C57BL/6J小鼠及鸡胚B16细胞移植瘤血管生成拟态的观察及其MMP7和MMP9的表达

[目的]探讨黑色素瘤B16细胞鸡胚和小鼠移植瘤组织中MMP7和MMP9的表达与血管生成拟态形成的关系,初步探讨宿主微环境对肿瘤细胞的影响.[方法]分别建立黑色素瘤B16细胞鸡胚和小鼠移植瘤模型,通过HE切片观察血管生成拟态的分布情况,利用免疫组化方法检测MMP7和MMP9的表达.[结果]B16细胞鸡胚和小鼠移植瘤组织中均可见血管生成拟态,并且前者显著多于后者.鸡胚移植瘤组织和小鼠移植瘤组织中MMP7的阳性细胞百分比分别为34.55±8.98和15.27±4.21,前者显著高于后者(P＜0.01),MMP9的阳性细胞百分比分别为16.38±3.34和10.53±1.95,前者显著高于后者(P＜0.01).[结论]鸡胚移植瘤可用于研究肿瘤生长早期的生物学行为,MMP7和MMP9的表达可能与肿瘤生长早期血管生成拟态的形成有关.     

内皮抑素抑制黑色素瘤血管生成的实验研究

【目的】研究内皮抑素对黑色素瘤血管生成的影响,及其对肿瘤细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响,并阐述其相关分子机制。【方法】C57/BL6小鼠40只,建立小鼠B16黑色素瘤动物模型,分为内皮抑素组和空白对照组,比较两组肿瘤内血管生成拟态(VM)和内皮依赖性血管的数目;构建组织芯片,应用免疫组织化学技术染色检测肿瘤组织PCNA的表达;电镜观察两组肿瘤内微血管的超微结构变化。【结果】实验组肿瘤中VM和内皮依赖性血管数量均少于对照组,且差别有统计学意义;实验组PCNA表达阳性率与对照组相比差异有统计学意义。【结论】内皮抑素可抑制黑色素瘤内皮依赖性血管和拟态样血管的生长,进而影响肿瘤细胞PCNA的表达。     

肿瘤血管生成拟态的研究进展

血管生成理论认为,当实体肿瘤直径大于2mm时需要诱导生成新的血管来获取血供,否则肿瘤就会因为缺血缺氧发生坏死。肿瘤诱导的血管生成主要步骤包括：肿瘤经过无血管的缓慢生长期后（指体积小于2mm的时期）,便释放多种血管生成因子,引起血管内皮细胞形态改变,基底膜及周围的细胞外基质降解,内皮细胞迁移、增殖,血管形成、改建。目前抗血管生成已经成为肿瘤治疗的一种新手段。     

胃癌细胞血管生成拟态的形态学及机制研究

目的:血管生成拟态(Vasculogenic mimicry,VM)是近年来发现的一种全新的肿瘤微循环模式.本研究通过体外三维培养的方式对胃癌细胞血管生成拟态进行形态学的研究,并探讨其可能的分子机制.方法:体外三维培养SGC-7901细胞,观察其是否可以形成血管生成拟态.免疫细胞化法检测参与血管生成拟态形成的胃癌细胞中MMP-2与MT1-MMP的表达水平.观察PI3K信号通路抑制剂对MMP-2和MT1-MMP的表达水平及对胃癌细胞血管生成拟态的影响.结果:胃癌细胞SGC-7901在体外三维培养条件下能够形成血管生成拟态.参与血管生成拟态的癌细胞中MMP-2与MT1-MMP高表达.PI3K信号通路抑制剂能够抑制MMP-2与MT1-MMP的表达,导致SGC-7901细胞血管生成拟态的能力明显降低.结论:体外三维培养时胃癌细胞SGC-7901具有形成血管生成拟态的能力.PI3K信号通路的抑制剂可以抑制胃癌血管生成拟态的形成,其机制之一可能是通过抑制MMP-2与MT1-MMP的表达.     

胃癌肉瘤组织中的血管生成拟态观察

目的观察胃癌肉瘤组织中的血管生成拟态（VM）。方法采用免疫组化SP法和PAS染色技术,对27例胃癌肉瘤分别进行VEGF与PAS、CD31与PAS的双重染色,计算MVD、VMD及GF表达量,并分析其相关性。结果 15例胃癌肉瘤组织中存在VM,含有VM者5年生存率为0,无VW者5年生存率为41.7%（5/12）,两者相比P〈0.05。含VM者VEGF表达量为（101.09±18.79）个/HP,无VM者为（134.50±23.48）个/HP,两者相比P〈0.05。含VM者MVD为（57.55±10.39）条/HP,无VM者为（70.84±13.80）条/HP,两者相比P〈0.05。结论部分胃癌组织中存在VM,含VM者胃肿瘤组织VEGF、MVD水平较低,但患者预后差。     

结肠癌血管生成拟态的形态学观察及生成机制

目的：探讨结肠癌血管生成拟态（VM）现象及其生成的相关机制.方法：体外三维培养结肠癌细胞株SW480,倒置显微镜下观察VM形成情况,透射电镜下观察其超微结构.采用MTT法检测磷脂酰肌醇-3激酶（PI-3K）信号通路抑制剂2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮（LY294002）对SW480细胞的增殖抑制率.10μmo1/LLY294002处理SW480细胞72h,在光学显微镜下观察VM密度,并用逆转录聚合酶链技术（RT-PCR）检测骨桥蛋白（opn）基因,基质金属蛋白酶2（mmp2）基因水平.WesternBlot检测LY29400210μmo1/L处理SW480细胞24～72h后蛋白激酶B（PKB）,磷酸化蛋白激酶B（p-PKB）蛋白的表达.结果：结肠癌细胞株SW480在体外三维培养条件下能够形成VM,电镜观察结果进一步证实了VM的存在.LY294002作用后SW480细胞的生长明显减慢,抑制率为13.01%～67.55%（P〈0.01）且呈良好的时间—剂量效应关系.SW480细胞经LY29400210μmo1/L干预72h后,VM密度由（12.50±3.27）个下降至（2.60±1.07）个（P〈0.01）,opn,mmp2 mRNA的表达强度分别为0.31±0.01,0.20±0.04,低于未干预细胞的表达强度0.75±0.03,0.55±0.05（P〈0.01）.PKB蛋白表达下降（P〈0.01）,p-PKB蛋白表达水平无明显变化.结论：LY294002通过下调opn,mmp2mRNA的表达,抑制结肠癌细胞VM的形成,此过程与抑制PI-3K/PKB通路有关.     

肿瘤血管生成拟态研究新进展

血管生成拟态是指具有可塑性、侵袭性的肿瘤细胞所形成的非内皮细胞衬覆的微血管通道,其在体内显示为过碘酸席夫染色阳性和CD31染色阴性的图案,在体外三维培养体系中显示为管状或图案样的网络,其可能与肿瘤的侵袭转移潜能以及较差的临床预后有关。     

卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达

目的:在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达情况。方法:卵巢癌细胞SKOV3接种裸鼠腹腔,建立卵巢癌腹腔移植瘤模型,在同一张切片上以抗鼠CD34标记鼠血管内皮细胞,PAS染色行基底膜样结构标记。并应用免疫组化和RT-PCR方法比较MMP2在卵巢癌腹腔移植瘤中央和边缘区域组织的表达差异。结果:卵巢癌腹腔移植瘤中央区域可见卵巢癌细胞围成管状结构,中间可见红细胞,未见CD34阳性细胞出现,PAS阳性物质呈颗粒状弥散分布在卵巢癌细胞浆内,有的贴附在管腔内侧。免疫组化提示MMP2蛋白阳性表达率在肿瘤中央区域组织比肿瘤边缘区域明显增高,RT-PCR分析显示肿瘤组织中央区域MMP2表达与边缘区域相比有显著性差异。结论:卵巢癌细胞分泌PAS阳性物质,可能参与构建肿瘤的血管基质重塑。卵巢癌中央区域可见血管生成拟态,肿瘤中央区域MMP2表达高于肿瘤边缘区域,MMP2表达是否与卵巢癌血管生成拟态形成有关,仍需今后进一步研究。     

恶性胃间质瘤的血管生成拟态与恶性程度的关系

 目的 探讨恶性胃间质瘤中是否存在血管生成拟态（VM）,即肿瘤细胞变形并模仿正常血管结构形成的拟态血管。  方法 将36例恶性间质瘤分为低、中、高度3组,分别采用免疫组织化学和PAS染色双重染色测定微血管密度（MVD）、血管生成拟态密度（VMD）,并分析肿瘤的恶性程度与VMD的关系。  结果  恶性胃间质瘤中有VM形成,含有VM的恶性胃间质瘤VEGF表达及MVD均低于无VM者（P均<0.05）;随着胃间质瘤恶性程度的增高,VM肿瘤的比例逐渐增加,VMD逐渐增高,高度恶性与低或中度恶性肿瘤间差异具有统计学意义（P均<0.05）,但后二者间差异无统计学意义（P>0.05）。  结论 恶性胃间质瘤细胞具有可塑性,能通过自身变形并分泌细胞外基质,模拟正常血管结构形成可输送血液的管道系统,即血管生成拟态。     

血管生成拟态及在肝细胞癌中的研究进展

近几年,人们先后在黑素瘤、肝细胞癌等恶性肿瘤中发现了血管生成拟态。血管生成拟态是肿瘤细胞自身形成的,参与肿瘤的微循环。血管生成拟态的调节与基因、血管上皮钙黏素、Twist1细胞核的表达等相关。血管生成拟态是预后不良的标志,预测低分化、高浸润、高转移和低生存率。因而抗肿瘤治疗时,经典抗血管治疗联合抗血管生成拟态治疗成为必要。     

血管生成拟态在颅内血管外皮细胞瘤中的表达及其意义

目的  探讨颅内血管外皮细胞瘤中是否存在血管生成拟态（VM）及其意义。方法  选取12例颅内血管外皮细胞瘤病理标本,进行HE染色、CD34-PAS双重染色,观察是否存在VM。结果  9例颅内血管外皮细胞瘤组织中观察到存在典型PAS染色阳性、CD34染色阴性的管道,在这些管道中均可以找到红细胞。结论  颅内血管外皮细胞瘤组织中存在VM。     

双向分化肿瘤血管生成拟态的组织微阵列研究

目的　探讨在双向分化肿瘤中是否存在肿瘤细胞通过自身变形并模拟产生血管样通道而达到自身血液供应的方式 ,即血管生成拟态 (VM )。方法　采用免疫组化和PAS双重染色技术研究双向分化肿瘤内血管的生成模式 ,收集双向分化肿瘤恶性黑色素瘤 (高度恶性 30例、低度恶性 30例 ) ,滑膜肉瘤 (高度恶性 2 3例、低度恶性 13例 ) ,间皮肉瘤 (2 6例 ) ,上皮样肉瘤 (4例 )及具有双向分化倾向的腺泡型横纹肌肉瘤 (高度恶性 16例、低度恶性 16例 )共 15 8例 ,制作成组织芯片 ,进行CD31和PAS双重染色 ,通过网格计数法比较这些肿瘤中CD31和PAS阳性图案围成的管道面积 ,以其差异研究血管生成拟态。并且比较高度恶性肿瘤和低度恶性肿瘤血管生成拟态的差异。结果　双向分化肿瘤中CD31和PAS阳性图案围成的管道面积差异具有统计学意义 (P <0 .0 1)。同时观察到细胞异型性小的双向分化肿瘤形成血管生成拟态的例数明显少于瘤细胞异型性大的双向分化肿瘤形成血管生成拟态例数 ,其差异具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。在明显具有血管生成拟态的点阵中见PAS阳性的血管样图案内无内皮细胞衬覆但有红细胞存在 ,并可见双向分化肿瘤的瘤细胞可表达CD31抗原和PAS阳性物质。结论　双向分化肿瘤内的肿瘤细胞可通过自身变形并且与细胞外基质     

膜型基质金属蛋白酶-1表达对肝细胞癌血管生成拟态形成的影响

目的 研究膜型基质金属蛋白酶-1（MT1-MMP）表达对肝细胞癌血管生成拟态（VM）形成的影响及机制。方法 构建靶向MT1-MMP的RNA干扰质粒载体,转染肝癌细胞系Bel7402,实时定量PCR及Western blot检测干扰效果;在体外三维细胞培养体系中观察其对VM管状结构形成的影响;Transell侵袭小室实验检测细胞侵袭能力。结果 靶向抑制MT1-MMP的表达下调肿瘤细胞侵袭能力,影响肝癌细胞在三维细胞培养体系中VM管状结构的形成。结论 MT1-MMP表达影响肝细胞癌VM的形成,可能成为肝细胞癌抗血管生成治疗的新靶点。     

肝癌及癌间质MMP-9表达及其与血管生成拟态的关系

目的:探讨原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中癌细胞与间质中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及其与血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的关系。方法:收集原发性肝细胞癌手术切除后留取的癌组织,通过免疫组织化学检测肝癌细胞及间质细胞MMP-9的表达情况,分析其表达与VM的关系。结果:VM表达阳性组中癌细胞和间质细胞的MMP-9阳性表达率分别明显高于VM阴性组,差异具有统计学意义(χ2=4.234,P=0.039;χ2=4.167,P=0.041)。结论:MMP-9可能参与并促进VM的形成。     

The effect of alphastatin peptide suppressing the hypoxia-induced vasculogenic mimicry formation of glioma

Objective： To investigate the vasculogenic mimicry formation induced by hypoxia in Ⅱ-Ⅲ human glioma cell and the effect of alphastatin peptide suppressing the hypoxia-induced vasculogenic mimicry formation and the mechanism. Methods： MTT, Transwell and three- dimentional culture were used to detect the proliferation, migration and tubule formation of SHG44. The expression of vascular endothelial growth factor-α（VEGF-α, erythropoietin-producing hepatocellular carcinoma-A2 （EphA2） and matrix metalloproteinases 2 （MMP2） was detected by RT-PCR and Western blotting analysis. Results： The OD490 in hypoxia group was 0.60±0.06 and in control group was 0.46±0.05. The number of cell migration was 178.71±18.81 in hypoxia group and 85.86±17.92 in control group. The tubule formation was 56.80±12.21 in hypoxia group and 4.20±2.62 in control group. The proliferation, migration and tubule formation in hypoxia group were significantly higher than that in control group. The expression of VEGF-α, EphA2 and MMP2 was upregulated in hypoxia. When various concentrations of alphastatin （100, 1 000, 10 000 nmol/L） were added to hypoxia group, the numbers of cell migration were 142.57±12.12, 92.71±17.68, 30.00±7.72 and the tubule formation were 47.71±10.58, 18.86±8.40, 8.43±5.62. The cell migration and tubule formation were significantly suppressed by alphastatin in a dose-dependent manner. In alphastatin group, the phosphorylation of EphA2 protein （P=0.037, F=4,629） and activation of MMP2 protein （P=0.005, F=9.331） were significantly suppressed but there was no change in VEGF-α protein. Conclusion： Ⅱ-Ⅲ human glioma cell is able to form vasculogenic mimicry induced by hypoxia and alphastatin peptide can suppress the hypoxia-induced vasculogenic mimicry. VEGF-α induced EphA2 phospharilation and MMP2 activation maybe the key pathway to form vasculogenic mimicry.     

原发性肝癌中血管生成拟态的表达和预后相关性分析

目的:探讨原发性肝癌中是否存在血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM),进一步探究VM在原发性肝癌中与肝硬化、临床分期、病理分级、组织分型的关系及预后相关性分析。方法:收集142例经手术治疗、临床及随访资料完整的原发性肝癌患者的病理蜡块,重新切片,采用CD31、PAS双重染色观察VM的表达情况,分析VM表达的临床意义。结果:在原发性肝癌和正常肝组织中VM阳性率分别为38.7%(55/142)和0%(0/15)(P<0.01);VM的表达与原发性肝癌的临床分期、肿瘤大小、肝细胞癌Edmondson分级呈正相关(P<0.05);VM的表达与是否伴有肝硬化相关(P<0.05);VM阳性组与阴性组12个月、24个月、36个月的生存率分别为46%/72%,35%/52%,19%/44%,差异有统计学意义。结论:原发性肝癌中存在VM;缺血、缺氧可诱导VM的表达;表达VM者临床分期更晚;肝硬化可增加VM的表达;表达VM者生存率更低。     

肿瘤相关巨噬细胞极化状态对前列腺癌干细胞自我更新能力和血管生成拟态的影响

目的:探讨肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化状态对前列腺癌(PCa)干细胞自我更新能力与血管生成拟态的影响,阐明TAM在PCa进展中的作用.方法:从人PCa细胞系DU145中分选出PCa干细胞,将人单核白血病细胞株THP-1诱导为M2型TAM,作为诱导组,并以未诱导的THP-1细胞作为对照组,实时荧光定量PCR(RT-qP...     

趋化因子受体3及血管生成拟态在结肠癌肝转移中的作用

目的 探讨趋化因子受体3(CXCR3)及血管生成拟态(VM)在结肠癌肝转移中的表达及其与临床指标的关系。方法 免疫组织化学染色检测40例结肠癌肝转移手术标本(A组)和30例结肠癌无肝转移手术标本(B组)CXCR3的表达,过碘酸雪夫氏(PAS)染色检测结肠癌组织中VM的表达,分析CXCR3和VM与临床指标的相关性。结果 A组结肠癌组织中CXCR3阳性表达率77.5% ,VM阳性表达率72.5%,肝转移瘤中CXCR3阳性表达率75.0%;B组结肠癌组织CXCR3阳性表达率43.3%,VM阳性表达率20.0%,两组间差异有统计学意义。相关性分析表明,CXCR3的表达与结肠癌分化程度、淋巴结转移、肝转移呈正相关,CXCR3与VM阳性表达也呈正相关(P＜0.05)。结论 CXCR3和VM 在结肠癌肝转移组的结肠癌组织中高表达,CXCR3和VM 的表达与结肠癌的转移及分化程度有关。