HBV感染者胚胎中HBV DNA的测定及其相关因素分析

目的检测父/母为乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染者的胚胎中是否存在HBV DNA,探讨HBV经配子垂直传播的可能性,同时评估影响垂直传播发生的相关因素。方法收集单方HBV感染的229对夫妻的310个废弃胚胎。采用套式聚合酶链反应(PCR)法测定胚胎样本中的HBV DNA。采用Logistic回归分析患者年龄、血清HBV DNA载量、血清HBV多种抗原或抗体存在情况及授精方法等因素与HBV DNA存在的相关性。结果 7.74%(24/310)的胚胎中检出了HBV DNA;血清HBV DNA载量与胚胎中存在HBV DNA呈显著正相关[OR4.128,95%CI(1.319,12.914),P=0.015];授精方式(IVF或ICSI)的差异对胚胎HBV DNA阳性检查率几乎无影响(P0.05);同一对夫妻的多个胚胎中只有部分胚胎存在HBV DNA。结论垂直传播可能是HBV重要的传播途径之一。对于HBV DNA高载量的父/母,自然受孕或助孕治疗前建议进行针对性治疗,以降低胚胎感染HBV的风险。     

人类卵母细胞及植入前胚胎中印迹基因Snrpn mRNA的表达

基因印迹是指亲源依赖性单等位基因表达，即只有一个父源性或母源性等位基因表达，印迹基因的表达不符合经典的孟德尔遗传。基因印迹正常发生于配子形成过程中，可影响胚胎形成、发育、胎儿生长及胎盘分化，若印迹异常则导致畸型和智力障碍。在卵泡成熟和早期胚胎发育过程中，印迹基因Snrpn起着重要作用，Snrpn基因异常可导致帕德维利综合征（Prader-Willi syndrome，PWS）和安吉尔曼综合征（Angelman syndrome，AS）等先天性遗传病发生。本实验用单细胞巢式逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法，检测Snrpn在人类卵母细胞生发泡（GV）、     

冻融胚胎囊胚培养中胚胎质量与囊胚形成之间关系

目的探讨在冻融胚胎囊胚培养中,冻融胚胎的质量与囊胚形成率之间关系,为临床运用提供依据。方法对2013~2016年在江门市中心医院行冻融胚胎囊胚培养的449名患者共478个周期进行回顾性分析,按不同年龄、解冻后胚胎存活状态、D3胚胎细胞数、D3胚胎细胞评级、D3胚胎质量等分组比较解冻后囊胚培养的囊胚形成率、可用囊胚形成率、优质囊胚形成率,分析各因素与可用/优质囊胚形成的相关性。结果随着年龄增长,患者解冻后胚胎的囊胚形成率、可用囊胚形成率、优质囊胚形成率均有下降,但无统计学差异(P0.05);解冻后胚胎的囊胚形成率、可用囊胚形成率、优质囊胚形成率在解冻后全存活胚胎组显著高于半存活胚胎组(P0.05)、D3优质胚胎组显著高于非优质胚胎组(P0.05)、7~9细胞与9细胞胚胎组显著高于7细胞组(P0.05),D3 A+B级胚胎组的优质囊胚形成率显著高于C+D级胚胎组(19.82%vs.14.83%)(P0.05);Logistic分析结果表明,患者年龄、胚胎解冻存活状态、D3胚胎细胞数与可用囊胚形成显著相关(P0.05),患者年龄、胚胎解冻存活状态、D3胚胎细胞数、D3胚胎细胞评级与优质囊胚形成显著有关(P0.05)。结论在冻融胚胎囊胚培养中,患者年龄、胚胎解冻存活状态、D3胚胎细胞数、D3胚胎细胞评级影响囊胚的形成及质量,其中胚胎解冻后存活状态对可用/优质囊胚形成的预测价值最大。     

大鼠胚胎脊髓移植后增加损伤脊髓生长抑素mRNA的表达

[目的] 研究大鼠胚胎脊髓移植后是否能够影响生长抑素（SOM）mRNA的表达。[方法]将动物分为单纯半切洞损伤组（A组）、胚胎脊髓移植组（B组）。术后1、3、7、14、28d，采用原位杂交方法观察SOM mRNA的表达，采用计算机图像分析技术，进行定量分析。[结果] 胚胎脊髓移植组SOM mRNA蛋白表达明显多于单损伤组。[结论] 作者的研究表明胚胎脊髓移植后可使损伤脊髓SOM mRNA表达增多。     

PBMCs HBV逆转录酶mRNA表达与乙型肝炎的临床关系

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）逆转录酶mRNA存外周血单个核细胞（PBMCs）中的表达与乙型肝炎的临床关系。方法选择70例乙型肝炎患者（包括急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝硬化）及10例HBsAg阴性的健康体检者。分别提取其PBMCs中的总RNA,经无RNA酶的DNA酶I消化去除残存的基因组DNA后,逆转录合成cDNA。以HBVP基因区设计合成逆转录酶引物进行PCR扩增,检测HBV逆转录酶的表达情况。对1例阳性标本进行了克隆和测序,将所得序列与Gen．Bank数据库中已知核苷酸序列进行同源性分析。结果所得基因序列为379个核苷酸,与实验设计相符。与HBVadw2亚型标准一级结构比较,同源性为93．7％。对照组无1例HBV逆转录酶mRNA阳性表达;急性乙型肝炎组阳性表达率较低,为5．3％（1／15）;慢性乙型肝炎组阳性表达率为33．3％（12／36）,两组阳性率差异有显著统计学意义（P〈0．05）;肝硬化组阳性表达率为26．7％（4／15）,与慢性乙型肝炎组比较,阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。PBMCs中HBV逆转录酶mRNA表达阳性组与阴性组肝功能比较,大部分指标差异有显著统计学意义（P〈0．05）。PBMCs中HBV逆转录酶表达阳性率与血清HBeAg、HBVDNA阳性率之间无相关性（r=0．164、,=0．07）,其差异均无显著统计学意义（P〉0．05）。另外,乙型肝炎患者中,有家族史者的PBMCs逆转录酶mRNA阳性表达率占37．0％（10／27）,而无家族史者的仅占16．3％（7／43）,乙型肝炎患者的家族史与PBMCsHBV逆转录酶阳性表达有相关性（r=0．229）,差异有显著统计学意义（P〈0．05）。结论HBV逆转录酶在PBMCs中可独立复制,其表达与乙型肝炎的慢性化、重度化及家族聚集性有密切相关性,可为早期诊断指标之一。     

小鼠着床前胚胎miRNA表达的实验研究

目的研究微小RNA(miRNA)在小鼠着床前胚胎各发育阶段的表达谱,探讨miRNA在着床前胚胎发育中的作用和意义。方法建立小鼠超排卵、交配和胚胎收集系统,采用miRNA扩增、miRNA芯片和荧光实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法研究小鼠着床前胚胎miRNA表达。结果小鼠卵母细胞、2细胞胚胎、4~8细胞胚胎和囊胚分别表达55、53、62和72个miRNA;四个发育阶段共筛查到表达94个miRNA,32个在各发育阶段均表达,62个在不同发育阶段特异性表达。实时荧光定量PCR方法验证mmu-miR-721在小鼠着床前胚胎中表达。结论小鼠着床前胚胎表达大量的miRNA,其可能对胚胎发育和胚胎细胞的分化起重要调控作用。     

妊娠中晚期口服替诺福韦酯阻断HBV垂直传播的有效性及安全性

目的探讨感染HBV的妊娠中晚期孕妇口服替诺福韦酯（TDF）阻断HBV母婴垂直传播的有效性及安全性。 方法从已拒绝终止妊娠及接受TDF抗病毒治疗的孕妇中纳入研究对象共计100例,包括分别于妊娠第20周、第24周、第28周、第32周及第36周开始接受TDF抗病毒治疗的5个治疗组的孕妇各20例;从拒绝接受TDF抗病毒治疗的感染HBV的孕妇中纳入20例设为对照组。 结果治疗组孕妇分娩前HBV DNA水平显著低于对照组,差异具有统计学意义（t =－8.737、P < 0.001）。治疗组孕妇分娩前HBV DNA水平在孕24周和28周差异无统计学意义（t =－0.911、P = 0.368）。治疗组胎儿出生后48周检测HBsAg、HBV DNA阳性率均为0%。治疗组孕妇均未出现明显的药物不良反应,其所产婴幼儿均无出生缺陷及相关并发症。 结论孕28周前口服TDF抗病毒治疗能够有效且安全地阻断HBV的母婴垂直传播。     

天津地区主要空气污染物与胚胎停育关系的流行病学研究

目的初探天津地区主要空气污染物与孕早期胚胎停育之间的关系,从环境角度探讨影响胚胎生长发育、导致胚胎停育的可能危险因素。方法收集天津市市内六区15家综合性三甲医院和妇产科专科医院计划生育门诊2002年1月至2007年8月每月人工流产例数及当月胚胎停育病例的详细信息。获取同期天津市环境监测中心市内六区国控测点常规污染物（SO2、TSP、PM10、NO2）的月均浓度。以图表初探天津地区主要空气污染物与胚胎停育的关系,利用SPSS11．0统计软件分析各种污染物之间的相关性,不同月份、季节、采暖期与非采暖期胚胎停育占当月人工流产总数的百分比是否有差别。结果天津地区采暖期空气污染较非采暖期严重,且采暖期受孕者,其发生胚胎停育比例也相对较高,颗粒物质（PM10）、总悬浮颗粒物（TSP）的污染水平与胚胎停育的病例比例呈正相关。空气中的颗粒物质PM10可能是胚胎停育的危险因素,冬春季受孕可能对胚胎发育有潜在的负面影响。结论空气污染对人类胚胎的正常发育可能存在潜在的威胁。     

移植整倍体胚胎的女性年龄与妊娠结局的关系

目的 探讨移植了经胚胎植入前遗传学检测(PGT)技术筛选出的整倍体胚胎的女性年龄与妊娠结局的关系.方法 回顾性分析2015年1月至2019年10月于西北妇女儿童医院生殖中心接受第一周期PGT筛选的344个周期及对应的首次冻融胚胎移植周期患者资料,根据胚胎移植时女方年龄分为4组:A组(＜30岁,n=155)、B组(30～...     

胚胎植入相关因子与输卵管妊娠发生的关系

异位妊娠(宫外孕)发生机理还存在较大争议,目前认为是输卵管异常导致胚胎停留在输卵管而致宫外孕的发生。输卵管中雌、孕激素受体的改变影响宫外孕的发生,同时,由于炎症或者其它因素使得输卵管一些炎症因子的改变,包括Prokineticins及其受体、激活素(Activin)A、白血病抑制因子(LIF)、整合素、白介素1(IL-1)、粘蛋白-1(mucin-1)、同源框基因(HOX)、一氧化氮(NO)等的改变,可以影响到平滑肌收缩和纤毛活动,还释放出一些胚胎植入前信号。停滞的胚胎使得子宫内膜表达一些植入前因子,从而建立输卵管种植的环境。另外,输卵管组织中免疫细胞和血管生长因子的异常也会导致宫外孕的发生。体外受精-胚胎移植宫外孕的发生稍高于正常妊娠。     

肝癌组织中蛋白酶ICH-1的表达及与乙、丙型肝炎病毒感染的关系

目的　探讨蛋白酶ICH 1在原发性肝细胞性肝癌 (HCC)发生中的作用及与乙型肝炎病毒 (HBV)和丙型肝炎病毒 (HCV)感染的关系。方法　应用免疫组织化学方法对 40例原发性肝癌和癌旁组织中蛋白酶ICH 1 (ICH 1L和ICH 1S)、HBsAg及HCV非结构区 5抗原 (NS5抗原 )的表达进行观察。结果　 40例肝癌中 1 5例ICH 1L阳性 ,阳性率为 37.5 % ,2 1例ICH 1S阳性 ,阳性率为 52 .5 %。癌细胞ICH 1表达较正常肝细胞增加 ,而又明显低于癌旁肝细胞 (P <0 .0 5)。 2 3例HBsAg和NS5阳性病例中 (其中两者共同阳性 3例 ) ,ICH 1L阳性 1 0例 ,占ICH 1L阳性总例数的 66 .7% (1 0 / 1 5) ,ICH 1S阳性 1 3例 ,占ICH 1S阳性总例数的 61 .9%。结论　蛋白酶ICH 1表达异常与肝细胞癌变有关 ,在肝癌发生过程中可能起一定作用。HBV和HCV感染可能是引起ICH 1表达异常的两种较重要的病因。     

冻融胚胎复苏状态对移植周期临床结果的影响

目的　观察冻融胚胎复苏状态对移植周期临床结果的影响。　方法　 94对夫妇共进行冻融胚胎移植 (F ET) 99周期。其中自然周期 67个 ,激素替代治疗 3 2周期。冻融 2d或 3d胚胎采用慢速冷冻法和快速解冻法 ,根据卵裂球存活程度分为 3组 :A组为全部移植 1 0 0 %卵裂球存活胚胎 ;B组为全部移植部分卵裂球受损胚胎和C组为混合移植。　结果　 99个周期共融解胚胎 3 3 0个、移植 2 87个 ,融胎存活率 87% ,临床妊娠率 2 3 % ( 2 3 / 99) ,胚胎种植率 1 0 % ( 3 0 / 2 87)。A组临床妊娠率 3 1 % ( 6/ 1 4 )、种植率1 8% ( 1 0 / 3 8) ,B组分别为 6% ( 1 / 1 6)及 2 % ( 1 / 41 ) ,C组分别为 2 3 % ( 1 6/ 69)及 9% ( 1 9/2 0 8) ,A ,B两组比较差异有显著意义 (P <0 .0 5)。进一步分析F ET胚胎中含 4或 8细胞卵裂球完好胚胎数 0 2 ,≥ 3的胚胎种植率 ,分别为 4.5%、1 0 %、1 2 .5%及 43 % ;4组间差别有显著性 (P <0 .0 5)。　结论　移植冻融胚胎卵裂球复苏状态与临床妊娠率密切相关     

肝硬化大鼠肝脏内皮素受体基因的表达与门静脉压力的关系

目的　研究四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝脏内皮素(endothelin, ET)受体基因的表达,并探讨其与门静脉压力的关系。方法　采用逆转录多聚酶链反应(RT PCR)测定大鼠肝组织 ETA受体和ETB受体mRNA的表达水平, 并测量门静脉压力。结果　肝硬化大鼠肝组织 ETA受体(0 4245±0 0612 vs 0 2792±0 1115,P<0 05) 和 ETB受体(0 5984±0 1047 vs 0 2938±0 1399,P< 0 05) mRNA 的表达均较对照组均显著升高;肝硬化大鼠门静脉压力较正常大鼠明显升高(16 08±2 19 vs8 25±2 56 cmH2O,P<0 05),并且ETA受体mRNA的表达与门静脉压力显著正相关(r=0 8074,P<0 05)。结论　四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝组织ET受体 mRNA的表达显著升高,并且 ETA受体 mRNA的表达与门静脉压力显著正相关, 表明 ET受体的高表达在门静脉高压症的发病机制中起重要作用。     

The Relationship between the VEGF Levels and VEGF mRNA Expression and Clinical Course in Different Glomerulonephritis

In this study, serum and urinary VEGF levels and VEGF expression in PBMNC were correlated with daily proteinuria, renal function tests, and renal histopathologic findings in untreated patients with different glomerulonephritis and with the course of renal function and proteinuria for one year. Forty-five untreated patients with different glomerulonephritis and 11 healthy persons comprised the study and control groups, respectively. VEGF mRNA expression was detected by RT- PCR in peripheral blood mononuclear cells (PBMNC), and VEGF levels were measured by ELISA in serum and urine samples simultaneously. Male/female ratio was 24/21 and mean ages were 34.49 ± 14.98. Serum and urinary VEGF levels, VEGF expressions in PBMNC, and the ratios of urine VEGF/urine creatinine were found to be similar in patients and controls. There were important correlations between urinary VEGF levels and baseline serum Cr (p = 0.035) and ESR (p = 0.022). There was also a marginal correlation between urinary VEGF levels and baseline CCr (p = 0.072). There was no correlation between serum and urinary VEGF levels and PBMNC mRNA expression and pathological findings such as with or without glomerular sclerosis, tubulointerstitial fibrosis (TIF), periglomerular fibrosis, and mesangial cell proliferation in renal biopsy. Serum and urinary VEGF levels or VEGF expression in PBMNC in patients with renal amyloidosis or proliferative or nonproliferative glomerulonephritis were similar with that of healthy controls and each other. Serum and urinary VEGF levels and PBMNC VEGF mRNA expression in untreated patients with different glomerulonephritis and controls were similar. We found only one important correlation, that between urinary VEGF levels and baseline serum creatinine levels in patients with different glomerulonephritis. Urinary VEGF can be an important pathogenesis of glomerular disease or a simple proteinuria. Serum and urinary VEGF levels and PBMNC VEGFmRNA did not change by periglomerular sclerosis, periglomerular fibrosis, or tubulointerstitial fibrosis on renal biopsy. PBMNC VEGF mRNA expression decreased in patients undergoing remission. In addition to the important correlation between urinary VEGF and serum creatinine, we also found an important correlation between erythrocyte sedimentation rate and urinary VEGF. This finding was interesting because we could not find a similar conclusion in other studies.     

CD105 mRNA在原发性肝细胞癌的表达与术后复发的关系

目的研究原发性肝细胞癌（HCC）组织CD105 mRNA表达与根治术后早期复发的关系。方法用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法，检测32例HCC行根治性切除术后随访1年以上患者及20例肝内胆管结石患者（对照组）肝组织CD105 mRNA的表达情况。结果中心处癌组织中CD105 mRNA的表达水平为0．45±0．02，明显高于对照组肝组织的0．26±0．02（P〈0．05）；肿瘤边缘处癌组织中CD105 mRNA的表达水平为0．65±0．08，明显高于中心处癌组织（P〈0．05）。边缘癌组织CD105 mRNA高表达与根治术后早期复发有关（t=4．34，P=0．00）；中心处癌组织CD105 mRNA表达与根治术后早期复发无关（t=0．81，P=0．43）。中心癌组织、边缘癌组织CD105 mRNA表达与患者年龄、肿瘤的大小、临床病理分期和病理类型等均无关（P〉0．05）。结论HCC边缘处癌组织CD105 mRNA表达水平明显高于中心处癌组织及对照组肝组织，且其高表达水平与HCC根治术后早期复发有关。     

HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者HBV前C/BCP突变/准种与HBeAg和HBV DNA的关系

目的探讨HBeAg阳性慢性乙型肝炎（eP-CHB）HBV前C/BCP突变/准种及其与HBeAg、HBV DNA水平的关系。 方法采用断面研究对2016年1月至2018年12月就诊于首都医科大学附属北京佑安医院的220例eP-CHB患者进行前C/BCP突变检测，其中24例患者进行前C/BCP区扩增、克隆，同步检测血清HBeAg和HBV DNA水平，分析前C/BCP突变/准种的发生情况及其与HBeAg和HBV DNA水平的关系。 结果220例eP-CHB患者中，HBV前C/BCP总突变率为70.0%（154/220），前C/BCP共同突变率为18.2%（40/220），前C突变率为30.9%（68/220），BCP突变率为57.3%（126/220）。HBV DNA≥ 5 lgIU/ml患者上述4种突变检出率均高于HBV DNA< 5 lgIU/ml者，其中前C/BCP总突变和BCP突变患者差异有统计学意义（χ² = 5.809、P = 0.016，χ² = 5.081、P = 0.024）。HBeAg水平越低（< 500 COI、500～1 000 COI和> 1 000 COI共3组患者比较），以上4种突变检出率越高，差异有统计学意义（χ² = 31.738、17.291、16.263、22.164，P均< 0.001）。HBV DNA≥ 5 lgIU/ml患者中，HBeAg水平越低，以上4种突变检出率越高，差异亦均有统计学意义（χ² = 40.503、19.654、16.727、29.119，P < 0.001）。准种检测中，前C区高突变组患者HBeAg水平低于低突变组，差异有统计学意义（t = 2.230、P = 0.017），前C、BCP高突变组与低突变组间HBV DNA水平差异无统计学意义（t = 0.624、P = 0.462，t = 0.893、P = 0.317）。 结论eP-CHB患者中仍存在广泛的前C/BCP突变。高HBV DNA、低HBeAg表达者，前C和BCP突变的发生率较高；前C区突变株在准种中比率高者更影响HBeAg的表达。推测前C/BCP突变可能是eP-CHB出现低HBeAg、高HBV DNA，并导致抗病毒治疗停药后易复发的原因。     

应用巢式RT-PCR联合检测原发性肝癌病人外周血AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达

目的 寻找一种敏感的方法以早期发现原发性肝癌的复发与转移。方法 应用逆转录聚合酶链反应分别在术前、术后1周和术后2个月检测37例行根治性切除的原发性肝癌病人外周血中MAGE-1 mRNA和AFPmRNA的表达，并随访所有病人1年。结果 外周血中MAGE-1 mRNA和AFPmRNA的阳性率和肿瘤的病理分期相关；肿瘤病期越晚，外周血中微转移灶的检出率越高。1年的随访中，有9例病人出现复发，MAGE-1和(或)AFPmRNA的阳性率为77．8％(7／9)，其中6例外周血中MAGE-1mRNA和(或)AFPmRNA持续阳性，2例由阴性转为阳性。另有10例病人MAGE-1mRNA和(或)AFPmRNA由术前阳性术后转为阴性，随访1年中无复发。结论 联合检测外周血MAGE-1和AFPmRNA的表达是早期发现肝癌术后复发、评估预后一项敏感可信的指标。     

细胞因子IL-1β和TNF-α mRNA在人精子表达的变化及意义

目的：了解IL－1β和TNFα在人精子表达的变化及意义。方法应用逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）检测13例正常生育者、30例不育者及30例慢性及30例慢性前列腺炎患者精子IL－1β和TNFα mRNA表达。结果不育精子中IL－1β和TNFα mRNA表达增显著低于正常生育者（P＝0．018和P＝0．046）。慢性前列腺炎患者精子中TNFα mRNA的表达显著低于正常生育者（P＝0．018）。而IL－1βmRNA表达与正常生育者相比差别无显著性意义（P＝0．42）。IL－1β和TNFα mRNA－NA在不育者与慢性前列腺炎患者精子中的表达差别无显著性意义（P＝0．49和P＝0．62）。结论某些因素可能干扰不育症患者精子IL－1βTNFα合成,导致精液质量下降及不育。生殖道炎症也可能影响精子TNFα表达,其机制和意义有待进一步研究证实。