微阵列芯片技术在耐多药结核病临床诊断中的应用研究

目的 探讨微阵列芯片技术在耐多药结核病（multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB）临床诊断中的应用。方法 收集2020年6月至2021年5月经滨州市中心医院确诊的245例住院肺结核患者的标本（痰液标本125例和痰培养分离菌株120例）。痰液标本同时采用DNA微阵列芯片技术和传统培养法检测其结核杆菌阳性率。痰液标本和分离菌株均采用DNA微阵列芯片技术进行肺结核耐多药检测和分枝杆菌菌种鉴定。结果 125例痰液标本经DNA微阵列芯片技术和痰培养法检测,阳性率分别为58.4%（73/125）和24.8%（31/125）,两种方法比较差异有统计学意义（2=14.520,P<0.001）。采用DNA微阵列芯片技术检测125例痰液标本和120例分离菌株,共检出结核分枝杆菌复合群192例,非结核分枝杆菌7例。结核分枝杆菌复合群192例检出耐药者41例,其中耐异烟肼15例,耐利福平19例,同时耐两种药物7例。非结核分枝杆菌包括胞内分枝杆菌4例,堪萨斯分枝杆菌2例,鸟分枝杆菌1例。结论 DNA微阵列芯片技术检测周期短,能同时进行结核分枝杆菌耐多药检测和菌种鉴定,对MDR-TB的早期诊断和治疗有较大的临床应用价值。     

耐多药结核病耐药状况分析

目的：探讨耐多药结核病（MDR—TB）的耐药状况。方法：对136例痰培养阳性的标本采用绝对浓度间接法试验进行耐药性测定，筛选出57例耐多药性肺结核病例，结合病例分析其耐药种类及意义。结果：57例MDR—TB患者中，获得性耐多药率为72％，青年组最多：原发性耐多药率为28％，以老年组为主。耐药原因以各种原因导致的不规则用药为主，占80．5％。耐药组合中以同时耐H、R、S三种药物为主，占40．4％。结论：本组病例获得性耐多药率高于原发性耐多药率，并以青年组为高，提示过去一段时间本地的结核病治疗上可能存在不足之处，耐多药的原因主要为不规则治疗所致，今后应加强宣教，加强督导管理。     

线性探针杂交技术在广西百色地区耐药结核病检测中的应用

目的 了解广西百色地区利福平、异烟肼耐药基因的分布情况。评价线性探针杂交技术(LPA)检测耐药结核分枝杆菌的应用价值。方法 利用LPA技术与传统比例药敏试验分别检测496例结核分枝杆菌感染患者痰标本,统计出利福平、异烟肼各个耐药基因的分布情况并与传统比例药敏试验作比较。结果 LPA技术对结核病患者耐多药的检出率和传统比例药敏试验相比较差异无统计学意义(P>0.05) 。LPA技术检测耐利福平和异烟肼的灵敏度、特异度分别为97.0%、99.1%和77.8%、 99.5%,耐多药结核病的灵敏度和特异度分别为82.8%和99.8%。本地区利福平耐药基因突变频率最高的是rpoB WT8 占32.4%,其次是ropB MUT3占29.7%;异烟肼耐药基因最常见的突变是 katG WT 占46.8%,其次是katG MUT1 占43.6%。kappa一致性检验评价两种药物耐药性检测方法的kappa值分别为0.965和0.904。结论 广西百色地区结核分枝杆菌利福平的耐药基因以rpoB WT8和ropB MUT3两个位点突变为主,而结核分枝杆菌异烟肼的耐药基因则以katG WT和katG MUT1位点突变多见。LPA技术能快速、准确诊断结核分枝杆菌利福平、异烟肼的耐药性及多药耐药性,LPA技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性与传统比例药敏试验具有高度的一致性,LPA检测技术可以大大地缩短检测的时限,辅助临床快速诊断出多耐药的结核菌。     

利福布丁对耐多药结核病的疗效观察

目的:探讨利福布丁治疗耐多药结核病的临床疗效.方法:选取来我院门诊及住院治疗的耐多药肺结核病患者作为观察对象,并随机分为两组,治疗方案分为3个月强化治疗,6个月巩固治疗,9个月继续治疗,对照组强化期给予利福平+帕司烟肼+左氧氟沙星+乙胺丁醇+丙硫异烟胺+丁胺卡那霉素,巩固期减去丁胺卡那霉素,继续治疗期减去乙胺丁醇,观察组使用利福布丁替换利福平,比较两组患者治疗效果.结果:两组患者治疗后症状、疗效较治疗前均有所好转,其中观察组患者改善更为明显,较对照组有统计学差异.经过18个月治疗后,观察组痰菌阴转率及病灶吸收率显著高于对照组.治疗后,观察组不良反应发生情况明显少于对照组患者.结论:在联合用药治疗耐多药结核病患者时,联合使用利福布丁方案疗效优于联用利福平组,值得进一步深究.     

重庆市结核病患者利福平耐药与耐多药的相关性分析

目的 了解重庆市结核病患者利福平（rifampicin, RFP）耐药与耐多药的相关程度,为重庆市RFP耐药及耐多药结核病患者的准确诊断和及时治疗提供科学依据。方法 收集重庆市公共卫生医疗救治中心2017—2019年收治的培养阳性且鉴定为结核分枝杆菌的患者菌株,进行以下十种抗结核药物的药敏试验：RFP、异烟肼（isoniazid, INH）、链霉素、乙胺丁醇、氧氟沙星、卡那霉素、阿米卡星、卷曲霉素、对氨基水杨酸和丙硫异烟胺。共收集菌株937例,分析其RFP和INH耐药情况。结果 937例菌株中,RFP耐药菌株288例,RFP耐药INH敏感菌株比例为20.14%（58/288）;RFP敏感菌株为649例,其中INH耐药菌株占比7.09%（46/649）。重庆市耐多药患者比例为24.55%,广泛耐药肺结核患者占比2.99%。无论RFP耐药还是RFP敏感菌株中,INH耐药或敏感的患者在年龄、性别和治疗史方面差异均无统计学意义。结论 重庆市RFP耐药结核病患者中有较高比例为异烟肼敏感患者,RFP耐药不适合作为重庆地区耐多药患者确诊的指标,应采取有效手段同时检测RFP和INH耐药情况,以指导临床医生为结核病患者制定合理的化疗方案,推动重庆市结核病防治工作的进展。     

应用分子线性探针技术快速筛查耐多药结核病的研究

目的应用分子线性探针(Geno Type MTBDRplus·GTplus)技术检测绵阳地区结核分枝杆菌的耐药性,了解耐多药结核病的状况,为制定地区结核病的预防控制策略提供科学依据。方法应用病例对照研究方法,对绵阳市9个县(市、区)送检的235株结核分枝杆菌同时运用GTplus和国际标准法-比例法检测利福平(RFP)和异烟肼(INH)的耐药性,分析GTplus诊断耐多药结核病的敏感性和特异性。结果 228株样本的结果有效,GTplus检测绵阳地区结核病耐多药率为14.04%(32/228),与比例法14.47%(33/228)相比,诊断耐多药结核病的结果差异无统计学意义(P0.05),敏感性和特异性分别为81.82%(27/33)和97.44%(190/195);结果报告时间1 d,明显快于比例法的42 d。结论 GTplus诊断耐多药结核菌特异、敏感、快速、方便,对控制结核病的传播具有重要意义。     

耐多药结核病

近10多年全球结核病流行(感染患病与死亡)呈持续上升趋势。结核菌耐药或耐多药的增加是主要原因之一。此外,耐多药结核菌与HIV双重感染并存时易造成耐多药结核病暴发流行,且临床治愈困难死亡率极高,成为结核病控制的严重威胁。因此,结核耐药,尤其是耐多药问题引起了广泛关注。这里主要就耐多药结核病的流行临床和控制等方面有关问题作探讨,供结核病临床与防治工作参考。 1 结核病耐药的分类、概念、名称的统一 1.1 原发耐药(PDR,primary dnug resistance) 一般概念指未用过抗结核药,其结核菌耐任一抗结核药者。WHO耐药监测指南的定义则是：未用过抗结核药,或用药＜1月,其结核菌耐任一抗结核药者。     

78例耐多药结核病临床分析

结核病是严重危及全球的公共卫生问题之一。 5 0年来 ,化学疗法在控制结核病的流行上发挥巨大作用 ,使 90 %以上的初治肺结核患者获得治愈。然而随着化学药物的广泛应用 ,耐药结核病 ,尤其是耐多药结核病 (MDR- TB)对全球结核病控制造成严重威胁。为了提高对耐多药结核病的认识 ,本文分析了 78例耐多药结核病的临床资料 ,现报告如下。1　临床资料1.1　对象　本院 1996年 10月～ 1999年 10月住院的结核病人中进行了痰结核菌培养 ,并对结果为阳性者进行了药敏试验共 96 9人 ,抽取其中至少对异烟肼和利福平均耐药的 78例 ,男 5 1例 ,女 2 7例…     

耐多药及广泛耐药结核病的诊断与治疗

正结核病患者感染的结核分枝杆菌经体外试验证实至少同时对异烟肼、利福平耐药,被称为耐多药(multidrug resistance,MDR)。耐多药结核病(MDR-TB)包括原发性和获得性两种类型。原发性MDR-TB是由耐多药结核杆菌的传播引起的,而获得性MDR-TB是在治疗过程中出现的,这也是当前MDR-TB产生的主要原因。结核病患者感染的结核分枝杆菌经体外试验证实除至少同时对异烟肼、利福平耐药外,还对任何氟喹诺酮类药物产生耐药,以及3种二线抗结核注射药物(卷曲霉素、卡那霉素和阿米卡星)中的至少1种耐     

运用线性探针技术快速检测耐多糖结核分枝杆菌的效果评价

目的 评估线性探针技术快速检测耐多药结核分枝杆菌的效果。方法 选取317例结核分枝杆菌分离株分别进行MGIT960液体药物敏感性试验和线性探针快速检测,以液体法作为金标准,探讨线性探针检测技术的敏感性和特异性以及Kappa值。结果 317株结核分枝杆菌复合群样本分别进行MGIT960液体药物敏感性试验和线性探针快速检测,其中液体法利福平(RFP)耐药率为5.5%,异烟肼耐药率为11.5%,耐多药(MDR)患者检出率为4.7%;线性探针快速检测法利福平(RFP)耐药率为7.4%,异烟肼耐药率为11.7%,MDR检出率为5.7%。以液体法为金标准,线性探针检测技术检测利福平和异烟肼的敏感性和特异性分别为94.3％、97.7％和86.3％、98.0％。结论 线性探针检测技术是一个敏感、特异和快速的诊断MDR的有效方法。     

MDR-TB诊断试剂盒鉴定广东结核分枝杆菌复合群及RIF和INH药敏效果分析

目的评价耐多药结核病(MDR-TB)快速诊断试剂盒对广东地区结核分枝杆菌复合群的鉴定效果及利福平(RIF)和异烟肼(INH)的药敏检测效果。方法选取151份痰标本和150份细菌培养物,采用MDR-TB快速诊断试剂盒对其进行菌群鉴定及RIF和INH药敏检测,结果分别与常规法进行比较。结果与常规生化菌种鉴定结果相比,两者鉴定结果一致率为96.7%(291/301);与常规比例法药敏试验结果相比,诊断试剂盒检测单耐RIF的灵敏度为94.1%(64/68),检测单耐INH的灵敏度为87.7%(57/65),检测RIF和INH皆耐药株的灵敏度为79.3%(46/58),检测RIF和INH皆敏感株的特异性为100%。结论该试剂盒能简单快速地鉴定结核分枝杆菌复合群,检测RIF和INF的敏感性高、特异性好,在广东地区应用前景较好。     

PCR-探针熔解分析法检测结核分枝杆菌利福平耐药性的临床应用

目的评价PCR-探针熔解分析法(probe melting analysis assay,PMAA)检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对利福平(rifampin,RFP)耐药性的临床应用价值。方法采用常规比例法和PCR-PMAA对512株MTB临床分离株进行RFP药敏试验,并进行RFP耐药相关基因rpoB DNA测序。结果以常规比例法为标准,PCR-PMAA检测RFP耐药性的敏感性、特异性分别为97.5%、96.2%,阳性和阴性预测值分别为94.1%、98.4%、符合率及约登指数分别为96.7%及0.93。193株比例法和PCR-PMAA两法检测均耐药的菌株,经DNA测序证实174株rpoB基因RFP耐药决定区(RFP resistance determining region,RRDR)发生单位点密码子突变,19株RRDR发生不同组合型的双位点密码子联合突变;5株比例法检出耐药、PCR-PMAA敏感的菌株,DNA测序rpoB基因未见突变;12株比例法检出敏感、PCR-PMAA耐药的菌株,DNA测序证实其中7株511位点密码子突变,5株533位点密码子突变;302株两法检测均敏感菌株DNA测序结果未见rpoB耐药相关的基因位点突变。PCR-PMAA检测MTB临床分离株rpoB基因突变结果与DNA测序结果完全一致。结论 PCR-PMAA法能高效检出MTB对RFP耐药的相关基因突变,用于检测MTB对RFP耐药性的敏感性高、特异性强,方法简便、快速、价廉,具有良好的临床应用前景。     

GeneXpert Mtb/RIF检测技术在结核病诊断中的应用评价

目的 评估GeneXpert Mtb/RIF检测技术对肺结核诊断和耐利福平肺结核筛查的效果,为筛选最佳实验室检测方法提供依据。方法 收集三亚市定点医院结核病门诊2015年5月—2016年12月243例临床诊断为肺结核的痰标本,分别进行涂片镜检、痰培养和GeneXpert Mtb/RIF检测,分析三种方法的敏感度和特异度。以比例法药敏为标准,分析GeneXpert检测利福平耐药的敏感度和特异度。结果 涂片镜检与GeneXpertMtb/RIF对比,GeneXpertMtb/RIF检测结核菌的敏感度为93.7%,特异度为28.9%,GeneXpertMtb/RIF检测与涂片镜检一致率为83.5%。痰培养与GeneXpertMtb/RIF对比,GeneXpert检测结核菌的敏感度为96.7%,特异度为56.6%,GeneXpert检测与痰培养的一致率为91.8%。利福平耐药大多与rpoB基因突变有关,GeneXpertMtb/RIF检测利福平耐药与比例法药敏一致率为98.1%, 敏感度为88.9%,特异度为98.9%,并且可检测出利福平耐药基因位点。结论 GeneXpert Mtb/RIF 检测技术适用于结核分枝杆菌及耐药结核分枝杆菌的快速筛查,在痰涂片和痰培养上补充GeneXpertMtb/RIF检测可提高病原学检出率,尽早发现耐多药病患。     

Xpert MTB/RIF和LPA对肺结核病诊断价值的比较

目的 评价Xpert MTB/RIF和线性探针技术（line probe assay, LPA）对肺结核病的诊断价值。方法 选取2016年1月—2018年3月陕西省结核病防治研究所和汉中市第二人民医院就诊的258例肺结核可疑症状者作为研究对象,应用痰涂片镜检法、固体培养法、Xpert MTB/RIF、LPA对所有研究对象的同一份痰样本进行检测,结合受试者工作特征 (receiver operation characteristic, ROC)曲线进行分析比较。分别以临床诊断和痰涂片镜检+固体培养结果为标准,比较Xpert MTB/RIF和LPA对肺结核病的诊断效能;以固体比例法药敏试验结果标准,比较Xpert MTB/RIF和LPA检测利福平耐药性的效能。结果 在涂阴培阴组中,Xpert MTB/RIF对结核分枝杆菌阳性检出率（20.00%）显著高于LPA阳性检出率（11.03%）,差异有统计学意义（P=0.04）。以临床诊断结果为金标准,Xpert MTB/RIF和LPA的ROC曲线下的面积（area under curve, AUC）分别为0.874、0.846,AUC差异无统计学意义。以痰涂片镜检法、固体培养法结果为标准,Xpert MTB/RIF和LPA的AUC分别为0.882、0.927,AUC差异有统计学意义（P=0.02）。以固体比例法药敏试验结果为标准,Xpert MTB/RIF和LPA检测利福平耐药性的AUC分别为0.889、0.909,AUC差异无统计学意义。结论 Xpert MTB/RIF和LPA对于肺结核病均具有较好的辅助诊断价值,Xpert MTB/RIF对于菌阴肺结核有更高的阳性检出率。     

分子线性探针技术分析四川地区结核分枝杆菌耐药情况

摘要：目的应用分子线性探针GenoType®MTBDRplus Assay（GTplus）试剂盒检测四川地区耐多药结核分枝杆菌（MTB）
株的基因型特征,并初步了解耐药结核病的流行情况。方法选取结核确诊患者105份临床标本和68株临床分离株,应
用GTplus 试剂盒检测MTB耐利福平和异烟肼相关的rpoB、katG、inhA 基因的突变,推测其对利福平和异烟肼的耐药
性。结果151例样本的GTplus结果有效,总耐药率和耐多药率分别为29.14%（44/151）和17.22%（26/151）;耐利福平和
高、低水平耐异烟肼的突变菌株分别为21.85%（33/151）、21.19% (32/151）和3.31%（5/151）;突变型以rpoB S531L、katG
S315T1和inhA C-15T为主。痰标本组的耐多药菌株比率明显高于肺外标本组。结论四川地区MTB耐药形势严峻,尤
以耐多药结核病的情况严重,耐药菌株以rpoB S531L和katG S315T1突变型为主,应推广快速分子药敏试剂盒的临床应
用,快速并提高对耐药结核病的诊断。     

Evaluation of Microscopic observation drug susceptibility (MODS) assay as a rapid,sensitive and inexpensive test for detection of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis

BackgroundMicroscopic observation drug susceptibility (MODS) assay has been suggested as a low cost method for rapid, accurate detection of tuberculosis (TB) and multidrug resistant tuberculosis (MDR-TB).MethodsA total of 2424 samples collected from 1063 eligible patients of suspected pulmonary or extrapulmonary TB were subjected to MODS assay. Performance of MODS was compared with culture and drug susceptibility testing (DST) by conventional solid Lowenstein–Jensen (LJ) media or liquid Mycobacteria Growth Indicator Tube (MGIT) culture.ResultsWhen compared to reference gold standard of positivity in either solid or liquid reference culture, the MODS assay had sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value of 91.3%, 98.2%, 96.0% and 95.9% respectively. MODS took a median time of 10.3 days to culture positivity as compared to 13.8 days using MGIT and 30.5 days using LJ culture. Culture and DST being concurrent in MODS, the median turnaround time for DST was the same as that for culture i.e. 10.3 days. The overall median turn around time for culture positivity and DST using manual MGIT and LJ medium was 23.6 days and 61.2 days respectively. The concordance between MODS culture and the reference susceptibility method was 97.7% for rifampicin, 95.6% for isoniazid, 98.5% for rifampicin and isoniazid. The cost of performing a single MODS assay was INR 200.ConclusionMODS is a rapid and sensitive, yet simple and inexpensive test that may be helpful to enhance diagnostic accuracy, and case detection of TB and MDR-TB in resource constrained settings.     

扩增结核分枝杆菌DNA的微孔杂交比色检测

目的建立简单的杂交方法特异地检测聚合酶链反应(PCR)扩增的结核杆菌DNA.方法用玻璃粉提纯结核分枝杆菌DNA,dUTP-脲DNA糖基化酶(UDG)防污染,用5'端标记生物素的引物进行PCR扩增,5'端带标记的扩增产物与固定在微孔板上特异探针杂交,然后用酶标链霉亲和素进行酶联免疫法检测.结果对100份来自结核病人高度怀疑有结核分枝杆菌的痰标本检测,扩增杂交法检出40份阳性,比抗酸染色法(15/100),培养法(28/100)和PCR电泳法(35/100)检出率高,而50份来自无结核感染者的痰标本,几种方法检查均为阴性.结论该方法可灵敏、特异、客观地检测临床标本中的结核分枝杆菌,比传统PCR-电泳法优越.     

河南省耐多药结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB的突变特征

目的:分析河南省耐多药(MDR)结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。方法:收集150株MDR结核分枝杆菌,应用PCR扩增利福平耐药相关基因rpoB编码区全长并测序,以结核分枝杆菌H37Rv标准株DNA序列为参比序列,分析菌株的突变特征。结果:MDR菌株rpoB基因编码区存在突变者占97.2%(140/144),突变在利福平耐药决定区(RRDR)内者占96.5%(139/144),RRDR内和RRDR外同时存在突变者占99.3%(139/140);突变热点依次为rpoB531、rpoB526和rpoB516。发现未被记录的15个突变位点和4个突变类型,其中rpoB1284位点突变可能是多态性位点,与利福平耐药无关。结论:检测河南地区结核分枝杆菌rpoB基因RRDR内位点的突变可预测MDR结核分枝杆菌的耐药性。     

免疫层析法检测MPT64蛋白在结核与非结核分枝杆菌鉴定中的临床应用价值

目的评价免疫层析法检测MPT64蛋白鉴别结核与非结核分枝杆菌的临床应用价值。方法采用免疫层析法检测201株分枝杆菌,其中包括4株结核分枝杆菌复合群(mycobacterium tuberculosis complex,MTC)标准株、135株结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株、17株非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacterium,NTM)标准株和45株NTM临床分离株的MPT64蛋白。结果 4株MTC标准菌株和135株MTB临床分离株中,138株MPT64蛋白检测阳性,1株检测为阴性,敏感性为99.3%(138/139),17株NTM标准株和45株NTM临床分离株MPT64蛋白检测均为阴性,特异性为100%(62/62),201株结核和非结核分枝杆菌MPT64蛋白检测的准确度为99.5%(200/201)。结论应用免疫层析法检测MPT64蛋白鉴别结核与非结核分枝杆菌敏感性高,特异性强,方法简便、快速、准确,具有良好的临床应用前景。