆子油乳注射液体外抑制肺腺癌耐药株A549/DDP增殖作用的研究

目的 探讨鸦胆子油乳注射液对肺腺癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药株(A549/DDP)体外增殖作用的影响.方法 体外培养A549/DDP细胞,MTT法检测鸦胆子油乳注射液对人A549/DDP细胞的抑制作用.流式细胞仪检测鸦胆子油乳注射液对A549/DDP细胞周期和凋亡率的影响.结果 MTT法表明鸦胆子油乳注射液对A549/DDP的细胞抑制率呈剂量依赖性.流式细胞仪证明鸦胆子油乳对其增殖,细胞周期及凋亡率有明显抑制效果.结论 鸦胆子油乳注射液能抑制A549/DDP耐药细胞株的增殖,引起细胞周期阻滞,诱导凋亡.     

Bcl-2家族在阿司匹林诱导人小细胞肺癌A549细胞凋亡中的作用

摘要 目的: 研究阿司匹林对人小细胞肺癌A549细胞体外增殖抑制作用及凋亡的影响,探究Bcl-2在诱导凋亡机制中的作用。方法:运用体外细胞培养,阿司匹林以不同浓度（1,2.5,5,7.5,10mmol/L）作用于人小细胞肺癌A549细胞。采用噻唑蓝(MTT)法测定阿司匹林对细胞杀伤率;用流式细胞检测法测定细胞周期时相改变及细胞凋亡率;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder 现象;Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2等表达;荧光染色观察细胞线粒体膜电位的改变。结果：阿司匹林对人小细胞肺癌A549细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和剂量依赖性;可使A549细胞G0/G1期和G2/M期比例明显下降,S期比例升高;诱导细胞凋亡发生;阿司匹林作用A549细胞后,Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,Caspase3活化,线粒体膜电位改变。结论：阿司匹林在体外可有效抑制人小细胞肺癌A549细胞增殖,可能通过影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布、诱导凋亡发挥抑制细胞增殖作用,其凋亡机制与Bcl-2表达减少,线粒体膜跨膜电位下降相关。     

三氧化二砷对人肺癌A549细胞凋亡及耐药基因表达影响的实验研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人肺癌细胞株的诱导凋亡作用及对耐药基因LRP表达的影响。方法:选用人肺腺癌A549细胞株,运用体外细胞培养法,MTT法,流式细胞术检测As2O3对人肺癌细胞株抑制及诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测LRPmRNA的表达。结果:As2O3对人肺癌A549细胞具有抑制作用,其抑制率呈时间-剂量依赖关系。不同浓度的As2O3均可诱导凋亡。1.0μmol/L、3.0μmol/L的As2O3可下调LRP mRNA的表达。结论:As2O3具有抑制肿瘤细胞生长及诱导细胞凋亡作用,其机制与下调LRPmRNA表达有密切关系。     

苯乙酸钠对肺癌A549细胞生长的影响

目的:研究抗肿瘤药物苯乙酸钠(NaPA)对体外培养的人肺腺癌细胞株A549抑制率、细胞周期和凋亡的影响。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色、流式细胞仪等方法,观察不同浓度NaPA对人肺腺癌A549细胞株生长、细胞周期和凋亡的影响。结果:NaPA对A549有明显的生长抑制作用,且呈剂量时间依赖性,最大抑制率可达79%。NaPA可阻滞A549细胞的细胞周期,使G1/G0期细胞增多,S期细胞减少,同时诱导A549细胞的凋亡,凋亡率最高可达30.5%。结论:苯乙酸钠抑制A549细胞生长,其抑制作用可能是通过NaPA使细胞周期抑制于G1/G0期和诱导细胞凋亡而实现。     

吉西他滨联合多西紫杉醇对非小细胞肺癌细胞株的效应

目的 了解吉西他滨(gemcitabine)联合多西紫杉醇(docetaxel)对非小细胞肺癌细胞株的效应。方法经细胞生长抑制实验和四唑氮氢氧化物(XTT)检测得出细胞生存率，用等效应图(Isobologram)分析得出两药各设计浓度在50％生长抑制浓度(IB50)中的联合效应。结果吉西他滨联合多西紫杉醇在肺腺癌细胞株(A549)的生长抑制实验中，11个ID50效应点中8个落在等效应图的拮抗效应区。在肺鳞癌细胞株(EBC-1)的生长抑制实验中，有效的6个ID50效应点中5个落在等效应图的“相加”区和“超相加”区。结论在体外实验中吉西他滨联合多西紫杉醇对人肺鳞癌细胞株具有“相加”和“超相加”效应，而对人肺腺癌细胞株则产生拮抗效应。     

得力生诱导肺癌细胞株A549细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响

目的探讨中成药得力生诱导肺癌细胞株A549细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响。方法采用MTT法测定细胞增殖抑制率,在显微镜下观察细胞凋亡的形态特点,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用逆转录聚合酶连反应（RT—PCR）法测定survivin mRNA的表达。结果（1）得力生在4mL／L-100mL／L浓度范围内可抑制A549细胞增殖,此作用与药物体积浓度无明显相关关系,但该作用具有时间依赖性（r=0．991,P=0．001）。（2）20mL／L浓度的得力生在体外可诱导A549细胞凋亡,且其作用具有时间依赖性（r=0．997,P=0．049）。（3）RT—PCR结果显示,得力生可明显抑制A549细胞中表达survivin,与对照组相比,差异具有统计学意义（r=4．333,P〈0．05）。结论得力生可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与抑制survivin基因表达有关。     

羟基喜树碱对人骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞体外作用的研究

目的 观察羟基喜树碱对人骨髓增生异常综合征（MDS）MUTZ-1细胞体外生长的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法，测定羟基喜树碱对人骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞生长的抑制作用，并绘制浓度-抑制率曲线；采用流式细胞技术检测药物诱导的凋亡细胞量；光镜及透射电镜观察羟基喜树碱处理后细胞形态学的变化。结果羟基喜树碱对MUTZ-1细胞生长抑制作用呈现剂量和时间依赖性，其作用不同时间的半数抑制浓度（IC50）分别为91．198、8．983、6．204、2．509、0．364。羟基喜树碱可诱导MUTZ-1细胞凋亡，呈现剂量依赖性。光镜下可见凋亡细胞胞膜完整、胞体固缩、核固缩、核染色质碎裂；透射电镜下可见凋亡细胞核染色质凝聚、边集，部分细胞核膜消失，细胞浆浓缩、密度增加，浆内可见大小不规则的染色质团块。结论羟基喜树碱对MUTZ-1细胞生长有明显的抑制作用，并可诱导MUTZ-1细胞凋亡。     

沉默APE1对非小细胞肺癌细胞的放射敏感性的影响研究

目的 研究脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶-1（APE1）对非小细胞肺癌细胞放射敏感性的影响。方法 采用免疫组化染色检测手术标本切片（非小细胞肺癌组织20例及癌旁组织5例）中APE1的表达,Western blot与实时荧光定量（qRT）-PCR检测非小细胞肺癌细胞系（A549,H460,H1299）及肺正常上皮细胞系中APE1的表达;Western blot检测辐照A549与H460细胞0~6 Gy后APE1的表达;构建沉默APE1的A549与H460稳定细胞株后,Western blot检测其辐照6 Gy后APE1的蛋白表达;细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成率;CCK-8检测细胞增殖;细胞术流式检测细胞凋亡。结果 非小细胞肺癌组织及细胞系中APE1的表达明显上调;辐照能诱导非小细胞肺癌细胞APE1的表达,且表达随辐照剂量增高而上调;沉默APE1能有效地抑制辐照诱导A549与H460细胞中APE1的表达;成功构建沉默APE1的A459、H460稳定细胞株;沉默APE1联合辐照进一步抑制了非小细胞肺癌细胞克隆形成率、细胞增殖率,同时促进细胞凋亡（ PAPE1可增强非小细胞肺癌细胞的放射敏感性。     

FTY720联合吉西他滨对非小细胞肺癌肿瘤相关细胞株增殖和凋亡作用的研究

目的 探讨FTY720与吉西他滨用药对人非小细胞肺癌(NSCLC)肿瘤细胞株A549和H520增殖和凋亡的影响作用.方法 分别选取0、2、4、6、8、10 μmol/L浓度的FTY720对体外培养得到NSCLC细胞株A549及H520做干预影响,于培养24、48、72 h后分别检测吸光度值,观察各浓度条件下FTY720对A549及H520的抑增殖作用;对A549及H520细胞株加分别单独加7 μmol/L FTY720和0.2 μmol/L吉西他滨及37 μmol/L FTY720结合0.2μmol/L吉西他滨,观察各组细胞培养48 h后抑制和凋亡差异.结果 不同浓度FTY270抑制NSCLC细胞株A549、H520增殖,差异有统计学意义(P＜0.05),FTY720对NSCLC细胞株A549、H520的增殖抑制作用和浓度、时间具有相关性,FTY720联合吉西他滨抑制A549、H520细胞和凋亡率显著强于两种药品的单独使用(P＜0.05).结论 FTY720联合吉西他滨可显著抑制人NSCLC细胞株A549及H520的增殖,并可有效促进癌细胞凋亡的作用,临床价值较高.     

腺病毒介导的HSV-TK基因系统联合羟基喜树碱对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用

目的 研究腺病毒介导的HSV-TK系统联合羟基喜树碱(HCPT)对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用.方法 使用含有HSV-TK基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的复制缺陷腺病毒转染人膀胱癌细胞T-24细胞,表达GFP为转染成功标志,同时观察转染率,PCR检测TK表达.以正常T-24细胞为空白对照,转染成功后分别加入GCV、GCV HCPT,采用MTT法测定单纯HCPT作用于人膀胱癌细胞72 h细胞增殖抑制率、各组治疗转染后人膀胱细胞24、48、72 h细胞存活率;流式细胞仪检测GCV(0.5 mg/ml) HCPT(10 mg/L)作用T-24细胞4h后的凋亡情况.结果 随着浓度的增高,HCPT对T-24细胞的生长抑制率逐渐增高,HCPT浓度为0.01 mg/L时T-24生长抑制率为14%,50 mg/L时T-24生长抑制率为63%,当HCPT浓度大于100 mg/L时,抑制作用无明显增加(P=0.216).GCV组、GCV HCPT各组对转染后细胞有明显杀伤作用(P=0.00),GCV HCPT组随HCPT浓度增高和作用时间的延长,杀伤效率明显增高.0.5 mg/ml GCV单独作用于转染后的膀胱癌细胞72 h后,细胞存活率为34.6%,GCV(0.5 mg/m1) HCPT(10 mg/L)组的细胞存活率仅为8.07%(P=0.00).GCV 10 mg/mlHCPT作用后4h,T-24细胞出现M1期前典型的细胞凋亡峰,凋亡率达52.93%.结论 HSV-TK/GCV系统联合HCPT治疗能增强自杀基因系统对人膀胱癌的杀伤作用,能够良好地诱导人膀胱癌细胞的凋亡.     

KL1在人非小细胞肺癌A549细胞中的作用及其相关机制研究

目的:研究人非小细胞肺癌A549细胞中Klotho基因表达的KL1蛋白的相关功能及其机制?方法:分别用表达KL1蛋白和表达KL蛋白(Klotho基因表达的另一种同源蛋白)的质粒转染非小细胞肺癌细胞株A549后,通过Western blot验证转染结果;MTT法检测细胞的生长情况;平板细胞克隆形成实验检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞转染后对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)信号通路的中下游靶位点蛋白ERK1/2磷酸化水平的影响?结果:转染48 h后细胞显著表达外源性KL(P < 0.01)?KL1蛋白(P < 0.01)?KL1基因过表达后可以抑制A549细胞生长(P < 0.01);同时显著抑制细胞增殖(P < 0.01),促进细胞凋亡(P < 0.01);KL1过表达能够明显降低bFGF通路中ERK1/2的磷酸化水平(P < 0.01);过表达KL1与过表达KL比较,两者在影响细胞生长?增殖?凋亡和对bFGF信号通路的激活中并无明显统计学差异(P > 0.05)?结论:KL1与KL蛋白均能够抑制肿瘤细胞生长增殖,促进肿瘤细胞凋亡,作用效果相当?KL1能够抑制bFGF信号转导通路,可能是KL中发挥抑制肿瘤作用的主要功能片段?     

紫杉醇对人肺腺癌细胞系A549生长抑制作用的研究

目的:评价紫杉醇对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,以及诱导凋亡与G2-M期阻滞的关系。方法:紫杉醇不同浓度、不同时间分别处理A549细胞,采用MTT试验和流式细胞术进行检测及分析。结果:紫杉醇对A549的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),10~1 000 nmol/L的浓度对A549生长的影响差异不显著(P>0.05)。紫杉醇浓度≤100 nmol/L时,G2-M期细胞的比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡的比例在低浓度范围内(0.1~10 nmol/L)呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低。10 nmol/L作用时,凋亡的发生呈时间效应;1 000 nmol/L作用时,G2-M期阻滞表现出时间效应,但不如低浓度诱导凋亡出现的早。紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05)。结论:紫杉醇对A549的生长抑制作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞的影响较小,但却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的。