急性高眼压下猫眼视网膜酶的活性改变

我们用酶组化方法系统观察急性高眼压下猫眼视网膜及其血管１０种酶活性的改变，这些改变亦即视网膜缺血－再灌流所引起的损害，自由基清除剂过氧化氢酶和过氧化物酶活性降低，证明自由基增多是造成上述损害的之一，其处理原则为在降低高眼压的同时，缺血期宜通过血循环以外途径补充视网膜所急需的氧和营养物，缺血后的再灌流期给予自由基清除剂。     

兔急性高眼压状态后眼组织自由基及过氧化氢酶的变化

目的：观察急性高眼压状态后眼组织中自由基及过氧化氢酸活性变化。方法：用前房灌注生理盐水法制成急性高眼压模型后,按不同时间用电子自旋共振法测定小梁组织、视网膜组织中自由基的g值及量,同时测定视网膜、房水及血浆中过氧化氢酶的活性。结果：高眼压后0.5h直至第3天视网膜及小梁组织中均测到氧自由基并呈升高趋势。视网膜、房水中过氧化氢酶活性降低,血液中过氧化氢酶活性无改变。结论：急性高眼压状态视网膜、小梁组织中存在自由基损伤。提示急性闭角型青光眼发作手,应使用自由基清除剂,以保护眼组织。     

氨基胍对大鼠慢性高眼压视网膜PI-3K表达的影响

目的研究慢性高眼压过程中大鼠视网膜磷脂酰肌醇-3-激酶（PI-3K）表达的变化及应用氨基胍对其表达的影响，探讨氨基胍对慢性高眼压视网膜的保护作用。方法应用免疫组织化学、RT-PCR和Westernblot的方法，观察应用及未应用氨基胍的慢性高眼压大鼠视网膜在不同时点的差异及PI-3K表达的变化。结果与正常对照组相比，慢性高眼压大鼠应用与未应用氨基胍者，视网膜均随着高眼压时间的延长逐渐出现形态学变化，于高眼压的第21d视网膜变薄，节细胞数量减少；在此过程中，PI-3K表达增多。慢性高眼压大鼠的视网膜应用氨基胍者与未应用氨基胍者相比，其形态学变化较小，而PI-3K表达则明显增多，两者差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论PI-3K是慢性高眼压视网膜损伤过程中的保护性因素，氨基胍通过上调其表达发挥对视网膜的保护作用。     

鼠诱发性高眼压和细胞凋亡的实验研究

目的 探讨鼠实验性急慢性高眼压的视网膜组织损伤机制。方法 应用前房内连续灌注生理盐水的方法制成急性高眼压鼠模型。实验后第1、2、4、5、7和10d观察视网膜反应。巩膜表浅静脉烧灼法制成慢性高眼压模型，分别于实验后1和2个月观察视网膜损害情况。用TUNEL技术和半胱胺酸天冬胺酸酶免疫组化研究法以证实视网膜细胞的凋亡机制，NADPH辅酶反应识别一氧化氮诱导的细胞。结果 急性高眼压模型的免疫组化研究证实节细胞凋亡是早期的细胞死亡，而在对照组一氧化氮合成酶在视网膜组织并不表现明显的活性。慢性高眼压模型实验提示一氧化氮合成酶活性增加，表明一氧化氮具有神经保护作用而并非仅存有细胞毒性作用。TUNEL和半胱胺酸天冬胺酸酶研究表明，凋亡开始于慢性高眼压的不同阶段。结论 了解高眼压所致的视网膜损害的机制为研究在细胞变性过程中某些物质对凋亡、一氧化氮合成酶和突触传递的影响，尤其是对研究青光眼节细胞死亡的机制提供了基础。     

深低温保存角膜内皮细胞的酶组织化学观察

对深低温(-196℃)保存40和140天的兔角膜及26天到611天的人角膜内皮细臌的酶活性做了测定。发现琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶和乳酸脱氢酶活性较强,酸性磷酸酶活性中等,ATP酶和5′-核苷酸酶活性较低,均与对照组相似。未测到碱性磷酸酶、磷酸化酶和葡萄糖-6-磷酸酶。     

视网膜挫伤的酶组织化学及组织学研究

对兔眼球挫伤后视网膜与糖代谢有关的酶：琥珀酸脱氢酶（SDH）、苹果酸脱氢酶（MDH）、乳酸脱氢酶（LDH）、葡萄糖—6—磷酸脱氢酶（G6PD）、葡萄糖—6—磷酸酶（G6P）、磷酸化酶及三磷酸腺苷酶（ATP－ase）的活性做了测定，发现眼球挫伤后SDH、MDH、LDH及G6PD活性降低，而G6P、磷酸化酶及ATPase活性增强，提示眼球挫伤后视网膜的能量代谢发生了障碍。并提示可能与外伤引起视网膜缺血缺氧有关。     

美金胺对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞保护作用的实验研究

目的探讨美金胺对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）的保护作用。方法以生理盐水在前房内加压灌注制作大鼠急性高眼压模型，然后腹腔内注射美金胺或生理盐水，分为美金胺治疗组和急性高眼压对照组各20只，另设健康对照组大鼠8只。采用免疫组织化学法和脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸末端标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated 2＇-deoxyuridine 5＇-triphosphate-biotin nick end labeling，TUNEL），检测大鼠RGCs caspase-3和凋亡细胞的表达。结果健康对照组无caspase-3与凋亡细胞表达。急性高眼压对照组在高眼压6h后视网膜出现凋亡细胞，逐渐增加至24h达高峰，后逐渐减少，72h时仅有少数凋亡细胞；caspase-3表达改变与凋亡细胞表达相似。美金胺治疗组的变化规律同急性高眼压对照组。急性高眼压6，24和72h后凋亡细胞与caspase-3的表达在3组间的差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。结论细胞凋亡可能在视网膜急性高眼压损伤过程中起重要作用，美金胺对RGCs具有保护作用。     

持续性低眼压对视功能损伤机制实验研究

目的探讨眼外伤后或手术后持续性低眼压对视功能损伤的机制。方法健康青紫兰兔48只，随机分为6组，实验组动物双眼均接受CO2激光外路巩膜切除术，化学比色法测定视网膜匀浆中一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）的含量和Na^＋．K^＋．ATP酶的活性，进行统计学分析。结果各实验组动物视网膜NO、MDA含量随低眼压时间的延长而持续上升，Na^＋．K^＋．ATP酶活性持续下降，7、10、14、21天组与正常组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。NO含量与MDA含量呈显著正相关（r=0．812，P〈0．01），与Na^＋．K^＋．ATP酶活性呈显著负相关（r=-0．857，P〈0．01），MDA含量与Na^＋．K^＋．ATP酶活性呈显著负相关（r=-0．835，P〈0．01）。结论脂质过氧化作用及自由基反应是造成持续性低眼压时视网膜结构及功能损伤的重要原因。     

兔实验性高眼压视网膜神经节细胞的凋亡

目的 探讨实验性高眼压免眼中是否存在视网膜神经节细胞的凋亡。方法 血细胞注射法诱导青光眼建立大白兔血细胞诱导的高眼压实验动物模型。通过制作视网膜组织超薄切片，透射电镜鉴定视网膜神经节细胞(RGCS)凋亡的存在。制备视网膜细胞悬液，利用流式细胞仪检测高眼压兔眼视网膜神经节细胞凋亡的数量。结果 实验组血细胞注射后眼压有不同程度的升高，透射电镜下可见典型的RGCs凋亡阳性细胞存在，经流式细胞仪检测凋亡率为O.76％，～O．93％。结论血细胞诱导青光眼可得到良好的慢性高眼压实验动物模型，实验性高眼压兔眼中有视网膜神经节细胞的凋亡缔朐稠亡旱免高眼RGCs损伤；流式细胞术     

盐酸氟桂嗪治疗高眼压性视网膜损伤

目的 观察家兔高眼压前、高眼压即刻及高眼压后用盐酸氟桂嗪对视网膜损伤的保护作用。方法 应用前房灌注加压法使前房内压力升至125．56mmHg，维持1h，恢复再灌注，在造成高眼压前12h，高眼压即刻及高眼压后12h用药。在再灌注7天，通过形态学及ERG的b波的观察，了解盐酸氟桂嗪对家兔视网膜损伤的保护作用。结果 高眼压前用药，ERG的b波可恢复至缺血前的85％左右。高眼压即刻及高眼压后用药可恢复至缺血前的60％左右，而未用药组则只能恢复43％左右。有统计学意义。功能民形态学变化一致。结论 盐酸氟桂嗪对家兔高眼压性视网膜损伤有保护作用。高眼压前用药比高眼压即刻及高眼压后用药作用更明显。     

A Study of Histology and Enzymatic Histochemistry on Rabbit‘s Retina in Acute Ocular Hypertension

The changes of activities of enzymes relating to energy metabolism in rabbit‘s retina in acute ocular hypertension were observed. The activities of succinate dehydrogenase and adenosine triphosphatase were found to be reduced, while the activities of the lactatic dehydrognease and glucose-6-phosphatase increased. The results revealed the metabolic disturbance of energy in retina after acute ocular hypertension might be the underlying factors relating to the defects of the functions and structures of the...     

活血化瘀汤对急性高眼压模型大鼠视网膜谷氨酸转运体表达的影响

背景高眼压及缺血缺氧可使眼内谷氨酸的浓度增加,对视网膜神经节细胞（RGCs）造成兴奋性损伤,诱导其凋亡。国内外已进行了大量的谷氨酸兴奋性损伤的防护研究,但目前尚未见从细胞和分子水平对中药复方进行相关研究的报道。目的探讨活血化瘀汤方剂对急性高眼压模型大鼠视网膜谷氨酸转运体L-谷氨酸／L-天门冬氨酸转运体（GLAST）表达的影响。方法健康Wistar大鼠45只,随机分为正常对照组（5只）、单纯加压组（20只）、活血化瘀汤治疗组（20只）,后2组随机取一侧眼制作急性高眼压模型,活血化瘀汤治疗组于造模后即刻给予活血化瘀汤灌胃治疗,分别于给药后1、3、7、14d各时间点随机处死5只大鼠,单纯加压组分别在相同时间点随机处死5只大鼠,并获取其视网膜组织。用实时定量聚合酶链反应（real—time PCR）法检测3组大鼠视网膜中GLAST的表达变化,并对不同时间点视网膜组织行透射电镜及光学显微镜观察。结果急性高眼压损伤后3d,光学显微镜下可见视网膜变薄,14d时视网膜变得更薄,内层较显著,RGCs数量减少。透射电镜下,急性高眼压损伤后1d可见RGCs细胞器变性、肿胀,14d时出现部分细胞凋亡。Real—time PCR结果显示,单纯加压组及活血化瘀汤治疗组视网膜中GLAST mRNA的表达量在造模后1d快速上调,与正常对照组大鼠比较差异有统计学意义（P〈0．05）;3d时单纯加压组大鼠视网膜中GLAST mRNA表达量下降,与活血化瘀汤治疗组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;7d及1dd时单纯加压组与活血化瘀汤治疗组大鼠视网膜中GLAST mRNA的表达量均恢复至正常水平,2组间差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论活血化瘀汤方剂有可能通过增强GLAST的表达减轻急性高眼压对大鼠视网膜的损伤。     

原花青素对大鼠急性高眼压后视网膜作用的实验研究

探讨原花青素(PC)对大鼠急性高眼压后视网膜的作用及其机制。方法 将Spraque-Dawley(SD)大鼠随机分成正常组、模型组及PC高、低剂量组。PC高、低剂量组用原花青素蒸馏水悬浊液分别按100 mg/（kg·d）和300 mg/（kg·d）灌胃给药5 d,正常对照组和模型组则同步灌注蒸馏水,5d后模型组和PC各剂量组分别建立急性高眼压模型,48 h后取出建立高眼压模型的眼球。电子显微镜观察各组视网膜形态结构,紫外分光光度计比色法检测视网膜组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛 （MDA）、一氧化氮（NO）、谷氨酸（Glu）和钙离子（Ca2+）水平。结果 电子显微镜图片显示PC可减轻视网膜组织水肿,减少视网膜神经节细胞凋亡。PC可提高视网膜组织中SOD活性,降低MDA、NO、Glu和Ca2+水平。结论 PC对急性高眼压导致的视网膜损伤有保护作用,其主要机制可能与抗自由基氧化,拮抗钙离子超载,降低NO及Glu对视网膜的毒性作用有关。     

急性高眼压状态大鼠视网膜一氧化氮 及其合酶变化的研究

目的通过对急性高眼压下大鼠视网膜一氧化氮(nitric oxid e,NO)及其合酶(nitric oxide synthase,NOS)变化的分析,探讨一氧化氮在高眼压视网膜损伤中的作用。方法Wistar大鼠60只,随机分成为高眼压30 min组;高眼压60 min组;高眼压90 min组;高眼压后12 h组和高眼压后24 h 组。前房加压灌注成高眼压模型。利用镀铜镉还原法测定视网膜中NO₂^－/NO₃^－ 的 含量从而间接反映视网膜组织中NO的含量。利用免疫组织化学法研究视网膜内神经结构型一氧化氮合酶(neuronal constitutive nitric oxide synthase,ncNOS)的分布及其变化。结果正常及缺血大鼠视网膜神经结构型一氧化氮合酶(ncNOS)主要位于大鼠视网膜内核层内侧,节细胞层,内丛状层。急性高眼压30min,60min ,90min大鼠视网膜NO的含量逐渐下降(P<0.01),ncNOS阳性 细胞数也逐渐减少(P<0.05),阳性物质表达减弱;急性高眼压 90min后再灌注过程中,NO的含量比90min时明显升高(P<0.05),但与正常比较仍显著下降(P<0.01)。ncNOS阳性细胞数继续减少(P <0.01)。结论一氧化氮参与了急性高 眼压下视网膜损伤过程;通过ncNOS催化的途径合成的NO对缺血以及缺血再灌注的视网膜可能具有重要的作用。(中华眼底病杂志,2001,17:230-233)     

急性高眼压条件下视网膜神经感觉层超微结构的变化

目的:研究高眼压条件对大鼠视网膜神经感觉层(neurosensory retina)超微结构的影响。方法:利用自制的加压装置使大鼠眼内压升高,维持眼底缺血状态2h,再分别于恢复血液再灌注0,8,24,48h;7d处死大鼠,取出视网膜组织,电镜观察。结果:电镜下观察再灌注8h视网膜外核层、内核层细胞死亡表现出凋亡和坏死两种特征,神经纤维层水肿明显,细胞线粒体出现空泡样结构,24h有视网膜节细胞凋亡数量最多,48h减少,7d后凋亡细胞数量减少,细胞密度减小,视网膜萎缩变薄。结论:急性高眼压条件下视网膜各层细胞易损性不同,缺血再灌注不同时间各层超微结构变化不一致,凋亡不仅是视网膜节细胞的死亡形式也是其它层细胞的死亡形式。     

兔眼慢性高眼压模型视网膜损害相关基因的克隆及筛选

目的　构建慢性高眼压条件下兔眼视网膜组织差异表达基因的消减cDNA文库并鉴定、克隆及筛选与慢性高眼压视网膜损害相关的基因表达片段。方法　于兔眼前房注射1%甲基纤维素每周1次,连续5周,制作慢性高眼压模型。提取实验组和对照组兔眼视网膜组织总RNA及纯化mRNA。采用原位杂交技术,进行视网膜组织差异表达基因抑制性消减文库的构建及初步的基因筛选。对一个上调的cDNA片段用地高辛标记,采用原位杂交的方法在实验组和对照组的视网膜中进行相关基因片段的细胞定位。结果　成功构建慢性高眼压条件下兔眼视网膜损害相关基因的抑制性消减cDNA文库,经基因片段测序及同源性检索,得到有效基因序列16个,经NCBI BLAST信息途径分析,发现高度同源序列(同源性>98% )2个。其中一个编号F9基因片段与Ras家族基因相似,原位杂交结果确定其大量表达于实验组视网膜神经节细胞及内核层细胞中,而对照组视网膜组织未表达。结论　慢性高眼压条件下视网膜组织基因表达失调,F9片段在慢性高眼压视网膜损害过程中表达明显增高。建立慢性高眼压条件下视网膜损害相关基因的抑制性消减cDNA文库,可为今后青光眼视神经损害机制及视神经保护的研究奠定基础。     

慢性高眼压兔模型视网膜中生长相关蛋白-43表达的变化

目的:研究持续高眼压状态下视网膜中生长相关蛋白-4(GAP-43)表达的变化。方法:兔眼前房注射复方卡波姆溶液制成慢性高眼压模型(n=21),用免疫组织化学方法观察在高眼压不同时间段视网膜中GAP-43的表达变化。结果:正常兔眼视网膜内丛状层中存在GAP-43的表达。持续性高眼压7d后内丛状层中的GAP-43免疫反应产物密度增加,且在节细胞和神经纤维层也出现阳性产物,与对照组比较有显著差异(P<0.05)。高眼压14d时阳性反应产物与7d时相比有所下降,但仍高于正常对照组(P<0.05);21d时基本恢复至正常对照组水平(P>0.05)。结论:慢性高眼压时视神经、视网膜结构受损,导致视网膜中GAP-43短暂升高。