EC9706细胞和人食管鳞状细胞癌组织中MAL基因启动子区的甲基化状态

目的:探讨人食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)MAL基因启动子区的甲基化状态。方法:利用亚硫酸氢盐测序法检测人食管鳞癌细胞系EC9706中MAL基因启动子区CpG位点甲基化的发生情况。根据测序结果选用甲基化敏感性限制性内切酶酶切结合PCR技术进一步检测26例食管鳞癌组织及配对癌旁正常组织MAL基因启动子区的甲基化情况。结果:EC9706细胞中MAL基因启动子区检测出42个胞嘧啶位点的甲基化,占所有CpG位点的73.7%(42/57)。食管鳞癌组织中MAL基因的甲基化率为53.8%(14/26),远远高于配对癌旁正常组织的7.7%(2/26)(χ2=10.924,P<0.001)。不同临床病理特征食管鳞癌组织中MAL基因启动子区甲基化率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:MAL基因启动子区的甲基化可能是食管鳞癌发生的机制之一。     

食管鳞状细胞癌中WIF-1基因启动子区甲基化状态及mRNA表达的研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中WIF-1基因启动子甲基化状态及mRNA表达水平及其与病理指标之间的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测62例ESCC组织及30例癌旁组织中WIF-1基因启动子区甲基化状态和mRNA的表达水平,应用SPSS13.0探讨其与临床病理资料的关系。结果 WIF-1基因在癌组织中的甲基化率59.7%(37/62)明显高于癌旁组织13.3%(4/30),差异有显著性(P<0.05);其甲基化状态与年龄、分化程度及淋巴结转移情况相关(P<0.05);而与其他临床资料(性别、部位、浸润深度、临床分期)无明显相关性(P>0.05)。WIF-1基因mRNA在ESCC组的表达量(0.565±0.112)显著低于癌旁正常组(0.666±0.107),差异有显著性(P<0.05)。结论 WIF-1基因启动子甲基化在食管鳞癌的进展过程中起着重要的作用;WIF-1基因mRNA表达异常可能与ESCC的发生有关,此基因甲基化与mRNA表达两者之间的关系有待进一步研究。     

胃癌组织中相关肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态

目的分析胃癌组织中肿瘤抑制基因启动子区甲基化状态及其与临床分期、分型的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应方法,检测106例胃癌及其邻近胃小凹上皮、16例慢性胃炎小凹上皮石蜡标本中E钙黏素（E—CD）、错配修复酶hMLH1、APC和6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）基因启动子区甲基化状态,并对其中46例胃癌采用免疫组化方法检测E—CD蛋白表达情况。结果在胃癌、胃癌邻近小凹上皮及慢性胃炎小凹上皮中,基因甲基化频率分别为72．6％（77／106）、44．3％（47／106）和12．5％（2／16）,三者问差异有统计学意义（P〈0．01）。Laurén弥漫型胃癌甲基化（80．6％,50／62）明显高于肠型胃癌甲基化（61．4％,27／44）,两者间差异有统计学意义（P〈0．01）。甲基化与患者的年龄、性别、Ming分型及区域淋巴结转移无关（均P〉0．05）,甲基化与胃癌的浸润深度、pTNM分期和分化程度有关（均P〈0．05）。行E—CD蛋白检测的46例胃癌中,22例有E—CD基因甲基化,其中20例（90．9％）E—CD蛋白呈异质性减弱或基本消失表达;24例无E—CD基因甲基化,其中9例（37．5％）E—CD蛋白呈异质性减弱或基本消失表达,两者间差异有统计学意义（P〈0．01）。结论上述肿瘤抑制基因启动了区甲基化可能是胃癌发生的早期事件。胃癌E—CD基因甲基化与E—CD蛋白异质性减弱或消失表达密切相关。     

喉鳞状细胞癌组织CLDN11基因启动子甲基化及临床意义研究

目的探讨喉鳞状细胞癌（LSCC）组织中CLDN11基因启动子的甲基化水平及其临床意义。方法采用实时荧光定量甲基化特异性聚合酶链反应（qMSP）分别检测91例LSCC患者的LSCC组织及其配对的癌旁正常组织CLDN11基因启动子甲基化水平,分析其与临床病理特征及预后的关系,绘制ROC曲线评估其诊断价值。结果LSCC组织CLDN11基因启动子甲基化水平明显高于癌旁正常组织（P＜0.01）。Ⅲ、Ⅳ期、T3~4期、有淋巴结转移的LSCC组织CLDN11基因启动子甲基化水平分别高于Ⅰ、Ⅱ期、T1~2期、无淋巴结转移的LSCC组织（均P＜0.01）。ROC曲线分析AUC为0.884（95％CI：0.835~0.932,P＜0.01）,甲基化水平为0.571时,诊断LSCC的灵敏度、特异度分别为0.923、0.736。与低甲基化组（甲基化水平＜0.571）患者相比,高甲基化组（甲基化水平≥0.571）患者总生存率较低（P＜0.01）。结论CLDN11基因启动子高甲基化或可作为LSCC诊断和预测预后的生物标志物。     

宫颈和食管鳞状细胞癌组织中DNA甲基化谱分析及肿瘤标志物初步筛选

目的 初步筛选与宫颈鳞状细胞癌和食管鳞状细胞癌发生相关的差异甲基化标志物.方法 采用Illumina Infinium HumanMethylation450 Bead Chips(甲基化450k芯片)技术分别检测并分析8例宫颈鳞状细胞癌和8例食管鳞状细胞癌及其相应癌旁组织的DNA甲基化谱,筛选差异甲基化基因;结合基因...     

食管癌组织Ras相关区域家族1A基因启动子区甲基化检测

目的:检测食管癌和癌旁正常组织Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因启动子区甲基化变化.方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测79例食管鳞癌患者癌组织及对应的20例癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区甲基化,并观察食管癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化与临床病理变化的关系.结果:79例食管鳞癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率(67%,53/79)明显高于癌旁正常组织(15%,3/20).食管癌组织中不同年龄、分化程度的RASSF1A基因启动子区甲基化阳性率差异有统计学意义(P＜0.05),而淋巴结转移与否、肿瘤分期间甲基化阳性率差异无统计学意义.20例同一个体癌组织甲基化阳性率明显高于癌旁正常组织(50%(10/20)vs 15%(3/20))(P＜0.05),仅3例同时出现甲基化,一致率为15%.结论:RASSF1A基因启动子区甲基化是食管鳞癌频发的分子事件.食管鳞癌组织RASSF1A基因甲基化明显高于癌旁正常组织,并且和年龄、分化程度有关.     

子宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1mRNA表达和E-cad甲基化检测

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌组织中DNA甲基化转移酶(DNMT1)mRNA的表达和上皮钙粘附素(E-cad-herin)的甲基化状况,分析其与宫颈鳞状细胞癌发生发展的关系.方法:应用原位杂交技术检测20例正常宫颈、60例CIN(CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CINⅢ各20例)和40例宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1 mRNA的表达情况;利用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法检测E-cad基因启动子区甲基化状况,分析官颈鳞状细胞癌中DNMT1 mRNA的表达与E-cad启动子区甲基化状况及2者之间的相关性.结果:DNMT1 mRNA在正常官颈、CIN和宫颈鳞状细胞癌组织中表达逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);DNMT1 mRNA在CIN Ⅰ、CINIⅡ、CINⅢ组织中表达的差异有统计学意义(P<0.05).E-cad启动子甲基化率在正常宫颈、CIN、宫颈鳞状细胞癌组织中依次升高,差异有统计学意义(P<0.05).E-cad启动子甲基化与DNMT1 mRNA的表达呈正相关(r=0.401,P<0.05).结论:DNMT1 mRNA过表达和E-cad启动子异常甲基化与子宫颈鳞状细胞癌的发生发展关系密切;E-cad启动子甲基化过程可能是在DNMT1的催化作用下完成的.     

人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区甲基化状态的研究

目的:探讨6种人食管鳞癌细胞株KYSE150,KYSE510,TE13,EC9706,CaEs17和EC109中RIZ1基因启动子区的甲基化状态;观察特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR对存在甲基化的细胞株RIZ1基因的转录调控作用及其对该细胞生长增殖的影响。方法:甲基化特异PCR(MSP)法检测6种人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区的甲基化状态;实时定量PCR法检测5-Aza-CdR处理前后RIZ1基因启动子区CpG岛高度甲基化的人食管鳞癌细胞株TE13中RIZ1 mRNA表达量的变化;MTT法检测5-Aza-CdR对TE13细胞生长增殖的影响。结果:(1)6种人食管鳞癌细胞株中TE13,CaEs17,EC109三株细胞RIZ1基因启动子区存在甲基化;(2)5-Aza-CdR处理细胞株TE13后,RIZ1 mRNA表达量上调;(3)5-Aza-CdR能抑制TE13的生长增殖,并随时间的延长和浓度的增加抑制作用变明显。结论:启动子区CpG岛高度甲基化是人食管鳞癌细胞株TE13 RIZ1基因表达沉默的重要原因;5-Aza-CdR能使TE13 RIZ1 mRNA表达上调;并能抑制TE13细胞的生长增殖,并呈时间和浓度依赖性。     

白血病细胞雄激素受体基因启动子甲基化状态的研究

目的 检测白血病细胞雄激素受体基因启动子区CpG岛甲基化状态情况,初步探讨雄激素受体基因启动子区甲基化与白血病发病机制的可能联系.方法 应用甲基化特异性PCR技术(methylation specific PCR, MSP)检测3种白血病细胞株及15例患者骨髓标本雄激素受体基因甲基化状态.结果 白血病细胞株均出现甲基化和非甲基化带,呈部分甲基化状态,而作为对照的正常人白细胞均只出现非甲基化带.15例白血病患者全部检出甲基化状态. 结论 白血病细胞的雄激素受体基因启动子区存在高甲基化现象,可能为白血病的致病机制分析提供了一个新的方向,提示AR基因启动子CPG岛的甲基化有可能成为白血病的新的参考标记物.     

食管鳞状细胞癌组织中细胞胀亡及微血管密度检测

目的 :检测人食管鳞状细胞癌组织中细胞胀亡及微血管密度 (MVD)。方法 :利用透射电镜和免疫组织化学技术 ,对 6 0例手术切除的食管癌组织进行细胞胀亡和MVD检测 ,分析胀亡指数 (OI)与肿瘤MVD、临床病理分期、分化的关系。结果 :食管鳞状细胞癌组织中存在胀亡细胞 ;N0 期癌组织中OI高于N1 期 (P <0 .0 5 ) ;随分化程度的升高 ,OI升高 (P <0 .0 0 5 ) ;MVD高表达组OI高于低表达组 (P <0 .0 0 1 ) ,OI与T分期无关。结论 :食管鳞状细胞癌组织中存在胀亡细胞 ,其与食管癌的生物学行为有一定相关性     

食管鳞状细胞癌组织中细胞胀亡与凋亡检测

目的 :探讨食管鳞状细胞癌组织中细胞胀亡与凋亡的存在及 2者间的关系。方法 :收集 30例食管鳞状细胞癌标本 ,利用透射电镜、TUNEL及免疫组织化学技术检测其中的胀亡、凋亡细胞及微血管密度 (MVD)。结果 :食管鳞状细胞癌组织中存在胀亡及凋亡细胞 ,凋亡指数 (AI)和胀亡指数 (OI)分别为 (1 .7± 1 .2 )和 (3.2± 1 .9)。与MVD低表达组比较 ,高表达组OI较低 ,而AI较高 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 0 1或P <0 .0 0 5 )。结论 :食管鳞状细胞癌存在凋亡和胀亡两种细胞死亡方式 ,2者的存在及分布与MVD有关。     

食管癌细胞中T钙黏蛋白基因启动子区异常甲基化的研究

目的 探讨食管癌细胞中T钙黏蛋白( T-cadherin)基因启动子区甲基化状态,以及5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作用对食管癌细胞生长、侵袭以及T-cadherin基因甲基化状态与表达的影响.方法 采用甲基化特异性PCR分析经5-Aza-CdR处理前后食管癌细胞EC1和EC109中T-cadherin启动子甲基化状态,Western印迹检测经5-Aza-CdR处理前后两种细胞中T-cadherin蛋白表达,以MTT比色法与侵袭实验测定细胞增殖与侵袭能力的变化.结果 EC1和EC109细胞中T-cadherin基因启动子区域存在异常甲基化现象,经5-Aza-CdR作用后可逆转启动子异常甲基化,显著上调食管癌细胞中T-cadherin的蛋白表达,同时显著抑制肿瘤细胞的增殖与侵袭能力(P＜0.01).结论 启动子区异常甲基化是导致食管癌细胞中T-cadherin表达水平下调的重要机制,应用5-Aza-CdR可恢复T-cadherin表达并抑制肿瘤细胞的恶性表型.     

原发性肝细胞癌中p16、p15基因启动子区甲基化状态检测

目的研究原发性肝细胞癌中p16、p15基因启动子区甲基化状态及其与原发性肝细胞癌发生发展的关系。方法用特异性甲基化PCR（MSP）法检测30例原发性肝细胞癌肿瘤组织和5例正常肝脏组织中p16、p15基因启动子区甲基化状态，并进行统计分析。结果30例原发性肝细胞癌肿瘤组织中p16和p15基因启动子区分别有53．3％（16／30，P〈0．05）和46．7％（14／30，P〉0．05）甲基化，5例正常组织中未发现甲基化。两基因甲基化与原发性肝细胞癌临床病理及HBsAg之间无明显相关性（P〉0．05），两者在原发性肝细胞癌发生中有协同性（相关性和一致性）。结论p16、p15基因启动子区异常甲基化在原发性肝细胞癌中发生频率很高，可能对肝细胞癌发生发展起重要作用。     

食管鳞状细胞癌组织中VEGF表达与细胞胀亡检测

目的 :检测食管鳞状细胞癌组织中细胞胀亡及血管内皮生长因子 (VEGF)的表达。方法 :利用透射电镜和免疫组织化学技术检测 30例食管鳞状细胞癌组织中细胞胀亡指数及VEGF表达情况 ,分析 2者的相关性。结果 :VEGF阳性的细胞很少发生细胞胀亡 ,VEGF高表达的癌组织中较少存在细胞胀亡。食管鳞状细胞癌组织中VEGF的表达与细胞胀亡的发生呈负相关 (q =7.2 6 4 ,P <0 .0 5 )。结论 :食管鳞状细胞癌组织中细胞胀亡的发生可能与新生血管缺乏有关     

食管鳞状细胞癌组织中ADAMTS18基因的表达及临床意义

目的通过对食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中含凝血酶敏感素基序的去整合素金属蛋白酶18(ADAMTS18)m RNA及蛋白表达情况的检测,探讨ADAMTS18在ESCC发生、发展中所起的作用及临床意义,为ESCC的临床早期诊断及预后评估提供新的客观参考指标。方法采用半定量-逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法及免疫组化S-P的方法(生物素-链霉卵白素过氧化酶系统)对72例ESCC组织及癌旁正常组织中ADAMTS18 m RNA及蛋白的表达进行检测。结果 1ADAMTS18 m RNA在ESCC组织中的相对表达量为(0.361±0.115),在癌旁正常组织中表达量为(0.879±0.265),ESCC组织中ADAMTS18 m RNA表达量显著低于癌旁正常组织(P<0.01);ADAMTS18 m RNA在高/中分化鳞癌组中的相对表达量为(0.496±0.153),在低分化鳞癌组中为(0.232±0.088),低分化鳞癌组ADAMTS18 m RNA表达量显著低于高/中分化鳞癌组(P<0.05)。2ADAMTS18蛋白在ESCC组织中的阳性表达率为34.7%(25/72),在癌旁组织中的阳性表达率为93.1%(67/72),ADAMTS18蛋白在ESCC组织中阳性表达率显著低于癌旁组织(P<0.01);ADAMTS18蛋白在高/中分化鳞癌组中的阳性表达率为45.4%(20/44),在低分化鳞癌组中为17.8%(5/28),低分化鳞癌组ADAMTS18蛋白阳性表达率显著低于高/中分化鳞癌组(P<0.05)。结论 ADAMTS18基因在ESCC中的异常表达与ESCC的发生、发展及组织分化程度关系密切,检测ESCC组织中ADAMTS18基因的表达情况,有助于ESCC早期诊断及预后评估。     

凋亡相关基因PDCD5启动子区甲基化在新疆汉族和维吾尔族食管鳞癌中的作用研究

目的：探讨凋亡相关基因程序化细胞死亡分子5（PDCD5）启动子区 CpG岛在新疆维吾尔族和汉族食管鳞状细胞癌（鳞癌）中的甲基化情况及其与临床病理特征的相关性。方法采用甲基特异性PCR（MSP）法检测40例食管鳞癌患者（维吾尔族20例,汉族20例）癌组织、癌旁组织中 PDCD5基因甲基化情况。结果癌组织中PDCD5甲基化阳性率为80．0％（32/40）,癌旁组织中甲基化阳性率为35．0％（14/40）,差异有统计学意义（P ＜0．05）;PDCD5甲基化阳性率与食管鳞癌临床分期相关（P ＜0．05）;不同民族、性别、年龄食管鳞癌中 PDCD5甲基化阳性率差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论在食管鳞癌癌组织中甲基化水平高于癌旁组织;PDCD5甲基化率与食管癌的临床分期有相关性,PDCD5在食管鳞癌中的甲基化率与民族、性别、年龄无相关性。     

食管鳞状细胞癌组织中神经性钙黏附蛋白和mRNA的表达

目的:检测食管鳞状细胞癌组织中神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)和mRNA的表达.方法:采用免疫组织化学PV法和RT-PCR法检测62例食管鳞状细胞癌组织及62例正常食管黏膜组织中N-cadherin蛋白和mR.NA的表达.结果:正常食管黏膜组织及食管鳞状细胞癌组织中N-cadherin蛋白的阳性表达率和mRNA的相对含量分别为29.O%、75.8%和(0.154±0.019)、(0.663±0.016),差异均有统计学意义(X2=23.758,t=1 290.840,P均<0.001).N-cadherin蛋白阳性表达率及mRNA的相对含量与食管鳞状细胞癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移密切相关(X2=6.924、9.345、4.486,F/t=555.231、4.971、7.269,P<0.05或0.01).结论:N-cadherin的高表达与食管鳞状细胞癌的发生发展及浸润转移密切相关.     

食管鳞状细胞癌组织中Netrin-1的表达

目的:探讨Netrin-1在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达情况及其与ESCC发生发展的关系。方法:采用免疫组化和原位杂交法分别检测40例ESCC及40例正常食管黏膜组织中Netrin-1蛋白和mRNA的表达。结果:ESCC组织中Netrin-1蛋白的阳性表达率为47.5%(19/40),高于正常食管黏膜组织的5.0%(2/40)(χ2=18.660,P<0.001)。ESCC组织中Netrin-1mRNA的阳性表达率为52.5%(21/40),高于正常食管黏膜组织的5.0%(2/40)(χ2=22.029,P<0.001)。Netrin-1mRNA和蛋白的表达与ESCC的组织学分级、浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期均有关(χ2mRNA=12.420、12.477、9.528、10.566,χ2蛋白=8.878、8.021、8.338、9.950,P均<0.05)。ESCC组织中Netrin-1蛋白与mRNA的表达有关联(rP=0.517,P<0.001)。结论:Netrin-1表达与ESCC的发生发展有关,可作为ESCC预后判断的辅助指标。     

Hela细胞雄激素受体基因外显子1的甲基化检测

目的:检测Hela细胞雄激素受体(AR)基因外显子1的甲基化水平.方法:用亚硫酸氢盐克隆测序法和联合亚硫酸氢盐的限制酶法(COBRA)检测不同来源Hela细胞AR基因外显子1的甲基化水平,BiQ Analyzer软件分析测序结果.结果:在非CpG胞嘧啶转化率＞98％的前提下,Hela细胞AR基因外显子1片段的总甲基化率...