大鼠骨髓间充质干细胞对细菌性前列腺炎抑制作用的研究

目的 :研究外源性骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大肠埃希菌致大鼠前列腺炎的抑制作用。方法:贴壁选择法分离、培养、扩增BMSCs。将SD大鼠50只随机分为急性细菌性前列腺炎(ABP)组、ABP+BMSCs组、慢性细菌性前列腺炎(CBP)组、CBP+BMSCs组和正常对照组,每组10只。在小动物超声引导下向大鼠前列腺两侧叶内注射大肠埃希菌建立前列腺炎症模型,注入细菌1~14 d为急性炎症期,4~12周为慢性炎症期,对照组注入等量PBS。然后将BMSCs注入ABP+BMSCs组和CBP+BMSCs组大鼠前列腺内,观察移植BMSCs2周后大鼠前列腺病理学变化并做炎症评分,RT-PCR扩增前列腺组织中炎症因子IL-1β、TNF-αmRNA,ELISA检测IL-1β、TNF-α蛋白含量,统计分析各组表达差异。结果:前列腺组织病理学提示炎症组前列腺组织呈典型炎症病理变化,腺管结构改变,间质水肿,炎细胞浸润,纤维组织增生,而BMSCs治疗组大鼠前列腺炎症明显减轻。PCR和ELISA分析显示ABP组IL-1βmRNA(0.829±0.121)、蛋白(271.75±90.59)pg/ml和TNF-αmRNA(0.913±0.094)、蛋白(105.78±19.05)pg/ml含量均显著高于对照组[(0.342±0.087)、(45.76±17.99)pg/ml]、[(0.247±0.054)、(19.42±7.75)pg/ml](P均0.01)及BMSCs治疗组[(0.433±0.072)、(51.34±22.13)pg/ml]、[(0.313±0.076)、(28.38±8.78)pg/ml](P0.01);CBP组IL-1βmRNA(0.975±0.114)、蛋白(265.31±71.34)pg/ml和TNF-αmRNA(0.886±0.084)、蛋白(107.45±26.11)pg/ml含量也均显著高于对照组及BMSCs治疗组[(0.396±0.064)、(56.37±21.22)pg/ml]、[(0.417±0.068)、(29.21±10.22)pg/ml](P均0.01)。结论:注入BMSCs能够减轻大肠埃希菌引起的前列腺炎症反应,其作用可能与减少炎细胞浸润,降低IL-1β、TNF-α水平有关。     

丙泊酚对大鼠缺血-再灌注脑TNF-α、IL-10、NF-κB的影响

目的 研究丙泊酚对缺血性脑炎性因子表达的影响.方法 SD大鼠30只随机分为假手术对照(S)组、脑缺血-再灌注(IR)组(双侧颈总动脉夹闭造成暂时性脑缺血)、丙泊酚预处理(PP)组(缺血前60 min输注丙泊酚50 mg·kg-1·h-1),丙泊酚后处理(PA)组(再灌注后10 min给予丙泊酚50 mg·kg-1·h-1)以及不行脑缺血丙泊酚(P)组(输注丙泊酚50 mg·kg-1·h-1),每组6只.用酶联免疫吸附法(ELISA)测定脑组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10),用同位素([32P]-ATP)方法测定脑内核因子-κB(NF-κB)的变化.结果 与S组比较,IR组TNF-α明显增高[(2.57±0.19)Pg/g vs.(1.60±0.15)pg/g](P<0.05),同时IL-10明显增高[(11.59±1.32)pg/gvs.(7.97±1.96)pg/g](P<0.05).与IR组比较,PP组TNF-α明显减低[(1.88±0.26)pg/g vs.(2.57±0.19)pg/g](P<0.05),IL-10水平明显降低[(8.35±1.00)pg/g vs.(11.59±1.32)Pg/g](P<0.05),NF-κB活性明显减低.PA组TNF-α、IL-10、NF-κB与IR组差异无统计学意义.IL-10和NF-κB水平与TNF-α活性呈现平行变化关系.结论 脑缺血前丙泊酚预处理可抑制脑的炎性介质TNF-α、IL-10和NF-κB的增高,但脑缺血-再灌注后应用丙泊酚对缺血性炎性介质的增高没有抑制作用;丙泊酚对缺血性炎性介质TNF-α的作用可能与抑制NF-κB转导途径有关.     

基于Notch通道右归丸对大鼠退变椎间盘的影响

[目的]探讨右归丸对大鼠退变腰椎间盘结构的潜在干预机制。[方法]将30只雄性SD大鼠随机分为3组,每组10只。正常对照组为健康大鼠,不做特殊处理;退变组采用纤维环穿刺法建立大鼠椎间盘退变模型。药物组在退变组基础上予右归丸灌胃2周。ELISA检测血清炎症因子IL-10、MIF、TNF-α水平;Western blot检测椎间盘组织中Ⅱ型胶原、Notch1蛋白表达水平。[结果]与正常对照组比较,退变组和药物组的大鼠血清白细胞介素-10(interleukin-10, IL-10)[(22.3±2.8) pg/ml vs(30.9±1.7) pg/ml vs (53.2±7.5) pg/ml, P<0.001]、巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor, MIF）[(0.3±0.0) pg/ml vs (1.3±0.3) pg/ml vs (0.6±0.2) pg/ml, P<0.001]、肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)[(12.5±3.0) pg/ml vs (52.6±...     

TNF-α、TGF-β_1在慢性非细菌性前列腺炎患者前列腺液中的表达及意义

目的探讨TNF-α和TGF-β1在慢性非细菌性前列腺炎患者前列腺液中的表达及临床意义。方法采用双抗体夹心法对20例炎症型慢性非细菌性前列腺炎即炎症型慢性骨盆疼痛综合征(Ⅲa型),20例非炎症型慢性非细菌性前列腺炎即非炎症型慢性骨盆疼痛综合征(Ⅲb型),10例健康对照者前列腺液(EPS)中TNF-α、TGF-β1含量进行测定。采用美国国立卫生院慢性前列腺炎症状评分(NIH-CPSI)进行相关性研究。结果①TNF-α在Ⅲa型患者EPS中表达水平[(152.44±83.06)pg/ml]明显高于Ⅲb型组[(93.15±57.26)pg/ml]和健康对照组[(78.99±53.51)pg/ml],P<0.05。但在Ⅲb型和健康对照组之间差异无统计学意义,P>0.05。②TGF-β1在Ⅲa型组[(8477.50±4612.45)pg/ml]和Ⅲb型组[(7946.50±5044.06)pg/ml]表达水平均明显高于健康对照组[(2462.50±985.31)pg/ml],P<0.01。但在Ⅲa和Ⅲb型之间差异无统计学意义,P>0.05。③前列腺液中TNF-α、TGF-β1的水平与慢性前列腺炎症状评分无相关性(r=0.23,P>0.05;r=0.31,P>0.05)。结论前列腺液中细胞因子(TNF-α、TGF-β1)在慢性前列腺炎的病理学改变中起重要作用,可作为慢性前列腺炎的诊断依据之一。     

金匮肾气丸对环磷酰胺所致睾丸损伤小鼠睾丸组织Nrf2信号通路基因表达的影响

目的:探究金匮肾气丸对环磷酰胺致小鼠睾丸损伤保护作用及其抗氧化机制。方法:将30只雄性小鼠均分为空白组、模型组和金匮肾气丸治疗组。治疗组小鼠给予1.2 g/kg体重剂量的金匮肾气丸进行灌胃,空白组和模型组小鼠给予相同体积的生理盐水灌胃,每天1次;在治疗的第7天,模型组和治疗组小鼠给予50 mg/kg体重剂量环磷酰胺进行腹腔注射,每周1次,连续用药35 d。实验结束后对所有小鼠称重(体重和睾丸重量)并采集血液进行睾酮含量检测,取附睾头用于精子质量检测,取睾丸进行组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),病理组织学及核因子E2相关因子2 (Nrf2)信号通路相关基因PCR检测。结果:实验结束时,模型组小鼠体重[(34.63±1.92) g vs(48.32±1.64) g]、睾丸质量[(80.0±3.9) mg vs(140.0±6.1) mg]、睾丸脏器系数[(0.22±0.01)%vs(0.31±0.03)%]、精子活率[(48.66±8.08)%vs(89.33±4.04)%]、精子浓度[(28.42±5.26)×10~6/ml vs(77.67±8.73)×10~6/ml]、SOD [(140.82±10.08) U/mg prot vs(358.52±40.41) U/mg prot]和血清睾酮[(8.75±0.96) pg/ml vs(21.75±1.71) pg/ml]水平较空白组显著降低(P<0.05),畸形精子百分率[(37.33±2.08)vs(15.33±1.53)%]和MDA[(54.89±6.09) nmol/ng prot vs(30.21±2.17) nmol/ng prot]水平显著升高(P<0.05);金匮肾气丸治疗组小鼠体重[(39.80±2.89) g vs(34.63±1.92) g]、睾丸质量[(130.00±11.00) mg vs(80.00±3.90) mg]、睾丸脏器系数[(0.28±0.01)%vs(0.22±0.01)%]、精子活率[(76.00±5.29)%vs(48.66±8.08)%]、精子浓度[(56.08±4.29)×10~6/ml vs(28.42±5.26)×10~6/ml]、SOD[(206.59±16.38) U/mg prot vs(140.82±10.08) U/mg prot]和血清睾酮[(15.50±1.29) pg/ml vs(8.75±0.96) pg/ml]水平较模型组显著升高(P<0.05),畸形精子百分率[(25.01±2.99)%vs(37.33±2.08)%]和MDA[(35.84±3.61) nmol/ng prot vs(54.89±6.09) nmol/ng prot]水平显著降低(P<0.05)。模型组依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶1(NOQ-1)、Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)mRNA的表达水平较空白组显著降低(P<0.05),半胱天冬酶3(Caspase 3)mRNA表达水平显著升高(P<0.05);金匮肾气丸治疗组小鼠Nrf2和HO-1 mRNA的表达水平较模型组显著升高(P<0.05),Caspase 3 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。病理组织学结果发现,模型组小鼠生精小管管腔内各级生精细胞层数减少,部分生精小管细胞完全脱落,精子数量减少;治疗组小鼠生精小管恢复趋于正常。结论:金匮肾气丸可有效抑制环磷酰胺造成的睾丸损伤,其机制可能与金匮肾气丸能调控Nrf2信号通路基因表达,增强抗氧化酶的活性有关。     

自身免疫性前列腺炎大鼠模型的建立

目的:使用前列腺蛋白提纯液建立自身免疫性前列腺炎大鼠模型。方法:选用36只Wistar大鼠,随机分为对照组、低浓度组和高浓度组,每组12只。对照组注射生理盐水,低浓度和高浓度组实验大鼠于0、14 d分别注射等剂量15 mg/ml及80 mg/ml浓度的前列腺蛋白提纯液,4周后处死大鼠,前列腺组织HE染色,取大鼠外周血检测血清炎症因子IL-8、IL-10,血清免疫球蛋白IgA、IgM,辅助性T细胞Th1/Th2等指标。结果:高浓度组有3只大鼠死亡,对照组与低浓度组均无死亡。前列腺大体观察对照组无明显变化,低浓度组大鼠前列腺体积增大,质地稍硬,高浓度组大鼠前列腺质地坚硬,与周围组织粘连。实验组病理切片显示前列腺组织腺体结构破坏,有炎性细胞浸润。大鼠血清IL-8指标低浓度组[(129.07±11.48)pg/ml]、高浓度组[(147.58±17.70)pg/ml]与对照组[(94.12±7.04)pg/ml]比明显升高(P0.05);大鼠血清IL-10指标低浓度组[(227.14±18.19)pg/ml]、高浓度组[(187.14±16.32)pg/ml]与对照组[(252.48±21.72)pg/ml]相比显著降低(P0.05)。大鼠血清IgA与对照组[(0.19±0.14)mg/ml]相比,低浓度组[(0.25±0.37)mg/ml]和高浓度组[(0.31±0.42)mg/ml]明显升高(P0.05);大鼠血清IgM指标低浓度组[(0.23±0.41)mg/ml]、高浓度组[(0.34±0.58)mg/ml]与对照组[(0.17±0.33)mg/ml]相比,显著升高(P0.05)。外周血辅助性T细胞Th1/Th2未见明显改变。结论:低、高浓度组大鼠造模均获成功。使用低浓度的前列腺蛋白提纯液造模的动物死亡率低,病理改变及血清炎症因子变化符合自身免疫性前列腺炎的表现,可作为制备自身免疫性前列腺炎的可靠模型浓度。     

腹腔镜胆囊切除术中应用不同器械对机体氧化应激的影响

目的探讨在腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy,LC)术中应用不同器械对机体氧化应激的影响。方法选择2007年10月～2008年10月符合标准的胆囊切除术78例,LC术中分别使用超声刀(A组,n=30)和电刀(B组,n=30),18例因经济原因要求开腹手术(C组,n=18)。术前、术后0h、12h、24h检测3组患者丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平并进行比较。结果与术前相比,LC术后0h MDA[A组:(7.141±1.024)nmol/Lvs(6.483±0.721)nmol/L,q=3.940,P0.05;B组:(7.357±1.151)nmol/Lvs(6.562±0.730)nmol/L,q=4.545,P0.05]均明显升高,C组升高不明显[(6.676±0.920)nmol/Lvs(6.575±0.762)nmol/L,q=0.505,P0.05]。术后24h MDALC组均恢复至术前水平[A组:(6.635±0.903)nmol/Lvs(6.483±0.721)nmol/L,q=0.910,P0.05;B组:(6.762±0.884)nmol/Lvs(6.562±0.730)nmol/L,q=0.890,P0.05],而C组持续升高[(7.715±1.183)nmol/L vs(6.575±0.762)nmol/L,q=4.880,P0.05]。与术前相比,术后0hLC组SOD活性降低[A组:(99.405±18.840)U/ml vs(121.821±15.535)U/ml,q=7.039,P0.05;B组:(101.516±19.304)U/ml vs(124.242±16.301)U/ml,q=6.962,P0.05],C组降低不明显[(111.019±18.425)U/ml vs(118.748±18.247)U/ml,q=2.443,P0.05];术后24hLC组均恢复至术前水平[A组:(120.487±17.004)U/ml vs(121.821±15.535)U/ml,q=0.420,P0.05;B组:(119.118±18.235)U/ml vs(124.242±16.301)U/ml,q=1.570,P0.05],而C组继续降低[(102.363±15.741)U/ml vs(118.748±18.247)U/ml,q=4.009,P0.05]。A组术后各时点MDA水平较B组无明显差异(P0.05),而术后12h SOD活性较B组明显偏高[(119.836±18.208)U/ml vs(109.917±17.543)U/ml,q=3.080,P0.05]。结论 LC术中CO2气腹可导致氧化应激的产生,但较开腹胆囊切除术恢复快;LC术中应用超声刀较电刀更有利于机体术后氧化应激的恢复。     

肥胖对雄性大鼠生殖功能影响的机制研究

目的研究肥胖对雄性大鼠生殖功能的影响,初步探讨其氧化损伤的相关机制。方法 6周龄SD雄性大鼠随机分成对照组(普通饮食,15只)和肥胖组(高脂饮食,30只)。喂养16周后,处死,测定体重、脏器系数、代谢参数和生殖内分泌激素(GnRH、FSH、LH、TT、E_2)和SHBG,检测睾丸生精细胞凋亡、氧化应激和附睾精子参数,比较两组各指标差异。结果与对照组大鼠相比,肥胖组大鼠体重和Lee指数明显增加,血清瘦素(Lep)[(3.17±0.23)ng/ml vs.(2.33±0.21)ng/ml]、胰岛素(INS)[(28.99±2.43)μU/ml vs.(20.62±1.72)μU/ml]和甘油三酯(TG)[(0.55±0.03)mmol/L vs.(0.36±0.04)mmol/L]显著升高,血清GnRH[(36.46±1.95)pg/ml vs.(45.51±2.75)pg/ml]、LH[(3.06±0.37)U/L vs.(4.67±0.70)U/L]、总睾酮(TT)[(0.81±0.13)ng/ml vs.(1.98±0.32)ng/ml]、SHBG[(55.31±3.80)nmol/L vs.(71.69±4.65)nmol/L]显著降低,差异均有统计学意义(P0.05);TUNEL结果显示,肥胖组大鼠睾丸生精细胞凋亡指数显著高于对照组[(4.26±0.35)%vs.(3.09±0.28)%,P0.05];氧化应激结果表明,肥胖组大鼠的MDA上升、SOD降低,差异有统计学意义(P0.05);附睾精子分析发现,与对照组相比,肥胖组大鼠的精子活力显著下降[(14.36±7.67)%vs.(36.40±9.17)%,P0.01],而精子浓度无显著性差异(P0.05)。结论高脂饮食诱导雄性大鼠的肥胖,代谢和生殖内分泌紊乱,氧化损伤增加,导致生精细胞凋亡增加,并最终使精子活力下降。     

大鼠精索静脉曲张氧化应激介导附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1损伤及对附睾功能的影响

目的:探索精索静脉曲张(VC)大鼠模型中氧化应激介导附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1损伤及对附睾功能影响。方法:将45只体重220～235 g的SD大鼠随机分为假手术组(单纯暴露并分离左肾静脉)、实验组(部分缩窄左肾静脉并充分结扎精索静脉侧支)和治疗组[造模术后给予150 mg/(kg·d)维生素E灌胃60 d],每组各15只。模型构建后60d分别观察左侧附睾组织学改变,采用qPCR、免疫组化染色、免疫荧光染色及Western印迹等检测左侧附睾上皮连接蛋白ZO-1及连接相关蛋白表达水平,同时检测附睾组织超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)活性,丙二醛(MDA)、α葡糖苷酶含量以及精子活力指标。结果:与假手术组相比,实验组左侧附睾上皮结构紊乱,上皮细胞数量减少,可见部分上皮细胞脱落至附睾管腔。qPCR检测claudin11、β-catenin、JAM-A、cadherin12、ZO-1等多个连接蛋白表达,结果显示除实验组较假手术组ZO-1表达明显下调外(P0.05),其余蛋白均无显著差异。免疫组化染色、免疫荧光染色Western印迹结果显示,与假手术组相比,实验组ZO-1表达明显降低(P0.05);经维生素E治疗后,治疗组ZO-1表达较实验组明显升高(P0.05)。实验组较假手术组大鼠附睾组织中MDA明显升高[(1.21±0.18)nmol/mg protein vs(0.41±0.05)nmol/mg protein,P0.05)],SOD[(298.62±67.84)U/mg protein vs(814.65±73.64)U/mg protein,P0.05)]、T-AOC[(0.24±0.04)nmol/mg protein vs(0.84±0.07)nmol/mg protein,P0.05)]、α葡糖苷酶[(5.82±1.24)U/mg protein vs(11.72±2.72)U/mg protein,P0.05)]明显降低;经维生素E干预后,治疗组SOD [(497.73±48.03)U/mg protein]、T-AOC[(0.42±0.06)nmol/mg protein]、α葡糖苷酶[(9.11±1.91)U/mg protein]较实验组明显回升(P0.05),MDA[(0.69±0.12)nmol/mg protein]明显下降(P0.05)。附睾精子活力检测,实验组较假手术组前向运动精子百分率明显降低[(31.33±6.32)%vs(71.21±5.21)%,P0.05],经维生素E干预后治疗组[(60.68±5.31)%]明显提高(P0.05)。结论:精索静脉曲张通过氧化应激导致附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1表达下调,附睾功能损伤。抗氧化剂维生素E能有效改善精索静脉曲张附睾氧化应激水平,促进ZO-1表达上调,改善附睾功能。     

牙周基础治疗对2型糖尿病合并慢性牙周炎患者糖脂代谢及炎症反应的影响

目的:探讨牙周基础治疗对2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)合并慢性牙周炎患者糖脂代谢及炎症反应的影响。方法:按照随机数字表法将2019年1月-2019年12月笔者医院收治的150例T2DM合并慢性牙周炎患者分为对照组与观察组,每组75例。对照组患者进行糖尿病常规治疗,观察组患者在糖尿病常规治疗的基础上进行牙周基础治疗,均连续治疗3个月。比较两组糖代谢指标[空腹血糖(Fasting blood-glucose,FBG)、餐后2h血糖(2h postprandial blood glucose,2hPG)、糖化血红蛋白(Glycosylated hemoglobin,HbA1c)],脂代谢指标[总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)]及炎症因子[肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-10]的变化。结果:治疗后,观察组的FBG[(5.99±0.40)mmol/L vs(6.87±0.80)mmol/L]、2hPG[(7.41±0.46)mmol/L vs (8.93±0.90)mmol/L]、HbA1c[(6.45±0.58)%vs(7.84±0.66)%]水平均明显低于对照组(P0.05);观察组的TG[(0.98±0.22)mmol/L vs(2.20±0.79)mmol/L]水平明显低于对照组(P0.05);观察组的TNF-α[(1.15±0.32)pg/ml vs(2.87±0.65)pg/ml]、IL-1β[(0.40±0.15)pg/ml vs(3.71±0.94)pg/ml]水平明显低于对照组(P0.05),IL-10[(11.25±1.44)pg/ml vs(7.82±1.90)pg/ml]水平明显高于对照组(P0.05)。结论:牙周基础治疗对T2DM合并慢性牙周炎患者的糖脂代谢及炎症反应具有明显的改善作用。     

益心康泰胶囊对老年SD大鼠生精功能及血清超氧化物歧化酶和丙二醛的影响

目的:观察益心康泰对老龄SD大鼠精子密度和活率,以及血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:将老年(24月龄)SD雄性大鼠随机分为空白组、十一酸睾酮组、益心康泰高、中、低剂量组共5组,根据体重,分别给予10 ml/kg生理盐水、4 mg/kg十一酸睾酮悬浊液、0.6 g/kg、0.3 g/kg、0.15 g/kg益心康泰悬浊液灌胃,1次/d,30 d后,取附睾,剥离脂肪、包膜,剪碎放入37℃恒温水浴锅中预热的生理盐水试管内,利用CASA精子自动分析系统(伟力)检测精子各项常规参数。取血查血清SOD和MDA含量。并行睾丸组织HE染色,在光镜下观察睾丸组织形态学变化。结果:与空白对照组相比,高、中、低剂量益心康泰均能显著提高老年大鼠的精子密度[分别为(152.3±24.0)×106/ml、(334.5±97.7)×106/ml、(302.7±158.9)×106/ml、(221.4±75.6)×106/ml,P<0.05]和活率[分别为(26.5±2.0)%、(35.5±5.9)%、(33.1±5.4)%、(28.4±2.1)%,高、中剂量与空白组相比P<0.01],同时,高剂量组可以显著提高血清SOD含量[(22.0±5.3)U/ml,P<0.01],降低MDA含量[(13.6±4.6)nmol/ml,P<0.01];睾丸组织学检测显示,给药组相对于空白组细胞增殖更为活跃,可见较多分裂期细胞,管腔内成熟精子数目较多,间质稀少,血管丰富,间质细胞发育良好。结论:益心康泰可以通过影响SOD和MDA的含量而改善老年SD大鼠的生精功能。     

双氢青蒿素对前列腺癌细胞PC-3M生长的影响及其机制探讨

目的:观察双氢青蒿素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3M细胞凋亡和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:不同浓度(0、25、50、100μmol/L)的双氢青蒿素分别作用于PC-3M细胞48 h,MTT法检测细胞生长活性;流式细胞仪测定细胞凋亡率;分光光度法检测细胞凋亡过程中caspase-3、caspase-8活性变化;半定量RT-PCR法检测PC-3M细胞内VEGF mRNA的表达;Western印迹法检测细胞VEGF蛋白表达。结果:双氢青蒿素能显著抑制PC-3M细胞的增殖,与对照组(0μmol/L)的细胞凋亡率(2.92±0.45)%相比,各剂量组(25、50、100μmol/L)的细胞凋亡率[(8.85±0.74)%,(12.83±0.84)%,(18.65±1.24)%]显著增加,caspase-8[(0.47±0.05)U/μg vs(1.22±0.15)U/μg,(1.76±0.07)U/μg,(2.91±0.24)U/μg]、caspase-3[(0.44±0.07)U/μg vs(0.95±0.08)U/μg,(1.48±0.14)U/μg,(2.92±0.45)U/μg]活性显著增加,呈剂量依赖性(P<0.01)。PC-3M细胞内VEGF mRNA的表达和蛋白表达呈剂量依赖性降低。结论:双氢青蒿素能显著抑制体外PC-3M细胞的生长,并促进其凋亡,机制可能与增加凋亡蛋白酶和抑制VEGF表达有关。     

iNOS基因转染对雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145生长的影响

目的:观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转染对雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145生物学行为的影响。方法:将iNOS基因转染到DU145细胞并筛选出阳性细胞进行扩增,并设空载体组和对照组。观察细胞的形态变化,MTT法绘制生长曲线;流式细胞术检测细胞凋亡率;了解NOS抑制剂对转染细胞的影响。结果:转染iNOS后,DU145细胞分泌的NO[(272.50±15.82)μmol/L]显著高于空载体组[(122.00±18.93)μmol/L]和对照组[(121.00±6.98)μmol/L](P<0.05)。流式细胞术检测结果提示转染iNOS组细胞凋亡率[(42.78±2.01)%]明显高于空载体组[(30.65±1.46)%]和对照组[(28.96±1.50)%](P<0.05)。MTT测定结果提示转染组细胞生长较空载体组和对照组减慢(P<0.05),NOS抑制剂可以加快其生长,但无显著性差异(P>0.05)。结论:iNOS基因转染可以使DU145细胞分泌较高浓度的NO,诱导细胞凋亡,抑制细胞生长,为晚期雄激素非依赖性前列腺癌的基因治疗提供一个有效的靶点。     

螺内酯对糖尿病大鼠肾小球保护作用的机制探讨

目的 观察螺内酯对糖尿病大鼠肾小球的保护作用并探讨其机制。 方法 将SD大鼠随机分为健康对照组、病理组、螺内酯治疗组。治疗30 d后处死，观察肾小球病理形态变化；RT-PCR法观察肾脏皮质纤溶酶原激活剂抑制物1(PAI-1) 和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的变化； Western印迹法观察肾脏皮质PAI-1的表达；免疫组化方法观察肾脏皮质TGF-β1、纤连蛋白(FN)变化及检测肾皮质丙二醛(MDA) 含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 、总抗氧化能力(T-AOC)活性。 结果 与病理组比，螺内酯治疗后可下调肾皮质TGF-β1、PAI-1 mRNA与蛋白表达（P均< 0.05）；降低肾皮质MDA水平[（0.95±0.20）比（1.23±0.31） nmol/mg，P < 0.05]；增强SOD、GSH-Px、T-AOC活性[分别为（550.19±20.06）比（509.53±33.25） U/mg，（21.67±2.70）比（18.91±2.30） U/mg，（1.15±0.21）比（0.86±0.26） U/mg，P均< 0.05]；减少FN在肾小球的沉积(P < 0.01)；改善肾小球的病理状况。 结论 螺内酯可能通过下调糖尿病大鼠肾皮质TGF-β1、PAI-1表达，降低肾皮质氧化应激水平，起到保护糖尿病大鼠肾脏，延缓肾小球硬化的作用。     

不同年龄对精子凋亡率及DNA完整性影响的研究

目的:探讨不同年龄阶段精子凋亡率、精子DNA完整性及精液基本参数与年龄是否存在相关性。方法:随机选取在我科因女方因素行体外受精-胚胎移植男性精液标本104例,按男方年龄分为3组,年龄<35岁组43例、35～39岁组31例、≥40岁组30例,按WHO手册第4版手工分析精液常规参数,流式细胞术(FCM)结合FITC-Annexin V/PI荧光染色检测精子凋亡率,吖啶橙荧光染色检测精子DNA完整性。结果:①3组精液量[(2.87±0.89)ml vs(2.98±1.09)ml vs(2.65±0.95)ml]、精子浓度[(60.40±25.43)×106/ml vs(69.74±28.33)×106/ml vs(55.97±27.22)×106/ml]无显著性差异(P>0.05),≥40岁组前向运动精子百分率[(39.00±8.35)%]减少,与<35岁组[(48.72±9.89)%]和35～39岁组[(45.65±10.55)%]相比,差异有显著性(P<0.01);≥40岁组正常形态精子百分率[(11.11±8.26)%]与<35岁组[(16.43±8.75)%]相比,差异有显著性(P<0.01)。②精子凋亡在不同年龄组人群均有一定发生率,≥40岁组精子凋亡率为[(11.82±5.77)%],高于<35岁组[(7.04±3.50)%]和35～39岁组[(9.42±4.73)%],与<35岁组相比结果有统计学意义(P<0.01);≥40岁组DNA完整精子百分率降低[(75.52±10.60)%],与<35岁组[(86.55±5.60)%]和35～39岁组[(81.39±8.94)%]相比,差异有显著性(P<0.01);③男性年龄与精子凋亡百分率呈正相关(P<0.01),与前向运动精子、DNA完整精子百分率呈负相关(P<0.01)。结论:男性年龄增加可能导致前向运动精子百分率减少,正常形态精子百分率降低,精子凋亡百分率增加,DNA完整精子百分率性降低,在生育过程中,男性年龄应引起关注。     

葡萄籽原花青素对小鼠睾丸扭转复位后生精功能的保护作用

目的:探讨葡萄籽原花青素(GSP)对小鼠睾丸扭转复位后生精功能的保护作用。方法:24只健康雄性昆明小白鼠(8周龄,25～27 g)随机分为3组:对照组、扭转组、治疗组,每组8只。扭转组及治疗组建立单侧睾丸扭转复位动物模型,治疗组于扭转复位前30 min腹腔注射GSP(50 mg/kg),术后采用腹腔注射方式连续给药3 d,每天1次,每次50 mg/kg。扭转组方法同治疗组,治疗同体积生理盐水。术后第4天取扭转侧睾丸,检测组织病理学参数和生精细胞凋亡指数(AI),并检测睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。对照组行假手术。结果:治疗组与扭转组相比,Johnsen评分上升[(7.38±0.92)分vs(5.00±1.85)分,P<0.05],生精小管直径略增大[(178.75±1.58)μm vs(176.50±1.60)μm,P>0.05],生精细胞层数增加[(5.75±0.71)层vs(3.75±1.03)层,P<0.05],生精细胞凋亡指数AI明显降低[(16.25±1.67)%vs(40.50±1.60)%,P<0.05)],SOD活性明显上升[(52.67±3.57)U/mg prot vs(29.04±4.46)U/mg prot,P<0.05],MDA含量明显下降[(2.91±0.04)nmol/mg prot vs(4.63±0.05)nmol/mg prot,P<0.05]。结论:GSP对小鼠睾丸扭转复位后生精功能损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其能清除氧自由基、抑制脂质过氧化、提高机体抗氧化能力有关。     

氯沙坦对自发性高血压大鼠前列腺增生作用的实验研究

目的:研究氯沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)前列腺增生的作用及机制。方法:采用36只雄性SHR,随机分为氯沙坦高剂量干预组[30 mg/(kg.d)]、氯沙坦低剂量干预组[15 mg/(kg.d)]及对照组,每组12只。测量大鼠体重及尾动脉基础血压。分别予以氯沙坦混悬液及蒸馏水灌胃。干预6周后,测量各组SHR体重及尾动脉血压,麻醉动物,心脏取血待测,分离大鼠前列腺并称重后行组织固定、包埋、切片。电镜观察前列腺细胞超微结构。酶联免疫吸附法测定大鼠血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、白介素-6(IL-6)水平;免疫组织化学法测定大鼠前列腺组织中内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)表达阳性率。结果:与对照组比较,氯沙坦干预后低剂量和高剂量干预组SHR尾动脉收缩压明显降低[(203.75±10.28)mmHg vs(184.54±16.90)mmHg,P=0.013和(203.75±10.28)mmHg vs(166.88±14.74)mmHg,P<0.001],舒张压亦明显降低[(151.58±9.96)mmHg vs(136.71±14.28)mmHg,P=0.022和(151.58±9.96)mmHg vs(122.71±11.56)mmHg,P<0.001]。SHR前列腺重量在低和高剂量干预组中均比对照组明显降低[(0.64±0.10)vs(0.73±0.08)mg,P=0.011和(0.50±0.17)vs(0.73±0.08)mg,P<0.001];电镜观察示氯沙坦低剂量干预后基底细胞及柱状上皮细胞水肿,间质中纤维母细胞核异染色质浓集趋边、核周隙增宽,线粒体、内质网减少;氯沙坦高剂量干预组超微结构紊乱程度较低剂量干预组更明显;氯沙坦低剂量干预组、高剂量干预组血清AngⅡ水平较对照组均明显升高[(61.32±2.49)vs(54.85±7.20)pg/ml,P=0.021和(65.49±6.78)vs(54.85±7.20)pg/ml,P<0.001)];氯沙坦高剂量干预组血清IGF-1水平较对照组下降[(1.50±0.11)vs(1.60±0.10)ng/ml,P=0.03)];氯沙坦干预后血清IL-6水平较对照组无明显变化;免疫组化显示氯沙坦干预后大鼠前列腺组织eNOS表达阳性率较对照组明显增高,高剂量干预组较低剂量干预组升高更显著,氯沙坦干预组与对照组间eNOS阳性表达率比较(P=0.022),差异具有统计学意义。结论:氯沙坦可通过抑制肾素-血管紧张素系统、IGF-1进而抑制前列腺增生,也可通过抑制血管生成,起到延缓和抑制自发性高血压大鼠前列腺增生的作用。     

肥胖男性青少年性发育特点及其性激素水平分析

目的:探讨肥胖男性青少年性发育特点并对性激素水平进行分析。方法:选择自2010年1月至2012年6月期间到我院泌尿外科因小睾丸、小阴茎就诊的肥胖男性青少年156例为观察组,对照组选择社区健康青少年男性50例,测算两组对象的体重指数(BMI)、阴茎自然长度、睾丸容积并询问有无遗精及首次遗精年龄,采用放射免疫分析法测定血清黄体生成素(LH)、卵泡刺激激素(FSH)、催乳素(PRL)、总睾酮(TT)、游离睾酮(FT)、孕激素(P)和雌二醇(E2)水平,并计算TT/E2、睾酮分泌指数(TSI)。结果:①观察组BMI[(27.1±2.2)kg/m2]显著高于对照组[(20.4±1.6)kg/m2](P<0.05),阴茎自然长度[(5.6±1.7)cm]及睾丸平均容积[(7.6±2.3)cm3]显著小于对照组(P<0.05);两组青少年首次发生遗精年龄未现显著性差异(P>0.05),但观察组遗精发生率较对照组有极显著性下降(χ2=17.335,P<0.05)。②观察组血清LH、FSH、PRL、TT、FT、E2、P分别为(7.82±2.14)mIU/ml、(7.71±1.83)mIU/ml、(8.91±3.52)ng/ml、(0.73±0.20)ng/ml、(5.09±2.60)pg/ml、(48.57±8.34)pg/ml、(1.25±0.58)ng/ml,对照组分别为(5.39±1.76)mIU/ml、(6.82±2.01)mIU/ml、(8.26±2.97)ng/ml、(1.47±0.41)ng/ml、(11.28±4.72)pg/ml、(8.61±4.08)pg/ml、(0.64±0.19)ng/ml,其中观察组LH、E2、P显著高于对照组(P<0.05,P<0.01,P<0.05),TT、FT显著低于对照组(P均<0.01)。观察组TT/E2值(0.015±0.004)较对照组(0.173±0.037)显著降低(P<0.01);观察组TSI为(0.098±0.026),显著低于对照组(0.272±0.084,P<0.01)。③相关分析表明,BMI与PRL、E2呈显著正相关,与TT、FT、TT/E2及TSI呈显著负相关(P<0.05);阴茎自然长度与TT、FT、TT/E2及TSI呈显著正相关,与E2呈显著负相关(P<0.05);睾丸平均容积与LH、PRL、E2呈负相关,与TT、FT、TT/E2、TSI呈正相关(P<0.05)。结论:肥胖男性青少年存在性发育不良及性激素水平改变,肥胖及脂肪积聚导致E2增高、TT及FT下降、TT/E2、TSI下降尤为明显并与性发育存在显著相关性,提示男性青少年体内的脂肪含量对其生殖系统发育具有重要影响。     

胶球藻多糖对老年大鼠前列腺增生的抑制作用及作用机制

目的:探讨胶球藻多糖(CGD)对老年大鼠前列腺增生是否有对抗作用及其作用机制。方法:选用21月龄30只健康雄性SD大鼠,采用随机数字法均分为3组:老龄大鼠对照组;CGD低剂量组[50 mg/(kg.d)];CGD高剂量组[100 mg/(kg.d)];另设青年大鼠对照组(3月龄)。采用食物咀嚼法给药,连续给药3个月。给药3个月后,切除各组大鼠前列腺组织,称取前列腺湿重;HE染色观察前列腺组织结构的改变,Masson染色观察前列腺间质的改变,Western印迹观察各组前列腺组织磷酸化3-磷脂酰肌醇依赖性蛋白激酶(PDK1)、蛋白激酶B(PKB/Akt)和PTEN蛋白表达的改变。结果:老年大鼠前列腺湿重和前列腺指数较青年对照组明显增加,分别从(550±60)mg,1.94±0.10增加到(1 220±140)mg,2.08±0.17(P<0.01)。连续应用CGD[100 mg/(kg.d)]3个月的老年大鼠前列腺湿重和前列腺指数较老年对照组明显降低[(1 080±97)mg vs(1 220±140)mg,P<0.01;1.85±0.16 vs 2.08±0.17,P<0.05)。HE染色和Masson染色结果显示老年大鼠前列腺上皮组织和间质均较给药组大鼠厚,特别是间质增厚更明显。Western印迹结果显示老年大鼠前列腺组织磷酸化PDK1和磷酸化Akt蛋白表达较青年对照组大鼠明显增加,而磷酸化PTEN蛋白表达明显降低。CGD[50、100 mg/(kg.d)]可明显降低老年大鼠前列腺组织磷酸化PDK1和磷酸化Akt蛋白表达水平,上调磷酸化PTEN蛋白表达水平。但各组间总的PDK1、Akt和PTEN蛋白表达水平没有差异。结论:CGD能明显抑制老年大鼠的前列腺增生,这种抑制作用与下调PI3K/Akt通路有关。     

神经肽催产素与男性不育关系的研究

目的:分析特发性男性不育患者催产素(oxytocin,OT)水平及其受体的表达。方法:选取特发性少精子症(oligozoospermia group,OG)(含无精子)、弱精子症(asthenozoospermia group,AG)及少精子合并弱精子症(oligoasthenozoospermia group,OAG)男性不育患者共65例,年龄20～45岁;对照组(control group,CG)选取有自然生育史的健康男性志愿者20例(精液参数正常),年龄20～45岁。检测各组血清黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、睾酮(testosterone,T)及OT含量,进一步通过检测催产素受体启动子功能序列(oxytocin receptor promotor fuctional sequence,OTRP)、催产素受体羧基端部分mRNA序列(OTRmR-NA)以及OTR蛋白构象、组成来分析OTR表达情况。OTR蛋白印迹分析结果经灰度软件处理后转化为计数资料;统计方法采用单因素方差分析。结果:①男性生殖内分泌激素含量分析:OT:各病例组均高于CG[(79.30±3.83)pg/ml],具有统计学意义(F0.05/2(2,82)=8.29,P<0.001);LH:AG[(4.26±0.31)IU/L]及OAG[(4.55±0.40)IU/L]均低于OG[(6.77±0.57)IU/L]和CG[(7.19±0.50)IU/L](F0.05/2(2,82)=11.64,P<0.01);FSH:AG[(5.02±0.39)IU/L]低于CG[(8.91±0.91)IU/L]、OG[(11.86±1.76)IU/L]及OAG[(8.82±1.03)IU/L](F0.05/2(2,82)=7.22,P<0.01);T:各组间无统计学差异(F0.05/2(2,82)=0.42,P=0.739)。②OTR基因转录分析:OTR启动子功能序列和OTR成熟mRNA序列未发现明显的变异。③OTR构象分析:人OTR以单体和寡聚体同时存在,以寡聚体为主,常见为四聚体和六聚体;AG(0.41±0.03)和OAG(0.13±0.01)的单体明显多于OG(0.05±0.004)和CG(0.05±0.003)(F0.05/2(2,82)=115.50,P<0.01);AG中20%病例存在寡聚体明显减少现象。结论:男性不育患者血清OT含量及OTR表达的差异提示OT与男性不育间存在一定的联系,OTR单体表达升高及寡聚体表达降低为进一步探索OT与男性不育间的关系提供了新的方向。